一种卟啉衍生物纳米复合物制剂及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种在类风湿性关节炎的光动力疗法与光热疗法中应用的一种卟啉衍生物纳米复合物制剂及其应用。本发明公开了一种水溶性卟啉衍生物与纳米材料的复合试剂的实验方法，该复合试剂具有稳定的荧光特性以及优良的生物相容性，可以实现对炎症区域药物释放的检测与示踪，并通过纳米材料对卟啉分子的吸附作用实现在炎症区域的富集；本发明实验方法简便易行、毒性低、特异性强，所得到的复合试剂中的卟啉衍生物在紫光激发条件下可以生成单线态氧，复合试剂中的纳米材料在红光激发条件下具有优良的光热效应，可以实现对于炎症疾病实现药物富集，光动力疗法和光热疗法的多模态治疗，具有广阔的医学临床应用价值和前景。
【专利说明】一种卟啉衍生物纳米复合物制剂及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种在类风湿性关节炎的光动力疗法与光热疗法中的应用的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂及其实验方法，具体涉及卟啉衍生物在紫光照射条件下的光动力疗法，纳米材料在红光照射条件下的光热疗法以及利用纳米材料的吸附作用实现卟啉衍生物在炎症区域的药物富集，同时利用复合试剂稳定的荧光特性以及优良的生物相容性实现对炎症区域药物释放的检测与示踪，从而实现对于类风湿性关节炎等炎症疾病的多模态协同治疗。
【背景技术】
[0002]众所周知，类风湿性关节炎是一种以关节病变为主的慢性全身自身免疫性疾病。主要临床表现为小关节滑膜所致的关节肿痛，继而软骨破坏、关节间隙变窄，晚期因严重骨质破坏、吸收导致关节僵直、畸形、功能障碍。本病多为一种反复发作性疾病，致残率较高，预后不良，目前还没有很好的根治方法。控制类风湿药物可以产生长久缓和、延后或停止病情的恶化，消炎及镇痛药能减轻痛楚及改善僵硬，但却不能阻止关节的伤害或减慢病情的恶化。因此寻找一种新的治疗材料也是人们为了根治此疾病的努力方向。
[0003]卟啉类衍生物通常分为脂溶性卟啉化合物和水溶性卟啉化合物两种，这种物质具有一定的光敏性质，在紫外或可 见光作用下，能有效释放单线态氧.早期的卟啉是从含有卟啉化合物的天然产物中通过提取、分离、纯化等方法得到的，如血红素、叶绿素等。目前有两种途径得到目标卟啉分子:天然卟啉的结构修饰和卟啉化合物的全合成。天然卟啉的结构修饰虽然能很方便地进行结构的改造，但是受到结构本身的限制，同时外环官能基团的选择上也十分有限，此外，也限制了卟啉化合物的本身生理活性。因此，通常人们需要通过全合成的办法，来获得具有特定生理活性和功能的卟啉分子。本发明所应用的一类四-对-磺酸基苯基卟啉(TSPP)，是一种水溶性的卟啉类衍生物，具有很好的光敏性质，同时具有稳定的荧光特性和良好的生物相容性。
[0004]纳米材料同样是一个新兴的具有广阔发展前景的领域，众多的纳米材料由于其独特的理化性质在不用的领域都产生了许多意想不到的作用，而在生物医学工程中，纳米材料更多的是用来作为药物的载体和成像的手段。纳米颗粒与光敏剂复合试剂同时具备纳米材料的靶向性与光敏剂的光照选择性和高杀伤效果，展现出了明显的优势。
[0005]本发明的方法简便易行、毒性低、特异性强，应用水溶性的卟啉衍生物和纳米材料，可以同时对于炎症疾病实现药物富集，光动力疗法和光热疗法的多模态治疗，具有广阔的医学临床应用价值和前景。
【发明内容】
[0006]本发明提供了一种在类风湿性关节炎的光动力疗法与光热疗法中应用的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂及其实验方法。本发明所涉及的复合材料制备简便易行、毒性低、特异性强，可以对炎症疾病实现药物富集，还可以进一步应用于光动力疗法和光热疗法的多模态治疗中。
[0007]一种卟啉衍生物与纳米材料复合试剂的实验方法，具体实验方法如下:
制备:将浓度为0.05mg/ml的卟啉衍生物水溶液与不同浓度的纳米材料混合,磁力搅拌6h，超声后得到不同种类的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂；
在细胞水平进行研究，其具体步骤是:
1)、利用MTT实验测试上述不同种类复合试剂与滑膜细胞相互作用的细胞毒性；
2)、利用荧光光谱仪和共聚焦荧光显微镜对上述不同种类的复合试剂在滑膜细胞中的分布情况进行表征，通过荧光成像的荧光分布情况及其荧光强度对不同种类复合试剂进行定性或定量分析；
3)、将不同种类复合试剂与滑膜细胞在生理条件下孵育，24h后分别施以紫光光照和红光光照，通过细胞的存活/生长抑制情况探究上述不同种类复合试剂与细胞的相互作用情况。
[0008]其中所述的卟啉衍生物为四-对-磺酸基苯基卟啉(TSPP)，所述的纳米材料为TiO2晶须或颗粒,纳米ZnO, Pt纳米簇，Au纳米簇和Ag纳米簇等中的一种或两种。
[0009]其中所述的离体滑膜细胞中正常滑膜细胞取自正常雄性SD大鼠膝关节滑膜组织；类风湿性关节炎滑膜细胞取自胶原诱导的CIA雄性SD大鼠膝关节滑膜组织，通过组织原代培养得到。
[0010]在动物活体模型层面进行研究，其具体步骤是:
1)、利用牛II型胶原和完全弗氏佐剂诱导类风湿性关节炎的雄性SD大鼠模型；
2)、将0.0.5 ml无菌的浓度为0.5~lmg/ml的复合试剂溶液注射到模型鼠上，12h后实验组分别施以紫光光照和红光光照各30min，每天注射一次，光照一次，实验时间为14d，对照组无光照；另取健康雄性SD大鼠作为空白组。
[0011]3)、用活体荧光成像仪对炎症部位进行成像并对其进行定性及定量分析。
[0012]其中所述步骤I)中的注射方法为尾静脉注射，步骤2)中的注射方法为局部注射。
[0013]其中所述的卟啉衍生物为四-对-磺酸基-苯基卟啉(TSPP);所述的纳米材料为TiO2晶须或颗粒,纳米ZnO, Pt纳米簇，Au纳米簇和Ag纳米簇等中的一种或两种。
[0014]本发明与现有技术方法相比，具有以下优点和效果:
本方法采用的卟啉衍生物和纳米材料具有良好的生物相容性，可以有效避免传统纳米材料合成过程中引入的化学试剂以及纳米材料稳定剂对有机体造成的生物毒性，同时利用纳米材料对于卟啉衍生物的吸附作用实现在炎症区域的富集；
该卟啉衍生物与纳米材料复合试剂具有稳定的荧光特性，在注入细胞和活体12h后可以在细胞内或者炎症区域检测到荧光，实现对炎症区域药物释放的检测与示踪；
同时本发明充分利用了卟啉衍生物的光动力性质和纳米材料的光热性质，简便易行、毒性低、特异性强，可以实现光动力疗法和光热疗法的多模态治疗，具有广阔的医学临床应用价值和前景。
【专利附图】
【附图说明】
[0015]现在将描述如本发明的优选但非限制性的实施例，本发明的这些和其他特征、方面和优点在参考附图阅读如下详细描述时将变得显而易见，其中:图1是不同浓度的卟啉衍生物水溶液的可见吸收光谱图；
图2是不同浓度的卟啉衍生物水溶液的荧光发射光谱图。
【具体实施方式】
[0016]结合着附图1和2，以下的说明本质上仅仅是示例性的而并不是为了限制本公开、应用或用途。
[0017]实施例1卟啉衍生物与纳米材料复合试剂与离体滑膜细胞的相互作用
1、以滑膜细胞为研究对象，将无菌的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂与处于对数生长期的滑膜细胞共孵育8~24小时(37 ° C，5 % CO2, RH 95%)，利用MTT实验测试不同种类复合试剂与正常/类风湿性关节炎滑膜细胞相互作用的细胞毒性；
2、以滑膜细胞为研究对象，实验组将处于对数生长期的滑膜细胞按照1.6 X IO5个细胞/孔的密度接种于6孔板中，培养24 h后加入已灭菌并用新鲜无菌的DMEM培养基进行稀释的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂溶液。
[0018]对照组将培养基中的滑膜细胞按照1.6 X IO5个细胞/孔的密度接种于6孔板中，培养24 h。培养时间终止后向 实验组和对照组的每孔加入磷酸缓冲溶液(PBS，pH=7.2)冲洗2-3次。将其置于激光聚焦荧光显微镜下，采用波长为532 nm绿光进行激发即可采集到细胞的荧光图像，通过荧光断层扫描技术可以清晰的观察到这种卟啉衍生物与纳米材料复合试剂主要吸附在细胞上。
[0019]3、以滑膜细胞为研究对象，将无菌的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂与处于对数生长期的滑膜细胞共孵育8~24小时(37 ° C，5 % C02，RH 95%)，实验组分别施加401~405nm的紫光照射30min和615飞35nm的红光照射30min,测试卟啉衍生物与纳米材料复合试剂的光动力效应和光热效应对于滑膜细胞的作用。
[0020]所述卟啉衍生物为四-(对-磺酸基)苯基卟啉(TSPP);所述纳米材料为TiO2晶须或颗粒。
[0021]实施例2 卟啉衍生物与纳米材料复合试剂与离体滑膜细胞的相互作用
1、以滑膜细胞为研究对象，将无菌的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂与处于对数生长期的滑膜细胞共孵育8~24小时(37 ° C，5 % CO2, RH 95%)，利用MTT实验测试不同种类复合试剂与正常/类风湿性关节炎滑膜细胞相互作用的细胞毒性；
2、以滑膜细胞为研究对象，实验组将处于对数生长期的滑膜细胞按照1.6 X IO5个细胞/孔的密度接种于6孔板中，培养24 h后加入已灭菌并用新鲜无菌的DMEM培养基进行稀释的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂溶液。
[0022]对照组将培养基中的滑膜细胞按照1.6 X IO5个细胞/孔的密度接种于6孔板中，培养24 h。培养时间终止后向实验组和对照组的每孔加入磷酸缓冲溶液(PBS，pH=7.2)冲洗2-3次。将其置于激光聚焦荧光显微镜下，采用波长为532 nm绿光进行激发即可采集到细胞的荧光图像，通过荧光断层扫描技术可以清晰的观察到这种卟啉衍生物与纳米材料复合试剂主要吸附在细胞上。
[0023]3、以滑膜细胞为研究对象，将无菌的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂与处于对数生长期的滑膜细胞共孵育8~24小时(37 ° C，5 % C02，RH 95%)，实验组分别施加401~405nm的紫光照射30min和615飞35nm的红光照射30min,测试卟啉衍生物与纳米材料复合试剂的光动力效应和光热效应对于滑膜细胞的作用。
[0024]所述卟啉衍生物为四-(对-磺酸基)苯基卟啉(TSPP);所述纳米材料为Pt纳米簇和Ag纳米簇等中的一种或两种。
[0025]实施例3 卟啉衍生物与纳米材料复合试剂与离体滑膜细胞的相互作用
1、以滑膜细胞为研究对象，将无菌的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂与处于对数生长期的滑膜细胞共孵育8~24小时(37 ° C，5 % CO2, RH 95%)，利用MTT实验测试不同种类复合试剂与正常/类风湿性关节炎滑膜细胞相互作用的细胞毒性；
2、以滑膜细胞为研究对象，实验组将处于对数生长期的滑膜细胞按照1.6 X IO5个细胞/孔的密度接种于6孔板中，培养24 h后加入已灭菌并用新鲜无菌的DMEM培养基进行稀释的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂溶液。
[0026]对照组将培养基中的滑膜细胞按照1.6 X IO5个细胞/孔的密度接种于6孔板中，培养24 h。培养时间终止后向实验组和对照组的每孔加入磷酸缓冲溶液(PBS，pH=7.2)冲洗2-3次。将其置于激光聚焦荧光显微镜下，采用波长为532 nm绿光进行激发即可采集到细胞的荧光图像，通过荧光断层扫描技术可以清晰的观察到这种卟啉衍生物与纳米材料复合试剂主要吸附在细胞上。
[0027]3、以滑膜细胞为研究对象，将无菌的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂与处于对数生长期的滑膜细胞共孵育8~24小时(37 ° C，5 % C02，RH 95%)，实验组分别施加401~405nm的紫光照射30min和615飞35nm的红光照射30min,测试卟啉衍生物与纳米材料复合试剂的光动力效应和光热效应对于 滑膜细胞的作用。
[0028]所述卟啉衍生物为四_(对-磺酸基)苯基卟啉(TSPP);所述纳米材料为纳米ZnO。
[0029]实施例4卟啉衍生物与纳米材料复合试剂与离体滑膜细胞的相互作用
1、以滑膜细胞为研究对象，将无菌的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂与处于对数生长期的滑膜细胞共孵育8~24小时(37 ° C，5 % CO2, RH 95%)，利用MTT实验测试不同种类复合试剂与正常/类风湿性关节炎滑膜细胞相互作用的细胞毒性；
2、以滑膜细胞为研究对象，实验组将处于对数生长期的滑膜细胞按照1.6 X IO5个细胞/孔的密度接种于6孔板中，培养24 h后加入已灭菌并用新鲜无菌的DMEM培养基进行稀释的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂溶液。
[0030]对照组将培养基中的滑膜细胞按照1.6 X IO5个细胞/孔的密度接种于6孔板中，培养24 h。培养时间终止后向实验组和对照组的每孔加入磷酸缓冲溶液(PBS，pH=7.2)冲洗2-3次。将其置于激光聚焦荧光显微镜下，采用波长为532 nm绿光进行激发即可采集到细胞的荧光图像，通过荧光断层扫描技术可以清晰的观察到这种卟啉衍生物与纳米材料复合试剂主要吸附在细胞上。
[0031]3、以滑膜细胞为研究对象，将无菌的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂与处于对数生长期的滑膜细胞共孵育8~24小时(37 ° C，5 % C02，RH 95%)，实验组分别施加401~405nm的紫光照射30min和615飞35nm的红光照射30min,测试卟啉衍生物与纳米材料复合试剂的光动力效应和光热效应对于滑膜细胞的作用。
[0032]所述卟啉衍生物为四-(对-磺酸基)苯基卟啉(TSPP);所述纳米材料为Au纳米簇和Ag纳米簇等中的一种或两种。
[0033]实施例5卟啉衍生物与纳米材料复合试剂与离体滑膜细胞的相互作用1、以滑膜细胞为研究对象，将无菌的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂与处于对数生长期的滑膜细胞共孵育8~24小时(37 ° C，5 % CO2, RH 95%)，利用MTT实验测试不同种类复合试剂与正常/类风湿性关节炎滑膜细胞相互作用的细胞毒性；
2、以滑膜细胞为研究对象，实验组将处于对数生长期的滑膜细胞按照1.6 X IO5个细胞/孔的密度接种于6孔板中，培养24 h后加入已灭菌并用新鲜无菌的DMEM培养基进行稀释的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂溶液。
[0034]对照组将培养基中的滑膜细胞按照1.6 X IO5个细胞/孔的密度接种于6孔板中，培养24 h。培养时间终止后向实验组和对照组的每孔加入磷酸缓冲溶液(PBS，pH=7.2)冲洗2-3次。将其置于激光聚焦荧光显微镜下，采用波长为532 nm绿光进行激发即可采集到细胞的荧光图像，通过荧光断层扫描技术可以清晰的观察到这种卟啉衍生物与纳米材料复合试剂主要吸附在细胞上。
[0035]3、以滑膜细胞为研究对象，将无菌的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂与处于对数生长期的滑膜细胞共孵育8~24小时(37 ° C，5 % C02，RH 95%)，实验组分别施加401~405nm的紫光照射30min和615飞35nm的红光照射30min,测试卟啉衍生物与纳米材料复合试剂的光动力效应和光热效应对于滑膜细胞的作用。
[0036]所述卟啉衍生物为四-(对-磺酸基)苯基卟啉(TSPP);所述纳米材料为TiO2晶须或颗粒，Au纳米簇等中的一种或两种。
[0037]实施例6卟啉衍生物与纳米材料复合试剂与类风湿性关节炎活体模型的相互作用
1)、利用牛II型胶原和完全弗氏佐剂诱导类风湿性关节炎的雄性SD大鼠模型；
2)、将0.1~0.5 ml无菌的浓度为0.5~lmg/ml的复合试剂溶液注射到模型鼠上，12h后实验组分别施以紫外光照和红外光照各30min，每天注射一次，光照一次，对照组不施加光照，实验时间为14d ;另取健康雄性SD大鼠作为空白组。
[0038]3)、用活体荧光成像仪对炎症部位进行成像并对其进行定性及定量分析。
[0039]4)、解剖实验组、对照组和空白组老鼠，取全血和血清，测试血常规和天冬氨酸转氨酶、谷丙转氨酶、乳糖脱氢酶、肌酸激酶和尿素氮的指标；取器官肝，肾和后足膝关节，制备病理切片，分析治疗对于雄性SD大鼠的影响。
[0040]所述步骤I)中的注射方法为尾静脉注射，步骤2)中的注射方法为局部注射；所述卟啉衍生物为四-(对-磺酸基)苯基卟啉(TSPP);所述纳米材料为TiO2晶须。
[0041]实施例7卟啉衍生物与纳米材料复合试剂与类风湿性关节炎活体模型的相互作用
1)、利用牛II型胶原和完全弗氏佐剂诱导类风湿性关节炎的雄性SD大鼠模型；
2)、将0.1~0.5 ml无菌的浓度为0.5~lmg/ml的复合试剂溶液注射到模型鼠上，12h后实验组分别施以紫外光照和红外光照各30min，每天注射一次，光照一次，对照组不施加光照，实验时间为14d ;另取健康雄性SD大鼠作为空白组。
[0042]3)、用活体荧光成像仪对炎症部位进行成像并对其进行定性及定量分析。
[0043]4)、解剖实验组、对照组和空白组老鼠，取全血和血清，测试血常规和天冬氨酸转氨酶、谷丙转氨酶、乳糖脱氢酶、肌酸激酶和尿素氮的指标；取器官肝，肾和后足膝关节，制备病理切片，分析治疗对于雄性SD大鼠的影响。[0044]所述步骤I)中的注射方法为尾静脉注射，步骤2)中的注射方法为局部注射；所述卟啉衍生物为四_(对-磺酸基)苯基卟啉(TSPP);所述纳米材料为TiO2颗粒。
[0045]实施例8卟啉衍生物与纳米材料复合试剂与类风湿性关节炎活体模型的相互作用
1)、利用牛II型胶原和完全弗氏佐剂诱导类风湿性关节炎的雄性SD大鼠模型；
2)、将0.1-0.5 ml无菌的浓度为0.5~lmg/ml的复合试剂溶液注射到模型鼠上，12h后实验组分别施以紫外光照和红外光照各30min，每天注射一次，光照一次，对照组不施加光照，实验时间为14d ;另取健康雄性SD大鼠作为空白组。
[0046]3)、用活体荧光成像仪对炎症部位进行成像并对其进行定性及定量分析。
[0047]4)、解剖实验组、对照组和空白组老鼠，取全血和血清，测试血常规和天冬氨酸转氨酶、谷丙转氨酶、乳糖脱氢酶、肌酸激酶和尿素氮的指标；取器官肝，肾和后足膝关节，制备病理切片，分析治疗对于雄性SD大鼠的影响。
[0048]所述步骤I)中的注射方法为尾静脉注射，步骤2)中的注射方法为局部注射；所述卟啉衍生物为四_(对-磺酸基)苯基卟啉(TSPP);所述纳米材料为纳米ZnO。
[0049]实施例9卟啉衍生物与纳米材料复合试剂与类风湿性关节炎活体模型的相互作用
1)、利用牛II型胶原和完全弗氏佐剂诱导类风湿性关节炎的雄性SD大鼠模型；
2)、将0.1-0.5 ml无菌的浓度为0.5~lmg/ml的复合试剂溶液注射到模型鼠上，12h后实验组分别施以紫外光照和红外光照各30min，每天注射一次，光照一次，对照组不施加光照，实验时间为14d ;另取健康雄性SD大鼠作为空白组。
[0050]3)、用活体荧光成像仪对炎症部位进行成像并对其进行定性及定量分析。
[0051]4)、解剖实验组、对照组和空白组老鼠，取全血和血清，测试血常规和天冬氨酸转氨酶、谷丙转氨酶、乳糖脱氢酶、肌酸激酶和尿素氮的指标；取器官肝，肾和后足膝关节，制备病理切片，分析治疗对于雄性SD大鼠的影响。
[0052]所述步骤I)中的注射方法为尾静脉注射，步骤2)中的注射方法为局部注射；所述卟啉衍生物为四-(对-磺酸基)苯基卟啉(TSPP);所述纳米材料为Au纳米簇或Ag纳米簇。
[0053]实施例10 卟啉衍生物与纳米材料复合试剂与类风湿性关节炎活体模型的相互作用
1)、利用牛II型胶原和完全弗氏佐剂诱导类风湿性关节炎的雄性SD大鼠模型；
2)、将0.1-0.5 ml无菌的浓度为0.5~lmg/ml的复合试剂溶液注射到模型鼠上，12h后实验组分别施以紫外光照和红外光照各30min，每天注射一次，光照一次，对照组不施加光照，实验时间为14d ;另取健康雄性SD大鼠作为空白组。
[0054]3)、用活体荧光成像仪对炎症部位进行成像并对其进行定性及定量分析。
[0055]4)、解剖实验组、对照组和空白组老鼠，取全血和血清，测试血常规和天冬氨酸转氨酶、谷丙转氨酶、乳糖脱氢酶、肌酸激酶和尿素氮的指标；取器官肝，肾和后足膝关节，制备病理切片，分析治疗对于雄性SD大鼠的影响。
[0056]所述步骤I)中的注射方法为尾静脉注射，步骤2)中的注射方法为局部注射；所述卟啉衍生物为四-(对-磺酸基)苯基卟啉(TSPP);所述纳米材料为纳米ZnO，Pt纳米簇，Au纳米簇和Ag纳米簇等中的任意两种复合材料。
[0057]由以上具体实例结果表明:本方法采用的卟啉衍生物和纳米材料具有良好的生物相容性，可以有效避免传统纳米材料合成过程中引入的化学试剂以及纳米材料稳定剂对有机体造成的生物毒性，同时利用纳米材料对于卟啉衍生物的吸附作用实现在炎症区域的富集，提闻治疗效果；
同时本发明充分利用了卟啉衍生物的光动力性质和纳米材料的光热性质，简便易行、毒性低、特异性强，实现了光动力疗法和光热疗法的多模态治疗，具有广阔的医学临床应用价值和前景。
[0058]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出:对于本【技术领域】的技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范 围。
【权利要求】
1.一种卟啉衍生物与纳米材料复合试剂的实验方法，其特征在于， 制备步骤:将浓度为0.05mg/ml的卟啉衍生物水溶液与不同浓度的纳米材料混合，磁力搅拌6h，超声后得到不同种类的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂； 在细胞水平进行研究，其具体步骤是: 1)、利用MTT实验测试上述不同种类复合试剂与滑膜细胞相互作用的细胞毒性； 2)、利用荧光光谱仪和共聚焦荧光显微镜对上述不同种类的复合试剂在滑膜细胞中的分布情况进行表征，通过荧光成像的荧光分布情况及其荧光强度对上述不同种类复合试剂进行定性或定量分析； 3)、将不同种类复合试剂与滑膜细胞在生理条件下孵育，24h后分别施以紫光光照和红光光照，通过细胞的存活/生长抑制情况探究上述不同种类复合试剂在光动力治疗和光热治疗中的效果与性质。
2.如权利要求1所述的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂的实验方法，其特征在于，该复合试剂可应用到离体滑膜细胞的光动力疗法与光热疗法中，该复合试剂联合卟啉衍生物与纳米材料，利用卟啉衍生物作为光动力疗法中的光敏剂，同时利用纳米材料的富集作用和光热作用，实现双重选择性与多模式治疗。
3.如权利要求1所述的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂的实验方法，其中所述的卟啉衍生物为四-对-磺酸基-苯基卟啉(TSPP);所述的纳米材料为TiO2晶须或颗粒，纳米ZnO，Pt纳米簇，Au纳米簇和Ag纳米簇中的一种或两种。
4.如权利要求2所述卟啉衍生物与纳米材料复合试剂的实验方法，其特征在于，所述的离体滑膜细胞中正常滑膜细胞取自正常雄性SD大鼠膝关节滑膜组织；类风湿性关节炎滑膜细胞取自胶原诱导的CIA雄性SD大鼠膝关节滑膜组织，通过组织原代培养得到。
5.如权利要求1所述的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂的实验方法，其特征在于，在动物活体模型层面进行研究，具体步骤是: 利用牛II型胶原和完全弗氏佐剂诱导类风湿性关节炎的雄性SD大鼠模型； 将0.1-0.5 ml无菌的浓度为0.5~lmg/ml的复合试剂溶液注射到模型鼠上，12h后，实验组分别施以紫光光照和红光光照各30min，每天注射一次，光照一次，对照组不施加光照，实验时间为14d，对照组无；另取健康雄性SD大鼠作为空白组； 用活体荧光成像仪对炎症部位进行成像并对其进行定性及定量分析。
6.如权利要求5所述的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂的实验方法，其特征在于所述步骤I)中的注射方法为尾静脉注射，步骤2)中的注射方法为局部注射。
7.如权利要求5所述的卟啉衍生物与纳米材料复合试剂的实验方法，其中所述的卟啉衍生物为四-对-磺酸基-苯基卟啉(TSPP);所述的纳米材料为TiO2晶须或颗粒，纳米ZnO, Pt纳米簇，Au纳米簇和Ag纳米簇中的一种或两种。
【文档编号】A61P19/02GK103816538SQ201410064037
【公开日】2014年5月28日 申请日期:2014年2月25日 优先权日:2014年2月25日
【发明者】王雪梅, 赵春秋, 王建玲, 任发 申请人:东南大学