蜚蠊抗肝纤维化活性提取物的制备及检测方法
【专利摘要】本发明涉及一种蜚蠊提取物的制备方法及检测方法，制备方法包括：将蜚蠊成虫杀死干燥后粉碎；将所得粉末加入醇溶剂进行提取并过滤；将所得滤液减压浓缩至浸膏无醇味；在油水分离装置中加入所得浸膏和热水，进行搅拌，静置后放出水层，收集滤液并过滤；将蜚蠊脱脂提取物经过大孔吸附树脂柱吸附，再用水及不同浓度的醇洗脱；将所得洗脱液过滤、减压浓缩、干燥后粉碎，即得抗肝纤维化的活性提取物；分别测定提取物活性成分中总肽、粘多糖、多元醇及游离氨基酸的含量，当前对于蜚蠊提取物多用于烫伤、烧伤、组织修、口腔护理及心血管疾病方面的应用，本发明使蜚蠊的药用价值得到进一步的提升。
【专利说明】蜚蠊抗肝纤维化活性提取物的制备及检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及医药【技术领域】，具体而言，本发明涉及一种蜚蠊抗肝纤维化活性提取物的制备方法和活性组分的检测方法。
【背景技术】
[0002]蜚蠊(Blattodea)属昆虫纲，蜚蠊目，蜚蠊科，俗称蟑螂。它在地球上已经生存了 4亿年，是世界上生命力最强、最古老、至今繁衍最成功的昆虫类群之一。蜚蠊一直被人类视为害虫，但它面对人类的各种杀灭手段却能顽强繁衍至今，其体内无疑具有最优秀的生物活性物质和特殊生理机制。
[0003]近年来，随着我国对传统中医药资源研究开发的重视，科学工作者对这一资源丰富的昆虫进行了应用方面的研究开发，取得了可喜的成就，并以蜚蠊药材为原料，先后研发的新药有:“康复新液”、“肝隆胶囊”、“心脉隆注射液”，其中“肝隆胶囊”和“心脉隆注射液”为国家级二类新药(中药)。“康复新液”用于治疗口腔溃疡、十二指肠溃疡、烧伤、烫伤、褥疮、肺结核辅助治疗等，为国家中药保护品种、国家医保乙类药物；“肝隆胶囊”用于治疗慢性乙型肝炎，肝硬化及乙肝病毒携带等肝脏疾病；“心脉隆注射液”主治慢性充血性心力衰竭，慢性肺原性心脏病，对继发性肺心病、心肌病的心衰治疗效果特别明显。郝芳芳等研究了美洲大蠊(periplaneta americana,为蜚蠊的一种)乙醇提取物对免疫性肝纤维化大鼠肝功能的影响[文献:郝芳芳，李春艳，赖泳，等.美洲大蠊对免疫性肝纤维化大鼠肝功能的影响[J].安徽农业科学，2012，40 (18):9717.]，结果表明美洲大蠊乙醇提取物对免疫性肝纤维化具有一定的防治作用，能明显改善肝功能；甘平等的研究结果显示美洲大蠊乙醇提物具有抗CC14和ConA所致肝损伤的作用[文献:甘平，张旭强，何旭，等.美洲大蠊提物对小鼠急性肝损伤的保护作用[J].现代药物与临床，2011，26(2): 123-128.]。
[0004]为了明确蜚蠊药材中具有抗肝纤维化作用的活性部位，进一步弄清其中起主要作用的物质基础，并从分子药理学基础上阐明蜚蠊抗肝纤维化的作用机制，发明人对其展开了详细的药学工艺研究。
【发明者】采用不同浓度的醇提，提取方法采用工业生产常用的冷浸或热提两种方法，精制过程选用价格较低、易于反复再生利用的大孔树脂对蜚蠊提取物进行研究，并结合体内外实验进行活性追踪，得到具有抗肝纤维化作用较强的活性部位。
[0005]本发明首先选用不同浓度的乙醇对蜚蠊进行提取，得到粗提物，并采用大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)对粗提取物进行活性筛选，筛选出活性最强的粗提取物，然后选用多种大孔树脂为分离材料，对活性粗提取物进行分离纯化，同时采用健康清洁级SD大鼠建立肝纤维化模型，对分离纯化得到的蜚蠊提取物进行抗肝纤维化药理活性实验，通过数理统计分析，筛选得到抗肝纤维化活性最强的活性提取物。
[0006]本发明的优势在于:①蜚蠊资源丰富，目前已完全实现人工饲养，全国每年产量达600多吨以上本发明得到的蜚蠊提取物具有安全、有效，质量可控、无毒副作用的优势；③本发明工艺所用到的提取、分离、纯化材料为环保、安全、可反复再生利用的材料，如醇、大孔树脂；④蜚蠊系列药品的研发是云南省重点培育的五大系列“云药”特色产品之一，该项研究成果得到的天然产物，将为研发安全、有效、资源丰富、具有较强抗肝纤维化作用的新药奠定基础，使这一资源丰富的药用昆虫更好地为人类服务。
【发明内容】
[0007]本发明的主要目的在于提供一种乙醇提取、大孔吸附树脂纯化，制备蜚蠊抗肝纤维化作用的提取物的制备及检测方法。
[0008]本发明中蜚蠊具有抗肝纤维化的有效部位提取物的制备方法如下:
[0009]原料处理:将蜚蠊养殖时间在5个月以上的成虫用50°C?60°C的热水烫死后，经60?70°C温度下干燥后粉碎。
[0010]提取:将所得粉末置于提取罐中，加入醇溶剂进行提取制得滤液；
[0011]其中醇溶剂为甲醇、乙醇、乙二醇中的一种或几种与水的混合物,提取2?3次，每次用3?7倍量的溶剂，溶剂浓度为60%?95%，提取方法采用冷浸提取法或回流提取法。冷浸提取法为将蜚蠊干燥成虫粉碎至10?30目，置浸泡罐中，加3?7倍量体积分数为60?95%的提取溶剂，搅匀，每次浸泡72小时以上，其间每间隔3?6小时搅拌一次，然后将提取液用孔径为200?500目的滤布过滤，收集滤液；所述回流提取法为将蜚蠊干燥成虫粉碎至10?30目，置提取罐中，加3?7倍量体积分数为60?95%的提取溶剂，搅匀，在70?80°C下回流提取2?5小时，提取3次，然后将提取液用孔径为200?500目的滤布过滤，收集滤液；所述过滤可先用全棉滤布、棉纶滤布、涤纶滤布、丙纶滤布或尼龙滤布中的一种。
[0012]浓缩:将所得滤液减压浓缩至浸膏无醇味，即得蜚蠊提取物；
[0013]脱脂:在油水分离装置中加入所得浸膏和热水，进行搅拌，静置后放出水层，收集滤液并过滤，即得蜚蠊脱脂提取物；
[0014]其中采用在油水分离装置中加入浸膏和浸膏体积量的2?5倍量60?75°C的热水，顺着同一方向缓慢搅拌，并加热至65?75°C，保温0.5小时，静置冷却6?12小时，待油脂分离后放出水层，过滤，收集滤液
[0015]吸附、洗脱:将蜚蠊脱脂提取物经过大孔吸附树脂柱吸附，再用水及不同浓度的醇洗脱，收集洗60?95%的洗脱液；
[0016]大孔吸附树脂为颗粒状，不同浓度的醇溶液是指50?95%的乙醇，大孔吸附树脂的用量为脱脂提取液的I?5倍量体积，脱脂液上柱吸附6?12小时后用50?95%的乙醇洗脱，收集洗脱液，过滤。
[0017]制成品:将所得洗脱液过滤、减压浓缩、干燥后粉碎，即得提取物的活性成分；减压浓缩时温度不得超过75°C。
[0018]测定:①提取物中总肽的测定:采用Folin-酚法，本品含多肽以小牛血清白蛋白计，不得少于400.0mg/g。②提取物中粘多糖的测定:采用苯酚-硫酸法，本品含多肽以葡萄糖计，不得少于100.0mg/g。③提取物中多元醇的测定:采用高碘酸钾-Nash法，本品含多元醇以甘露醇计，不得少于70.0mg/g。④提取物中游离氨基酸的测定:采用茚三酮法，本品含游离氨基酸以络氨酸计，不得少于200.0mg/g。
[0019]本发明的有益效果在于:提供一种用乙醇提取、大孔吸附树脂纯化，制备蜚蠊抗肝纤维化作用的提取物的制备及检测方法，解决了当前对于蜚蠊提取物多用于口腔护理及心血管疾病方面的应用，使蜚蠊的药用价值得到进一步的提升。
【具体实施方式】
[0020]下文将详细描述本发明的实施例。应当注意的是，下述实施例中描述的技术特征或者技术特征的组合不应当被认为是孤立的，它们可以被相互组合和相互结合从而达到更好的技术效果。具体的提取物制备步骤如下:
[0021]原料处理:将蜚蠊养殖时间在5个月以上的成虫用50°C?60°C的热水烫死后，经60?70°C温度下干燥后粉碎。
[0022]提取:将所得粉末置于提取罐中，加入醇溶剂进行提取制得滤液；
[0023]其中醇溶剂为甲醇、乙醇、乙二醇中的一种或几种与水的混合物,提取2?3次，每次用3?7倍量的溶剂，溶剂浓度为60%?95%，提取方法采用冷浸提取法或回流提取法。冷浸提取法为将蜚蠊干燥成虫粉碎至10?30目，置浸泡罐中，加3?7倍量体积分数为60?95%的提取溶剂，搅匀，每次浸泡72小时以上，其间每间隔3?6小时搅拌一次，然后将提取液用孔径为200?500目的滤布过滤，收集滤液；所述回流提取法为将蜚蠊干燥成虫粉碎至10?30目，置提取罐中，加3?7倍量体积分数为60?95%的提取溶剂，搅匀，在70?80°C下回流提取2?5小时，提取3次，然后将提取液用孔径为200?500目的滤布过滤，收集滤液；所述过滤可先用全棉滤布、棉纶滤布、涤纶滤布、丙纶滤布或尼龙滤布中的一种。
[0024]浓缩:将所得滤液减压浓缩至浸膏无醇味，即得蜚蠊提取物；
[0025]脱脂:在油水分离装置中加入所得浸膏和热水，进行搅拌，静置后放出水层，收集滤液并过滤，即得蜚蠊脱脂提取物；
[0026]其中采用在油水分离装置中加入浸膏和浸膏体积量的2?5倍量60?75°C的热水，顺着同一方向缓慢搅拌，并加热至65?75°C，保温0.5小时，静置冷却6?12小时，待油脂分离后放出水层，过滤，收集滤液
[0027]吸附、洗脱:将蜚蠊脱脂提取物经过大孔吸附树脂柱吸附，再用水及不同浓度的醇洗脱，收集洗60?95%的洗脱液；
[0028]大孔吸附树脂为颗粒状，不同浓度的醇溶液是指50?95%的乙醇，大孔吸附树脂的用量为脱脂提取液的I?5倍量体积，脱脂液上柱吸附6?12小时后用50?95%的乙醇洗脱，收集洗脱液，过滤。
[0029]制成品:将所得洗脱液过滤、减压浓缩、干燥后粉碎，即得提取物的活性成分；减压浓缩时温度不得超过75°C。
[0030]测定:①提取物中总肽的测定:采用Folin-酚法，本品含多肽以小牛血清白蛋白计，不得少于400.0mg/g。②提取物中粘多糖的测定:采用苯酚-硫酸法，本品含多肽以葡萄糖计，不得少于100.0mg/g。③提取物中多元醇的测定:采用高碘酸钾-Nash法，本品含多元醇以甘露醇计，不得少于70.0mg/g。④提取物中游离氨基酸的测定:采用茚三酮法，本品含游离氨基酸以络氨酸计，不得少于200.0mg/g。
[0031]实施例1
[0032]蜚蠊醇提取物经AB-8大孔吸附树脂纯化后的抗肝纤维化活性提取物的制备及主要活性成分的测定
[0033]1、将蜚蠊养殖时间在5个月以上的干燥药材经60?70°C干燥后粉碎，置提取罐中，加3?5倍量浓度为60?90%的乙醇溶剂，可采用回流提取或冷浸提取。回流提取:提取三次，第一次3?5小时，第二、三次2?4小时，回流温度控制在75?80°C，用孔径为200?500目的滤布过滤，合并滤液。冷浸提取:提取三次，每次浸泡72小时以上，其间每间隔6?12小时搅拌一次，用孔径为200?500目的滤布过滤,合并滤液。
[0034]2、将上述滤液减压浓缩，温度为50?70°C，浓缩至浸膏无醇味，此时相对密度为1.05?1.20，即得蜚蠊醇提物。
[0035]3、在油水分离装置中加入流浸膏和浸膏体积量的3倍量60?75°C的热水，顺着一个方向缓慢搅拌，搅拌速度为30?50转/分钟，同时加热至65?75°C，保温I小时，静置冷却12小时，待油脂分离后放出水层，用200?500目滤布过滤，收集滤液，滤液减压浓缩，温度为55?65°C，浓缩至相对密度为1.1?1.3，即得蜚蠊脱脂提取物。
[0036]4、AB-8大孔吸附树脂分段精制:将蜚蠊50?95%的乙醇提取物经脱脂后上大孔吸附树脂柱，并吸附2?3小时，用水洗至洗脱液无色，用不同浓度的乙醇洗脱，收集60?95 %的乙醇洗脱，过滤，滤液减压浓缩，温度为60°C，冷冻干燥或喷雾干燥，粉碎，即得本发明的活性提取物。
[0037]大孔吸附树脂为颗粒状，大孔吸附树脂的用量为脱脂提取液的3?5倍量体积。
[0038]5、测定
[0039]5.1采用Folin-酚法测定蜚蠊提取物中的总肽含量，本品含多肽以小牛血清白蛋白计，不得少于400.0mg/g ο
[0040]5.1.1小牛血清白蛋白对照品0.2g，精密称定，置10ml量瓶中，加水至刻度，摇勻。精密量取10ml，置于10ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每Iml含小牛血清白蛋白200 μ g)。
[0041]5.1.2 精密量取对照品溶液 0.00,0.10,0.20,0.40,0.60,0.80、1.0Om 于 1ml 量瓶中，加蒸馏水补齐至1.00ml。每管各加碱性铜试剂(含0.5mol/l NaOHUO% Na2C03,0.1% NaKC4H406和0.05% CuS04) 1.0ml，混匀。35°C加热反应lOmin，冷却;再依次快速加AFolin-酚试剂4.0ml，混匀，55°C加热反应15min，冷却，加水定容，以对照品溶液0.00浓度为空白，照紫外-可见分光光度法在760nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。
[0042]5.1.3取本品1.0g，精密称定，加适量蒸馏水超声溶解，用水定容至100ml，提供试品溶液。精密移取供试品溶液1.0ml，照标准曲线的制备项下的方法制备，依法测定吸光度，并用标准曲线计算出供试品溶液中总肽的含量。
[0043]5.2采用苯酹-硫酸法，本品含多肽以葡萄糖计，不得少于100.0mg/g ο
[0044]5.2.1精密称取干燥至恒重的葡萄糖对照品lOOmg，置10ml容量瓶中，加水溶解，定容、摇匀，即得1.0mg/ml的对照品储备液。精密移取储备液适量，用蒸馏水稀释成0.1mg/ml的对照品测试液。
[0045]5.2.2精密称取蜚蠊提取物ML-D冻干粉约50mg于10ml圆底烧瓶中，加6mol/L盐酸50ml，密封，置90°C恒温干燥箱中水解lh，冷却，转移至10ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
[0046]5.2.3精密移取水解后的供试品溶液10ml，加浓硫酸20ml，5%苯酚2ml，在沸水浴中加热显色1min在490nm处测定吸光度,计算供试品中粘多糖的含量。
[0047]5.3采用高碘酸钾-Nash法，本品含多元醇以甘露醇计，不得少于70.0mg/g。
[0048]5.3.1精密称取干燥至恒重的甘露醇对照品10mg，置1ml量瓶中，加水溶解，定容、摇勻，即得1.0mg/ml的对照品储备液。精密移取对照品储备液4ml于10ml量瓶中，用蒸馏水定容，摇匀，即得40 μ g/ml的对照品测试液。
[0049]5.3.2精密称取蜚蠊提取物ML-D冻干粉约30mg于10ml量瓶中，用蒸馏水定容，摇勻，即得0.3mg/ml的供试液。
[0050]5.3.3供试品溶液和蒸馏水各5ml于25ml量瓶中，分别加入Iml0.015mol/L高碘酸钾溶液，室温静置15min，分别加入2ml0.1% L-鼠李糖，再加入4mlNash试液，50°C保温15min，冷却，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。用紫外-可见分光光度计413nm处测定吸光度，计算供试品中多元醇的含量。
[0051]5.4采用茚三酮法，本品含游离氨基酸以络氨酸计，不得少于200.0mg/g ο
[0052]5.4.1精密称取干燥至恒重的络氨酸对照品10.0mg置10ml容量瓶中，加0.02mol/L的氢氧化钠溶液10ml，水浴加热至完全溶解，用蒸馏水定容至刻度，混匀，即得浓度为0.lmg/ml的对照品溶液。
[0053]5.4.2精密称取ML-D 25mg置10ml量瓶中，用蒸馏水溶解并定容至刻度，混匀，SP得浓度为0.25mg/ml的供试品溶液。
[0054]5.4.3精密移取Iml供试品溶液和Iml蒸馏水分别置1ml量瓶中，分别加Imll.0 %的茚三酮溶液和Iml柠檬酸缓冲液(pH = 6.0)，混匀，沸水浴加热显色30min，冷却，分别加3ml60%乙醇，用蒸馏水定容至刻度，混匀，于570nm处测定吸光度值，计算游离氨基酸的含量。
[0055]实施例2
[0056]蜚蠊醇提取物经D-1Ol大孔吸附树脂纯化后的抗肝纤维化活性提取物的制备及主要活性成分的测定
[0057]I蜚蠊活性提取物的制备:提取、浓缩、脱脂工艺同实施例一的I?3。
[0058]2D-101大孔吸附树脂分段精制:将上一步得到的蜚蠊取物加适量水溶解后上D-1Ol大孔吸附树脂柱，吸附过夜，用水洗至洗脱液无色，然后用不同浓度的醇洗脱，收集60?95%的乙醇洗脱液，过滤，滤液减压浓缩，温度为60°C，冷冻干燥或喷雾干燥，粉碎，即得本发明的活性提取物。
[0059]大孔吸附树脂为颗粒状，大孔吸附树脂的用量为脱脂提取液的3倍量体积。
[0060]3测定:①提取物中总肽的测定:采用Folin-酚法，本品含多肽以小牛血清白蛋白计，测量值为461.0mg/g。②提取物中粘多糖的测定:采用苯酚-硫酸法，本品含多肽以葡萄糖计，测量值为137.0mg/g。③提取物中多元醇的测定:采用高碘酸钾-Nash法，本品含多元醇以甘露醇计，测量值为78.5mg/g。④提取物中游离氨基酸的测定:采用茚三酮法，本品含游离氨基酸以络氨酸计，测量值为237.5mg/g。
[0061]实施例3
[0062]蜚蠊醇提取物经D-201大孔吸附树脂纯化后的抗肝纤维化活性提取物的制备及主要活性成分的测定
[0063]I蜚蠊活性提取物的制备:提取、浓缩、脱脂工艺同实施例一的I?3。
[0064]2D-201大孔吸附树脂分段精制:将上一步得到的蜚蠊取物加适量水溶解后上D-201大孔吸附树脂柱，吸附过夜，用水洗至洗脱液无色，然后用不同浓度的醇洗脱，收集60?95%的乙醇洗脱液，过滤，滤液减压浓缩，温度为60°C，冷冻干燥或喷雾干燥，粉碎，即得本发明的活性提取物。
[0065]大孔吸附树脂为颗粒状，大孔吸附树脂的用量为脱脂提取液的3倍量体积。
[0066]3测定:①提取物中总肽的测定:采用Folin-酚法，本品含多肽以小牛血清白蛋白计，测量值为462.lmg/g。②提取物中粘多糖的测定:采用苯酚-硫酸法，本品含多肽以葡萄糖计，测量值为127.2mg/g。③提取物中多元醇的测定:采用高碘酸钾-Nash法，本品含多元醇以甘露醇计，测量值为88.6mg/g。④提取物中游离氨基酸的测定:采用茚三酮法，本品含游离氨基酸以络氨酸计，测量值为231.6mg/g。
[0067]实施例4
[0068]蜚蠊醇提取物经HPD-100大孔吸附树脂纯化后的抗肝纤维化活性提取物的制备及主要活性成分的测定
[0069]I蜚蠊活性提取物的制备:提取、浓缩、脱脂工艺同实施例一的I?3。
[0070]2HPD-100大孔吸附树脂分段精制:将上一步得到的蜚蠊取物加适量水溶解后上D-201大孔吸附树脂柱，吸附过夜，用水洗至洗脱液无色，然后用不同浓度的醇洗脱，收集60?95%的乙醇洗脱液，过滤，滤液减压浓缩，温度为60°C，冷冻干燥或喷雾干燥，粉碎，即得本发明的活性提取物。
[0071]大孔吸附树脂为颗粒状，大孔吸附树脂的用量为脱脂提取液的3?5倍量体积。
[0072]3测定:①提取物中总肽的测定:采用Folin-酚法，本品含多肽以小牛血清白蛋白计，测量值为450.3mg/g。②提取物中粘多糖的测定:采用苯酚-硫酸法，本品含多肽以葡萄糖计，测量值为130.5mg/g。③提取物中多元醇的测定:采用高碘酸钾-Nash法，本品含多元醇以甘露醇计，测量值为82.lmg/g。④提取物中游离氨基酸的测定:采用茚三酮法，本品含游离氨基酸以络氨酸计，测量值为223.8mg/g。
[0073]本发明提供的一种蜚蠊成虫提取物的制备及检测方法，能有效提取出蜚蠊体内可用于抗肝纤维化作用的活性成分，通过Folin-酚法、苯酚-硫酸法、高碘酸钾-Nash法及茚三酮法对活性成分进行检测。
[0074]本文虽然已经给出了本发明的一些实施例，但是本领域的技术人员应当理解，在不脱离本发明精神的情况下，可以对本文的实施例进行改变。上述实施例只是示例性的，不应以本文的实施例作为本发明权利范围的限定。
【权利要求】
1.一种蜚蠊成虫提取物的制备方法，其特征在于:包括以下步骤: 原料处理:将蜚蠊养殖时间在5个月以上的成虫杀死干燥后粉碎； 提取:将所得粉末置于提取罐中，加入醇溶剂进行提取制得滤液； 浓缩:将所得滤液减压浓缩至浸膏无醇味，即得蜚蠊提取物； 脱脂:在油水分离装置中加入所得浸膏和热水，进行搅拌，静置后放出水层，收集滤液并过滤，即得蜚蠊脱脂提取物； 吸附、洗脱:将蜚蠊脱脂提取物经过大孔吸附树脂柱吸附，再用水及不同浓度的醇洗脱，收集洗60?95%的洗脱液； 制成品:将所得洗脱液过滤、减压浓缩、干燥后粉碎，即得提取物的活性成分； 检测:分别测定提取物的活性成分中总肽、粘多糖、多元醇及游离氨基酸的含量。
2.根据权利要求1所述的蜚蠊成虫提取物的制备方法，其特征在于:所述原料处理是用50°C?60°C的热水烫死后，在60°C?70°C下烘干。
3.根据权利要求1所述的蜚蠊成虫提取物的制备方法，其特征在于:所述提取步骤中醇溶剂为甲醇、乙醇、乙二醇中的一种或几种与水的混合物，提取2?3次，每次用3?7倍量的溶剂，溶剂浓度为60%?95%，提取方法采用冷浸提取法或回流提取法。
4.根据权利要求3所述的蜚蠊成虫提取物的制备方法，其特征在于:所述冷浸提取法为将蜚蠊干燥成虫粉碎至10?30目，置浸泡罐中，加3?7倍量体积分数为60?95 %的提取溶剂，搅匀，每次浸泡72小时以上，其间每间隔3?6小时搅拌一次，然后将提取液用孔径为200?500目的滤布过滤，收集滤液；所述回流提取法为将蜚蠊干燥成虫粉碎至10?30目，置提取罐中，加3?7倍量体积分数为60?95%的提取溶剂，搅匀，在70?80°C下回流提取2?5小时，提取3次，然后将提取液用孔径为200?500目的滤布过滤，收集滤液；所述过滤可先用全棉滤布、棉纶滤布、涤纶滤布、丙纶滤布或尼龙滤布中的一种。
5.根据权利要求1所述的蜚蠊成虫提取物的制备方法，其特征在于:所述脱脂采用在油水分离装置中加入浸膏和浸膏体积量的2?5倍量60?75°C的热水，顺着同一方向缓慢搅拌，并加热至65?75°C，保温0.5小时，静置冷却6?12小时，待油脂分离后放出水层，过滤，收集滤液。
6.根据权利要求1所述的蜚蠊成虫提取物的制备方法，其特征在于:所述吸附、洗脱步骤大孔吸附树脂为颗粒状，不同浓度的醇溶液是指50?95%的乙醇，大孔吸附树脂的用量为脱脂提取液的I?5倍量体积，脱脂液上柱吸附6?12小时后用50?95%的乙醇洗脱，收集洗脱液，过滤。
7.根据权利要求1所述的蜚蠊成虫提取物的制备方法，其特征在于:所述减压浓缩时温度不得超过75°C。
8.一种蜚蠊成虫提取物的检测方法，其特征在于:所述检测方法指采用Folin-酚法测定提取物中的总肽含量，采用苯酚-硫酸法测定提取物中粘多糖的含量，采用高碘酸钾-Nash法测定提取物中多元醇的含量，采用茚三酮法测定提取物中游离氨基酸的含量。
【文档编号】A61P1/16GK104352529SQ201410623930
【公开日】2015年2月18日 申请日期:2014年11月7日 优先权日:2014年11月7日
【发明者】肖培云, 杨永寿, 施贵荣, 李夸巧, 杨敏, 赵昱 申请人:大理学院