一种全人源her2抗体、其编码基因及应用的制作方法

一种全人源her2抗体、其编码基因及应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及药物化学领域，具体涉及一种全人源HER2抗体、其编码基因及应用。本发明提供了一种全人源HER2抗体，其中重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:1，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:2。全人源HER2抗体可降低输液反应和免疫原性，提高药物安全性，具有更好的药物动力学特征。
【专利说明】一种全人源HER2抗体、其编码基因及应用

【技术领域】
[0001] 本发明涉及抗体【技术领域】，具体涉及一种全人源HER2抗体、其编码基因及应用。

【背景技术】
[0002] HER2/neu (Human Epidermal Growth Factor Receptor 2,人表皮生长因子受体 2)，又称erbB-2,是生长因子受体家族成员之一。该受体蛋白通常只在胎儿时期表达，成年 以后只在极少数正常组织内低水平表达，然而在多种人类肿瘤组织中（如乳腺癌、胃癌、卵 巢癌、肺癌、原发性肾细胞癌、子宫内膜癌等）却过度表达，并提示预后不良。HER2/neu的过 度表达可导致肿瘤细胞过度增殖和新生血管的形成，造成肿瘤高复发率、高转移率和高死 亡率。研宄表明，HER2/neu的过度表达会出现在约30%的乳腺癌和16%的胃癌患者中，是 乳腺癌患者预后差的指征，同时在胃癌的发生、发展和侵袭性/转移性上也发挥着重要作 用。
[0003] 针对HER2/neu靶点的单克隆抗体药物治疗是继手术和放、化疗后较为有效的治 疗手段。赫赛汀（Herceptin)是美国Genentech公司（现属Roche公司）研制，于1998年 上市的以HER2/neu为靶点的拮抗性人源化单克隆抗体药物，被批准用于HER2/neu高表达 的乳腺癌和胃癌的治疗。该抗体抑制了 HER2/neu的信息传递活性，从而阻断了下游信号传 导，导致癌细胞增殖停滞和新生血管形成的抑制。赫赛汀作为一线用药在乳腺癌术后与化 疗合用已在临床中被证实可使病人生存期延长，并使复发率下降50%。
[0004] 赫赛汀的分子药理机制通常被认为是通过抑制HER2磷酸化、阻断细胞增殖周期、 加速受体内化及抗体Fc段诱导的效应器作用（如抗体介导的细胞杀伤作用，ADCC)的共同 结果。
[0005] 尽管相当多的HER2阳性乳腺癌病人在赫赛汀治疗的起始阶段对抗体药物有良好 的反应，但最终疾病还会进展和恶化，有约70 %病例对赫赛汀治疗无效和产生耐药状况。因 此，寻求更为有效的抗HER2/neu抗体是目前临床迫切需要解决的问题。
[0006] 赫赛汀的耐药机制目前尚不完全清楚，有HER2受体以下信号传递通路异常，如持 续激活的PI3K途径、磷酸化PTEN失去作用等。针对HER2分子上不同的表位产生的可抑制 HER2和HER3形成异源性二聚体的单克隆抗体帕妥珠单抗（Pertuzumab)与赫赛汀联合应 用，在最近的临床实验中被证实与单用赫赛汀相比其对病人生存期的延长有更加明显的作 用，说明抗体通过赫赛汀表位以外的结合位点可以产生不同于赫赛汀的拮抗机制，从而与 赫赛汀产生相加或协同效应。T-DMl是免疫抗体结合物（antibody-drug conjugate，ADC)， 是将高效价细胞毒素 DMl与单克隆抗体曲妥珠单抗（Trastuzumab，即赫赛汀）通过共价键 结合，利用抗体结合HER2后的受体内吞作用，将毒素带入HER2阳性的肿瘤细胞，从而起到 对肿瘤细胞的杀伤作用。在之前接受过赫赛汀和化疗的HER2阳性晚期或转移性乳腺癌病 人中，与标准治疗联合使用，T-DMl可显著延长无进展生存期。该临床实验数据表明，利用 HER2抗体对HER2阳性肿瘤细胞的特异免疫反应性，携载细胞毒素进入癌细胞，可能是克服 赫赛汀药效不足的有效途径。临床前实验还显示，利用细胞工程方法制备的去岩藻糖的曲 妥珠单抗，通过加强与效应器细胞上Fe受体的结合，获得了更强的抗体介导的细胞杀伤作 用，在相关动物模型中展示了比赫赛汀更强的抑制肿瘤的效果。该项研宄结果提示，加强抗 体介导的细胞杀伤作用，也可能是优化抗HER2抗体的可能途径之一。
[0007] 赫赛汀是人源化的抗体药产品，受到技术发展的制约。患者接受抗体治疗后产生 的抗药抗体，可能是抗体耐药的机制之一。人源化抗体临床常见的副作用是输液反应。高 容量全人源抗体单链可变区片段（scFv)噬菌体展示文库，是近十几年来被国际各大生物 制药公司利用来筛选全人源抗体的平台之一。过去十几年来，有利用该文库筛选得到高亲 和力全人源抗体的先例（如Abbott公司的阿达木单抗（Humira))及丰富经验。全人源抗 体可降低输液反应和免疫原性，提高药物安全性，具有更好的药代动力学特征。


【发明内容】

[0008] 本发明提供了一种全人源的HER2抗体，其中重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO: 1，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO: 2。
[0009] 本发明的全人源HER2抗体，其是Fab、Fab'、F(ab'）2、Fv或scFv的形式。所述 Fab、Fab'、F(ab'）2、Fv或scFv具有本领域所惯常理解的含义。
[0010] 本发明的全人源HER2抗体，还可以包括人IgG的重链恒定区和轻链恒定区。在一 个具体的实施方案中，所述人IgG为IgGl。在一个具体的实施方案中，所述人IgG重链恒定 区的氨基酸序列为SEQ ID N0:5,所述人IgG轻链恒定区的氨基酸序列为SEQ ID N0:6。
[0011] 本发明提供了编码本发明全人源HER2抗体的核苷酸序列。
[0012] 在一个具体的实施方案中，编码所述重链可变区的核苷酸序列为SEQ ID N0:3,编 码所述轻链可变区的核苷酸序列为SEQ ID N0:4。在一个具体的实施方案中，当本发明的全 人源HER2抗体为全长抗体时，在本发明的核苷酸序列中，编码所述重链恒定区的核苷酸序 列为SEQ ID N0:7,编码所述轻链恒定区的核苷酸序列为SEQ ID N0:8。
[0013] 本发明提供了一种表达载体，其中本发明的核苷酸序列与表达载体的表达控制序 列可操作地连接。在具体的实施方案中，所述表达载体是pGEM-Τ载体或293载体。
[0014] 本发明提供了一种细胞，其包含本发明的表达载体。所述细胞可以是原核或真核 的。在具体的实施方案中，所述细胞可以哺乳动物细胞，例如FreeStyle 293F细胞。
[0015] 本发明提供了一种药物组合物，其包含本发明的全人源HER2抗体和可药用载体。
[0016] 此外发明人还发现，本发明的全人源HER2抗体与赫赛汀的作用机制不同，因此本 发明的全人源HER2抗体可用于对赫赛汀耐药或对赫赛汀无反应的患者。
[0017] 本发明提供了一种联合药物，其包含本发明的全人源HER2抗体和赫赛汀。
[0018] 本发明提供了一种试剂盒，其包含本发明的全人源HER2抗体。所述试剂盒可用于 检测样品中的HER2蛋白。所述试剂盒还可包含本领域检测HER2试剂盒中的其他常用组分。
[0019] 本发明提供了本发明的全人源HER2抗体用于制备用于治疗受试者中的HER2阳性 肿瘤的药物的用途。
[0020] 所述"HER2阳性肿瘤"是指如果IHC〔免疫组化法〕检查结果为3个加号（+++)， 即，大于30%的肿瘤细胞的胞膜呈现完整的强着色，就表明为HER2阳性；如果是2个加号 (++)，即，至少10%的肿瘤细胞呈现弱至中度完整的胞膜染色，那么进一步做FISH〔荧光原 位杂交法〕或CISH〔显色原位杂交法〕检查，倘若结果为阳性〔发生基因扩增〕，就可以确诊 为HER2阳性。优选地，HER2阳性肿瘤检测结果是使用我国食品药品监督管理总局认证的 检测试剂盒（IHC，FISH和CISH检测试剂盒）获得的结果。执业医师熟知如何判定肿瘤是 否为HER2阳性肿瘤。
[0021] 所述HER2阳性的肿瘤可以选自HER2阳性的乳腺癌、胃癌、肺癌、非小细胞肺癌、 骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛门区癌、 结肠癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食道癌、小肠 癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状芳腺癌、肾上腺癌、软组织癌、尿道癌、阴莖癌、前列腺癌、 膀胱癌、肾或尿道癌、肾细胞癌、肾盂癌、间皮瘤、肝细胞癌、胆囊癌、慢性或急性白血病、淋 巴细胞淋巴瘤、中枢神经系统（CNS)癌、脊柱肿瘤、脑干神经胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤 (glioblastoma multiforme)、星形细胞瘤、神经鞘瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、脑膜瘤、 鳞状细胞瘤和垂体腺瘤。
[0022] 优选地，所述受试者是人。
[0023] 优选地，所述受试者是对赫赛汀耐药或对赫赛汀无反应的人。

【专利附图】

【附图说明】
[0024] 图IA显示了重组全长抗人HER2抗体GB235-049重链表达载体（293-VH-CH)的结 构示意图；图IB显示了重组全长抗人HER2抗体GB235-049轻链表达载体（293-VL-CL)的 结构示意图。以PCR方法，利用相应模板和引物（详见实施例5)分别获得含5'端EcoRI 酶切位点的信号肽、重链可变区（VH)、含TGA终止密码子和3'端BamH I酶切位点的重链恒 定区（CH)基因片段，并以over-lapping PCR方法将三段联接，获得GB235-049抗体的重链 全长基因片段。以相同方法获得GB235-049抗体含信号肽、轻链可变区（VL)和轻链恒定区 (CL)的轻链全长基因片段。利用EcoRI和BamH I酶切形成的粘性末端分别将重链和轻链 全长基因片段克隆至PGEM-T载体。
[0025] 图2显示了重组全长抗人HER2抗体GB235-049的SDS-PAGE电泳结果图。将纯化 得到的68235-049抗体和赫赛汀对照样品在50禮二硫苏糖醇还原条件下经10%聚丙烯酰 氨凝胶电泳解析，结果显示GB235-049抗体和赫赛汀均呈现分子量为50KDa和25KDa的两 条带，分别为抗体的重链和轻链。
[0026] 图3显示了重组全长抗人HER2抗体GB235-049与人HER2抗原的结合结果图。以 重组人HER2抗原包被ELISA板，以不同浓度的GB235-049抗体和赫赛汀与包被于板上的抗 原分子结合，并以HRP标记的羊抗人IgG Fc抗体测定结合的抗体。结果显示与赫赛汀一样， GB235-049抗体可结合于人HER2,并呈现出浓度依赖性和可饱和性。
[0027] 图4A显示了重组全长抗人HER2抗体GB235-049与猴HER2抗原的结合结果图。以 猴HER2抗原包被ELISA板，以不同浓度的GB235-049抗体和赫赛汀与包被于板上的抗原分 子结合，并以HRP标记的羊抗人IgG Fc抗体测定结合的抗体。结果显示GB235-049与赫赛 汀一样，GB235-049抗体可结合于猴HER2,并呈现出浓度依赖性和可饱和性。
[0028] 图4B显示了重组全长抗人HER2抗体GB235-049与小鼠 HER2抗原的结合结果图。 在用ELISA测定GB235-049抗体与猴HER2免疫反应性的同时，以重组小鼠 HER2抗原被 ELISA板，以不同浓度的GB235-049抗体和赫赛汀与包被于板上的抗原分子结合，并以HRP 标记的羊抗人IgG Fc抗体测定结合的抗体。结果显示GB235-049抗体、赫赛汀与小鼠 HER2 均无交叉反应。
[0029] 图5显示了重组全长抗人HER2抗体GB235-049与人HER家族其它成员人HER1、 HER3、HER4抗原的结合实验结果图。以重组人HERl、HER2、HER3和HER4抗原分别包被ELISA 板，以GB235-049抗体和赫赛汀（均为10 μ g/mL)与包被于板上的抗原分子结合，并以HRP 标记的羊抗人IgG Fc抗体测定结合的抗体。结果显示与赫赛汀一样，GB235-049抗体可结 合于人的HER2,并且与其他HER家族成员分子没有免疫反应性。
[0030] 图6显示了重组全长抗人HER2抗体GB235-049与赫赛汀表位竞争的结果图。用 ELISA方法，以重组人HER2抗原包被ELISA板，以不同浓度的GB235-049抗体和赫赛汀分别 与生物素标记的赫赛汀（0. 005 μ g/mL固定浓度）共同室温孵育2小时后和HER2包被的板 结合，并用HRP标记的抗生物素抗体检测结合的抗体。结果显示，随赫赛汀浓度增加，生物 素标记的赫赛汀在HER2抗原上的结合受到抑制；而GB235-049抗体即使是在实验涉及的最 高浓度（10 μ g/mL)时，仍对生物素标记的赫赛汀在HER2上的结合无抑制作用。
[0031] 图7显示了重组全长抗人HER2抗体GB235-049与BT-474细胞的结合曲线结果图。 将表达中等水平的HER2和表达高水平的P-HER2的BT-474乳腺癌细胞在96-孔U型板中 分别与不同浓度的GB235-049抗体和赫赛汀孵育，在充分洗涤后，以HRP标记的羊抗人Fc 抗体检测结合抗体。结果显示，GB235-049抗体和赫赛汀一样可结合于表达HER2的细胞表 面，且呈现出浓度依赖性和可饱和性，提示GB235-049抗体对HER2有高度选择性。
[0032] 图8显示了重组全长抗人HER2抗体GB235-049体外抑制BT-474细胞增殖活性的 实验结果。将表达中等水平的HER2和表达高水平的P-HER2的BT-474乳腺癌细胞在96-孔 平底型板中分别与2和10 μ g/mL的GB235-049抗体和赫赛汀孵育72小时后用Alamar Blue 测定细胞活性。结果显示，两个抗体在两种浓度下均能明显抑制BT-474细胞增殖。
[0033] 图9显示了重组全长抗人HER2抗体GB235-049体外抑制BT-474细胞增殖活性可 被可溶性人HER2抗原翻转。将HER2高表达的BT-474乳腺癌细胞在96-孔平底板中分别 与不同浓度的GB235-049抗体和赫赛汀孵育72小时，或在各抗体浓度条件下加入100 μ g/ mL的重组人HER2抗原，并孵育72小时，用Alamar Blue测定细胞活性。结果显示，与空白 对照相比，两个抗体在两种浓度下均能明显抑制BT-474细胞增殖。在存在可溶性HER2抗 原的条件下，高浓度赫赛汀抗体对细胞增殖的抑制作用部分被翻转，低浓度赫赛汀抗体对 细胞增殖的作用完全被翻转，而GB235-049抗体无论是在高浓度还是低浓度条件下均被翻 转，提示抗体对肿瘤细胞增殖的抑制作用是HER2特异性的。
[0034] 图10A、图10B、图IOC分别显示了重组全长抗人HER2抗体GB235-049体外作用 BT-474细胞2小时、24小时、72小时后的P-HER2、P-Akt、P-ERK1/2蛋白表达结果图。将 表达中等水平的HER2和表达高水平的P-HER2的BT-474在含10%胎牛血清培养基中与2 和20 μ g/mL赫赛汀和GB235-049抗体孵育，并分别于2、24和72小时取样。以细胞裂解 液做免疫印迹，以相应抗体分别探测全部和磷酸化的HER2、ERK1/2和Akt。图IOA的结果 显示，在抗体作用2小时的情况下，与对照组相比，20 μ g/ml和2 μ g/ml的赫赛汀均可引起 P-HER2和P-Akt的下调，而GB235-049抗体对P-HER2和P-Akt的下调作用均不明显，对 P-HER2有轻微的上调作用。图IOB的结果显示，在24小时的作用条件下，赫赛汀对P-HER2 和P-Akt的下调作用与2小时的一致，而GB235-049抗体对P-HER2有上调作用，但对P-Akt 无明显作用。图IOC的结果显示，在作用72小时的条件下，20 μ g/ml和2 μ g/ml的赫赛汀 对P-HER2、P-Akt和P-ERK1/2都产生了明显的下调作用，而GB235-049抗体主要活性体现 在对P-ERK1/2的下调作用上，无论是在20 μ g/ml还是2 μ g/ml，其下调作用都很明显。

【具体实施方式】
[0035] 本文所用的术语"抗体"是能够通过至少一个抗原识别位点，和靶分子（包括糖、 多聚核酸、脂类、多肽等）特异结合的免疫球蛋白。完整的抗体由两个相同的轻链（L)和两 个相同的重链（H)组成。每条轻链通过一个共价二硫键和重链相连，而不同免疫球蛋白同 种型的重链间的二硫键数目不同。每条重链和轻链也有规则间隔的链内二硫键。每条重链 的一端有可变区（VH)，其后是多个恒定区。每条轻链的一端有可变区（VL)，另一端有恒定 区；轻链的恒定区和重链的第一个恒定区相对，轻链的可变区和重链的可变区相对。特殊的 氨基酸残基在轻链和重链的可变区之间形成界面。
[0036] 本文所用的术语"可变区"表示抗体中可变区的某些部分在序列上有所不同，它形 成了各种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。然而，可变性并不均匀地分布在整个可 变区中。它集中于轻链和重链可变区中称为互补决定区（CDR)或超变区中的三个片段中。 可变区较保守的部分称为构架区（FR)。天然重链和轻链的可变区中各自包括四个FR区，它 们大致上呈β-折叠构型，由形成连接环的三个⑶R区相连，在某些情况下可形成部分β 折叠结构。每条链中的CDR通过FR区紧密地靠在一起并与另一链的CDR -起形成抗体的 抗原结合部位（参见Kabat等，NIH Publ. No. 91-3242,卷I，647-669页（1991)。恒定区不 直接参与抗体与抗原的结合，但是它们表现出不同的效应功能，例如参与抗体的依赖于抗 体的细胞毒性。
[0037] 脊椎动物抗体（免疫球蛋白）的"轻链"可根据其恒定区的氨基酸序列归为明显 不同的两类（称为κ和λ)中的一类。根据其重链恒定区的氨基酸序列，免疫球蛋白可以 分为不同的种类，主要有5类免疫球蛋白：IgA，IgD，IgE，IgG和IgM，其中一些还可进一步 分为亚类（同类型），如IgGl，IgG2, IgG3, IgG4, IgAl和IgA2。对应于不同免疫球蛋白重 链恒定区分别称为α、β、ε、μ、γ。不同免疫球蛋白的亚单位结构和三维构型是众所周 知的。
[0038] 本文所用的"全人源抗体"是指抗体基因来源于人类的抗体。
[0039] 本文中，所谓"抗体"不但包括完整的多克隆或者单克隆抗体，也包括各种抗体片 段（如Fab、Fab'、F(ab'） 2、Fv)，单链抗体（scFv)，由抗体片段形成的多特异性抗体，含有抗 体片段的融合蛋白，以及任何经过改造但包含所需特异性识别位点的免疫球蛋白分子。抗 体的来源或者制备方法并不受限制，例如通过杂交瘤、噬菌体选择、重组表达、转基因动物 等。
[0040] 下面将结合实施例进一步详细地描述本发明，然而应该理解，列举这些实施例只 是为了说明本发明，而不是用来限制本发明。下列实施例中未特别指明的浓度为质量百分 比浓度；未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，《分子克隆 实验指南》（New York :Cold Spring Harbor LaboratoryPress，1989)中所述的条件，或按 照制造厂商所建议的条件。
[0041] 实施例1从全人源scFv B莖菌体文库中筛选scFv的阳性克隆
[0042] 人HER2 (胞外域）-Fc融合蛋白（下文称为hHER2-Fc)抗原（购自Sino Biological 公司，货号：10004-H02H)用磷酸盐缓冲液PBS (0· OlM Na2HPO4 ·12Η20+0· 002MKH 2Ρ04+0· 14Μ NaCl+0. 002Μ KC1，pH = 8. 6)稀释至 5 μ g/ml，按照 100 μ 1/ 孔加入酶标板中， 4°C包被过夜。PBST(含0. 05%吐温20的PBS缓冲液）洗板4次后加入5% BSA(牛血清 白蛋白，货号：A7030,购自Sigma公司）300 μ1/孔，37°C封闭1小时。再用PBST洗板2次。 将含有7 X IOltl个独立克隆的全人源scFv噬菌体抗体文库（此抗体库由优瑞科（北京）生 物技术有限公司以多个健康人淋巴细胞的抗体可变区基因与人工合成的重链CDR3基因组 合构建而成）的悬液按照100 μ 1/孔加入酶标板中，在37°C条件下孵育2小时。吸出噬菌 体悬液，加入PBST充分吹打5分钟。在第一轮淘选过程中，PBST吹打一遍，在第二轮和第三 轮淘选中，PBST分别进行五遍和十遍的吹打，以去除非特异性的结合。加入含0. 1 % BSA的 0. 2M甘氨酸-盐酸（pH = 2. 2)洗脱液，室温孵育10分钟后，充分地吹打，洗脱阳性克隆的 噬菌体。将洗脱下的阳性克隆的噬菌体悬液用I MTris-HCUpH = 9. 1)缓冲液中和至中性， 感染对数期的大肠杆菌（购自Lucigen公司，货号：60502-1)并扩增，用于下一轮淘选（第 一、二轮）。第三轮淘选时，需将洗脱液进行梯度稀释并感染对数期宿主菌，在带氨苄（Amp) 抗性的LB琼脂培养皿上分离出单克隆来，用于单克隆鉴定及质粒保存。
[0043] 实施例2 scFv噬菌体阳性克隆的酶联免疫吸附法（ELISA)鉴定
[0044] hHER2-Fc抗原用PBS (pH = 8. 6)稀释至2 μ g/ml，按照100 μ 1/孔加入酶标板中， 4°C包被过夜。PBST洗板4次后加入5% BSA 300 μ 1/孔，37°C封闭1小时。再用PBST洗板 2次，加入100 μ 1/孔噬菌体阳性克隆悬液，在37°C条件下孵育2小时。PBST洗板4次，加 入HRP(辣根过氧化物酶）标记的抗M13噬菌体抗体（购自GE公司，货号：27-9421-01，用 PBSTl: 5000稀释，100 μ 1/孔），室温孵育1小时。PBST洗板4次，加入100 μ 1/孔显色液 (可溶型单组分TMB底物溶液，购自Tiangen公司，货号：ΡΑ107-01)，室温孵育15分钟显色， 加入50 μ 1/孔终止液（1Μ硫酸），在多功能酶标仪（Model 680Micro reader，购自Bio-Rad 公司）上450/630nm的波长下读出吸光值。
[0045] 结果显示，经过三轮筛选，共获得1312种全人源scFv，可与hHER2-Fc抗原特异性 结合的scFv噬菌体阳性克隆有499种。经DNA测序，这些阳性克隆中有102种核苷酸/氨 基酸序列均不相同的scFv (如表1所示）。
[0046] 表 L
[0047]

【权利要求】
1. 一种全人源的HER2抗体，其中重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO: 1，轻链可变 区的氨基酸序列为SEQ ID N0:2。
2. 权利要求1的全人源HER2抗体，其是Fab、Fab'、F(ab'）2、Fv或scFv的形式。
3. 权利要求1的全人源HER2抗体，还包括人IgG的重链恒定区和轻链恒定区；优选地， 所述人IgG为IgGl;更优选地，所述人IgG重链恒定区的氨基酸序列为SEQ ID N0:5,所述 人IgG轻链恒定区的氨基酸序列为SEQ ID N0:6。
4. 编码权利要求1-3任一项的全人源HER2抗体的核苷酸序列；优选地，在所述核苷酸 序列中，编码所述重链可变区的核苷酸序列为SEQ ID N0:3,编码所述轻链可变区的核苷酸 序列为 SEQ ID N0:4。
5. 权利要求4的编码全人源HER2抗体的核苷酸序列，其中当所述全人源HRE2抗体包 含重链恒定区和轻链恒定区时，编码所述重链恒定区的核苷酸序列为SEQ ID N0:7,编码所 述轻链恒定区的核苷酸序列为SEQ ID N0:8。
6. -种包含权利要求4的核苷酸序列的表达载体，所述核苷酸序列与所述表达载体的 表达控制序列可操作地连接；优选地，所述表达载体为PGEM-T载体或293载体。
7. -种药物组合物，其包含权利要求1-3任一项的全人源HER2抗体和可药用载体。
8. -种联合药物，其包含权利要求1-3任一项的全人源HER2抗体和赫赛汀。
9. 一种检测人HER2的试剂盒，其包含权利要求1-3任一项的全人源HER2抗体。
10. 权利要求1-3任一项的全人源HER2抗体用于制备用于治疗受试者中的HER2阳性 肿瘤的药物的用途；优选地，所述HER2阳性的肿瘤选自HER2阳性的乳腺癌、胃癌、肺癌、非 小细胞肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、 肛门区癌、结肠癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食道癌、小肠 癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状芳腺癌、肾上腺癌、软组织癌、尿道癌、阴莖癌、前列腺癌、 膀胱癌、肾或尿道癌、肾细胞癌、肾盂癌、间皮瘤、肝细胞癌、胆囊癌、慢性或急性白血病、淋 巴细胞淋巴瘤、中枢神经系统（CNS)癌、脊柱肿瘤、脑干神经胶质瘤、多形式成胶质细胞瘤 (glioblastoma multiforme)，星形细胞瘤，神经鞘瘤，室管膜瘤，成神经管细胞瘤，脑膜 瘤、鳞状细胞瘤和垂体腺瘤；优选地，所述受试者是人；更优选地，所述受试者是对赫赛汀 耐药或对赫赛汀无反应的人。
【文档编号】A61K39/395GK104497140SQ201410704632
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年11月26日 优先权日:2014年11月26日
【发明者】周清, 舒孟军, 石姝, 言苏, 谭涛超 申请人:嘉和生物药业有限公司