实施例1 :BAK502G9的表达
[0153] 以与WO 87/04462和WO 2004/076485中所述规程类似的方式在GS NSO细胞系中 表达BAK502G9,所得培养物上清液含598mg/l BAK502G9抗体。
[0154] 实施例2 :BAK502G9的纯化
[0155] (a)rmp 蛋白 A Sepharose 纯化
[0156] rmp蛋白A Sepharose fast flow层析步骤所使用的柱为2. 6cm直径，在0· 9% w/v 氯化钠中装柱，床高14. 5cm，柱体积77ml。树脂来自GE Healthcare/Amersham Biosciences 17-5138。层析使用 Amersham Biosciences P-50 泵、UVl 检测仪和流动室（flow cell)进 行。将柱在使用前用6M盐酸胍清洁。
[0157] 用水清洗和清洁后，随后将rmp蛋白A Sepharose fast flow柱用350ml磷酸盐 缓冲盐水pH7. 2平衡。将2. 6升培养物上清液直接于室温以200cm/小时加载到柱上。
[0158] 然后用567ml磷酸盐缓冲盐水ρΗ7· 2,接着用568ml 50mM乙酸钠 ρΗ5· 55清洗柱。 通过用380ml 50mM乙酸钠 ρΗ3. 75进行清洗，从柱上洗脱BAK502G9抗体。洗脱后，用50mM 乙酸PH3.0清洗柱。
[0159] 在峰的上下坡最大UV偏差2%之间收集洗脱峰。在217ml中回收了 I. 5g BAK502G9 抗体。
[0160] (b)低DH病毒灭活
[0161] 将 rmp 蛋白 A Sepharose fast flow 洗出液用 173ml IOOmM 乙酸调整至 ρΗ3· 70。 然后将调整后的洗出液静置60分钟以灭活病毒。然后将调整后的洗出液用437ml 50mM氢 氧化钠中和至ρΗ5· 50,并使用Millipore stericup (产品号SCGPU11RE)进行(λ 22μπι过 滤。在823ml中回收了 L4g BAK502G9抗体。
[0162] (c) SP Sepharose 纯化
[0163] SP Sepharose fast flow层析步骤所使用的柱为I. 6cm直径，在磷酸盐缓冲盐水 ρΗ7· 2 中装柱，床高 15. 5cm，柱体积 31ml。树脂来自 GE Healthcare/Amersham Biosciences 17-0729。层析使用 Amersham Biosciences P-50 泵、UVl 检测仪和流动室（flow cell)进 行。将柱在使用前用〇. 5M氢氧化钠清洁。
[0164] 用水清洗和清洁后，随后将SP Sepharose fast flow柱用145ml 50mM乙酸钠 ρΗ5· 50 平衡。
[0165] 将400ml BAK502G9抗体（作为中和后的rmp蛋白A洗出液）直接于室温以200cm/ 小时加载到柱上。
[0166] 然后用302ml 50mM乙酸钠+30mM氯化钠 ρΗ5· 50清洗柱。
[0167] 通过用150ml 50mM乙酸钠+85mM氯化钠 ρΗ5. 50进行清洗，从柱上洗脱BAK502G9 抗体。洗脱后，用50mM乙酸钠+2Μ氯化钠 ρΗ5. 50清洗柱。
[0168] 在峰的上坡最大UV偏差2%与下坡最大UV偏差30%之间收集洗脱峰。将洗出液 用 Millipore steriflip (产品号 SCGP00525)进行 0.22 μ m 过滤。在 54ml 中回收了 0.67g BAK502G9 抗体。
[0169] 对剩余的392ml BAK502G9抗体（作为中和后的rmp蛋白A洗出液）重复此加工步 骤。又在54ml中回收了 0. 67g BAK502G9抗体。在下一步前合并两份过滤后的SP S印harose 洗出液。
[0170] (d) Q Sepharose Fast Flow 层析
[0171] Q Sepharose fast flow层析步骤所使用的柱为I. 6cm直径，在磷酸盐缓冲盐水 ρΗ7· 2 中装柱，床高 13. 3cm，柱体积 27ml。树脂来自 GE Healthcare/Amersham Biosciences 17-0510。层析使用 Amersham Biosciences P-50 泵、UVl 检测仪和流动室（flow cell)进 行。将柱在使用前用〇. 5M氢氧化钠清洁。
[0172] 用水清洗和清洁后，随后将Q Sepharose fast flow柱用138ml 50mM乙酸钠 +85mM氯化钠 ρΗ5· 50平衡。
[0173] 将44ml BAK502G9抗体（作为SP S印harose洗出液）直接于室温以200cm/小时 加载到柱上。
[0174] 通过用124ml 50mM乙酸钠+85mM氯化钠 ρΗ5· 50清洗柱，进行BAK502G9抗体的等 度洗脱（isocratic elution)。洗脱后，用50mM乙酸钠+2M氯化钠 ρΗ5· 50清洗柱。
[0175] 在峰的上下坡最大UV偏差2%之间收集洗脱峰。将洗出液用Millipore steriflip(产品号 SCGPU01RE)进行 0. 22μπι 过滤。在 88ml 中回收了 0. 52g BAK502G9 抗 体。对剩余的44ml BAK502G9抗体（作为SP S印harose洗出液）重复此加工步骤。又在 51ml中回收了 0. 54g BAK502G9抗体。然后合并两份过滤后的Q Sepharose洗出液。
[0176] (e)浓缩
[0177] 产品是在50mM乙酸钠+85mM氯化钠 pH5. 50中获得的，不需要渗滤。
[0178] 将17. 5升中的95. 31g BAK502G9抗体（作为Q S印harose滤出液）浓缩至1. 5 升。使用 Millipore Pellicon 2TFF 系统和 0.1M230KDa 膜（Millipore P2B030A01)来进 行浓缩。然后从该器材中回收BAK502G9抗体，然后用50mM乙酸钠+85mM氯化钠 pH5. 50缓 冲冲洗该器材。然后将浓缩后的抗体与缓冲冲洗液（buffer flush)合并。将1.67ml 10% w/v聚山梨醇酯80添加至合并液，聚山梨醇酯80的终浓度为0. 01 % w/v。然后将合并液进 行0. 22μπι过滤。在1.67升中回收了 91.6克BAK502G9抗体。
[0179] (f)所用材料
[0180] 用于配制上述缓冲液的化学制品如下：
[0181] 盐酸狐· Sigma Aldrich. G4505
[0182] 正磷酸氢二钠.VWR. 1038349
[0183] 正磷酸二氢钠.VWR. 102454R
[0184] 乙酸钠三水合物· VWR. 102354X.
[0185] 氯化钠.VWR. 10241AP.
[0186] 乙酸· VWR. 10001CU.
[0187] 聚山梨醇酯 80. J. T. Baker. 7394.
[0188] 实施例3 :28天稳定性分析
[0189] Tffe
[0190] rmp蛋白A层析如下文表1所列进行。
[0191] 表1:蛋白A层析参数
[0192]
【主权项】
1. 一种药物组合物，其包含11^-13抗体、5〇1111乙酸钠、851111氯化钠、0.01%聚山梨醇酯 80,且 pH 为 5· 5±0· 1。
2. 权利要求1的药物组合物，其中所述IL-13抗体是人IL-13单克隆抗体。
3. 权利要求1的药物组合物，其中所述人IL-13单克隆抗体选自下组： (a) 包含 BAK278D6 HCDR1-3 和 LCDR1-3 的抗体； (b) 包含 BAK502G9 HCDR1-3 和 LCDR1-3 的抗体； (c) 包含 BAK1111D10 HCDR1-3 和 LCDR1-3 的抗体； (d) 包含 BAK1167F2 HCDR1-3 和 LCDR1-3 的抗体； (e) 包含 BAK1183H4 HCDR1-3 和 LCDR1-3 的抗体；和 (f) 包含BAK502G9 VH结构域和VL结构域的抗体。
4. 权利要求3的药物组合物，其中所述人IL-13单克隆抗体为包含BAK502G9 HCDR1-3 和IXDR1-3的抗体。
5. 权利要求3的药物组合物，其中所述人IL-13单克隆抗体为包含BAK502G9 VH结构 域和VL结构域的抗体。
6. 权利要求1-5的药物组合物，其中所述IL-13抗体以50mg/ml、100mg/ml或150mg/ ml的量存在于所述药物组合物中。
7. 权利要求6的药物组合物，其中所述IL-13抗体以150mg/ml的量存在于所述药物组 合物中。
8. 依照前述权利要求任一项的药物组合物，进一步包括一种或多种表面活性剂、无机 或有机盐、稳定剂、稀释剂、增溶剂、还原剂、抗氧化剂、螯合剂和/或防腐剂。
9. 权利要求1的药物组合物，其包含50mg/ml IL-13抗体、50mM乙酸钠、85mM氯化钠、 0.01 %聚山梨醇酯80,且pH为5. 5±0· 1。
10. 依照权利要求1-9任一项的药物组合物在制备用于治疗或预防IL-13相关病症的 药物中的用途。
11. 依照权利要求10的用途，其中所述IL-13相关病症选自哮喘、特应性皮炎、变应性 鼻炎、纤维化、慢性阻塞性肺病、硬皮病、炎性肠病和何杰金氏淋巴瘤。
12. 依照权利要求11的用途，其中所述IL-13相关病症是哮喘。
13. 依照权利要求1-9任一项的药用抗体组合物，其是用于治疗IL-13相关病症的药用 抗体组合物。
14. 权利要求13的药物组合物，其中所述IL-13相关病症选自哮喘、特应性皮炎、变应 性鼻炎、纤维化、慢性阻塞性肺病、硬皮病、炎性肠病和何杰金氏淋巴瘤。
15. 权利要求14的药物组合物，其中所述IL-13相关病症是哮喘。
【专利摘要】本发明涉及白介素-13抗体组合物，更具体地，本发明涉及一种药物组合物，其包含白介素-13抗体，更具体的说是白介素-13单克隆抗体，尤其是人白介素-13单克隆抗体。本发明还涉及纯化所述抗体的方法和使用所述组合物来治疗白介素-13相关病症诸如哮喘、特应性皮炎、变应性鼻炎、纤维化、慢性阻塞性肺病、硬皮病、炎性肠病和何杰金氏淋巴瘤，特别是哮喘的用途。
【IPC分类】A61P11-00, A61P11-02, A61P11-06, A61P35-00, A61P1-00, A61K39-395, A61P17-00, A61P37-08
【公开号】CN104667275
【申请号】CN201410602375
【发明人】布伦丹.C.菲什, 珍妮特.E.兰斯通, 卡伦.班尼斯特, 克莱尔.L.霍普
【申请人】医学免疫有限公司
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2006年9月29日
【公告号】CN101321540A, CN102060925A, CN102060925B