NKG2D、MICA、MICB、NKG2A、NKG2B、NKG2C、NKG2E、NKG2F、 TAPI、TAP2及其功能性片段或其组合。在一些实施方案中，将所述疫苗与一种或多种下列核 酸分子和/或蛋白质组合施用：选自由包含编码CCL20、IL-12、IL-15、IL-28、CTACK、TECK、 MEC和RANTES或其功能性片段的一种或多种的编码序列的核酸分子组成的组的核酸分子， 和选自由CCL20、IL-12蛋白、IL-15蛋白、IL-28蛋白、CTACK蛋白、TECK蛋白、MEC蛋白或 RANTES蛋白或其功能性片段组成的组的蛋白。
[0164] 疫苗可以通过不同的途径（包括口服、胃肠外、舌下、经皮、经直肠、经粘膜、局部、 经由吸入、经颊施用、胸膜内、静脉内、动脉内、腹膜内、皮下、肌内、鼻内鞘内和关节内或其 组合）施用。对于兽医学用途，可按照正常兽医实践作为适当地可接受的制剂施用疫苗。兽 医可以容易地确定最适合于特定动物的给药方案和施用途径。疫苗可通过常规注射器、无 针注射装置、"微粒轰击基因枪"或其它物理方法诸如电穿孔（"EP"）、"流体动力法"或超 声波进行施用。
[0165] 可利用几种公知的技术将疫苗的质粒递送至哺乳动物，所述技术包括利用和不利 用体内电穿孔的DNA注射（也称为DNA接种）、脂质体介导的、纳米颗粒促进的重组载体诸 如重组腺病毒、重组腺病毒相关病毒和重组痘苗病毒。可经由DNA注射并连同体内电穿孔 递送抗原或免疫原。
[0166] b.电穿孔
[0167] 可按照制药领域内的技术人员公知的标准技术配制疫苗。可通过考虑诸如特定受 试者的年龄、性别、体重和状况以及施用途径的因素，利用医学领域内的技术人员公知的技 术按剂量施用此类组合物。所述受试者可以是哺乳动物，诸如人、马、牛、猪、绵羊、猫、狗、大 鼠或小鼠。
[0168] 可预防性或治疗性施用所述疫苗。在预防性施用中，可以足以诱发免疫应答的量 施用所述疫苗。在治疗性应用中，以足以引发治疗作用的量向有此需要的受试者施用所述 疫苗。足以实现该作用的量被定义为"治疗有效剂量"。对该用途有效的量将取决于例如 所施用的疫苗方案的特定组成、施用方式、疾病的阶段和严重程度、患者的一般健康状态以 及处方医生的判断。
[0169] 所述疫苗可通过如 Donnelly 等人（Ann. Rev. Immunol. 15:617-648(1997)); Feigner等人（美国专利No. 5, 580, 859,1996年12月3日授予的）；Felgner (美国专利 No. 5, 703, 055,1997 年 12 月 30 日授予的）；和 Carson 等人（美国专利 No. 5, 679, 647,1997 年10月21日授予的）（所有文献和美国专利的内容通过引用以其整体并入本文）中描述 的本领域公知的方法来施用。可将所述疫苗的DNA复合成可以例如使用疫苗枪向个体施用 的颗粒或珠粒。本领域技术人员将了解药学上可接受的载体，包括生理上可接受的化合物 的选择取决于例如表达载体的施用途径。
[0170] 可经由多种途径施用所述疫苗。典型的递送途径包括胃肠外施用，例如真皮内、 肌内或皮下递送。其它途径包括口服施用、鼻内和阴道内途径。具体地对于疫苗的DNA， 可将所述疫苗递送至个体的组织的间隙空间（Feigner等人，美国专利No. 5, 580, 859和 5, 703, 055,将所有所述美国专利的内容通过引用以其整体并入本文）。所述疫苗还可被施 用至肌肉，或经由真皮内或皮下注射，或经皮肤（诸如通过离子电渗疗法）进行施用。还可 应用所述疫苗的表皮施用。表皮施用可包括机械或化学刺激表皮的最外层以刺激针对所述 刺激物的免疫应答（Carson等人，美国专利No. 5, 679, 647,其内容通过引用以其整体并入 本文）。
[0171] 还可将所述疫苗配制用以经由鼻道施用。适用于经鼻施用的制剂（其中载体是固 体）可包括具有例如在约10至约500微粒范围内的粒度的粗粉，以其中采用从鼻中吸入， 即，通过从拿至靠近鼻的粉剂的容器经鼻道快速吸入的方式来施用所述粗粉。所述制剂可 以是鼻喷雾剂、滴鼻剂或利用喷雾器的气溶胶施用。所述制剂可包含所述疫苗的水性或油 性溶液。
[0172] 所述疫苗可以是液体制剂诸如悬浮剂、糖浆剂或酏剂。所述疫苗还可以是用于胃 肠外、皮下、真皮内、肌内或静脉内施用（例如，可注射施用）的制剂，诸如无菌悬浮剂或乳 剂。
[0173] 可将所述疫苗掺入脂质体、微球或其它聚合物基质（Feigner等人，美国专利 No. 5, 703, 055 ;Gregoriadis, Liposome Technology，第I 至III 卷（第 2 版，1993)，其内容 通过引用以其整体并入本文）。脂质体可由磷脂或其它脂质组成，并且可以是被相对简单地 产生和施用的无毒、生理上可接受和可代谢的载体。
[0174] 可使用电穿孔装置来实现经由本发明的质粒的电穿孔的疫苗的施用，所述电穿孔 装置被构造来向哺乳动物的期望的组织递送有效地在细胞膜中引起可逆孔形成的能量的 脉冲，并且优选的能量脉冲是与由用户预设的电流输入相似的恒定电流。电穿孔装置可包 括电穿孔组件和电极部件或操作部件。电穿孔组件可包括和包含电穿孔装置的各种元件的 一个或多个，包括：控制器、电流波形发生器、阻抗测试器、波形记录器、输入元件、状态报告 元件、通信端口、记忆组件、电源和电源开关。可使用例如体内电穿孔装置例如
[0175] CELLECTRA EP 系统（VGX Pharmaceuticals, Blue Bell, PA)或 Elgen 电穿孔器 (Genetronics，San Diego，CA)促进质粒对细胞的转染来实现电穿孔。
[0176] 电穿孔组件可作为电穿孔装置的一个元件起作用，并且其它元件是与所述电穿孔 组件通信的分开的元件（或组件）。电穿孔组件可作为电穿孔装置的多于一个元件起作用， 其可以与同所述电穿孔组件分开的所述电穿孔设备的另外的其它元件通信。作为机电装置 或机械装置的一部分存在的电穿孔装置的元件可以不受限制，因为所述元件可作为一个装 置或作为彼此相互通信的分开的元件起作用。电穿孔组件可以能够递送在期望的组织中产 生恒定电流的能量脉冲，并且包括反馈机制。电极部件可包括在空间排列上具有多个电极 的电极阵列，其中所述电极组件接收来自电穿孔组件的能量脉冲并将其通过电极递送至期 望的组织。多个电极的至少一个在能量脉冲的递送过程中是中性的，并且测量期望的组织 的阻抗，以及与将所述阻抗传达给电穿孔组件。反馈机制可接收测量的阻抗，并可调整由电 穿孔组件递送的能量脉冲以维持恒定电流。
[0177] 多个电极可以分散模式递送能量脉冲。多个的电极可通过在程序化顺序下控制电 极以分散模式递送能量脉冲，并且所述程序化顺序由用户输入至电穿孔组件中。程序化顺 序可包含多个按顺序递送的脉冲，其中多个脉冲的每一个脉冲通过至少两个有源电极（其 中一个中性电极测量阻抗）来递送，并且其中多个脉冲的随后脉冲通过至少两个有源电极 (一个中性电极测量阻抗）的不同的一个电极来递送。
[0178] 可通过硬件或软件来进行反馈机制。可通过模拟闭环电路来进行反馈机制。反馈 每50 y s、20 ys、10 ys或Iys产生一次，但优选地是实时反馈或瞬时反馈（即，基本上同 时的，如通过可获得的测定响应时间的技术测定）。中性电极可测量期望的组织中的阻抗， 并将所述阻抗传达到反馈机制，并且所述反馈机制响应所述阻抗并调整能量脉冲以将恒定 电流维持在与预设电流相似的值上。反馈机制可在能量脉冲递送过程中连续和瞬时地维持 恒定电流。
[0179] 可促进本发明的DNA疫苗的递送的电穿孔装置和电穿孔方法的实例包括 在Draghia-Akli等人的美国专利No. 7, 245, 963、Smith等人提交的美国专利公开 2005/0052630(其内容在此通过引用整体并入）中描述的那些电穿孔装置和方法。可用 于促进DNA疫苗的递送的其它电穿孔装置和电穿孔方法包括2007年10月17日提交的共 同未决和共同拥有的美国专利申请序列No. 11/874072中提供的那些电穿孔装置和方法， 所述专利申请序列根据35USC 119(e)要求2006年10月17日提交的美国临时申请序列 No. 60/852, 149和2007年10月10日提交的60/978, 982 (其全都在此整体并入）的权益。
[0180] Draghia-Akli等人的美国专利No. 7, 245, 963描述了标准电极系统及它们用于促 进将生物分子引入至身体或植物的选择的组织的细胞中的用途。标准电极系统可包含多种 针电极；皮下针头；提供从可编程恒定电流脉冲控制器至多个针电极的导电连接的电连接 器；和电源。操作者可抓住多个安装在支持结构上的针电极，并将它们牢固地插入身体或植 物的选择的组织中。随后经由皮下针头将生物分子递送至选择的组织。激活可编程恒定电 流脉冲控制器，并将恒定电流电极脉冲施加于多个针电极。施加的恒定电流电脉冲促进将 生物分子引入至多个电极之间的细胞中。美国专利No. 7, 245, 963的整个内容在此通过引 用并入。
[0181] 由Smith等人提交的美国专利公开2005/0052630描述了可用于有效地促进将生 物分子引入至身体或植物的选择的组织的细胞中的电穿孔装置。所述电穿孔装置包括其操 作通过软件或固件来指定的电动力学装置（"EKD装置"）。EKD装置基于脉冲参数的用户控 制和输入在阵列中的电极之间产生一系列可编程的恒定电流脉冲波形，并且允许存储和获 取电流波形数据。电穿孔装置还包含具有一个阵列的针电极的可替换电极盘、用于注射针 的中央注射通道和可移去的引导盘。美国专利公开2005/0052630的整个内容在此通过引 用并入。
[0182] 美国专利No. 7, 245, 963和美国专利公开2005/0052630中描述的电极阵列和方 法可适用于不仅至组织诸如肌肉，而且还至其它组织或器官内的深度穿透。由于电极阵 列的配置，还可将注射针（以递送选择的生物分子）完全插入靶器官中，并且在利用电极 预先描绘的区域中垂直于靶组织施用注射剂。美国专利No. 7, 245, 963和美国专利公开 2005/005263中描述的电极优选为20mm长和21规格。
[0183] 此外，在一些包括电穿孔装置及其用途的实施方案中，设想存在电穿孔装置，其为 在下列专利：1993年12月28日授予的美国专利5, 273, 525、2000年8月29日授予的美国专 利 6, 110, 16U2001 年 7 月 17 日授予的 6, 261，281 和 2005 年 10 月 25 日授予的 6, 958, 060， 以及2005年9月6日授予的美国专利6, 939, 862中描述的那些电穿孔装置。此外，本文设 想了针对注射DNA的方法设计的涵盖2004年2月24日授予的美国专利6, 697, 669(其涉 及使用各种装置的任一种递送DNA)和2008年2月5日授予的美国专利7, 328, 064中提供 的主题的专利。上述专利通过引用整体并入。
[0184] 所述疫苗可经由电穿孔，诸如通过美国专利No. 7, 664, 545 (其内容通过引用并入 本文）中描述的方法来施用。所述电穿孔可以是利用美国专利No. 6, 302, 874、5, 676, 646、 6, 241，701、6, 233, 482、6, 216, 034、6, 208, 893、6, 192, 270、6, 181，964、6, 150, 148、 6, 120, 493、6, 096, 020、6, 068, 650和5, 702, 359 (其内容通过引用以其整体并入本文）中描 述的方法和/或设备来进行。所述电穿孔可经由微创装置来进行。
[0185] 微创电穿孔装置（"MID"）可以是用于将上述疫苗和相关流体注射进身体组织的 设备。所述装置可包括空心针、DNA盒和流体递送装置，其中所述装置适合用于驱动使用的 流体递送装置，以在将针插入所述身体组织过程中同时（例如，自动地）将DNA注射进身体 组织。这具有在针被插入的同时逐渐注射DNA和相关流体的能力导致流体在整个身体组织 中的更均匀分布的有利方面。在注射过程中经历的疼痛可因被注射的DNA在更大面积上的 分布而减弱。
[0186] MID可将疫苗注射进组织而无需使用针。MID可以以使疫苗穿透组织的表面并进 入下面的组织和/或肌肉的力，以小流或射流的形式注射疫苗。小流或射流后方的力可通 过膨胀压缩的气体（诸如二氧化碳）使其在几分之一秒内通过微孔来提供。微创电穿孔 装置以及使用它们的方法的实例描述于公开的美国专利申请No. 20080234655、美国专利 No. 6, 520, 950、美国专利 No. 7, 171，264、美国专利 No. 6, 208, 893、美国专利 No. 6, 009, 347、 美国专利No. 6, 120, 493、美国专利No. 7, 245, 963、美国专利No. 7, 328, 064和美国专利 No. 6, 763, 264中，其每一个的内容通过引用并入本文。
[0187] MID可包含产生无痛穿透组织的高速液体射流的注射器。此类无针注射器是商购 可得的。可在本文中使用的无针注射器的实例包括美国专利No. 3, 805, 783、4, 447, 223、 5, 505, 697和4, 342, 310 (其每一个的内容通过引用并入本文）中描述的那些注射器。
[0188] 适用于直接或间接电转运的期望的疫苗可使用无针注射器（通常通过使组织表 面与注射器接触以以足以使疫苗穿透进组织的力驱动试剂射流的递送）来引入（例如，注 射）待治疗的组织中。例如，如果待治疗的组织是粘膜、皮肤或肌肉，则以足以使试剂穿透 通过解质层和分别进入真皮层，或进入下面的组织和肌肉的力来朝向粘膜或皮肤表面注射 所述试剂。
[0189] 无针注射器特别适合用于将疫苗递送至所有类型的组织，特别地皮肤和粘膜。在 一些实施方案中，无针注射器可用于将含有疫苗的液体推进至表面并进入受试者的皮肤或 粘膜。可使用本发明的方法治疗的各种类型的组织的代表性实例包括胰腺、喉、鼻咽部、下 喉咽部、口咽、唇、咽喉、肺、心脏、肾脏、肌肉、乳房、结肠、前列腺、胸腺、睾丸、皮肤、粘膜组 织、卵巢、血管或其任意组合。
[0190] MID可具有使组织电穿孔的针电极。通过在多电极阵列（例如以矩形或正方形 模式建立的）中的多对电极之间脉冲，提供了优于在一对电极之间脉冲的结果的改善的结 果。例如在标题为〃Needle Electrodes for Mediated Delivery of Drugs and Genes"的 美国专利No. 5, 702, 359中公开了其中可在治疗性治疗过程中对多对针对进行脉冲的针的 阵列。在该申请（其通过引用并入本文，就如同充分列出一样）中，将针置于环状阵列中， 但具有连接器和使得能够在相对的针电极对之间产生脉冲的转换设备。可使用一对用于将 重组表达载体递送至细胞的针电极。这样的装置和系统在美国专利No. 6, 763, 264 (其内容 通过引用并入本文）中进行了描述。或者，可使用单针装置，所述装置允许注射DNA和利用 与常规注射针相似的单针进行电穿孔，和施加具有比通过目前使用的装置递送的脉冲的电 压更低的电压的脉冲，从而减轻患者经历的触电感。
[0191] MID可包含一个或多个电极阵列。所述阵列可包含两个或更多个具有相同直径或 不同直径的针。可均匀或不均匀地间隔针。针可以为0.005英寸至0.03英寸、0.01英寸 至0. 025英寸、或0. 015英寸至0. 020英寸。针的直径可为0. 0175英寸。针可相隔0. 5mm、 I. 0mm. L 5mm、2. 0mm、2. 5mm. 3. 0mm. 3. 5mm.4. Omm 或更多。
[0192] MID可由脉冲发生器和两个或更多个-针式疫苗注射器组成，所述注射器在单个 步骤中递送疫苗和电穿孔脉冲。脉冲发生器可允许经由闪存卡操作的个人计算机对脉冲和 注射参数进行灵活编程，以及全面记录和存储电穿孔及患者的数据。脉冲发生器可在很短 的时间中递送多种伏特脉冲。例如，脉冲发生器可递送在100ms持续时间中递送3个15伏 的脉冲。这种MID的实例是由Inovio Biomedical Corporation提供的Elgen 1000系统， 其在美国专利No. 7, 328, 064(其内容通过引用并入本文）中进行了描述。
[0193] MID 可以是 CELLECTRA(Inovio Pharmaceuticals, Blue Bell PA)装置和系统，其 为标准电极系统，帮助将大分子诸如DNA引入体内或植物的选定组织的细胞内。标准电极 系统可包含多个针电极；皮下针；提供从可编程恒定电流脉冲控制器至多个针电极的传导 连接的电连接器；和电源。操作员可握住固定在承载结构上的多个针电极并牢固地将其插 入至体内或植物的选定组织。随后经由皮下针将大分子递送入选定组织。激活可编程恒定 电流脉冲控制器并将恒定电流电脉冲施加至多个针电极。施加的恒定电流电脉冲帮助将生 物分子引入多个电极之间的细胞。通过借由恒定电流脉冲限制组织中的功耗来使因细胞的 过热而引起的细胞死亡降至最低。Cellectra装置和系统在美国专利No. 7, 245, 963(其内 容通过引用并入本文）中进行了描述。
[0194] MID 可以是 Elgen 1000 系统（Inovio Pharmaceuticals)。Elgen 1000 系统可包 括提供空心针的装置；和流体递送装置，其中所述设备被适配成驱动使用的流体递送装置， 以在将针插入所述身体组织的过程中同时（例如自动地）将流体（本文中描述的疫苗）注 射至身体组织中。有利方面是在将针插入的同时逐渐注射流体的能力导致流体在整个身体 组织中的更均匀分布。还相信在注射过程中经历的疼痛因被注射的流体的体积在更大区域 中的分布而减轻。