一种双层缓控释纳米粒及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及纳米药物载体领域，具体为一种酸敏感的壳聚糖-聚乳酸纳米粒的制 备方法。
【背景技术】
[0002] 微纳米粒能够定向将药物输送到作用部位，并且能够维持药物的控制释放，延长 药物的半衰期，和减少毒副作用等，是生物医药领域研究的热点。目前的缓释纳米粒主要有 纳米粒、胶束、脂质体等，它们都能够将药物或者是其他的功能基团运载到生物体内，但是 如何实现两种或多种药物(或其他功能基团）的分步释放，还需要更好的解决策略。
【发明内容】
[0003] 针对现有技术的缺陷或不足，本发明的目的在于提供一种双层缓控释纳米粒，该 纳米粒包括内核和将内核包覆的外壳;所述内核上负载有药物一。
[0004] -种实施方案中，本发明的外壳上负载有药物二。
[0005] -种实施方案中，本发明的内核材料选用聚乳酸(PLA)、聚径基乙酸(PGA)、乳酸/ 径基乙酸共聚物(PLGA)、聚己内醋(P化)或聚(6-?基下酸(P皿）。进一步可选择PLA和PLGA， 所选PLA载体的分子量在1~IOOkDa之间。
[0006] -种实施方案中，本发明的外壳材料为壳聚糖(CS)、壳聚糖衍生物、葡聚糖、葡聚 糖衍生物、普鲁兰多糖、当归多糖或灵芝多糖。进一步可选择壳聚糖及其衍生物，所选CS的 分子量在1~1 OOkDa之间。
[0007] -种实施方案中，本发明的外壳材料为链接有酸敏键的壳聚糖、链接有酸敏键的 壳聚糖衍生物、链接有酸敏键的葡聚糖、链接有酸敏键的葡聚糖衍生物、链接有酸敏键的普 鲁兰多糖、链接有酸敏键的当归多糖、链接有酸敏键的灵芝多糖;所述酸敏键上连接有药物 所述酸敏键为W下化学键中的一种：
[000引
[0009]化-R3汾别表示不同的化学基团。
[0010] -种实施方案中，本发明的纳米粒的粒径范围为0.1~1皿。
[0011] 本发明还提供了双层缓控释纳米粒的制备方法，该方法包括：
[0012] 溶解药物一和内核材料，采用溶剂挥发法制备内核物;将内核物和外壳材料溶解， 采用离子凝胶法制备双层缓控释纳米粒。
[0013 ]本发明提供了另一种双层缓控释纳米粒的制备方法，该方法包括：
[0014] 溶解药物一和内核材料，采用溶剂挥发法制备内核物;溶解所述内核物、药物二和 外壳材料，采用离子凝胶法制备双层缓控释纳米粒。
[0015] 本发明的又一种双层缓控释纳米粒制备方法包括：
[0016] 溶解药物一和内核材料，采用溶剂挥发法制备内核物;溶解连接有酸敏键的外壳 材料和药物S，采用脱水缩合法将药物S连接到酸敏键上，制得外壳物;溶解内核物、外壳 物和药物二，采用离子凝胶法制备双层缓控释纳米粒。
[0017] 与现有技术相比，本发明的优点在于：
[0018] 本发明内核包封药物时能够提高药物的运载效率，同时能够使药物到达作用部位 之前不被清除，并且药物能够随着载体材料的降解而释放，起到缓释作用。
[0019] 本发明同时包封两种药物时内外两层聚合物先后降解，能够分步释放出两种药 物，依次/协同发挥作用。相比单独一种药物，能够起到更好的效果。
[0020] 本发明使用酸敏感的化学键将药物或功能基团连接在外壳材料上，能够响应抑断 裂，为该纳米粒作为酸敏释药体系提供支撑。
【附图说明】
[002。 图I为实施例1制备的包载BMP-2的PLA纳米粒的SEM图；
[0022] 图2为实施例1制备的复合纳米粒化S法测定纳米粒径(531nm);
[0023] 图3为实施例1制备的复合纳米粒的TEM图；
[0024] 图4为实施例2制备的复合纳米粒的BMP-2和SDF-I的释放曲线；
[0025] 图5为实施例3的CCK-8实验的实验结果;如图所示，在第5天时，同一浓度各组之间 并无显著性差异(P<〇.05)，说明该纳米粒对细胞无明显毒性；
[0026] 图6为实施例3的化answell实验的实验结果，如图所示，在第24小时时，空白纳米 粒组和游离BMP-2组无明显差异(P<0.05)，SDF-I组每视野细胞数随SDF-I浓度增加而增加 且高于空白纳米粒组和游离BMP-2组，而双层载药纳米粒组介于SDF-I组与对照组之间，原 因主要是纳米粒中的SDF-I正逐步释放出来，但有效浓度低于完全游离的SDF-I，说明双层 载药纳米粒对BMSC确实有促进归巢作用且随释放的SDF-I浓度提高而增强。
[0027] 图7为实施例3制备的复合纳米粒在不同抑时OPG的释放曲线；
[002引图8为实施例4制备的酸敏的PLA-CS双层纳米粒的TEM图；
[0029] 图9为实施例4制备的复合纳米粒中的OPG对破骨细胞的抑制效应;A:空白对照;B: 游离OPG，lOiig/l;C:酸敏的化A-CS双层纳米粒，pH 7.4;C:酸敏的化A-CS双层纳米粒，pH 6.8;E:酸敏的PLA-CS双层纳米粒，pH 5.6.其结果与实施例3中体外释药数据一致。
【具体实施方式】
[0030] 本发明的药物一可W通过化学键连接在聚合物材料上，也可W通过物理包封的方 式包载在聚合物材料中。
[0031] 本发明的药物二可W通过化学键连接在聚合物材料上，也可W通过物理包封的方 式包载在聚合物材料中。
[0032] 本发明的药物=为具有祀向功能的基团（抗体或者是其他配体），通过酸敏感的化 学键连接在聚合物上。
[0033] 本发明的技术方案中可W设计包含=种药物的体系，也可W根据需要设计包载一 种或两种药物的微纳米粒。在具体药物上，例如，药物一可W选择功能蛋白或抗肿瘤药物， 例如骨形态发生蛋白2(BMP-2)、喜树碱、紫杉醇等。药物二可W选择功能因子或药物，例如 基质细胞衍生因子l(SDF-l)、顺销等，药物二能够与药物一联合或协同发生作用。药物S可 W选择具有祀向功能的抗体或配体，例如转铁蛋白、骨保护素(OPG)等。
[0034] 下面结合实例更具体的说明本发明的内容。
[0035] 实施例1:
[0036] (1)采用油/水型超声（或乳化）溶剂挥发法制备化A纳米粒：称取0.1 g化A、50yg BMP-2溶于5mL二氯甲烧中，即为油相；称取0.Sg聚乙締醇(PVA)溶于40mL蒸馈水中作为水 相;25°C下，将油相逐滴滴加到水相中，超声分散(或乳化仪分散），将得到的油水乳液50化/ min磁力揽拌2地，W除尽二氯甲烧；纳米粒经固化后离屯、收集，洗涂后冷冻干燥得到包载 BMP-2的PLA纳米粒粉末。如图1所示。
[0037] (2)将0.1 g包载BMP-2的PLA纳米粒粉末溶于20mL蒸馈水中，加入0.1 g的CS溶解后， 逐滴加入质量浓度为15% (W/V)的S聚憐酸钢(TPP)溶液4mL，室溫下揽拌使CS在PLA纳米粒 表面富集得到混合液，离屯、洗涂后冷冻干燥后得到复合纳米粒粉末。使用动态光散射法 (化s)测定复合纳米粒粒度，如图2所示;使用投射电镜(TEM)观察复合纳米粒表面形态，图 3。
[003引实施例2:
[0039] 将0.1 g实施例1制备的包载BMP-2的纳米粒粉末溶于20mL蒸馈水中，加