一种广谱性病毒感染抑制剂的制作方法
【技术领域】
[0001 ]本发明属于生物技术领域，设及一种广谱性病毒感染抑制剂。
【背景技术】
[0002] 近年来，诸如SARS、MERS、禽流感和埃博拉等新发突发传染病疫情的暴发日趋频 繁，人类面临病毒性传染病的现实和潜在威胁日益严峻，人类应对突发传染病的防控压力 日感倍增，但愈来愈多的实际情况表明：当病毒发生突变或出现新型病毒而导致传染病疫 情暴发时，原来的特异性防治药物难W发挥应有防控效果，甚至毫无疗效，而人类认知水平 和科研周期的限制，又使具有显著疗效的新一代特异性预防和治疗药物难W在短时间内推 出，极易导致疫情的迅速扩散和局部地区的灾难性暴发，不仅对当地的公共卫生服务造成 极大的破坏，同时也对社会的政治和经济造成巨大的冲击。因此，依据病毒的基本生物学特 性，针对病毒侵染宿主细胞的共性祀点，研发新型病毒感染抑制剂，对于应对病毒性传染病 疫情的持续挑战具有重要意义。
[0003] 植物化合物被称为"第屯类营养素"，广泛存在于日常食物，是一类对人体健康具 有特殊作用的非营养性化学物质。相关研究发现部分植物化合物具有抑制病毒感染的生物 活性，并逐渐成为抗病毒研究的热点之一。初步的研究结果显示:植物化合物的生物学效应 主要表现在其对细胞膜生物学特性的影响和局部微环境平衡的改变等方面，部分植物化合 物通过直接嵌入细胞膜脂质双层结构，改变细胞膜正常的功能性流动和电势电位差，进而 发挥一定的生物学效应。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种广谱性病毒感染抑制剂。
[000引本发明所提供的用于抑制病毒感染的制剂，主要由表没食子儿茶素没食子酸醋 化GCG)、单宁酸和黄巧多糖混合而成;所述表没食子儿茶素没食子酸醋化GCG)、所述单宁酸 和所述黄巧多糖的质量配比可为(0.5-1.0):(0.5-1.0):(0.5-1.5)。
[0006] 在本发明的一个实施例中，所述用于抑制病毒感染的制剂具体由表没食子儿茶素 没食子酸醋巧GCG)、单宁酸和黄巧多糖混合而成;所述表没食子儿茶素没食子酸醋巧GCG)、 所述单宁酸和所述黄巧多糖的质量配比为1:1:1.5。
[0007] 所述用于抑制病毒感染的制剂的制备方法也属于本发明的保护范围。
[0008] 所述用于病毒感染的制剂的制备方法，具体可包括如下步骤:将表没食子儿茶素 没食子酸醋化GCG)、单宁酸和黄巧多糖按照质量配比为(0.5-1.0): (0.5-1.0): (0.5-1.5) 的比例混合，得到所述制剂。
[0009] 其中，所述表没食子儿茶素没食子酸醋化GCG)、所述单宁酸和所述黄巧多糖的质 量配比具体可为1:1:1.5。
[0010] 所述用于抑制病毒感染的制剂在制备用于用于抑制病毒感染的产品中的应用也 属于本发明的保护范围。其中，所述病毒可为如下中的四种、任=种或任两种:流感病毒、腺 病毒、痘病毒和冠状病毒。
[0011] 在本发明中，所述抑制病毒感染具体为如下(a)或(b):
[0012] (a)预防病毒感染；
[0013] (b)在与病毒同时作用于宿主或宿主细胞时，抑制所述病毒对所述宿主或所述宿 主细胞的感染。
[0014] 更加具体的，在本发明的实施例中，所述制剂对所述病毒感染的抑制作用具体体 现为：W哺乳动物细胞作为病毒感染对象，在病毒感染细胞的同时或者在病毒感染细胞前 施用所述制剂，所述制剂对病毒的半数抑制浓度与抑制病毒感染的阳性对照药物相比显著 降低。所述阳性对照药物具体为利己韦林(Ribavirin)。
[0015] 在本发明中，当所述病毒为流感病毒时，所述哺乳动物细胞(或(b)中所述的宿主 细胞)具体为犬肾细胞(MDCK细胞）；当所述病毒为腺病毒时，所述哺乳动物细胞(或(b)中所 述的宿主细胞)具体为人胚肾细胞株(293细胞）；当所述病毒为痘病毒时，所述哺乳动物细 胞(或(b)中所述的宿主细胞)具体为非洲绿猴肾细胞(Vero细胞）；当所述病毒为冠状病毒 时，所述哺乳动物细胞(或(b)中所述的宿主细胞)具体为鼠成纤维细胞(170-1细胞）。
[0016] 在本发明中，所述流感病毒为甲型流感病毒;所述腺病毒为5型腺病毒;所述痘病 毒为痘苗病毒;所述冠状病毒为鼠肝炎冠状病毒。更加具体的，所述甲型流感病毒为化Nl亚 型流感病毒。在本发明的一个实施例中，所述流感病毒具体为HlNl亚型流感病毒A/ Beijing/501/2009化1N1)株;所述腺病毒具体为5型腺病毒dl309株;所述痘病毒具体为痘 苗病毒WR株;所述冠状病毒具体为鼠肝炎冠状病毒A59株。
[0017] 本发明W冠状病毒(mouse hepatitis virus,MHV)、痘病毒、5型腺病毒(Ad-5)和 甲型HlNl流感病毒为实验对象，采用观察细胞病变的方法，在不同的感染条件下，分别分析 了表没食子儿茶素没食子酸醋化GCG)、单宁酸和黄巧多糖运=种植物化合物单体及其混合 制剂抑制病毒感染的规律和特点。结果证实:本发明所提供的=种植物化合物单体和复合 配方混合物的细胞毒性均不高于已经获得安全许可的对照样品利己韦林，较为安全。在安 全的使用浓度下，预防性使用EGCG和单宁酸等植物化合物单体W及植物提取物复合配方混 合物，可W有效的抑制5型腺病毒、甲型HlNl流感病毒、痘病毒和冠状病毒的感染。研究中使 用的病毒具有不同生物特性、遗传物质和增殖特点，分属不同的病毒类别：5型腺病毒为无 囊膜的DNA病毒，甲型HlNl流感病毒为具囊膜的分阶段RNA病毒，痘病毒为具囊膜的DNA病 毒，冠状病毒为具囊膜的单链RNA病毒，因此，实验结果具有普遍性，相关植物化合物单体和 复合配方混合物具有进一步研发为广谱性病毒感染抑制剂的商业价值。
【具体实施方式】
[0018] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0019] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0020] 下述实施例中设及的定量实验数据W均数+标准差（±s)表示，采用SPSS 17.0统 计软件运用单因素水平方差分析的方法对组间比较数据进行统计处理。
[0021 ]细胞株:人胚肾细胞株(293细胞），犬肾细胞(MDCK细胞），非洲绿猴肾细胞(Vero细 胞)均为ATCC产品，293细胞的编号为ATCC C化-1573,MDCK细胞的编号为ATCC OX-34,Vero 细胞的编号为ATCC (XL-81。鼠成纤维细胞（17C1-1细胞），由英国布里斯托大学Stuad Siddel I 教授馈赠，记载于"Lin Lei , Sun Ying,Wu Xiaoyan,Sun Zounan ,Yang Yi , Su Wenli,Hu Yi,Zhu Qingyu,Guo Deyin,Liu Jingmei,Chang Guohui.Attenuation of Mouse Hepatitis Virus by Deletion of the LLRKxGxKG Region of Nspl.PLoS ONE, 20138(4) :e61166."-文，公众可从申请人处获得，仅用于重复本发明实验使用。各细胞均 按常规方法传代培养。
[002引病毒：5 型腺病毒（dl309 株），记载于"Radko S，Jung R，01anubi 0，Pelka P.Effects of Adenovirus Type 5 ElA Isoforms on Viral Replication in Arrested Human Cells.PLoS One.201 日 Oct 8;10(10):e0140124.doi:10.1371/ journal .pone .0140124. eCoIIection 2015." -文，公众可从申请人处获得，仅用于重复本 发明实验使用。甲型HlNr流感病毒（A/Beijing/501/2009(H1N1)株），记载于"Xiaoping Kang,Tao Jiang,Yongqiang Li,Fang Lin,Hong Liu,Guohui Chang,Qingyu Zhu,Ede Qin ,Chengfeng Qin and Yinhui Yang. A duplex real-time RT-PCR assay for detecting HSNlavian influenza virus