本发明涉及一种微生物菌剂及其制备方法和应用，具体涉及一种海洋芽孢杆菌菌剂及其制备方法和应用，属于农业微生物
技术领域：
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背景技术：
：近年来，由于连作面积的不断扩大、用药不科学、生产中作物种植种类单一、高密度连作栽培以及缺乏有效轮作等栽培措施的影响，致使土壤肥力下降，从而造成作物减产，品质降低，已经严重影响了农作物生产。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种可以提高土壤肥力、促进植物生长的海洋芽孢杆菌菌剂及其制备方法。为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：一种海洋芽孢杆菌菌剂，其特征在于，包括：海洋芽孢杆菌菌粉和腐殖酸，其中，前述海洋芽孢杆菌菌粉由保藏编号为cgmccno.13962(分类命名为bacillusoceanisediminis)的海洋芽孢杆菌在发酵培养基上发酵得到。前述的海洋芽孢杆菌菌剂，其特征在于，在前述海洋芽孢杆菌菌粉中，海洋芽孢杆菌的孢子含量≥100亿/克。前述的海洋芽孢杆菌菌剂，其特征在于，前述海洋芽孢杆菌菌粉和腐殖酸按照3：7的质量比例混合。前述的海洋芽孢杆菌菌剂，其特征在于，制备方法如下：step1：将保藏编号为cgmccno.13962的海洋芽孢杆菌放置在lb液体培养基中活化12h，备用；step2：将step1活化后的菌株放置在26-37℃下震荡培养12-18h，获得种子液；step3：配制发酵培养基：酵母膏5-10g/l、可溶性淀粉8-16g/l、葡萄糖4-8g/l、黄豆饼粉8-16g/l、牛肉膏6-12g/l、玉米粉8-16g/l、消泡剂适量，高温灭菌后待用；step4：将step2培养好的种子液加入到step3制得的发酵培养基中，在26-37℃条件下发酵培养，培养过程中通气量控制在150-200l/h，搅拌速度控制在150-230rpm，待发酵液中芽孢含量≥1000亿/克时停止发酵；step5：将step4制得的发酵液进行喷雾干燥，得到海洋芽孢杆菌菌粉，海洋芽孢杆菌的孢子含量≥100亿/克；step6：将step5制得的海洋芽孢杆菌菌粉与腐殖酸按照3：7的质量比混合，即得海洋芽孢杆菌菌剂。前述的海洋芽孢杆菌菌剂，其特征在于，在step3中，前述消泡剂为植物油或者二甲基硅油。本发明的有益之处在于：(1)海洋芽孢杆菌可以降解有机质，产生多种次生代谢产物，所以可以提高土壤肥力，促进植物生长，经试验验证，本发明的海洋芽孢杆菌菌剂可以明显促进植物生长，并且适用于各种农作物；(2)本发明的海洋芽孢杆菌菌剂，其制备方法简单高效，适合工业化生产。具体实施方式以下结合具体实施例对本发明作具体的介绍。第一部分：获取海洋芽孢杆菌1、筛选分离菌株将从山东青岛海洋采集的水样稀释10-5，均匀涂布在lb培养基上分离培养，挑选单菌落。2、鉴定菌株利用16s序列对挑选出来的单菌落进行分子鉴定，鉴定结果显示：该单菌落为海洋芽孢杆菌。3、菌株保藏我们将筛选分离得到的海洋芽孢杆菌于2017年03月31保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为cgmccno.13962。第二部分：制备海洋芽孢杆菌菌剂1、菌种活化将保藏编号为cgmccno.13962的海洋芽孢杆菌放置在lb液体培养基中活化12h，备用。2、种子液制备将前面活化后的菌株放置在26℃下(温度可适当升高至37℃)震荡培养12h(培养时间可适当延长至18h)，获得种子液。3、制作发酵培养基配制发酵培养基：酵母膏5-10g/l、可溶性淀粉8-16g/l、葡萄糖4-8g/l、黄豆饼粉8-16g/l、牛肉膏6-12g/l、玉米粉8-16g/l、消泡剂适量。在本实施例中，我们配制的发酵培养基为：酵母膏10g/l、可溶性淀粉10g/l、葡萄糖6g/l、黄豆饼粉10g/l、牛肉膏10g/l、玉米粉10g/l，初始ph值为7.1(在6.5-7.5范围内)，配制完成后我们还添加了0.5wt％植物油作为消泡剂(亦可选用二甲基硅油作为消泡剂，使用量为0.2-1.2wt％)。将配制好的发酵培养基放置到灭菌锅中进行灭菌，待温度降到30℃以下时备用。4、发酵培养将前面培养好的种子液加入到前面制得的发酵培养基中，在26℃条件下(可适当提高至37℃)发酵培养，培养过程中通气量控制在150-200l/h，搅拌速度控制在150-230rpm，测定发酵液中菌体数量，待发酵液中芽孢含量≥1000亿/克时停止发酵。5、制成菌粉将前面制得的发酵液进行喷雾干燥，得到孢子含量≥100亿/克的海洋芽孢杆菌菌粉。6、混料将前面制得的海洋芽孢杆菌菌粉与腐殖酸混合，海洋芽孢杆菌菌粉和腐殖酸二者之间的质量比例为3：7，即得海洋芽孢杆菌菌剂。第三部分：研究海洋芽孢杆菌菌剂对植物生长的促进作用1、海洋芽孢杆菌菌剂对草莓生长的影响在青岛某草莓大棚，选取两亩地，其中一亩地施用本发明的海洋芽孢杆菌菌剂1kg(作为实验组)，施用方法是对根部土壤进行冲施，另外一亩地不使用任何处理(作为对照组)。比较结果如下：株高(cm)株高差(％)实验组3116.1％对照组26——2、海洋芽孢杆菌菌剂对黄瓜生长的影响在山东昌乐某黄瓜大棚，选取两亩地，其中一亩地施用本发明的海洋芽孢杆菌菌剂1kg(作为实验组)，施用方法是对根部土壤进行冲施，另外一亩地不使用任何处理(作为对照组)。比较结果如下：株高(cm)株高差(％)实验组30.822.1％对照组24——由此可见：本发明的海洋芽孢杆菌菌剂可以促进植物生长。海洋芽孢杆菌可以降解有机质，产生多种次生代谢产物，所以本发明的海洋芽孢杆菌菌剂可以提高土壤肥力，进而可以促进植物生长。需要说明的是，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。当前第1页12