专利名称：Ghrelin拮抗剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的生长激素拮抗剂，所述拮抗剂给药于哺乳动物可降低其体内的循环生长激素水平。
背景技术：
Ghrelin具有27或28个氨基酸的相关肽的家族名称，所述肽可以在胃中分离得到(M.Kojima et al.，Nature，402，656-660，1999；H.Hosoda et al.，J.Biol.Chem.，May 8,2000)，但产生所述肽的细胞类型在大鼠和人是不同的。所述肽的另外的特征是丝氨酸残基上有一种必要的辛酰酯附着。已知Ghrelin是动物和人体内强效的生长激素(GH)释放物。
通过研究这些肽的合成变异以确定能否对这些肽进行改进，本发明便得自这种研究。
发明概述我们意外发现具有下述通式的新肽可降低，而不是增加哺乳动物中的循环GH水平Gly-Ser-Ser(辛酰)-Phe-A(其中A是-OH，NH2，Leu-Ser-Pro-Glu-X或-Ala-Lys-Leu-Gln-Pro-Arg-B，其中B是-OH或NH2)，推测其原因可能是这些肽可拮抗Ghrelin的作用。基于这种原因，这些肽可用来使升高的生长激素水平(如肢端肥大患者或与GH过度产生相关的其它肿瘤患者的升高的生长激素水平)正常化或降低。
发明描述瞬时肽可通过多种合成方法制备，例如P.LIoyd-Williams等所著的“Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins(合成肽和蛋白的化学方法)”CRC出版社，New York 1997，和肽化学家熟知的类似方法。
所述肽的水溶液可通过快速输注(bolus injection)或缓慢肠胃外输注以约1-10mg/kg体重的剂量皮下给药。这些肽还可以鼻内或肺内给药，或通过缓释制剂(包括掺入到肽中的可生物降解的多聚体)给药，或通过本领域普通技术人员熟知的其它方法，如可植入的渗透泵等方法给药。
实施例以下实施例用以说明这些新肽的效果。
实施例1固相合成以下肽Gly-Ser-Ser(辛酰)-Phe-Leu-Ser-Pro-Glu理论MW948.9，测定值948.9水中的溶解度为0.7mg/ml通过HPLC分析的纯度为97.8％以300mg/Kg的剂量给10天龄的大鼠皮下注射所述肽，溶剂对照和Ghrelin，15分钟时检测循环的GH，如R.Deghenghi等，在Life Sciences 54，1321-1328(1994)中所述。结果如下
这表明所述肽拮抗Ghrelin的作用，使GH的释放降低到接近零的水平，远比溶剂对照低。
实施例2用实施例1的方法制备如下的十四肽Gly-Ser-Ser(辛酰)-Phe-Leu-Ser-Pro-Glu-Ala-Lys-Leu-Gln-Pro-Arg理论MW1642.7 测定MW1642.7在水中的溶解度0.9mg/ml
HPLC分析所得纯度95.0％如上述实施例1所述将上述十四肽给药大鼠，所得结果如下
本发明的肽再一次表现出拮抗Ghrelin的作用，使GH的释放水平明显低于对照。
实施例3用实施例1的方法制备如下肽Gly-Ser-Ser(辛酰)-Phe理论MW522.4 测定MW522.4在水中的溶解度不溶HPLC分析所得纯度95.6％如上述实施例1所述给药大鼠这种肽，所得结果如下
本发明的肽再一次表现出拮抗Ghrelin的作用，使GH的释放水平明显低于对照。
序列表序列表<110>阿达纳生物科学有限公司(Ardana Bioscience Limited)<120>GHRELIN拮抗剂<130>ARDW/P26793PC<140>PCT/EP01/07929<141>2001-07-10<150>US 60/220,178<151>2000-07-13<160>4<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>一种人工序列，其是已知Ghrelin肽的合成变异，这种Ghrelin肽分离自大鼠和人类胃中的不同细胞类型.<220><221>MOD_RES<222>(3)..(3)<223>辛酰酯附着到丝氨酸残基<220><221>MISC_FEATURE<222>(5)..(5)<223>X是OH，NH2，Leu-Ser-Pro-Glu-X，或Ala-Lys-Leu-Gln-Pro-Arg-B，B是OH orNH2.<400>1Gly Ser Ser Phe Xaa1 5<210>2<211>8<212>PRT<213>人工序列<220><223>一种人工序列，其是已知Ghrelin肽的合成变异，这种Ghrelin肽分离自大鼠和人类胃中的不同细胞类型.<220><221>MOD_RES<222>(3)..(3)<223>辛酰酯附着到丝氨酸残基<400>2Gly Ser Ser Phe Leu Ser Pro Glu1 5<210>3<211>14<212>PRT<213>人工序列<220><223>一种人工序列，其是已知Ghrelin肽的合成变异，这种Ghrelin肽分离自大鼠和人类胃中的不同细胞类型。<220><221>MOD_RES<222>(3)..(3)<223>辛酰酯附着到丝氨酸残基<400>3Gly Ser Ser Phe Leu Set Pro Glu Ala Lys Leu Gln Pro Arg1 5 10<210>4<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>一种人工序列，其是已知Ghrelin肽的合成变异，这种Ghrelin肽分离大鼠和人类胃中的不同细胞类型。<220><221>MOD_RES<222>(3)..(3)<223>辛酰酯附着到丝氨酸残基<400>4Gly Ser Ser Phe权利要求
1.一种具有如下通式的Ghrelin拮抗剂肽，Gly-Ser-Ser(辛酰)-Phe-A，其中A是-OH，NH2，Leu-Ser-Pro-Glu-B，或-Ala-Lys-Leu-Gln-Pro-Arg-B，其中B是-OH或NH2，其中所述肽给药哺乳动物后具有拮抗Ghrelin的作用。
2.权利要求1的肽，具体指Gly-Ser-Ser(辛酰)-Phe-Leu-Ser-Pro-Glu。
3.权利要求1的肽，具体指Gly-Ser-Ser(辛酰)-Phe-Leu-Ser-Pro-Glu-Ala-Lys-Leu-Gln-Pro-Arg。
4.权利要求1的肽，具体指Gly-Ser-Ser(辛酰)-Phe。
5.包含权利要求1的肽的药物组合物，其形式是可药用盐。
6.权利要求5的组合物，其进一步包含载体。
7.权利要求5的组合物，其形式是缓释制剂或用于肠胃外给药的装置。
8.权利要求5的肽，其形式是可鼻内用药的制剂。
9.权利要求5的肽，其形式是可吸入用药的制剂。
10.一种使哺乳动物中升高的生长激素水平正常化的方法，该方法是向需要此种治疗的哺乳动物给药有效剂量的至少一种权利要求1的肽。
11.权利要求10的方法，其中所述肽是Gly-Ser-Ser(辛酰)-Phe-Leu-Ser-Pro-Glu。
12.权利要求11的方法，其中所述肽是Gly-Ser-Ser(辛酰)-Phe-Leu-Ser-Pro-Glu-Ala-Lys-Leu-Gln-Pro-Arg。
13.权利要求12的方法，其中所述肽是Gly-Ser-Ser(辛酰)-Phe。
14.权利要求10的方法，其中所述肽作为缓释制剂给药，或借助用于肠胃外给药的装置来给药。
15.权利要求10的方法，其中所述肽作为可鼻内用药的制剂给药。
16.权利要求10的方法，其中所述肽以可吸入用药的制剂给药。
17.权利要求10的方法，其中所述肽以每公斤哺乳动物体重约1-10毫克的剂量给药。
18.权利要求10的方法，其中所述肽给予肢端肥大的哺乳动物。
全文摘要
本发明公开了一种新肽，该肽具有对称为Ghrelin的生长激素释放肽的拮抗剂特性。这种新肽可用于降低哺乳动物血循环中的生长激素水平，且具有治疗价值。
文档编号C07K14/60GK1443198SQ01813240
公开日2003年9月17日 申请日期2001年7月10日 优先权日2000年7月24日
发明者罗马诺·德根吉 申请人:阿达纳生物科学有限公司