专利名称：一种桑叶黄酮提取方法
技术领域：
本发明涉及一种从天然药用植物桑叶中提取其黄酮类有效成分的提取方法。
背景技术：
桑叶异名铁扇子，为桑科属桑(Morus alba L.)的树叶。桑叶甘、苦、寒，归肺、肝经，能疏散风热，清肺润燥，清肝明目，中医用它治疗风热感冒，肺热燥咳，头昏头痛，目赤昏花，现代药理学证实，桑叶可抑制血糖升高，具有预防和治疗糖尿病的作用。桑叶中含有丰富的芸香甙、槲皮素、异槲皮素以及槲皮素-3-葡萄糖甙等黄酮类化合物，含量约在3％左右。药理学研究发现，桑叶黄酮具有较强的抗氧化功能、降血脂功能以及通过抑制大鼠小肠双糖酶活性而具有显著的降血糖作用。鉴于桑叶黄酮具有多种多样的生物活性，桑叶黄酮在医药和食品领域作为天然药物、天然抗氧化剂有广泛的应用前景。至目前为止，尚未见有关从药用植物桑叶中大量提取桑叶黄酮的提取方法报道，基于以上原因，本发明对桑叶黄酮的提取方法进行了详细研究。
发明内容
本发明的目的是提供一种效率高、无污染且能工业化生产的桑叶黄酮提取方法。
本发明的提取方法包括如下步骤(1)将桑叶粉碎，用乙醇回流提取，合并浸取液，静置，过滤，滤液浓缩回收乙醇，制得乙醇提取物浸膏；(2)控制温度60～80℃，用水对乙醇提取物浸膏反复提取，至提取液无黄酮显色反应，合并提取液，静置，过滤，浓缩得浓缩液；(3)浓缩液用酸调pH值至微酸性；(4)加入无机盐调整溶液的盐含量至1％～5％；(5)上述样品用非极性或弱极性大孔吸附树脂柱层析，先用水充分淋洗，至淋洗液由混浊变清、变为淡黄色，再用30～70％乙醇淋洗2～5个柱体积，收集淋洗液，浓缩、干燥即得产品。
步骤(1)中所述的桑叶可粉碎至20～50目，用乙醇回流提取3～4次。所述的乙醇回流提取使用的乙醇浓度优选为50％～80％。这样桑叶黄酮的提取效率高，提取液中杂质含量低。
步骤(2)中所述的水浓缩液的体积与桑叶重量比最好是(4～8)∶1(v/w)。
步骤(3)中所述的pH值为2～6，在此酸度范围内，大孔吸附树脂对桑叶黄酮的吸附效率高。
步骤(4)中所述的无机盐可以是氯化钠、硫酸钠、硫酸铵等的任意一种。无机盐的加入可提高大孔吸附树脂对桑叶黄酮的吸附效率。
步骤(5)中所述大孔吸附树脂可以是D101、D140、AB-8中的任一种，柱层析分离时，大孔吸附树脂床体积与待分离桑叶用量比例优选为(0.5～1)∶1(v/w)。大孔树脂柱层析淋洗速度最好为1-5ml/cm2.min。大孔吸附树脂进行柱层分离过程可进行1-3次，以满足桑叶黄酮含量的要求。大孔吸附树脂可再生利用，如用95％乙醇淋洗柱体即可使树脂再生，使用多次后，树脂也可用3％氢氧化钠浸泡淋洗，再用大量水淋洗再生。
本发明具有如下优点(1)本发明使用溶剂安全无毒，价格低廉可回收再用，对环境无污染。
(2)本发明使用分离材料为大孔吸附树脂。大孔吸附树脂是近年来发展起来的一类有机高聚物吸附剂，它具有较好的吸附性能。为分离有机化合物尤其是极性大的化合物的有效手段，在天然产物化学成分的提取等方面显示了独特作用。它不仅理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶媒，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，并且易于洗脱再生，可多次利用。
(3)采用本发明从药用植物桑叶中提取分离桑叶黄酮，提取量大，可工业化生产。
(4)采用本发明从药用植物桑叶中提取分离桑叶黄酮，黄酮含量大于50％，提取效率高。
具体实施例方式实施例1称取500g桑叶，粉碎过20目筛，用80％的乙醇溶液3升、2升、2升分三次回流提取，首次回流2.0小时，二次、三次分别回流1.0小时，合并提取液，冷藏静置24小时，过滤，滤液减压浓缩得乙醇提取物；乙醇提取物用水分别提取五次，每次500ml，提取1小时，温度保持在75℃，合并水提取液，静置过滤、减压浓缩至约2升；用盐酸调pH值为3.5；加入NaCl使盐含量为3％；浓缩液上柱分离，其柱高为60cm，柱径为3.0cm，柱填料为D101大孔吸附树脂，先用水淋洗至流出液变清后，改用40％乙醇淋洗5倍柱体积，淋洗速度为20ml/min，收集淋洗液，减压浓缩、真空干燥即得棕黄色的桑叶黄酮产物。以芦丁为对照品，利用差示分光光度法测定桑叶总黄酮的含量，桑叶黄酮含量为61％。
实施例2称取1Kg桑叶，粉碎过40目筛，用75％的乙醇溶液5升、4升、4升分三次回流提取，首次回流2.0小时，二次、三次分别回流1.0小时，合并提取液，冷藏静置24小时，过滤，滤液减压浓缩得乙醇提取物；乙醇提取物用水分别提取五次，每次800ml，提取1小时，温度保持在75℃，合并水提取液，静置过滤；用盐酸调pH值为4；加入NaCl使盐含量为3％；上柱分离，其柱高为60cm，柱径为4.0cm，柱填料为D101大孔吸附树脂；先用水淋洗至流出液变清后，改用50％乙醇淋洗4倍柱体积，淋洗速度为25ml/min，收集淋洗液，减压浓缩、真空干燥即得棕黄色的桑叶黄酮产物。以芦丁为对照品，利用差示分光光度法测定桑叶总黄酮的含量，桑叶黄酮含量为54％。
实施例3称取500g桑叶，粉碎过20目筛，用80％的乙醇溶液3升、2升、2升分三次回流提取，首次回流2.0小时，二次、三次分别回流1.0小时，合并提取液，冷藏静置24小时，过滤，滤液减压浓缩得乙醇提取物；乙醇提取物用水分别提取五次，每次500ml，提取1小时，温度保持在75℃，合并水提取液，静置过滤、减压浓缩至约2升，用盐酸调pH值为3.5；加入NaCl使盐含量为2％；浓缩液上柱分离，其柱高为60cm，柱径为3.0cm，柱填料为AB-8大孔吸附树脂，先用水淋洗至流出液变清后，改用40％乙醇淋洗5倍柱体积，淋洗速度为20ml/min，收集淋洗液，减压浓缩、真空干燥即得棕黄色的桑叶黄酮产物。以芦丁为对照品，利用差示分光光度法测定桑叶总黄酮的含量，桑叶黄酮含量为63％。
权利要求
1.一种桑叶黄酮提取方法，其特征在于包括如下步骤(1)将桑叶粉碎，用乙醇回流提取，合并浸取液，静置，过滤，滤液浓缩得乙醇提取物浸膏；(2)控制温度60～80℃，用水对乙醇提取物浸膏反复提取，至提取液无黄酮显色反应，合并提取液，静置，过滤，浓缩得浓缩液；(3)浓缩液用酸调pH值至微酸性；(4)加入无机盐调整溶液的盐含量至1％～5％；(5)上述样品用非极性或弱极性大孔吸附树脂柱层析，先用水充分淋洗，再用30～70％乙醇淋洗2～5个柱体积，收集淋洗液，浓缩、干燥即得产品。
2.如权利要求1所述的一种桑叶黄酮提取方法，其特征在于步骤(1)所述的乙醇回流提取使用的乙醇浓度为50％～80％。
3.如权利要求1所述的一种桑叶黄酮提取方法，其特征在于步骤(2)所述浓缩液的体积与桑叶重量比是(4～8)∶1(v/w)。
4.如权利要求1所述的一种桑叶黄酮提取方法，其特征在于步骤(3)所述pH值为2～6。
5.如权利要求1所述的一种桑叶黄酮提取方法，其特征在于步骤(4)所述的无机盐是氯化钠、硫酸钠、硫酸铵中的任意一种。
6.如权利要求1所述的一种桑叶黄酮提取方法，其特征在于步骤(5)所述大孔吸附树脂床体积与待分离桑叶用量比例为(0.5～1)∶1(v/w)。
7.如权利要求1所述的一种桑叶黄酮提取方法，其特征在于步骤(5)所述的柱层析淋洗速度为1-5ml/cm2.min。
8.如权利要求1所述的一种桑叶黄酮提取方法，其特征在于步骤(5)所述的柱层析分离层析次数为1-3次。
9.如权利要求1所述的一种桑叶黄酮提取方法，其特征在于步骤(5)所述的大孔吸附树脂是D101、D140、AB-8中的任一种。
全文摘要
一种桑叶黄酮提取方法，采用桑叶粉为原料，用乙醇和水作为提取溶剂和洗脱剂，大孔吸附树脂为分离材料，提取物中桑叶黄酮含量大于50％。本发明具有使用溶剂安全无毒，价格低廉可回收再用，对环境无污染，提取量大，可工业化生产，提取效率高的优点。
文档编号C07H1/00GK1683360SQ200510012388
公开日2005年10月19日 申请日期2005年3月12日 优先权日2005年3月12日
发明者张立伟, 杨林 申请人:山西大学