专利名称：新颖胺类的制作方法
技术领域：
本发明关于一种新颖的式(I)化合物。本发明亦关于相关态样，该等态样包括制备该等化合物的方法，含一或多种式(I)化合物的医药组合物及尤其其作为肾素抑制剂在心脏血管事件及肾功能不全中的用途。
背景技术：
在肾素-血管收缩素系统(RAS)中，生物活性血管收缩素II(Ang II)由两步机制产生。高度特异性酶肾素使血管收缩素原分解为血管收缩素I(Ang I)，该血管收缩素随后由次特异性血管收缩素-转化酶(ACE)进一步加工为Ang II。已知Ang II对至少两种称为AT1及AT2的受体亚型起作用。而AT1似乎传递Ang II的大部分已知功能，AT2的作用尚未知。
调节RAS代表心脏血管病治疗的主要进展。已接受ACE抑制剂及AT1阻断剂治疗高血压(Waeber B.等人，＂Therenin-angiotensin systemrole in experimental and humanhypertension＂，in Birkenhager W.H.，Reid J.L.(编)Hypertension，Amsterdam，Elsevier Science Publishing Co，1986，489-519；Weber M.A.，Am.J.Hypertens.，1992，5，247S)。另外，ACE抑制剂可用于肾保护(Rosenberg M.E.等人，Kidney International，1994，45，403；Breyer J.A.等人，KidneyInternational，1994，45，S156)，用于预防充血性心脏衰竭(Vaughan D.E.等人，Cardiovasc.Res.，1994，28，159；Fouad-Tarazi F.等人，Am.J.Med.，1988，84(增刊3A)，83)及心肌梗塞(Pfeffer M.A.等人，N.Engl.J.Med.，1992，327，669)。
开发肾素抑制剂的基础在于肾素的特异性(Kleinert H.D.，Cardiovasc.Drugs，1995，9，645)。已知肾素的唯一受质为血管收缩素原，其仅能由肾素加工(在生理条件下)。相反，除Ang I外，ACE亦可分解缓激肽且可由凝乳酶(一种丝胺酸蛋白酶)传递(Husain A.，J.Hypertens.，1993，11，1155)。因此，患者体内ACE的抑制导致引起咳嗽(5-20％)及潜在威胁生命的血管神经性水肿(0.1-0.2％)的缓激肽积聚(Israili Z.H.等人，Annals ofInternal Medicine，1992，117，234)。ACE抑制剂并不抑制凝乳酶。因此，在用ACE抑制剂治疗的患者中仍有可能形成Ang II。另一方面，AT1受体的阻断(例如，由氯沙坦(losartan))使其它AT-受体亚型(例如，AT2)过度暴露于Ang II，该Ang II的浓度因AT1受体的阻断而显著增加。总之，预期肾素抑制剂在阻断RAS的功效及安全性形态方面表现与ACE抑制剂及AT1阻断剂不同的医药概况。
因为肾素抑制剂由于其拟肽特性而导致的不足经口活性(Kleinert H.D.，Cardiovasc.Drugs，1995，9，645)，所以仅建立了有限的临床经验(Azizi M.等人，J.Hypertens.，1994，12，419；Neutel J.M.等人，Am.Heart，1991，122，1094)。数种化合物的临床开发已因该问题以及商品的高成本而停止。仅一种含4个手性中心的化合物进入临床试验(Rahuel J.等人，Chem.Biol.，2000，7，493；Mealy N.E.，Drugs of the Future，2001，26，1139)。因此，需要具有良好经口生物利用率及长的作用持续时间的肾素抑制剂。最近，描述了第一种展示高活体外活性的非肽肾素抑制剂(Oefner C.等人，Chem.Biol.，1999，6，127；专利申请案WO 97/09311；M
rki H.P.等人，Il Farmaco，2001，56，21)。然而，该等化合物的发展状态仍未知。
发明内容
本发明关于具有非肽性质及低分子量的肾素抑制剂。所述为式(I)的经口活性肾素抑制剂，其具有长作用持续时间，且除血压调节以外，其对诸如肾、心脏及血管重塑、动脉粥样硬化及可能性再狭窄的其中组织肾素-凝乳酶系统可经活化导致局部功能的病理生理学改变的适应症具有活性。所以，本发明描述该等式(I)的非肽肾素抑制剂。
详言之，本发明关于新颖式(I)化合物
其中 X表示CH、N或N+-O-； W表示对位经取代的苯基、对位经取代的吡啶基或噻唑基，诸如尤其对位经取代的苯基或
V表示-CH2CH2CH2-、-CH2CH2-A-、-CH2-A-CH2-、-A-CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-A-CH2CH2CH2-、-CH2-A-CH2CH2-、-CH2CH2-A-CH2-、-CH2CH2CH2-A-、-A-CH2CH2-B-(较佳)、-CH2CH2CH2CH2CH2-、-A-CH2CH2CH2CH2-、-CH2-A-CH2CH2CH2-、-CH2CH2-A-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-A-CH2-、-CH2CH2CH2CH2-A-、-A-CH2CH2CH2-B-、-CH2-A-CH2CH2-B-、-A-CH2CH2-B-CH2-、-A-CH2CH2CH2-B-CH2-、-CH2-A-CH2CH2CH2-B-或-O-CH2-Q-(亦较佳)， 其中Q与式(I)的基团U结合或(亦较佳)V表示下式的吡咯烷基
U表示未经取代的芳基，尤其苯基；经单、二、三或四取代的芳基(尤其经单、二、三或四取代的苯基)，其中取代基独立地选自由以下各基团组成的群C1-7烷基(诸如尤其甲基)、-CF3、卤素及羟基-C1-7烷基；或具有两个独立地选自氮、氧及硫的杂原子的5员杂芳基(较佳为吡唑基或异恶唑基)，其中该杂芳基视情况经单、二或三取代，其中该等取代基独立地选自由以下各基团组成的群C1-7烷基、C1-7烷氧基、-CF3、-OCF3及卤素； Q表示具有两个或三个独立地选自O及N的杂原子的5员杂芳基，较佳为异恶唑基，尤其为如下连接于式(I)分子的其余部分的异恶唑基
L表示-CH2-CH2-、-CH2-CH(R6)-CH2-、-CH2-N(R7)-CH2-、-CH2-O-CH2-或-CH2-S-CH2-； A及B各自独立地表示-O-或-S-； R1表示C1-7烷基或环烷基，较佳为环烷基，诸如尤其环丙基； R2表示卤素或C1-7烷基，较佳为氯或甲基； R3表示氢、卤素、C1-7烷基(诸如尤其甲基)、C1-7烷氧基或-CF3； R4表示氢；C1-7-烷基-O-(CH2)0-4-CH2-；CF3-O-(CH2)0-4-CH2-；R′2N-(CH2)0-4-CH2-，其中R′独立地选自由以下各基团组成的群氢、C1-7烷基(视情况但较佳经1至3个氟取代)、环丙基(视情况经1至3个氟取代)、环丙基-C1-7烷基(视情况但较佳经1至3个氟取代)及-C(＝O)-R＂，其中R＂为C1-4烷基、C1-4烷氧基、-CF3、-CH2-CF3或环丙基；或R13-C(＝O)-(O)0-1-(CH2)0-4-，其中R13为C1-4烷基、C1-4烷氧基或环丙基；其中R′及R＂两者较佳不同时表示氢； R5表示羟基、C1-7烷氧基、羟基-C1-7烷基、二羟基-C1-7烷基、C1-7烷氧基-C1-7烷基、C1-7烷氧基-C1-7烷氧基-C1-7烷基、羟基-C1-7烷氧基-C1-7烷基、胺甲酰基-C1-7烷氧基或C1-7烷基-羰基氧基； R6表示-H、-CH2OR9、-CH2NR8R9、-CH2NR8COR9、-CH2NR8SO2R9、-CO2R9、-CH2OCONR8R9、-CONR8R9、-CH2NR8CONNR8′R9、-CH2SO2NR8R9、-CH2SR9、-CH2SOR9或-CH2SO2R9；、 R7表示-R9、-COR9、-COOR11、-CONR8R9、-C(NR8)NR8’R9、-CSNR8R9、-SO2R9或-SO2NR8R9；或R7表示下式的基团聚
或
其中T表示-CH2-、-NH-或-O-，r为1至6的整数且s为1至4的整数； R8及R8′独立地表示氢、C1-7烷基、C2-7烯基、环烷基或环烷基-C1-7烷基，其中C1-7烷基、环烷基及环烷基-C1-7烷基可经1、2或3个卤素取代； R9表示氢、C1-7烷基、环烷基或环烷基-C1-7烷基，其中C1-7烷基、环烷基及环烷基-C1-7烷基可经单、二或三取代，其中该等取代基独立地选自由以下各基团组成的群卤素、羟基、-OCOR12、-COOR12、C1-7烷氧基、氰基、SO2R12、-CONR12R12′、吗啉-4-基-CO-、((4-C1-7烷基)哌嗪-1-基)-CO-、-NHC(NH)NH2、-NR10R10′及C1-7烷基，其限制条件为若碳原子为sp3杂化，则该碳原子至多与一个杂原子连接； R10及R10′独立地表示氢、C1-7烷基、环烷基、环烷基-C1-7烷基、羟基-C1-7烷基、-COOR8或-CONH2； R11表示卤素、C1-7烷基、C1-7烷氧基、-CF3或氢； R12及R12′独立地表示氢、C1-7烷基、C2-7烯基、环烷基或环烷基-C1-7烷基，其中C1-7烷基、环烷基及环烷基-C1-7烷基可经1、2或3个卤素取代； n表示整数0或1，尤其为0；且 m表示整数0或1，尤其为1，其限制条件为若n表示整数1，则m表示整数1； 及其盐。
除非另有说明，否则在本揭示案中，上文及下文所使用的一般术语较佳具有下列含义 当化合物、盐、医药组合物、疾病及其类似物为复数形式时，则其意欲亦意指单个化合物、盐或其类似物。
任何提及式(I)化合物将酌情且适当理解为亦提及式(I)化合物的盐(尤其医药学上可接受的盐)。
单独或与其它基团组合的术语C1-7烷基意谓具有1至7个碳原子的饱和、直链或支链基团，较佳具有1至4个碳原子，亦即C1-4烷基。C1-7烷基的实例为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、第二丁基、第三丁基、戊基、己基及庚基。较佳为甲基、乙基及异丙基。
单独或与其它基团组合的术语C1-7烷氧基指R-O基团，其中R为C1-7烷基。C1-7烷氧基的实例为甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、异丁氧基、第二丁氧基及第三丁氧基。
单独或与其它基团组合的术语羟基-C1-7烷基指HO-R基团，其中R为C1-7烷基。羟基-C1-7烷基的实例为HO-CH2-、HO-CH2CH2-、HO-CH2CH2CH2-及CH3CH(OH)-。
单独或与其它基团组合的术语C2-7烯基意谓包含一个烯键且由2至7个碳原子、较佳2至4个碳原子组成的直链或支链基团。C2-7烯基的实例为乙烯基、丙烯基及丁烯基。
术语卤素意谓氟、氯、溴或碘，较佳为氟、氯或溴。在本发明的一更佳实施例中，术语卤素意谓氟或氯。
单独或与其它基团组合的术语环烷基意谓具有3至7个碳原子的饱和环状烃环系统，亦即，环丙基、环丁基、环戊基、环已基或环庚基，较佳为环丙基。
单独或组合的术语芳基指苯基、萘基或二氢茚基，较佳为苯基。
术语sp3杂化指碳原子且意谓该碳原子与以围绕该碳原子的四角形方式置放的4个取代基形成4个键。
表达医药学上可接受的盐涵盖与对活有机体无毒的无机酸或有机酸形成的盐，该等酸如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、胺磺酸、磷酸、硝酸、亚磷酸、亚硝酸、柠檬酸、甲酸、乙酸、草酸、顺丁烯二酸、乳酸、酒石酸、反丁烯二酸、苯甲酸、扁桃酸、肉桂酸、棕榈酸、硬脂酸、麸胺酸、天冬胺酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、乙烷二磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、丁二酸、三氟乙酸及其类似物，或若式(I)化合物在性质上为酸性的，则涵盖与如碱金属或碱土金属碱的无机碱形成的盐，该等无机碱例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙及其类似物。对于医药学上可接受的盐的其它实例，可参考＂Saltselection for basic drugs＂，Int.J.Pharm.(1986)，33，201-217。
式(I)化合物可含有不对称碳原子。除非另有说明，否则双键或环上的取代基可以顺式(＝Z-)或反式(＝E-)存在。因此，式(I)化合物可以立体异构体的混合物或较佳以纯立体异构体形式存在。立体异构体的混合物可以例如管柱层析、薄层层析、HPLC或结晶的本身已知的方式分离。
本发明的化合物亦包括经由一或多个诸如氧(羟基缩合)、硫(巯基缩合)及/或氮的位点亚硝基化的亚硝基化的式(I)化合物。本发明的亚硝基化化合物可使用熟习此项技术者所已知的习知方法制备。举例而言，亚硝基化化合物的已知方法描述于以下文献中美国专利第5,380,758号、第5,703,073号、第5,994,294号、第6,242,432号及第6,218,417号，WO98/19672及Oae等人，Org.Prep.Proc.Int.，15(3)165-198(1983)。
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中X表示N+-O-且R4表示C1-4烷氧基-C(＝O)-NH-(CH2)0-4-CH2-或R13-C(＝O)-(O)0-1-(CH2)0-4-，其中R13为C1-4烷基、C1-4烷氧基或环丙基。
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中X表示CH或N；且 R4表示氢；C1-7烷基-O-(CH2)0-4-CH2-；CF3-O-(CH2)0-4-CH2-；或R′2N-(CH2)0-4-CH2-，其中R′独立地选自由以下各基团组成的群氢、C1-7烷基(视情况经1至3个氟取代)、环丙基(视情况经1至3个氟取代)、环丙基-C1-7烷基(视情况经1至3个氟取代)及-C(＝O)-R＂(其中R＂为C1-4烷基、-CF3、-CH2-CF3或环丙基)。
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中X表示CH或N+-O-。
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中R7表示-R9、-COR9、-COOR11、-CONR8R9、-C(NR8)NR8′R9、-CSNR8R9、-SO2R9或-SO2NR8R9。
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中A及B两者均表示-O-。
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中R6表示-CO2CH3或-CO2H。
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中R7表示-H、-COCH3、-C(NH)NH2、-CONHCH2C(CH3)2CONH2、-CONHCH(CH2)2或-CONHC(CH2)2CN。
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中R7表示-H。
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中L表示-CH2-CH2-或-CH2-NH-CH2-。
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中R1表示环丙基。
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中W表示对位取代的苯基，或
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中V表示-O-CH2CH2-O-、-O-CH2-Q-、-CH2-CH2-O-，其中该-CH2-CH2-O-的-CH2部分与式(I)的W基团结合，或
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中V表示-O-CH2CH2-O-或-O-CH2-Q-。
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中Q表示异恶唑基或恶二唑基。
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中Q表示异恶唑基，尤其为如下连接于式(I)分子的其余部分的异恶唑基
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中V-W表示
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中U表示
或
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中U表示
或
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中R2表示Cl且R3表示氢。
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中R4表示CH3-O-(CH2)2-3-或CH3-C(＝O)-NH-CH2-CH2-。
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中R4表示-CH2CH2CH2-O-CH3或-CH2CH2-O-CH3。
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中R4表示-CH2CH2-O-CH3。
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中R5表示羟基。
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中n表示整数0。
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中以下部分
表示下列可能性中的一种
或
本发明的一尤佳实施例关于式(I)化合物，其中 X表示CH、N或N+-O-； W表示对位取代的苯基或对位取代的吡啶基，其中该吡啶基尤其如下连接于式(I)分子的其余部分
V表示-A-CH2CH2-B-或-O-CH2-Q-，其中Q与式(I)的基团U结合或V表示下式的吡咯烷基
U表示三取代的苯基，其中该等取代基独立地选自由C1-7烷基(诸如尤其甲基)及卤素组成的群； Q表示异恶唑基，尤其为如下连接于式(I)分子的其余部分的异恶唑基
A及B两者均表示-O-； R1表示环丙基； R2表示卤素或C1-7烷基，尤其为氯或甲基； R3表示氢或C1-7烷基，尤其为氢或甲基； R4表示C1-7烷基-O-(CH2)0-4-CH2-，尤其为CH3-O-(CH2)1-2-CH2-； R5表示羟基； n表示整数0；且 m表示整数1。
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其中式(I)化合物的绝对构型如式(I′)所表示
本发明亦关于式(I)化合物，其中一或多个如式(I)或式(I)的较佳实施例所定义的取代基及符号由其本文所定义的较佳含义，诸如该等为以上所给的较佳实施例所定义的含义替代。
本发明的一较佳实施例关于式(I)化合物，其为(3S*，4R*)-4-{4-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-苯基}-4-羟基-哌啶-3-羧酸环丙基-(2，3-二甲基-苄基)-酰胺。
本发明的另一较佳实施例关于选自以下各物的式(I)化合物 (3S，4R)-4-{4-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-苯基}-4-羟基-哌啶-3-羧酸[2-氯-5-(2-甲氧基-乙基)-苄基]-环丙基-酰胺， (3′S，4′R)-6-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-4′-羟基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-3′-羧酸[2-氯-5-(2-甲氧基-乙基)-苄基]-环丙基-酰胺， (3′S，4′R)-6-[3-(2-氯-3，6-二氟-苯基)-异恶唑-5-基甲氧基]-4′-羟基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-3′-羧酸[2-氯-5-(2-甲氧基-乙基)-苄基]-环丙基-酰胺， (3′S，4′R)-6-[(R)-3-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-吡咯烷-1-基]-4′-羟基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-3′-羧酸[2-氯-5-(2-甲氧基-乙基)-苄基]-环丙基-酰胺， (3′S，4′R)-6-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-4′-羟基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-3′-羧酸[5-氯-2-(3-甲氧基-丙基)-吡啶-4-基甲基]-环丙基-酰胺，及 (3′S，4′R)-6-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-4′-羟基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-3′-羧酸[5-氯-2-(3-甲氧基-丙基)-1-氧基-吡啶-4-基甲基]-环丙基-酰胺。
式(I)化合物适用于治疗及/或预防诸如以下各疾病或与以下各疾病相关的疾病高血压、充血性心力衰竭、肺循环血压过高、肾功能不全、肾缺血、肾衰竭、肾纤维化、心功能不全、心脏肥大、心脏纤维化、心肌缺血、心肌病变、丝球体肾炎、肾绞痛、由糖尿病引起的并发症(如肾病、血管病变及神经病变)、青光眼、眼内压升高、动脉粥样硬化、血管成形术后再狭窄、血管或心脏手术后的并发症、勃起功能障碍、高醛固酮症、肺纤维化、硬皮病、焦虑症、认知病症、用免疫抑制剂治疗的并发症及其它与肾素-血管收缩素系统相关的疾病。
式(I)化合物尤其适用于治疗及/或预防高血压、充血性心力衰竭、肺循环血压过高、肾功能不全、肾缺血、肾衰竭、肾纤维化、心功能不全、心脏肥大、心脏纤维化、心肌缺血、心肌病变、由糖尿病引起的并发症(如肾病、血管病变及神经病变)。
在一实施例中，本发明关于治疗及/或预防与肾素-血管收缩素系统的调节障碍相关联的疾病的方法，详言之关于治疗及/或预防上述疾病的方法，该等方法包含向患者投与医药活性量的式(I)化合物。
本发明的另一方面关于包含式(I)化合物及医药学上可接受的载剂物质的医药组合物。该等医药组合物可用于治疗及/或预防上述疾病。该等医药组合物可用于经肠、非经肠或局部投药。其可例如经口例如以锭剂、包衣锭剂、糖衣药丸、硬明胶胶囊及软明胶胶囊、溶液、乳液或悬浮液形式投与；经直肠例如以栓剂形式投与；非经肠例如以注射溶液或输注溶液形式投与；或局部例如以软膏、乳膏或油状物形式投与。
本发明亦关于式(I)化合物用于制备供治疗及/或预防上述疾病用的医药组合物的用途。
医药组合物的制造可以任何熟习此项技术者所熟知的方式(参见例如Mark Gibson，Editor，PharmaceuticalPreformulation and Formulation，IHS Health Group，Englewood，CO，USA，2001；Remington，The Science andPractice of Pharmacy，第20版，Philadelphia College ofPharmacy and Science)藉由将所述式(I)化合物或其医药学上可接受的盐视情况与其它治疗上有价值的物质组合连同合适的无毒惰性治疗上兼容的固体或液体载剂物质及(若需要)常用医药佐剂一起制成盖伦制剂(galenical)投药形式来实现。
式(I)化合物或上述医药组合物亦与其它医药活性化合物组合使用，该等医药活性化合物诸如ACE抑制剂、中性肽链内切酶抑制剂、醛固酮拮抗剂、血管收缩素II受体拮抗剂、内皮素受体拮抗剂、血管扩张剂、钙拮抗剂、钾活化剂、利尿剂、抗交感神经药物、β-肾上腺素拮抗剂、α-肾上腺素拮抗剂、11β-羟类固醇脱氢酶1型抑制剂、可溶鸟苷酸环化酶活化剂及/或其它对预防或治疗上述疾病有益的药物。
本发明亦关于式(I)化合物的前药，其在活体内又转化为式(I)化合物。因此，任何提及式(I)化合物应酌情且适当理解为亦提及式(I)化合物的相应前药。
式(I)化合物可由以下所概述的方法、由实例中所描述的方法或由类似方法制造。
流程1中所述的A型化合物(参见专利申请案WO 2003/093267、WO 2004/002957、WO 2004/096769、WO2004/096803、WO 2004/096799及WO 2004/096366)可转化为B型化合物，其中L′表示如式(I)所定义的基团L的前驱体且Ra表示典型酯取代基，如甲基、乙基或苄基。PG表示合适保护基，通常为胺基羧酸酯基、苄基或甲基。流程1表示式(I)化合物，其中m为整数1；若m及n表示整数0，但为清楚之目的省略m，则可使用相同流程。L′可根据该合成加以修饰。胺必须单独制备(参见下文特定实例)。将B型化合物的酮烷基化产生C型化合物，或若已获得U-V-W片段，则产生D型化合物。Va表示如式(I)所定义的V的前驱体，且可根据该合成转化。在C型化合物中获得U-V-W片段产生D型化合物。使D型化合物的三级醇烷基化或酰基化产生E型化合物。最终获得L取代基产生F型化合物。去保护将最终产生式(I)化合物。
流程1
将B型化合物烷基化为C型化合物产生非对映异构体的混合物。该等非对映异构体可在该阶段或在任何以后的阶段(D、E、F型化合物或式(I)化合物)分离。
数种U-V-W-或Va-W-取代基的制备描述于前面提及的专利申请案中。另外，吡咯烷取代基可如流程2所述经铜或钯催化偶合连接于芳族环。在某些情况下，过渡金属并不为催化该反应所必需。其中PG′表示合适保护基的G型化合物将转化为其中X′表示CH或N的H型化合物。若式(I)中的W表示噻唑基，则亦可应用相同化学。
流程2
若V表示-O-CH2-Q-，则异恶唑基部分藉由环加成制备。该环加成可如流程1中所述在C型化合物中的W-Va片段上实现以产生D型化合物。另外，环加成可如(例如)流程3所述单独执行。用通常市售的醛在J型化合物上环加成产生K型化合物。当然，醛部分可构造于W-Va片段上且可构造U-CCH形式的化合物以在环加成的后产生另一异恶唑基部分。使用文献中所描述的方法，可使用相同原理制备恶二唑基部分。
流程3
又，羟基甲基异恶唑(流程4)可由流程3中所提及的醛及炔丙醇制备。与苯基或杂芳基衍生物(其中X＂通常表示-OH、-Br或-I)偶合产生K型化合物。
流程4
实施方式 下列实例用于更详细说明本发明。然而，其并不意欲以任何方式限制本发明的范畴。
实验部分 缩写(如本文所使用) AcOH 乙酸 Ang 血管收缩素 aq. 含水 Boc 第三丁基氧基羰基 BSA 牛血清白蛋白 Bu 丁基 BuLi 正丁基锂 Cy 环已基 dba二亚苄基丙酮 DIPEA 二异丙基乙基胺 DMAP 4-N，N-二甲基胺基吡啶 DMFN，N-二甲基甲酰胺 DMPU 1，3-二甲基-3，4，5，6-四氢-2(1H)-嘧啶酮 DMSO 二甲亚砜 dppp 1，3-双(二苯基膦基)丙烷 EDC·HCl 乙基-N，N-二甲基胺基丙基碳化二亚胺盐酸盐 EIA酶免疫分析 ELSD 蒸发光散射侦测 eq.当量 ES 电喷雾 ES+正离子电喷雾电离 Et 乙基 EtOAc 乙酸乙酯 EtOH 乙醇 FC 急骤层析 h 小时 HOBt 羟基苯幷三唑 HPLC 高效液相层析 LC-MS 液相层析-质谱 Me 甲基 MeOH 甲醇 min分钟 MS 质谱 NCSN-氯丁二酰亚胺 org. 有机 p 对 PG 保护基 rt 室温 sat. 饱和 sol. 溶液 TBAC 四正丁基氯化铵 TBME 第三丁基甲基醚 tBu 第三丁基 TFA 三氟乙酸 THF 四氢呋喃 TLC 薄层层析 tR 滞留时间(LC-MS或HPLC)，以分钟给出 UV 紫外线 Vis 可见光 xantphos4，5-双(二苯基膦基)-9，9-二甲基二苯幷哌喃 HPLC或LC-MS条件(除非另有指示) 分析型来自Agilent Technologies的Zorbax 59 SB Aqua管柱，4.6×50mm。溶离剂A乙腈；BH2O+0.5％ TFA。梯度经2分钟90％B→5％ B。流速1mL/min。侦测UV/Vis+MS。
制备型来自Agilent Technologies的Zorbax SB Aqua管柱，20×500mm。溶离剂A乙腈；BH2O+0.05％氢氧化铵(25％水溶液)。梯度经6分钟80％B→10％B。流速40mL/min。侦测UV+MS或UV+ELSD。
手性，分析型 a)Regis Whelk管柱，4.6×250mm，10μm。溶离剂AEtOH+0.05％ Et3N。溶离剂B己烷。流速1mL/min。
b)ChiralPak AD，4.6×250mm，5μm。溶离剂AEtOH+0.05％Et3N。溶离剂B己烷。流速1mL/min。
c)ChiralCel OD，4.6×250mm，10μm。溶离剂AEtOH+0.1％Et3N。溶离剂B己烷。流速0.8mL/min。
手性，制备型 a)Regis Whelk 01管柱，50×250mm且流速为100mL/min。溶离剂AEtOH+0.05％Et3N。溶离剂B己烷。
b)ChiralCel OD，20μm，50mm×250mm，，流速100mL/min。溶离剂AEtOH+0.1％Et3N。溶离剂B己烷。
5-溴-2-氯-N-环丙基苯甲酰胺 向装配有磁性搅拌棒且在N2下的经火焰干燥的250mL圆底烧瓶中添加于甲苯(80mL)中的5-溴-2-氯苯羧酸(10.0g，42.5mmol)及DMF(3.9mL，51.0mmol)。将溶液冷却至0℃，且经1小时逐滴添加乙二酰氯(4.4mL，51.0mmol)。将所得混合物在0℃下搅拌2小时且随后将挥发性组分移除。将所得粗反应混合物溶解于CH2Cl2(100mL)中且在冰浴中冷却至0℃。经1小时逐滴添加环丙胺(4.5mL，63.7mmol)，接着添加DIPEA(11.8mL，85.0mmol)。将所得溶液在室温下搅拌16小时。将反应混合物倾入含有1 M HCl水溶液(600mL)的1L分液漏斗中。将混合物用CH2Cl2(6×250mL)萃取。将组合的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤且随后在减压下浓缩。将产物自己烷/CH2Cl2中结晶且藉由过滤分离以产生标题化合物(8.24g，71％)。
N-(5-溴-2-氯苄基)环丙胺 将5-溴-2-氯-N-环丙基苯甲酰胺(12.0g，43.7mmol)于THF(100mL)中的溶液置放于装配有磁性搅拌棒且在N2下的250mL圆底烧瓶中。将溶液藉由逐滴添加BH3·Me2S(13.1mL，131mmol)处理且将所得悬浮液在室温下搅拌1小时。将混合物加热至回流历时1小时，冷却至室温且藉由逐滴添加1M HCl水溶液(25mL)缓慢中止。将悬浮液再回流1小时，冷却至室温且用1 M NaOH水溶液碱化至pH＝10-11。将混合物倾入含有1 M NaOH水溶液(350mL)的500mL分液漏斗中。将混合物用EtOAc(3×100mL)萃取。将组合的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤且随后在减压下浓缩。该粗胺可直接用于下一步骤中。
用环丙胺使经取代的苯甲醛还原胺化的一般程序
将经取代的苯甲醛(17.8mmol，1.0当量)、环丙胺(3.13mL，44.5mmol，2.5当量)及氰基硼氢化钠(1.34g，21.4mmol，1.2当量)于MeOH(100mL)中的溶液藉由逐滴添加冰AcOH(3.06mL，53.4mmol，3.0当量)处理。将所得溶液在室温下搅拌16小时隔夜。将反应混合物藉由逐滴添加饱和NaHCO3水溶液中止且在减压下浓缩以移除MeOH。将该粗残余物倾入含有饱和NaHCO3水溶液(150mL)的250mL分液漏斗中且用EtOAc(3×50mL)萃取。将组合的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤且随后在减压下浓缩。经FC纯化产生苯扎明(benzamine)产物。
使环丙基苯扎明经Boc保护的一般程序
Y＝卤素 将环丙基苯扎明(43.7mmol，1.0当量)于CH2Cl2(50mL)及1M NaOH水溶液(50mL)双相混合物中的溶液用Boc2O(15.1mL，65.6mmol，1.5当量)处理。将混合物在室温下剧烈搅拌16小时。将该混合物倾入含有H2O(300mL)的500mL分液漏斗中且用CH2Cl2(3×100mL)萃取。将组合的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤且随后在减压下浓缩。经FC纯化产生经Boc保护的胺。
使经Boc保护的环丙基苯扎明烯丙基化的一般程序
Y＝卤素 在N2下向经火焰干燥的圆底烧瓶或Schlenk管中添加Pd[PCy3]2(0.05当量)、CsF(2.0当量)及相应芳基溴(1.0当量)。若正使用芳基氯作为起始物质，则将(Pd[PtBu3]Br)2二聚物(0.025当量)替代Pd[PCy3]2催化剂使用。将烧瓶在减压(0.1mmHg)下抽空且用N2回填(重复3次)。将所得固体溶解于无水THF或二恶烷(0.15M溶液)中且添加三-正丁基烯丙基锡(1.5当量)且将所得混合物回流8-16小时直至TLC展示起始物质已完全耗尽。将反应混合物冷却至室温且在烧结玻璃漏斗上经硅胶垫过滤，用Et2O洗涤。将滤液浓缩且经FC纯化以产生相应烯丙基苯扎明衍生物。
使烯丙基苯扎明(allylbenzamines)硼氢化/氧化的一般程序
向装配有磁性搅拌棒的经火焰干燥的圆底烧瓶中添加烯丙基苯扎明(1.0当量)及无水THF(0.3M溶液)。将溶液冷却至0℃且经20分钟逐滴添加BH3·Me2S(1.1当量)。将该溶液在0℃下搅拌1小时，随后使其温至室温，且再搅拌2小时。将溶液冷却至0℃且逐滴添加1 M NaOH水溶液(注意放热反应)，接着逐滴添加30％H2O2水溶液。使混合物温至室温且搅拌2小时。将混合物倾入含有H2O的分液漏斗中且用Et2O(3次)萃取。将组合的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤且随后在减压下浓缩。经FC纯化产生所要醇产物。
使烯丙基苯扎明氧化分解/还原的一般程序
将烯丙基苯扎明(1.0当量)于CH2Cl2(0.4M溶液)中的溶液冷却至-78℃且使用气体分散管将O3气体引入至该溶液中。引入臭氧气体直至经TLC测定所有起始物质耗尽且反应混合物维持淡蓝色。将反应在-78℃下搅拌20分钟，随后添加EtOH(0.5M溶液)及NaBH4(2.5当量)。使混合物温至室温隔夜(16小时)。将反应混合物藉由逐滴添加饱和NH4Cl水溶液(5mL)中止且倾入含有饱和NH4Cl水溶液的分液漏斗中。将混合物用Et2O(3次)萃取。将组合的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤且在减压下浓缩。经FC纯化产生所要醇。
用甲基碘使芳族一级醇醚化的一般程序
将一级醇(1.0当量)于THF(0.25M溶液)中的悬浮液冷却至0℃且用NaH(60％于油中，2.0当量)处理。将所得混合物在0℃下搅拌30分钟且随后在室温下再搅拌30分钟。将悬浮液再冷却至0℃且随后以单份添加MeI(8.0当量)。将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，在室温下搅拌30分钟，且随后加热至回流历时4小时直至经TLC测定所有起始物质已耗尽。将冷却的反应混合物藉由逐滴添加饱和NH4Cl水溶液中止且倾入含有饱和NH4Cl水溶液的分液漏斗中，且用EtOAc(3次)萃取。将组合的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤且在减压下浓缩。经FC纯化产生甲基醚。
使经Boc保护的环丙基苯扎明去保护的一般程序
向经Boc保护的环丙基苯扎明(1.0当量)于CH2Cl2(0.1-0.5M溶液)中的溶液中添加4M于二恶烷中的HCl(5.0当量)。将所得混合物在室温下搅拌8-16小时直至TLC展示起始物质完全转化。将反应倾入含有1MNaOH水溶液的分液漏斗中且用CH2Cl2(3次)萃取。经FC纯化产生相应游离胺。
2-溴-5-氯-吡啶-4-甲醛 在-5℃下，向二异丙胺(20.9mL，148mmol)于无水THF(350mL)中的搅拌溶液中逐滴添加BuLi(1.6M于己烷中，89.5mL，143mmol)且在-5℃下，将所得溶液搅拌30分钟。使溶液冷却至-70℃且在-70℃下，经15分钟逐滴添加2-溴-5-氯吡啶(25.0g，130mmol)于THF(100mL)中的溶液以使得内部温度不超过-65℃。将混合物在-70℃下搅拌30分钟。经20分钟逐滴添加DMF(10.52mL，136mmol)以使得内部温度不超过-70℃。将橙色混合物在-70℃下搅拌40分钟。使混合物温至室温且倾入水(200mL)及1 M NaOH水溶液(50mL)的混合物中。将混合物用EtOAc(2×)萃取且将组合的有机萃取物用1M NaOH水溶液(2×)反洗。将有机萃取物经MgSO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。将粗产物经FC纯化(EtOAc/庚烷1:9→1:8→1:6→1:4→1:2→1:1)产生标题化合物(21.55g，72％)。LC-MStR＝0.74min；ES+295.01。
2-溴-5-氯-4-二甲氧基甲基-吡啶 在室温下，向2-溴-5-氯-吡啶-4-甲醛(43.9g，199mmol)于MeOH(800mL)中的溶液中依次添加原羧酸三甲酯(65.3mL，597mmol)与对甲苯磺酸单水合物(1.90g，10.0mmol)。随后，将该反应混合物加热至回流历时3小时。使混合物冷却至室温且在减压下浓缩。将残余物溶解于CH2Cl2中，且将该混合物用10％K2CO3水溶液洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。高真空下干燥产生标题化合物(51.7g，97％)。LC-MStR＝0.92min；ES+309.06。
5-氯-4-二甲氧基甲基-2-(3-甲氧基-丙基)-吡啶 向Mg(911mg，37.5mmol)及碘(一种晶体)于无水THF(30mL)中的悬浮液中逐滴添加总量的5％的1-溴-3-甲氧基丙烷(4.59g，30.0mmol)。藉助于加热枪将混合物加热至回流直至已起始形成格林纳溶液(Grignard)。缓慢添加剩余1-溴-3-甲氧基丙烷，同时放热反应继续进行。添加结束之后，将反应混合物在回流下搅拌20分钟且使其冷却至室温。在0℃下，将该格林纳溶液(1M于THF中，23.5mL，23.5mmol)逐滴添加至2-溴-5-氯-4-二甲氧基甲基-吡啶(2.50g，9.38mmol)及Ni(dppp)Cl2(495mg，0.938mmol)于THF(50mL)中的混合物中。将反应混合物在室温下搅拌30分钟且随后加热至回流历时2小时。使混合物冷却至室温且用EtOAc溶解。将该混合物用饱和NaHCO3水溶液洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。残余物经FC纯化(庚烷→EtOAc/庚烷1:1)产生标题化合物(1.51g，62％)。LC-MStR＝0.80min；ES+260.15。
5-氯-2-(3-甲氧基-丙基)-吡啶-4-甲醛 将5-氯-4-二甲氧基甲基-2-(3-甲氧基-丙基)-吡啶(25.5g，98.2mmol)溶解于1 M HCl水溶液(500mL)中且将混合物加热至80℃历时2小时。使混合物冷却至室温且添加EtOAc。将混合物冷却至0℃且用2.5 M NaOH水溶液碱化直至达到pH＝10。将层分离，且将有机层经MgSO4干燥，过滤且在减压下浓缩。在高真空下将残余物干燥产生粗标题化合物(98.1mmol，99％)，该粗化合物无需纯化即可进一步使用。LC-MStR＝0.62min；ES+246.12。
[5-氯-2-(3-甲氧基-丙基)-吡啶-4-基甲基]-环丙基-胺 在室温下，将5-氯-2-(3-甲氧基-丙基)-吡啶-4-甲醛(21.0g，98.2mmol)及环丙胺(13.8mL，196mmol)于MeOH(450mL)中的混合物搅拌隔夜。在0℃下添加NaBH4(4.83g，128mmol)且在室温下将混合物搅拌隔夜。添加冰且将混合物在减压下浓缩。将粗产物溶解于EtOAc中，且将该混合物用1 M NaOH水溶液洗涤。将水层用EtOAc反萃取。将组合的有机萃取物经MgSO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。粗产物经FC纯化(EtOAc/庚烷1:5→1:4→1:3→1:1→3:1→EtOAc)产生标题化合物(11.8g)及[5-氯-2-(3-甲氧基-丙基)-吡啶-4-基亚甲基]-环丙基-胺(10.7g)。将该未反应的亚胺溶解于MeOH(20mL)中，且将该溶液冷却至0℃。添加NaBH4(3.20g，84.6mmol)且将混合物在室温下搅拌隔夜。再添加NaBH4(3.20g，84.6mmol)且将混合物搅拌3天。将冰添加反应混合物中且将混合物在减压下浓缩。将粗产物溶解于EtOAc中，且将所得混合物用1 M NaOH水溶液洗涤。将水相用EtOAc反萃取。将组合的有机萃取物经MgSO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。粗产物经FC纯化(EtOAc/庚烷1:3→1:2→1:1→EtOAc)产生标题化合物(9.4g)。将标题化合物的溶离份混合在一起(21.2g，85％)。LC-MStR＝0.55min；ES+296.16。
2-(4-溴-苯氧基)-乙醇 将4-溴苯酚(1003g，0.58mol)溶解于二甲苯(220mL)中。添加[1，3]二氧戊环-2-酮(53.7g，0.61mol)及咪唑(592mg，8.70mmol)。将混合物加热至140℃历时3天。使混合物冷却至室温且在减压下移除溶剂。高真空下将残余物干燥产生标题化合物(130g，全收量)。LC-MStR＝0.81min。
甲烷磺酸2-(4-溴-苯氧基)-乙酯 将2-(4-溴-苯氧基)-乙醇(125g，0.576mol)溶解于CH2Cl2(650mL)中，且将溶液冷却至0℃。以使温度不上升至10℃以上的速度滴加Et3N(110mL，0.864mol)(约60分钟)，随后滴加甲磺酰氯(67.1mL，0.864mol)。将混合物在0℃下搅拌1小时，随后在室温下搅拌隔夜。将混合物用CH2Cl2稀释且用盐水(2×)洗涤。将水相用CH2Cl2反萃取。将组合的有机萃取物经MgSO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。在高真空下将残余物干燥产生标题化合物粗产物(174g，全收量)，该化合物无需纯化即可进一步使用。LC-MStR＝0.92min。
1-[2-(4-溴-苯氧基)-乙氧基]-2，6-二氯-4-甲基-苯 将K2CO3(29.3g，212mmol)溶解于水(162mL)中。添加1-丙醇(150mL)。添加2，6-二氯-对甲酚(25g，141mmol)于1-丙醇(150mL)中的溶液。添加甲烷磺酸2-(4-溴-苯氧基)-乙酯(41.6g，141mmol)。将混合物在85℃下搅拌6小时。将加热油浴移除且当内部温度达到78℃时，逐滴添加水(330mL)。使米色悬浮液冷却至室温。将混合物过滤且将沉淀用水洗涤。在高真空下在30℃下将沉淀干燥48小时产生标题化合物(43g，81％)。LC-MStR＝1.15min。
2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙醇 在一装配有气体液滴计数器及高效冷却系统的三颈烧瓶中，将2，6-二氯-对甲酚(20.0g，113mmol)、[1，3]二氧戊环-2-酮(9.95g，113mmol)及咪唑(115mg，1.70mmol)的混合物加热至160℃历时25小时。使混合物冷却至室温。残余物经FC纯化(Et2O/庚烷1:1)产生标题化合物(18.7g，75％)。LC-MStR＝0.88min。
5-溴-2-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-吡啶 将2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙醇(18.6g，84mmol)于THF(360mL)中的溶液冷却至0℃。分批添加NaH(约55％于油中，6.60g，约153mmol)且将混合物在室温下搅拌30分钟。逐滴添加2，5-二溴吡啶(18.0g，76.3mmol)于THF(60mL)中的溶液且将混合物加热至回流历时90分钟。使混合物冷却至室温且小心添加冰。在减压下将溶剂部分移除且将残余物用EtOAc稀释。将该混合物用饱和NH4Cl水溶液洗涤。将水层用EtOAc(2×)反萃取。将组合的有机萃取物用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。粗产物经FC纯化(EtOAc/庚烷3:97)产生标题化合物(22.7g，79％)。LC-MStR＝1.13min；ES+378.08。
2-氯-3，6-二氟-苯甲醛肟 将2-氯-3，6-二氟-苯甲醛肟(25.0g，142mmol)溶解于CH3CN(175mL)中。向该溶液中添加NaHCO3(35.7g，424mmol)且将混合物剧烈搅拌5分钟。添加水(350mL)且将混合物搅拌10分钟。添加NH2OH·HCl(19.7g，283mmol)及TBAC(1.97g，7.08mmol)且将反应混合物在室温下搅拌1小时。逐滴添加AcOH(20mL)直至pH值为6-7。将混合物用Et2O(3×)萃取。将组合的有机萃取物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。高真空下干燥产生标题化合物(25.0g，92％)。LC-MStR＝0.93min。
(S)-1-(5-溴-吡啶-2-基)-吡咯烷-3-醇 将2，5-二溴吡啶(12.2g，51.5mmol)及(S)-羟基吡咯烷(2.80g，32.1mmol)于甲苯(50mL)中的混合物加热至回流隔夜。使混合物冷却至室温且在减压下移除溶剂。将残余物用EtOAc(150mL)溶解且将混合物用10％K2CO3水溶液洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。残余物经FC纯化(庚烷→庚烷/EtOAc 1:2)产生标题化合物(3.62g，46％)。LC-MStR＝0.48min；ES+243.15。
(R)-5-溴-2-[3-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-吡咯烷-1-基]-吡啶 将偶氮二羧酸酯二哌啶(11.7g，45.4mmol)添加至(S)-1-(5-溴-吡啶-2-基)-吡咯烷-3-醇(8.82g，36.3mmol)及2，6-二氯-对甲酚(7.37g，40.0mmol)于甲苯(200mL)中的溶液中。将混合物用氮脱气5分钟且添加PBu3(85％，15.8mL，46.2mmol)。将混合物快速加热至100℃且在该温度下搅拌2小时。使混合物冷却至室温且用庚烷(200mL)稀释。将混合物过滤且在减压下使滤液蒸发。残余物经FC纯化(EtOAc/庚烷1:7)产生粗标题化合物，将该化合物用CH2Cl2稀释。将该混合物用1MNaOH水溶液洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。高真空下将残余物干燥产生纯标题化合物(13.5g，93％)。LC-MStR＝0.92min；ES+402.98。
(rac.)-3-[环丙基-(2，3-二甲基-苄基)-胺甲酰基]-4-侧氧基-哌啶-1-羧酸第三丁酯(B1) 将4-羟基-5，6-二氢-2H-吡啶-1，3-二羧酸1-第三丁酯3-甲酯(WO 2004/105738，1.00g，3.89mmol)、环丙基-(2，3-二甲基-苄基)-胺(681mg，3.89mmol)及对甲苯磺酸单水合物(92.4mg，0.486mmol)于无水甲苯(40mL)中的溶液在装配有迪恩-斯达克(Dean-Stark)收集器的烧瓶中在回流下搅拌隔夜。使反应混合物冷却至室温。添加EtOAc(120mL)且将所得混合物依次用饱和NaHCO3水溶液(2×)、1 M HCl水溶液(1×)及最后用饱和NaHCO3水溶液(1×)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。残余物经FC纯化(庚烷→庚烷/EtOAc50:50)产生标题化合物(566mg，36％)。LC-MStR＝1.02min；ES+401.02。
(rac.)-3-{[2-氯-5-(2-甲氧基-乙基)-苄基]-环丙基-胺甲酰基}-4-侧氧基-哌啶-1-羧酸第三丁酯(B2) 将4-羟基-5，6-二氢-2H-吡啶-1，3-二羧酸1-第三丁酯3-甲酯(WO 2004/105738，4.83g，18.8mmol)、[2-氯-5-(2-甲氧基-乙基)-苄基]-环丙基-胺(3.00g，12.5mmol)及对甲苯磺酸单水合物(298mg，1.56mmol)于无水甲苯(188mL)中的溶液在装配有迪恩-斯达克收集器的烧瓶中在回流(油浴，在130℃下)下搅拌24小时。使混合物冷却至室温且搁置整个周末。添加EtOAc(100mL)且将所得混合物依次用饱和NaHCO3水溶液、1M HCl水溶液(2×)及盐水洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。残余物经FC纯化(庚烷→庚烷/EtOAc40:60)产生标题化合物(2.39g，41％)。LC-MStR＝1.03min；ES+465.43。
(rac.)-3-{[5-氯-2-(3-甲氧基-丙基)-吡啶-4-基甲基]-环丙基-胺甲酰基}-4-侧氧基-哌啶-1-羧酸第三丁酯(B3) 将4-羟基-5，6-二氢-2H-吡啶-1，3-二羧酸1-第三丁酯3-甲酯(WO 2004/105738，2.00g，7.77mmol)、[5-氯-2-(3-甲氧基-丙基)-吡啶-4-基甲基]-环丙基-胺(1.98g，7.77mmol)及对甲苯磺酸单水合物(185mg，0.972mmol)于无水甲苯(78mL)中的溶液在装配有迪恩-斯达克收集器的烧瓶中在回流下搅拌隔夜。添加4-羟基-5，6-二氢-2H-吡啶-1，3-二羧酸1-第三丁酯3-甲酯(500mg，1.94mmol)且将混合物加热至回流历时4小时。使混合物冷却至室温。添加EtOA，且将混合物用饱和NaHCO3水溶液、1 M HCl水溶液及饱和NaHCO3水溶液洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。粗产物经FC纯化(EtOAc/庚烷7:3)产生标题化合物(1.70g，46％)。LC-MStR＝0.90min；ES+480.39。
(rac.)-(3S＊，4R＊)-3-[环丙基-(2，3-二甲基-苄基)-胺甲酰基]-4-{4-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-苯基}-4-羟基-哌啶-1-羧酸第三丁酯(D1) 在-78℃下，将1-[2-(4-溴-苯氧基)-乙氧基]-2，6-二氯-4-甲基-苯(537mg，1.43mmol)于无水THF(15mL)中的溶液用BuLi(1.6 M于己烷中，0.428mL，1.56mmol)处理。30分钟的后，在-78℃下，将该溶液以导管引入化合物B1(520mg，1.30mmol)于无水THF(15mL)中的溶液中。1小时的后，将混合物倾入饱和NH4Cl水溶液中，用EtOAc(2×)萃取，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。残余物经FC纯化(庚烷→庚烷/EtOAc 70:30)产生标题化合物(89mg，10％)。LC-MStR＝1.23min；ES+697.16。
(rac.)-(3R＊，4S＊)-3-{[2-氯-5-(2-甲氧基-乙基)-苄基]-环丙基-胺甲酰基}-4-{4-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-苯基}-4-羟基-哌啶-1-羧酸第三丁酯(D2) 在-78℃下，将1-[2-(4-溴-苯氧基)-乙氧基]-2，6-二氯-4-甲基-苯(4.04g，10.8mmol)于THF(107mL)中的溶液用BuLi(1.6M于己烷中，7.38mL，11.8mmol)处理。30分钟的后，添加DMPU(2.85mL，23.7mmol)且将混合物搅拌5分钟。缓慢添加化合物B2(2.00g，4.30mmol)于THF(14mL)中的溶液。将混合物在-78℃下搅拌15分钟且添加饱和NH4Cl水溶液(100mL)。使混合物温至室温且在减压下将溶剂部分移除。将残余物水溶液用饱和NH4Cl水溶液(50mL)稀释且将混合物用EtOAc(3×)萃取。将组合的有机萃取物经MgSO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。粗产物经FC纯化(庚烷→EtOAc/庚烷40:60)产生标题化合物(380mg，12％)。LC-MStR＝1.27min；ES+763.22。
(rac.)-(3R＊，4S＊)-3′-{[2-氯-5-(2-甲氧基-乙基)-苄基]-环丙基-胺甲酰基}-6-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-4′-羟基-3′，4′，5′，6′-四氢-2′H-[3，4′]联吡啶-1′-羧酸第三丁酯(D3) 在高真空下，将Mg切屑(535mg，22.0mmol)及无水LiCl(848mg，20.0mmol)置放于120℃下的油浴中的干燥烧瓶中隔夜。一旦其在N2下冷却，则在不打开烧瓶的情况下，添加THF(10mL)。在室温下缓慢添加异丙基氯于THF(10mL)中的溶液且将混合物在室温下搅拌12小时。将所得灰色1M溶液备用，但不应保留超过24小时。将于无水THF(80.6mL)中的5-溴-2-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-吡啶(3040mg，8.07mmol)用先前所制备的格林纳溶液(1M，8.48mL，8.48mmol)处理。将混合物在室温下搅拌4小时。再添加异丙基格林纳溶液(1 M，8.00mL，8.00mmol)且将混合物搅拌2小时。添加化合物B2(1500mg，3.226mmol)于无水THF(15mL)中的溶液且将混合物在室温下搅拌15分钟。将混合物倾入饱和NH4Cl水溶液中且用EtOAc萃取。将组合的有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。残余物经FC纯化(庚烷→庚烷/EtOAc 70:30)产生标题化合物(1.74g，71％)。LC-MStR＝1.23min；ES+764.49。
(rac.)-(3R＊，4S＊)-6-[3-(2-氯-3，6-二氟-苯基)-异恶唑-5-基甲氧基]-3′-{[2-氯-5-(2-甲氧基-乙基)-苄基]-环丙基-胺甲酰基}-4′-羟基-3′，4′，5′，6′-四氢-2′H-[3，4′]联吡啶-1′-羧酸第三丁酯(D4) 在高真空下，将Mg切屑(535mg，22.0mmol)及无水LiCl(848mg，20.0mmol)置放于120℃下的油浴中的干燥烧瓶中隔夜。一旦其在N2下冷却，则在不打开烧瓶的情况下，添加THF(10mL)。在室温下缓慢添加异丙基氯于THF(10mL)中的溶液且将混合物在室温下搅拌12小时。将所得灰色1M溶液备用，但不应保留超过24小时。将化合物K1(1.08g，2.69mmol)于无水THF(27mL)中的溶液在室温下用先前制备的格林纳溶液(1 M，3.76mL，3.76mmol)处理。将混合物在室温下搅拌且每小时检查格林纳溶液的形成。5小时的后，添加化合物B2(500mg，1.08mmol)于无水THF(10mL)中的溶液且将反应在室温下搅拌1小时。将混合物倾入饱和NH4Cl水溶液中且将混合物用EtOAc萃取。将组合的有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。残余物经FC纯化(庚烷→庚烷/EtOAc庚烷30:70)提供标题化合物(275mg，33％)。LC-MStR＝1.20min；ES+787.64。
(3′R，4′S)-3′-{[2-氯-5-(2-甲氧基-乙基)-苄基]-环丙基-胺甲酰基}-6-[(R)-3-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-吡咯烷-1-基]-4′-羟基-3′，4′，5′，6′-四氢-2′H-[3，4′]联吡啶-1′-羧酸第三丁酯与(3′S，4′R)-3′-{[2-氯-5-(2-甲氧基-乙基)-苄基]-环丙基-胺甲酰基}-6-[(R)-3-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-吡咯烷-1-基]-4′-羟基-3′，4′，5′，6′-四氢-2′H-[3，4′]联吡啶-1′-羧酸第三丁酯的混合物(D5) 在高真空下，将Mg切屑(535mg，22.0mmol)及无水LiCl(848mg，20.0mmol)置放于120℃下的油浴中的干燥烧瓶中隔夜。一旦其在N2下冷却，则在不打开烧瓶的情况下，添加THF(10mL)。在室温下缓慢添加异丙基氯于THF(10mL)中的溶液且将混合物在室温下搅拌12小时。将所得灰色1 M溶液备用，但不应保留超过24小时。在室温下，将于无水THF(61mL)中的(R)-5-溴-2-[3-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-吡咯烷-1-基]-吡啶(2.16g，5.38mmol)用先前制备的格林纳溶液(1M，8.47mL，8.47mmol)处理。将混合物在室温下搅拌且每小时检查格林纳溶液的形成。8小时的后，添加化合物B2(1.13g，2.42mmol)于无水THF(11mL)中的溶液且将反应在室温下搅拌1小时。将混合物倾入饱和NH4Cl水溶液中且将混合物用EtOAc萃取。将组合的有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。残余物经FC纯化(庚烷→EtOAc/庚烷30:70)提供标题化合物混合物(1.29g，68％)。LC-MStR＝1.03min；ES+787.77。
(rac.)-(3′R＊，4′S＊)-3′-{[5-氯-2-(3-甲氧基-丙基)-吡啶-4-基甲基]-环丙基-胺甲酰基}-6-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-4′-羟基-3′，4′，5′，6′-四氢-2′H-[3，4′]联吡啶-1′-羧酸第三丁酯(D6) 在高真空下，将Mg切屑(535mg，22.0mmol)及无水LiCl(848mg，20.0mmol)置放于120℃下的油浴中的干燥烧瓶中隔夜。一旦其在N2下冷却，则在不打开烧瓶的情况下，添加THF(10mL)。在室温下缓慢添加异丙基氯于THF(10mL)中的溶液且将混合物在室温下搅拌12小时。将所得灰色1M溶液备用，但不应保留超过24小时。在室温下，将于无水THF(54mL)中的5-溴-2-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-吡啶(2.02，5.37mmol)用先前制备的格林纳溶液(1M，7.51mL，7.51mmol)处理。将混合物在室温下搅拌且每小时检查格林纳溶液的形成。5小时的后，添加化合物B3(1.03g，2.15mmol)于无水THF(10mL)中的溶液且将反应在室温下搅拌1小时。将混合物倾入饱和NH4Cl水溶液中且将混合物用EtOAc萃取。将组合的有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。残余物经FC纯化(庚烷→EtOAc/庚烷2:7)提供标题化合物(921mg，55％)。LC-MStR＝1.19min；ES+779.64。
(rac.)-(3′R＊，4′S＊)-3′-{[5-氯-2-(3-甲氧基-丙基)-1-氧基-吡啶-4-基甲基]-环丙基-胺甲酰基}-6-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-4′-羟基-3′，4′，5′，6′-四氢-2′H-[3，4′]联吡啶-1′-羧酸第三丁酯(D7) 将化合物D6(46mg，0.603mmol)于无水CH2Cl2(6.00mL)中的溶液在室温下用3-氯过苯羧酸(70％，166mg，0.675mmol)处理，且将混合物在室温下搅拌2小时。将混合物倾入饱和NaHCO3水溶液中且用EtOAc萃取。将有机萃取物用饱和NaHCO3水溶液(2×)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。残余物经FC纯化(庚烷→庚烷/EtOAc 50:50)产生标题化合物(347mg，73％)。
5-溴-2-[3-(2-氯-3，6-二氟-苯基)-异恶唑-5-基甲氧基]-吡啶(K1) 在氮下，将2，5-二溴吡啶(31.4g，132mmol)及化合物L1(25.0g，102mmol)溶解于无水甲苯(1.00L)中。将t-BuONa(14.7g，153mmol)、xantphos(3.54g，6.12mmol)及Pd2(dba)3·CHCl3(1.83g，2.00mmol)添加至混合物中。将混合物加热至回流隔夜且使其冷却至室温。将该混合物用饱和NaHCO3水溶液及盐水洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。残余物经FC纯化(EtOAc/庚烷10:90)产生标题化合物(17.4g，43％)。LC-MStR＝1.08min。
[3-(2-氯-3，6-二氟-苯基)-异恶唑-5-基]-甲醇(L1) 将2-氯-3，6-二氟-苯甲醛肟(21.3g 111mmol)于DMF(66.7mL)中的溶液逐滴添加至NCS(14.9g，111mmol)及吡啶(1.78mL)于DMF(222mL)中的溶液中。将混合物在室温下搅拌1小时且逐滴添加炔丙醇(4.99g，89.1mmol)于DMF(71mL)中的溶液。将反应混合物加热至85℃且缓慢添加Et3N(15.5mL，111mmol)于DMF(89.3mL)中的溶液。将反应混合物在85℃下搅拌60分钟且使其冷却至室温。将混合物用水(533mL)稀释且用EtOAc(2×)萃取。将组合的有机萃取物用水及盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。残余物经FC纯化(EtOAc/庚烷40:60)产生标题化合物(17.0g，78％)。LC-MStR＝0.84min；ES+287.12。
3-(苄基-第三丁氧基羰基-胺基)-丙酸乙酯(M1) 在0℃下，将Boc2O(5.53g，25.3mmol)添加至N-苄基-β-丙胺酸乙酯(3.40mL，16.9mmol)及DIPEA(11.6mL，67.6mmol)于CH2Cl2(200mL)中的溶液中。将混合物搅拌隔夜同时温至室温。将混合物冷却至0℃且用1 M HCl水溶液分溶。将有机层再用1 M HCl水溶液及饱和NaHCO3水溶液洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。粗产物经FC纯化(EtOAc/庚烷3:20)产生标题化合物(5.16g，99％)。LC-MStR＝1.02min。
3-(苄基-第三丁氧基羰基-胺基)-丙酸(N1) 在70℃下，将化合物M1(838mg，2.73mmol)于EtOH(34mL)及1 M NaOH水溶液(13.7mL)中的混合物搅拌2小时。使混合物冷却至室温，且添加1 M HCl水溶液直至达到pH＝4。在减压下将溶剂部分移除且将残余物水溶液用EtOAc萃取。将组合的有机萃取物用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。高真空下干燥产生粗标题化合物(769mg，全收量)，该化合物无需纯化即可进一步使用。LC-MStR＝0.89min；ES+280.33。
苄基-(2-{[2-氯-5-(2-甲氧基-乙基)-苄基]-环丙基-胺甲酰基}-乙基)-胺基羧酸第三丁酯(O1) 在室温下，将化合物N1(769mg，2.75mmol)、DMAP(84.1mg，0.688mmol)、HOBt(446mg，3.30mmol)、DIPEA(1.78g，2.36mmol)及EDC·HCl(1.32g，6.88mmol)于CH2Cl2(65mL)中的混合物搅拌45分钟。添加[2-氯-5-(2-甲氧基-乙基)-苄基]-环丙基-胺(1.14g，4.13mmol)且将混合物搅拌隔夜。添加CH2Cl2且将混合物用1 M HCl水溶液(2×)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。粗产物经FC纯化(MeOH/CH2Cl2 1:99)产生标题化合物(1.12g，76％)。LC-MStR＝1.11min；ES+501.30。
4-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-苯甲醛(Q1) 在-78℃下，将BuLi(1.6 M于己烷中，17.0mL，26.9mmol)添加至1-[2-(4-溴-苯氧基)-乙氧基]-2，6-二氯-4-甲基-苯(8.81g，23.4mmol)于THF(91mL)中的溶液中。将混合物在-78℃下搅拌10分钟且添加DMF(2.72mL，35.1mmol)。将混合物在-78℃下搅拌2.5小时且添加饱和NH4Cl水溶液。使混合物温至室温且用TBME(2×)萃取。将组合的有机萃取物用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。粗产物经FC纯化(EtOAc/庚烷1:4)产生标题化合物(3.64g，48％)。LC-MStR＝1.07min；ES+325.03。
实例 实例1 (rac.)-(3S＊，4R＊)-4-{4-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-苯基}-4-羟基-哌啶-3-羧酸环丙基-(2，3-二甲基-苄基)-酰胺 将化合物D1(51mg，0.073mmol)于二恶烷(1mL)中的溶液在0℃下用HCl(4M于二恶烷中，0.5mL)处理，且将混合物在0℃下搅拌2小时。将反应混合物浓缩至干燥。经FC纯化(CH2Cl2→CH2Cl2/MeOH 90:10)产生标题化合物(18mg，39％)。LC-MStR＝0.96min；ES+597.16。
实例2 (3S，4R)-4-{4-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-苯基}-4-羟基-哌啶-3-羧酸[2-氯-5-(2-甲氧基-乙基)-苄基]-环丙基-酰胺 在0℃下，将HCl(4M于二恶烷中，2.40mL)添加至化合物D2(380mg，0.499mmol)于CH2Cl2(2.40mL)中的溶液中。将混合物搅拌2小时，同时温至室温，且随后在减压下移除溶剂。粗产物经FC纯化(CH2Cl2/MeOH 90:10)产生外消旋标题化合物(249mg，75％)。将该混合物经手性制备型HPLC(RegisWhelk，等梯度溶离剂B85％)分离。获得标题化合物(42mg，19％)。LC-MStR＝0.96min；ES+663.56。手性分析型HPLC(Regis Whelk，等梯度溶离剂B50％)tR＝33.0min。
实例3 (3′S，4′R)-6-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-4′-羟基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-3′-羧酸[2-氯-5-(2-甲氧基-乙基)-苄基]-环丙基-酰胺 将化合物D3(1.132g，1.485mmol)溶解于CH2Cl2(7.40mL)中。将溶液冷却至0℃。将HCl(4M于二恶烷中，7.40mL)逐滴添加至该混合物中。将混合物在室温下搅拌1小时且小心倾倒至饱和NaHCO3水溶液与EtOAc的混合物上。将混合物用EtOAc萃取。将组合的有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。粗产物经FC纯化(CH2Cl2至CH2Cl2/MeOH90:10)产生仍与少量硅胶混合的外消旋标题化合物。将该混合物用CH2Cl2稀释且经棉花过滤。在减压下移除溶剂以产生纯外消旋标题化合物(904mg，92％)。将该外消旋体经手性分析型HPLC(Chiralpack AD，等梯度溶离剂B 45％)分离。获得标题化合物(350mg，42％)。LC-MStR＝0.94min；ES+662.43。手性分析型HPLC(Chiralpack AD，等梯度溶离剂B65％)tR＝11.4min。
实例4 (3′S，4′R)-6-[3-(2-氯-3，6-二氟-苯基)-异恶唑-5-基甲氧基]-4′-羟基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-3′-羧酸[2-氯-5-(2-甲氧基-乙基)-苄基]-环丙基-酰胺 将化合物D4(275mg，0.349mmol)溶解于CH2Cl2(1.75mL)中。将溶液冷却至0℃。将HCl(4M于二恶烷中，1.75mL)逐滴添加至该混合物中。将混合物在室温下搅拌1小时且小心倾倒至饱和NaHCO3水溶液与EtOAc的混合物上。将混合物用EtOAc萃取。将组合的有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。粗产物经FC纯化(CH2Cl2→CH2Cl2/MeOH90:10)产生外消旋标题化合物(162mg，67％)。将该外消旋体经手性分析型HPLC(Chiralpack AD，等梯度溶离剂B50％)分离。获得标题化合物(45mg，30％)。LC-MStR＝0.92min；ES+687.63。手性分析型HPLC(Chiralpack AD，等梯度溶离剂B50％)tR＝11.5min。
实例5 (3′S，4′R)-6-[(R)-3-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-吡咯烷-1-基]-4′-羟基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-3′-羧酸[2-氯-5-(2-甲氧基-乙基)-苄基]-环丙基-酰胺 将化合物D5(1.29g，1.64mmol)溶解于CH2Cl2(8.2mL)中。将溶液冷却至0℃。将HCl(4M于二恶烷中，8.2mL)逐滴添加至该混合物中。将混合物在室温下搅拌1小时且小心倾倒至饱和NaHCO3水溶液与EtOAc的混合物上。将混合物用EtOAc萃取。将组合的有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。粗产物经FC纯化(CH2Cl2至CH2Cl2/MeOH90:10)产生仍与其相应立体异构体及少量硅胶混合的标题化合物。将该混合物用CH2Cl2稀释且经棉花过滤。在减压下移除溶剂以产生纯外消旋标题化合物(904mg，80％)，该化合物与其相应非对映异构体混合。将部分该混合物(150mg)经手性分析型HPLC(Chiralpack AD，等梯度溶离剂B 50％)分离。获得标题化合物(50mg，33％)。LC-MStR＝0.81min；ES+689.66。手性分析型HPLC(Chiralpack AD，等梯度溶离剂B 50％)tR＝10.7min。
实例6 (3′S，4′R)-6-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-4′-羟基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-3′-羧酸[5-氯-2-(3-甲氧基-丙基)-吡啶-4-基甲基]-环丙基-酰胺 将化合物D6(920mg，1.18mmol)溶解于CH2Cl2(5.9mL)中。将溶液冷却至0℃。将HCl(4 M于二恶烷中，5.9mL)逐滴添加至该混合物中。将混合物在室温下搅拌1小时且小心倾倒至饱和NaHCO3水溶液与EtOAc的混合物上。将混合物用EtOAc萃取。将组合的有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。粗产物经FC纯化(CH2Cl2至CH2Cl2/MeOH90:10)产生仍与其相应立体异构体及少量硅胶混合的标题化合物。将该混合物用CH2Cl2稀释且经棉花棉过滤。在减压下移除溶剂以产生与其相应非对映异构体混合的纯标题化合物(682mg，85％)。将部分该混合物(80mg)经手性分析型HPLC(Chiralpack AD，等梯度溶离剂B 50％)分离。获得标题化合物(31mg，39％)。LC-MStR＝0.88min；ES+679.23。手性分析HPLC型(Chiralpack AD，等梯度溶离剂B50％)tR＝16.4min。
实例7 (3′S，4′R)-6-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-4′-羟基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-3′-羧酸[5-氯-2-(3-甲氧基-丙基)-1-氧基-吡啶-4-基甲基]-环丙基-酰胺 将化合物D7(347mg，0.500mmol)溶解于CH2Cl2(2.5mL)中。将HCl(4M于二恶烷中，2.50mL)逐滴添加至该溶液中。将混合物在室温下搅拌1小时且小心倾倒至饱和NaHCO3水溶液与EtOAc的混合物上。将混合物用EtOAc萃取，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下移除溶剂。粗产物经FC纯化(CH2Cl2→CH2Cl2/MeO H9:1)产生仍与少量硅胶混合的标题化合物。将该混合物溶解于CH2Cl2中且经棉花过滤，其产生外消旋标题化合物(266mg，77％)。将部分该外消旋体(83mg)经手性分析型HPLC(Chiralpack AD，等梯度溶离剂B 50％)分离。获得标题化合物(29mg，35％)。手性分析型HPLC(Chiralpack AD，等梯度溶离剂B50％)tR＝31.1min。
生物分析 1.评估AngI积聚及肾素抑制的酶免疫分析(EIA) 1.1AngI-BSA接合物的制备 将1.3mg(1μmol)AngI[1-10(Bachem，H-1680)]及17mg(0.26μmol)BSA(Fluka，05475)溶解于4mL0.1M磷酸盐缓冲液(pH7.4)中，此后，逐滴添加2mL 1:100戊二醛于H2O中的稀释液(Sigma G-5882)。将混合物在4℃下培育隔夜，随后在室温下以2公升0.9％NaCl透析两次历时4小时，接着在室温下以2公升PBS 1×透析隔夜。随后将溶液用针筒过滤器，0.45μm(Nalgene，目录号194-2545)过滤。该接合物于0.05％迭氮化钠中在4℃下可于聚丙烯管中储存至少12个月。
1.2经BSA-AngI涂布的MTP的制备 将微量滴定板(MPT384，MaxiSorpTM，Nunc)在4℃下与80μl AngI(1-10)/BSA接合物一起培育隔夜，在铁氟龙烧杯(teflon beaker)中用PBS 1×以1:100,000稀释(精确稀释度视接合物的批量而定)，清空，用90μl阻断溶液
填充，且在室温下培育至少2小时或在4℃下培育隔夜。将96孔MTP(MaxiSorpTM，Nunc)用200μl接合物涂布且用250μl上述阻断溶液(除该阻断溶液含有3％ BSA外)阻断。将板在4℃下于阻断溶液中储存1个月。
1.3于384孔MTP中的AngI-EIA 将经AngI(1-10)/BSA涂布的MTP用洗涤缓冲液(PBS 1×，0.01％吐温20)洗涤3次且用75μl初级抗体溶液(抗Angl抗血清，用马血清以1:10预稀释)填充，稀释至最终浓度为于分析缓冲液(PBS 1×，1mM EDTA，0.1％ BSA，pH7.4)中1:100,000。将5μl肾素反应物(或于分析缓冲液中的标准物质)(参见下文)添加至初级抗体溶液中且将该板在4℃下培育隔夜。培育的后，将板用洗涤缓冲液洗涤3次且在室温下与二级抗体[抗兔IgG，与辣根过氧化物酶(Amersham Bioscience，NA 934V)连接，用洗涤缓冲液以1∶2,000稀释]一起培育2小时。将板用洗涤缓冲液洗涤3次且随后在室温下与受质溶液[1.89mMABTS(2.2′-次偶氮基-二-(3-乙基-苯幷噻唑啉磺酸盐)](RocheDiagnostics，102 946)及2.36mM H2O2[30％，于受质缓冲液(0.1M乙酸钠，0.05M磷酸二氢钠，pH 4.2)中的(Fluka，95300)]一起培育1小时。在405nm下在微板读数器(来自BMG的FLUOStar Optima)上读取板的OD。肾素反应期间，藉由比较平行量测的样品的OD与AngI(1-10)标准曲线的OD量化AngI的产生。
2.初级肾素抑制分析于缓冲液中的IC50，384孔MTP 肾素分析由先前描述的分析(Fischli W.等人，Hypertension，1991，18:22-31)改编而来且由以下两个步骤组成第一步将重组人类肾素与其受质(市售人类十四肽肾素受质)一起培育以产生产物血管收缩素I(AngI)。第二步由免疫学分析(酶免疫分析，EIA)量测所积聚的AngI。该分析的详细描述可见如下。EIA极灵敏且充分适合缓冲液或血浆中的肾素活性量测。由于该分析中所使用的肾素浓度低(每分析管2fmol或10pM)，有可能在该初级分析中量测低至低pM浓度的抑制剂亲和力。
2.1方法 在4℃下，将于分析缓冲液(PBS 1×，1mM EDTA，0.1％BSA，pH7.4)中的重组人类肾素(3pg/μl)、人类十四肽(1-14)受质(Bachem，M-1120)[5μM于10mM HCl中]、硫酸羟基喹啉(Fluka，55100)[30mM于H2O中]及分析缓冲液以100:30:10:145的比率预混合。将该预混合物以每孔47.5μl转移至聚丙烯板(MTP384，Nunc)中。将测试化合物溶解且以100％DMSO稀释且添加2.5μl至预混合物中，随后在37℃下培育3小时。培育期结束时，将5μl肾素反应物(或于分析缓冲液中的标准物质)转移至EIA分析(如上所述)中且量化由肾素产生的AngI。针对各化合物浓度计算肾素抑制的百分率(AngI降低)且测定抑制50％酶活性的肾素抑制浓度(IC50)。化合物展示极佳生物利用率且在代谢上比先前技术化合物更稳定。
抑制的实例
权利要求
1.一种式(I)化合物
其中
X表示CH、N或N+-O-；
W表示对位经取代的苯基、对位经取代的吡啶基或噻唑基；
V表示-CH2CH2CH2-、-CH2CH2-A-、-CH2-A-CH2-、-A-CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-A-CH2CH2CH2-、-CH2-A-CH2CH2-、-CH2CH2-A-CH2-、-CH2CH2CH2-A-、-A-CH2CH2-B-、-CH2CH2CH2CH2CH2-、-A-CH2CH2CH2CH2-、-CH2-A-CH2CH2CH2-、-CH2CH2-A-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-A-CH2-、-CH2CH2CH2CH2-A-、-A-CH2CH2CH2-B-、-CH2-A-CH2CH2-B-、-A-CH2CH2-B-CH2-、-A-CH2CH2CH2-B-CH2-、-CH2-A-CH2CH2CH2-B-或-O-CH2-Q-，其中Q与式(I)的基团U结合，或V表示下式的吡咯烷基
U表示未经取代的芳基；经单、二、三或四取代的芳基，其中取代基独立地选自由以下各基团组成的群C1-7烷基、-CF3、卤素及羟基-C1-7烷基；或具有两个独立地选自氮、氧及硫的杂原子的5员杂芳基，其中该杂芳基视情况经单、二或三取代，其中取代基独立地选自由以下各基团组成的群C1-7烷基、C1-7烷氧基、-CF3、-OCF3及卤素；
Q表示具有两个或三个独立地选自O及N的杂原子的5员杂芳基；
L表示-CH2-CH2-、-CH2-CH(R6)-CH2-、-CH2-N(R7)-CH2-、-CH2-O-CH2-或-CH2-S-CH2-；
A及B彼此独立地表示-O-或-S-；
R1表示C1-7烷基或环烷基；
R2表示卤素或C1-7烷基；
R3表示氢、卤素、C1-7烷基、C1-7烷氧基或-CF3；
R4表示氢；C1-7-烷基-O-(CH2)0-4-CH2-；CF3-O-(CH2)0-4-CH2-；R′2N-(CH2)0-4-CH2-，其中R′独立地选自由以下各基团组成的群氢、C1-7烷基(视情况经1至3个氟取代)、环丙基(视情况经1至3个氟取代)、环丙基-C1-7烷基(视情况经1至3个氟取代)及-C(＝O)-R＂，其中R＂为C1-4烷基、C1-4烷氧基、-CF3、-CH2-CF3或环丙基；或R13-C(＝O)-(O)0-1-(CH2)0-4-，其中R13为C1-4烷基、C1-4烷氧基或环丙基；其中R′及R＂两者不同时表示氢较佳；
R5表示羟基、C1-7烷氧基、羟基-C1-7烷基、二羟基-C1-7烷基、C1-7烷氧基-C1-7烷基、C1-7烷氧基-C1-7烷氧基-C1-7烷基、羟基-C1-7烷氧基-C1-7烷基、胺甲酰基-C1-7烷氧基或C1-7烷基-羰基氧基；
R6表示-H、-CH2OR9、-CH2NR8R9、-CH2NR8COR9、-CH2NR8SO2R9、-CO2R9、-CH2OCONR8R9、-CONR8R9、-CH2NR8CONR8′R9、-CH2SO2NR8R9、-CH2SR9、-CH2SOR9或-CH2SO2R9；
R7表示-R9、-COR9、-COOR11、-CONR8R9、-C(NR8)NR8′R9、-CSNR8R9、-SO2R9或-SO2NR8R9；或R7表示下式的基团
或
其中T表示-CH2-、-NH-或-O-，r为1至6的整数且s为1至4的整数；
R8及R8′独立地表示氢、C1-7烷基、C2-7烯基、环烷基或环烷基-C1-7烷基，其中C1-7烷基、环烷基及环烷基-C1-7烷基可经1、2或3个卤素取代；
R9表示氢、C1-7烷基、环烷基或环烷基-C1-7烷基，其中C1-7烷基、环烷基及环烷基-C1-7烷基可经单、二或三取代，其中取代基独立地选自由以下各基团组成的群卤素、羟基、-OCOR12、-COOR12、C1-7烷氧基、氰基、SO2R12、-CONR12R12′、吗啉-4-基-CO-、((4-C1-7烷基)哌嗪-1-基)-CO-、-NHC(NH)NH2、-NR10R10′及C1-7烷基，其限制条件为若碳原子为sp3杂化，则该碳原子至多与一个杂原子连接；
R10及R10′独立地表示氢、C1-7烷基、环烷基、环烷基-C1-7烷基、羟基-C1-7烷基、-COOR8或-CONH2；
R11表示卤素、C1-7烷基、C1-7烷氧基、-CF3或氢；
R12及R12′独立地表示氢、C1-7烷基、C2-7烯基、环烷基或环烷基-C1-7烷基，其中C1-7烷基、环烷基及环烷基-C1-7烷基可经1、2或3个卤素取代；
n表示整数0或1；且
m表示整数0或1，其限制条件为若n表示整数1，则m表示整数1；
及其盐。
2.如权利要求1的化合物，其中X表示N+-O-且R4表示C1-4烷氧基-C(＝O)-NH-(CH2)0-4-CH2-或R13-C(＝O)-(O)0-1-(CH2)0-4-，其中R13为C1-4烷基、C1-4烷氧基或环丙基，或该化合物的盐。
3.如权利要求1的化合物，其中X表示CH或N；且
R4表示氢；C1-7烷基-O-(CH2)0-4-CH2-；CF3-O-(CH2)0-4-CH2-；或R′2N-(CH2)0-4-CH2-，其中R′独立地选自由以下各基团组成的群氢、C1-7烷基(视情况经1至3个氟取代)、环丙基(视情况经1至3个氟取代)、环丙基-C1-7烷基(视情况经1至3个氟取代)及-C(＝O)-R＂，其中R＂为C1-4烷基、CF3、-CH2-CF3或环丙基；
或该化合物的盐。
4.如权利要求1的化合物，其中X表示CH或N+-O-，或该化合物的盐。
5.如权利要求1至4中任一项的化合物，其中R7表示-R9、-COR9、-COOR11、-CONR8R9、-C(NR8)NR8′R9、-CSNR8R9、-SO2R9或-SO2NR8R9，或该化合物的盐。
6.如权利要求1至5中任一项的化合物，其中A及B两者均表示-O-，或该化合物的盐。
7.如权利要求1至6中任一项的化合物，其中R6表示-CO2CH3或-CO2H，或该化合物的盐。
8.如权利要求1至7中任一项的化合物，其中R7表示-H、-COCH3、-C(NH)NH2、-CONHCH2C(CH3)2CONH2、-CONHCH(CH2)2或-CONHC(CH2)2CN，或该化合物的盐。
9.如权利要求8的化合物，其中R7表示-H，或该化合物的盐。
10.如权利要求1至6中任一项的化合物，其中L表示-CH2-CH2-或-CH2-NH-CH2-，或该化合物的盐。
11.如权利要求1至10中任一项的化合物，其中R1表示环丙基，或该化合物的盐。
12.如权利要求1至11中任一项的化合物，其中W表示对位经取代的苯基或
或该化合物的盐。
13.如权利要求1至12中任一项的化合物，其中V表示-O-CH2CH2-O-、-O-CH2-Q-、-CH2-CH2-O-，其中-CH2-CH2-O-的-CH2部分与式(I)的W基团结合，或
或该化合物的盐。
14.如权利要求13的化合物，其中V表示-O-CH2CH2-O-或-O-CH2-Q-，或该化合物的盐。
15.如权利要求1至14中任一项的化合物，其中Q表示异恶唑基或恶二唑基，或该化合物的盐。
16.如权利要求15的化合物，其中Q表示异恶唑基，或该化合物的盐。
17.如权利要求1至11中任一项的化合物，其中V-W表示
或该化合物的盐。
18.如权利要求1至17中任一项的化合物，其中U表示
或
或该化合物的盐。
19.如权利要求18的化合物，其中U表示
或
或该化合物的盐。
20.如权利要求1至19中任一项的化合物，其中R2表示C1且R3表示氢，或该化合物的盐。
21.如权利要求1及3至20中任一项的化合物，其中R4表示CH3-O-(CH2)2-3-或CH3-C(＝O)-NH-CH2-CH2-，或该化合物的盐。
22.如权利要求21的化合物，其中R4表示-CH2CH2CH2-O-CH3或-CH2CH2-O-CH3，或该化合物的盐。
23.如权利要求22的化合物，其中R4表示-CH2CH2-O-CH3，或该化合物的盐。
24.如权利要求1至23中任一项的化合物，其中R5表示羟基，或该化合物的盐。
25.如权利要求1至24中任一项的化合物，其中n表示整数0，或该化合物的盐。
26.如权利要求1、5至19及24至25中任一项的化合物，其中以下部分
表示下列可能性中的一种
或
或该化合物的盐。
27.如权利要求1的化合物，其中
X表示CH、N或N+-O-；
W表示对位经取代的苯基或对位经取代的吡啶基；
V表示-A-CH2CH2-B-或-O-CH2-Q-，其中Q与式(I)的基团U结合或V表示下式的吡咯烷基
U表示经三取代的苯基，其中取代基独立地选自由C1-7烷基及卤素组成的群；
Q表示异恶唑基；
A及B两者均表示-O-；
R1表示环丙基；
R2表示卤素或C1-7烷基；
R3表示氢或C1-7烷基；
R4表示C1-7烷基-O-(CH2)0-4-CH2-；
R5表示羟基；
n表示整数0；且
m表示整数1，
或该化合物的盐。
28.如权利要求1至27中任一项的化合物，或其盐，其中该式(I)化合物的绝对构型如式(I′)所表示
29.如权利要求1的化合物，其为(3S*，4R*)-4-{4-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-苯基}-4-羟基-哌啶-3-甲酸环丙基-(2，3-二甲基-苄基)-酰胺，或其盐。
30.如权利要求1的化合物，其选自
(3S，4R)-4-{4-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-苯基}-4-羟基-哌啶-3-羧酸[2-氯-5-(2-甲氧基-乙基)-苄基]-环丙基-酰胺，
(3′S，4′R)-6-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-4′-羟基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-3′-羧酸[2-氯-5-(2-甲氧基-乙基)-苄基]-环丙基-酰胺，
(3′S，4′R)-6-[3-(2-氯-3，6-二氟-苯基)-异恶唑-5-基甲氧基]-4′-羟基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-3′-羧酸[2-氯-5-(2-甲氧基-乙基)-苄基]-环丙基-酰胺，
(3′S，4′R)-6-[(R)-3-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-吡咯烷-1-基]-4′-羟基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-3′-羧酸[2-氯-5-(2-甲氧基-乙基)-苄基]-环丙基-酰胺，
(3′S，4′R)-6-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-4′-羟基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-3′-羧酸[5-氯-2-(3-甲氧基-丙基)-吡啶-4-基甲基]-环丙基-酰胺，及
(3′S，4′R)-6-[2-(2，6-二氯-4-甲基-苯氧基)-乙氧基]-4′-羟基-1′，2′，3′，4′，5′，6′-六氢-[3，4′]联吡啶-3′-羧酸[5-氯-2-(3-甲氧基-丙基)-1-氧基-吡啶-4-基甲基]-环丙基-酰胺，
或该等化合物的盐。
31.一种医药组合物，其包含如权利要求1至30中任一项的化合物或其医药学上可接受的盐及医药学上可接受的载剂物质。
32.如权利要求1至30中任一项的化合物或其医药学上可接受的盐或如权利要求31的医药组合物，其用作药物。
33.一种如权利要求1至30中任一项的化合物或其医药学上可接受的盐用于制备供治疗及/或预防疾病用的医药组合物的用途，其中该等疾病选自高血压、充血性心力衰竭、肺循环血压过高、肾功能不全、肾缺血、肾衰竭、肾纤维化、心功能不全、心脏肥大、心脏纤维化、心肌缺血、心肌病变、丝球体肾炎、肾绞痛、由糖尿病引起的并发症(如肾病、血管病变及神经病变)、青光眼、眼内压升高、动脉粥样硬化、血管成形术后再狭窄、血管或心脏手术后的并发症、勃起功能障碍、高醛固酮症、肺纤维化、硬皮病、焦虑症、认知病症、用免疫抑制剂治疗的并发症及其它与肾素-血管收缩素系统相关的疾病。
全文摘要
本发明关于一种新颖的胺衍生物及其在制备医药组合物中作为活性成分的用途。本发明亦关于相关方面，包括制备该等化合物的方法，含一或多种该等化合物的医药组合物及尤其其作为肾素抑制剂的用途。
文档编号C07D401/12GK101395149SQ200780007949
公开日2009年3月25日 申请日期2007年3月7日 优先权日2006年3月8日
发明者奥利维尔·贝曾康, 丹尼尔·比尔, 奥利维尔·考民伯伊夫, 考里纳·格里索斯托米, 尤博斯·雷门, 西尔维娅·理查德-比洛斯泰恩, 托马斯·韦勒 申请人:埃科特莱茵药品有限公司