专利名称：新型三萜衍生物及其药物用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及齐墩果酸或乌苏酸衍生物及其药物用途，具体为不同类型的一氧化氮(简 称NO，下同)供体通过酯键或酰胺键与具有肝病治疗作用的齐墩果酸或乌苏酸偶联的化合 物，及其在抗肝肿瘤方面的应用。
背景技术：
齐墩果酸(简称OA，下同)或乌苏酸(简称UA，下同)广泛存在于植物界，临床上 用于治疗慢性肝炎、肝硬化及恶性肿瘤等，但尚存在生物利用度较低、疗效不十分理想等 问题(参见熊筱娟，陈武，肖小华，等.乌索酸与齐墩果酸对小鼠实验性肝损伤保护作 用的比较[J].江西师范大学学报(自然科学版)，2004， 28(6): 540~543.王立新，韩广轩， 刘文庸，等.齐墩果酸的化学及药理研究[J].药学实践杂志，2001, 19 (2): 104-107; 陈武，熊筱娟，李开泉，等.乌索酸治疗急性病毒性肝炎的临床研究[J]. 2001， 13(1): 1~3.OA UA近年来，大量研究表明，细胞凋亡是引起各种肝细胞损伤的重要原因。而NO在细胞 凋亡过程中具有双向调节作用体内持续低浓度的NO (无论是内源性的还是外源性的)可 抑制细胞凋亡，对细胞具有保护和促其生长的作用；体内高浓度的NO可产生细胞毒性， 诱导肿瘤细胞凋亡，阻止肿瘤细胞的扩散和转移。NO供体是一类在体内经酶和非酶作用释 放一定量NO的化合物，己有报道一些NO供体选择性地在肝脏内释放少量NO，可用于治 疗肝炎、肝硬化等肝脏疾病。另有报道一些NO供体可经酶的活化特异性地在肝肿瘤部位 释放NO，杀灭癌细胞。发明内容本发明要解决的技术问题是基于NO的双向调节作用，如何应用药物设计的基本理 论，设计、合成结构类型新颖、释放NO机制多样化的NO供体型OA或UA衍生物，并 对它们进行生物活性筛选，以获得具有保肝作用或特异性抗肿瘤效应的新型肝病治疗药物。 本发明还要于提供一种新型肝病治疗药物的可工业化生产的制备方法。为解决上述问题本发明提供如下技术方案。 1.通式I化合物其中，R!代表H， CF3CO; R2代表H或CH3; R3代表H或CH3; R4代表不同碳链长度的脂肪烃基或芳香烃基。 2.通式II化合物其中，R!代表H， CF3CO; R2代表H, CH3; R3代表H， CH3; R4代表不同碳链长度的脂 肪烃基或芳香烃基；Rs代表Ph，S02Ph; X代表O, NH。3.通式ra化合物， CH2Ph; R2代表H， CH3; 113代表H， CH3; R4代表-(012)2-, -CH-CH-:-Ph-(O); R5代表不同碳链长度的脂肪烃基或芳香烃基。4.通式IV化合物其中，Ri代表H， C2H5， CH2Ph; R2代表H， CH3; 113代表H， CH3; R4代表-(012)2-， -CH-CH-,-Ph-(O); R5代表不同碳链长度的脂肪烃基或芳香烃基，R6代表Ph,S02Ph。通式I化合物的制备方法，其特征在于OA(UA)与相应的BrR4Br反应生成酯la;或者 OA (UA)与三氟乙酸酐反应制得混合酸酐，再与HOR4Br反应，生成酯lb， la或lb再与硝酸银反应得目的物；其中一些在碳酸氢钠(钾)存在下脱三氟乙酰基得其它I类化合物。la或lb其中，R4代表H， CF3CO; R2代表H， CH3; R3代表H， CH3; R4代表碳链长度的脂肪烃基或芳香烃基。具体反应步骤为OA or UA +BrR4Br~ 1a AgNQ3 |或1) (CF3CO)20 AgN03 OAorUA - ib ~^——2) HOR4Br通式II化合物的制备方法，其特征在于OA(UA)与三氟乙酸酐反应生成混合酸酐，再与含 羟基或氨基的呋咱氮氧化物2a反应制得部分II类化合物；其中一些在碳酸氢钠(钾)存在 下脱三氟乙酰基得其它II类化合物。HXR4 R5 Wo其中，R4代表碳链长度的脂肪烃基或芳香烃基；R5代表Ph，S02Ph; X代表O， NH。 具体反应步骤为1) (CF3CO)20 OA or UA ~^~^~~||2) 2a3) NaHC03通式ni化合物的制备方法，其特征在于OA (UA)与相应的溴代烷(&Br)反应成酯，再 与丁二酸酐或邻苯二甲酸酐在4-二甲氨基吡啶(DMAP)催化下得3a, 3a与阿魏酸或对羟 基桂皮酸的酯类衍生物在二环己基碳二亚胺(DCC)及DMAP催化下縮合，最后与硝酸银 进行取代反应。、COOF^HOOCF^COO,3ii其中，R！代表H, C2H5, CH2Ph; R2代表H， CH3; R3代表H， CH3; R4代表-(012)2-, -CH=CH-， -Ph-(o)。具体反应步骤为O一UA + RlBr_^ O, & HOR严A,通式IV化合物的制备方法，其特征在于3a与含羟基或氨基的呋咱氮氧化物2a在DCC及DMAP催化下縮合。(3a， 2a的结构同上)。 具体反应步骤为
，。+ ,。 DCC/DMAP 3a十2a_iv
以下为本发明化合物的实施例，这些实施例并不意味着对本发明的限制。
图1不同浓度下样品对HepG2的抑制率(％) 实施例1
1) 乌苏酸-2-溴乙酯(la!)
UA (1.0g，2.19mmo1)悬浮于15ml丙酮中，加三乙胺(2ml)使完全溶解，室温搅拌下 加入l， 2-二溴乙烷(l.Oml， 11.5mmo1),搅拌回流反应6小时，滤除不溶物，滤液浓縮， 柱层析[乙酸乙酯石油醚(60~卯°0=1: 4(V: V)]，得白色固体0.80g,收率65%， mp: 150-152。C。
2) 乌苏酸-2-硝氧乙酯(I。
lai (0.4g, 0.71mmo1)溶于乙腈和四氢呋喃的混合溶剂中，加入硝酸银(177tng， 1.06mmoD ，闭光回流反应6小时，滤除黄色的溴化银沉淀，滤液浓縮，得淡黄色油状物， 柱层析[乙酸乙酯石油醚(60~90°C) =1: 4 (V: V)]，得纯品0.3g，收率77.6%,mp: 178 ~180°C。
ESI-MS : 568 [M+Na]+ ;
IR (KBr, em"): 3447 (OH)， 1730 (C=0), 1632 (ON02);
!H-NMR (300MHz, CDC13)， S (ppm): 0.71(s, 3H， CH3)， 0.78 (s, 3H, CH3)， 0.90(s, 3H, CH3), 0.93 (s, 3H, CH3), 0.98 (s， 3H, CH3)， 1.13 (s, 3H， CH3), 1.49 (s, 3H， CH3), 2.82 2.86(m, 1H， Ci8-H ), 3.20~3.24(m, 1H, 3 a -H)， 4.53 (t， 2H， OCH2， J = 6Hz)， 4.13 (t， 2H， OCH2, J = 6Hz)， 5.27~5.29 (brs， 1H，C12-H);
Anal. C32H5iN06Found: (%) N2.14 C 70.90 H9.14200810053893.0
说明书第6/9页
Calcd:(%) N2.57 C 70.42 H9.42
实施例2
乌苏酸-3-(3-苯磺酰基-2-氧-呋咱-4-氧)-l-甲基丙酯(II!)
UA (456mg， lmmol)悬浮于甲苯中，加入三氟醋酐(0.82ml，5.87mmo1),室温搅拌， 10分钟后加入中间体2-(3-苯磺酰基-l， 2， 5-噁二唑-2-氧化物-4-)氧-3-丁醇(305mg， lmmol) (参照文献李瑞文，张奕华，季晖，等.苯磺酰基呋咱氮氧化物与双氯酚酸偶联化合物的合 成及抗炎活性[J].药学学报,2001， 36(11) :821-826),搅拌回流反应，6小时后结束反应， 冷却，反应液用10MNaOH洗至中性，有机层再分别水洗，饱和食盐水洗，无水Na2S04干 燥，柱层析[乙酸乙酯石油醚(60~90°C) =1: 4 (V: V)],得乳白色固体.523mg,将其 悬浮于甲醇中，加碳酸氢钠溶液(1.2g碳酸氢钠溶于60ml水)调PH至9，室温搅拌，减 压蒸除溶剂，残余物加水，用乙酸乙酯萃取，有机层分别用水、饱和食盐水洗，无水硫酸 钠干燥，过滤，柱层析[乙酸乙酯石油醚(60 卯'C) =1: 4 (V: V)]，得纯品484mg，收 率64.4%， mp:66 68。C。 ESI-MS : 775 [M+Na]+ ;
IR (KBr， cm"): 3438 (OH), 1720 (C=0)， 1170， 1367 (S02);
'H-NMR (300MHz ， CDC13), S (ppm): 0.66 (s， 3H， CH3)， 0.73 ( s, 6H， 2 X CH3 )， 0.87 (s， 6H， 2 XCH3 ),0.93 (s, 3H，CH3), 1.11 (s， 3H, CH3)， 2.79~2.81 (m， 1H, C18-H)， 3.14~3.19 (m， 1H, 3 a -H)， 4.14~4.46 (m， 2H， OCH2 )， 5.07~5.08 (m， 1H， OCH )， 5.24~5.25 (brs， 1H, C12-H ), 7.59~7.64 (m, 2H， ArH), 7.71~7.73 (m， 1H， ArH)， 8.03~8.06 (m, 2H, ArH); Anal. C42H60N2O8S Found : (%) N3.45 C 67.06 H7.92
Calcd:(%) N3.72 C 66.99 H 8.03
实施例3
1)3-0-羧丙酰基-乌苏酸(3a。
将UA(2.50 g， 5.48 mmol)、 丁二酸酐(2.19 g， 21.9 mmol)、 DMAP (0.668 g， 5.48 mmol)、 无7KCH2Cl2(60ml)依次加入反应瓶中，加热回流反应48小时。反应液水洗3次，有机层 无水Na2S04干燥；过滤，滤液浓缩，浓縮物柱层析[乙酸乙酯石油醚(60~90°C) =1: 4(V: V)]得产品1.696 g，产率53%。 2) 3-0-{4-[2-(2-硝氧基-乙氧羰基)-乙烯萄-苯氧}-琥珀酰基-乌苏酸(I仏)
将3ai (556mg， lmmol), 4-羟基苯丙烯酸-2-溴乙酯 (260mg, lmmol), DCC (206mg，lmmo1)，以及催化量的DMAP分别加入反应瓶，无水CH2C1210ml，室温搅拌反应， 过滤，滤液减压浓縮，柱层析[乙酸乙酯石油醚(60~90°C) =1: 4 (V: V)]得产品598mg， 收率75%。
将上述产品(56.6 mg, 0.071 mmol)、硝酸银(18mg， 0.11 mmol)、乙腈(5 ml)依次 加入反应瓶中，避光搅拌回流反应过夜，有溴化银黄色沉淀生成。反应结束后，过滤，滤 液浓縮，柱层析[乙酸乙酯石油醚(60~9(TC) =1: 4 (V: V)]分离得产品34.3mg,收率 61%, mp: U0 112。C。 ESI-MS : 814 [M+Na]+ ;
IR (KBr， cm-1) : 3235 (COOH), 1765(C=0)， 1725 (C=0)， 1637 (0N02);
!H-NMR (300MHz , CDC13), S (ppm) : 0.76 (s， 3H， CH3)， 0.89 (s， 6H， 2XCH3), 0.91 (s, 3H， CH3), 0.93 (s, 3H， CH3), 0.98 (s, 3H， CH3)， 1.14 (s， 3H, CH3)， 2.76 (t ， 2H, COCH2, J=6Hz), 2.77~2.81 (m， 1H, Q8-H)， 2"0 (t , 2H， COCH2 ， J=6Hz)， 4.50 (t , OCH2 ， J=6Hz)， 4.51~4.52(m， 1H, 3 a -H), 4.75 (t ， 2H， OCH2, J=6Hz)， 5.29 (brs,lH， C12-H)， 6.40 (d， 1H， =CH, J=16Hz)， 7.15 (d， 2H， ArH, J=8.7Hz)， 7.55 (d， 2H, ArH， J=8.7Hz), 7.70 (d， 1H， =CH， J=16Hz); Anal. C45H6iNOu . H20Found : (%) N 1.29 C 66.31 H7.79
Calcd:(%) N 1.73 C 66.75 H7.79
实施例4
3-0-[4-(3-苯磺酰基-2-氧-呋咱-4-氧)-丁氧]-琥珀酰基-乌苏酸(IV!)
由3^和4- (3-苯磺酰基-l， 2， 5-噁二唑-2-氧化物-4-)氧丁醇反应制得，收率41.5%， mp: 154~ 156°C。 ESI-MS : 875 [M+Na]+;
IR (KBr, cm") :3326 (OH)， 1731 (OO), 1168,1311 (S02);
'H-NMR (300MHz , CDC13), S (ppm) : 0.75 (s, 3H, CH3), 0.85 (s, 6H， 2xCH3), 0.87 (s, 3H，CH3), 0.92 (s， 6H， 2xCH3)， 1.12 (s， 3H， CH3), 2.64 (s, 4H， CO(CH2)2), 2.80~2.87 (m, 1H, C18-H)， 4.18 (t, 2H, OCH2 ， J=6Hz)， 4.45 (t, 2H, OCH2 ， J=6Hz)， 4.49~4.54 (m, 1H, 3 a -H)， 5.27 (brs， 1H, C12-H), 7.60~7.65 (m， 2H， ArH)， 7.74~7.79 (m， 1H, ArH)， 8.04~8.07 (m， 2H, ArH); Anal. C46H64N2OuS Found : (%) N3.17 C 64.63 H7.90
Calcd : (%) N 3.35 C 64.77 H 7.56
实施例5
通式I -IV化合物的部分药理实验如下。
1 IV类目标化合物，以上化合物均溶于DMSO，浓度为0.01M。以UA作为阳性对照药。
细胞系HepG2 cells (人肝癌细胞) 2.实验方法
(1) 取处于指数生长期状态良好的细胞一瓶，加入0.25%胰蛋白酶消化液，消化使贴壁细胞 脱落，计数2Xl(^ 4X10"个/ml，制成细胞悬液。■
(2) 取细胞悬液接种于96孔板上，100nl/孔，置恒温C02培养箱中培养24小时。
(3) 加入受试药物，100pl/孔，培养48小时。
(4) 将MTT加入96孔板中，20—孔，培养箱中孵育4小时。
(5) 吸去上清液，加入DMSO， 100^1/孔，平板床上振摇5分钟。
(6) 用酶联免疫检测仪在波长为570nm处测定每孔的吸光值，并计算细胞抑制率。
阴性对照组OD值-化合物组OD值
细胞抑制率％= - X100%
阴性对照组OD值3.实验结果
抑制率(%)-IC50 (mol/L)No.终浓度 (mol/L)1X IO一41 x 10—5IXI(厂6 IXI(T7Ii*96.5991.727.883.903.1X10-6
I2*97.0843.6315.90.367.1 X10"6
I3*96.3978.842.331.746.2 X10"6
14*96.1983.902.230.167.7X1(T6
I584.191.611.451.28l.OXl(T4
I6*99.4349.557.814.883.4 X10"6
I727.877.605.171.741.5X10-3
n225,1412.555.674.887.7X10墨3
n319.097.695.823.515.5X10-2
i"10.121.821.450.006.3X1(T4
IIfi89.872.271.930.064.1X10-5
n791.994.574.092.033.2X1(T5
n868.104.410.540.25UX10"4
m230.722.411.360.921.8X10-3
iv218.014.632.361.571.3X10-2
UA52.727.545.324.574.1X1(T4
注标*的为活性化合物
权利要求
1.通式I化合物其中，R1代表H，CF3CO；R2代表H或CH3；R3代表H或CH3；R4代表不同碳链长度的脂肪烃基或芳香烃基。
2.通式II化合物<formula>formula see original document page 2</formula>其中，R!代表H， CF3CO; R2代表H， CH3; R3代表H， CH3; R4代表不同碳链长度的脂 肪烃基或芳香烃基；Rs代表Ph,S02Ph; X代表O， NH。
3.通式III化合物<formula>formula see original document page 2</formula>其中，R！代表H， C2H5, CH2Ph; R2代表H， CH3; R3代表H, CH3; R4代表-(CH2)2-, -CH-CH-:-Ph-(O); R5代表不同碳链长度的脂肪烃基或芳香烃基。
4.通式IV化合物其中，R!代表H,C2H5，CH2Ph; R2代表H， CH3; R3代表H， CH3; R4代表-(012)2-， -CH=CH-，-Ph-(O》R5代表不同碳链长度的脂肪烃基或芳香烃基，R6代表Ph，S02Ph。
5.权利要求1的通式I化合物的制备方法，其特征在于OA(UA)与相应的BrR4Br反应 生成酯la;或者OA (UA)与三氟乙酸酐反应制得混合酸酐，再与HOILtBr反应，生成酯 lb， la或lb再与硝酸银反应得目的物:其中一些在碳酸氢钠(钾)存在下脱三氟乙酰基得 其它I类化合物。la或lb其中，Ri代表H， CF3CO: R2代表H， CH3; R3代表H， CH3; R4代表碳链长度的脂肪烃基或芳香烃基。具体反应步骤为OA or UA +BrR4Br_>1a A9N03 |或1) (CF3CO)20 AgN03 OAorUA - ^ 1b ~^~~2) HOR4Br
6.权利要求2的通式II化合物的制备方法，其特征在于OA(UA)与三氟乙酸野反应生成 混合酸酐，再与含羟基或氨基的呋咱氮氧化物2a反应制得部分II类化合物；其中一些在碳 酸氢钠(钾)存在下脱三氟乙酰基得其它II类化合物。<formula>formula see original document page 4</formula>其中，R4代表碳链长度的脂肪烃基或芳香烃基；Rs代表Ph，S02Ph; X代表O， NH。 具体反应步骤为1) (CF3CO)20 OA or UA 3~||2) 2a3) NaHC。3
7.权利要求3的通式III化合物的制备方法，其特征在于OA(UA)与相应的溴代烷(R!Br) 反应成酯，再与丁二酸酐或邻苯二甲酸酐在4-二甲氨基吡啶(DMAP)催化卞得3a， 3a与 阿魏酸或对羟基桂皮酸的酯类衍生物在二环己基碳二.亚胺(DCC)及DMAP催化下縮合， 最后与硝酸银进行取代反应。<formula>formula see original document page 4</formula>其中，Ri代表H， C2H5, CH2Ph; R2代表H， CH3; R3代表H， CH3; R4代表-(012)2-, -CH=CH-， -Ph隱(o)。具体反应步骤为<formula>formula see original document page 4</formula>
8.权利要求4的通式IV化合物的制备方法，其特征在于3a与含羟基或氨基的呋咱氮氧化物2a在DCC及DMAP催化下縮合。(3a， 2a的结构同上)。具体反应步骤为<formula>formula see original document page 4</formula>
9.权利要求1~8中通式I IV化合物用于制备抗肝肿瘤的药物。
全文摘要
本发明涉及不同类型的NO供体通过连接基团，以酯键或酰胺键分别与肝病治疗药物齐墩果酸(OA)或乌苏酸(UA)相偶联而成的一氧化氮供体型OA或UA衍生物；生物活性研究表明，部分化合物具有杀伤肝肿瘤细胞的作用，具有治疗肝癌的应用前景。
文档编号C07J63/00GK101633684SQ20081005389
公开日2010年1月27日 申请日期2008年7月21日 优先权日2008年7月21日
发明者王志凤 申请人:王志凤