专利名称：作为抗癌化合物的取代三环葵烷化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一 系列作为抗癌化合物的取代三环葵烷化合物，及其药学上可接受的盐、酯或前药，新化合物与药学上可接受的栽体的组合物，和新化合物的应用。本发明化合物可以相应的抑制恶性肺瘤生长，通过静脉、口服、皮下、动脉内给药或局部给药的方式给予恶性胂瘤患者进行治疗，具有较高的靶向性、稳定性和较低的毒性。
背景技术：
癌症已经成为威胁人类生命健康的最严重的疾病。由于老龄化人群始终在增加，预计癌症的发病率会持续增长。目前治疗癌症使用的方法有手术、放疗和化疗。治疗方式的选择取决于癌症的类型、位置和散布情况。化疗是手术和放疗的重要的辅助有段，对于不能手术和放疗的癌症只能借助于化疗。
随着对肿瘤细胞的基础生物学研究的发展。目前鉴定了涉及瘤性转化的细胞性活动和改变的细胞生长并且已经记录了几种人体肺瘤的癌发生中的多个步骤。已经鉴定了导致无法调节的细胞生长的癌基因并且将其表征为遗传来源和功能并且详细表征了调节细胞复制周期的特异性途径并且已经克隆和表征了这种调节中涉及的蛋白质。此外，已经详细阐明了介
导细胞凋亡反向调节细胞生长的分子(Kerr等，Cancer 1994， 73: 2013。目前已经证实操纵这些细胞调节途径能够终止肿瘤细胞中生长并且诱导其中的细胞凋亡(Cohen, and Tohoku， Exp . Med .，1992， 168 : 351;Fujiwara等，J. Natl. Cancer Inst. ， 1994， 86: 458 )。控制肺瘤细胞中的细胞生长和复制是重要的治疗靶标。
研究表明三环(5. 2. 1. 02'6)葵烷-8-烯-3， 5-二酮化合物对肿瘤细胞生长调节中涉及的蛋白质具有亲和性，具有治疗性和预防性作用，此类化合物能有效治疗以异常细胞增值为特征的以下哺乳动物疾病例如肿瘤、息肉、子宫内膜异位症、白血病、自身免疫性疾病、癌症等。Walter报道了 10-氧杂-4-氮杂-三环(5. 2. 1. 02'6)葵烷-8-烯-3， 5-二酮具有较好的抗肿瘤活性(Walter, W, G. J. Pharm. ScL 1989， 78: 66.)。另外有报道4-氮杂4- ( 2-甲基-2-亚硝基丙硫醇)-三环(5. 2. 1. 0")葵烷-8-烯-3，5-二酮具有治疗Raynaud's综合症、炎症、胃肠道病症和中枢神经紊乱等病症(US7， 238，814)。
本发明在大量实验的基础上，合成了未见报道的N， 1， 7， 8， 9， 10,10-不同取代的三环(5. 2. 1.02'6)葵烷-8-烯-3, 5-二酮系列化合物，研究表明此类化合物具有较强的抗肿瘤活性，某些化合物已经证明对一些类型的胂瘤具有显著的治疗作用。
按照本发明，这类新结构是具有强烈和持久效力的抑制肿瘤生长得的作用，同时降低了其副作用。
发明内容
本发明涉及取代的三环(5. 2. 1. 02'6)葵烷-8-烯-3， 5-二酮化合物(I)及其药学上可接受的盐或前药，新化合物与药学上可接受的载体的组合物，和新化合物的应用。本发明化合物具有以下通式。
其中，W为具有1-IO个碳原子的直链的或带支链的烷基、烷M或者芳香杂环取代基团，R2为卤素(氟、氯、溴、碘)或具有1-10个碳原子的直链的或带支链的烷基取代基团，113为氢原子或具有1-20个碳原子，可以具有1或2个双键或三键的直链的或带支链的脂肪族或芳香
5族基团。
本文所述的术语"烷基"被定义为包括饱和的一价烃链基团，具有直
链、支链或环状的部分或其组合，非环状烷基含有1-20个碳原子，优选l-6个碳原子，环烷基含有3-8个碳原子，也包括这样的烷基部分，可选的地被1至5个取代基取代，取代基独立地选自由卣素、羟基、巯基、氨基、硝基、氰基、氰硫基、酰基衍生物、磺酰基衍生物、亚磺酰基衍生物、烷基氨基、羧基、酯、醚、酰氨基、叠氮基、磺酸，氨磺酰基、硫代衍生物、氧基酯、氧基酰^J^、杂环、乙烯基、d—5烷氧基、Cw。芳氧基组成的基团。
优选的烷基是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基和2， 2-二甲基丙基，各自可选地被至少一个取代基取代，取代基选自由卤素、羟基、巯基、氨基、硝基和氰基组成的基团。例如三氟甲基、三氯曱基、2，2，2-三氯乙基、l，l-二甲基-2，2-二溴乙基、l，l-二甲基-2,2，2-三氯乙基。
此处提到的烷氧基，为含有1-6个(优选地含有l-4个)碳原子，烃链为支链或直链。优选的烷氧基包括甲氧基，乙氧基，正丙氧基，异丙氧基，正丁氧基，仲丁氧基和叔丁氧基。
此处提到的含有2 - 7个碳原子的链烯基，为直链的或带支链的，例如乙烯基，或是直链的或带支链的丙烯基，丁烯基，戊烯基，己烯基或庚烯基。双键可以在链烯基的任何位置。
此处提到的含有2 - 7个碳原子的的炔基，为直链的或带支链的，例如乙炔基，丙炔基，或直链的或带支链的丁炔基，戊炔基，己炔基或庚炔基。三键可以在炔基的任何位置。
本文所用的术语"环烷基"表示来源于饱和环状或多环烃的一价3-20碳基团，它可以可选地被任意适合的基团取代，包括不限于一个或多个选自烷基或如上关于烷基所述其它基团的部分。非限制性实例有环丙基、环丁基、环戊基、环戊基、环戊烯基、环戊基基、环庚基、环辛基等。
本文所用的术语"芳香族基团，，被定义为包括从由1-3个环组成并且
6含有6-30个碳原子的芳族烃基，例如苯基和萘基，各自可选地被多个取代基取代，取代基独立地选自囟素、羟基、巯基、氨基、硝基、M、氰硫基、酰基衍生物、磺酰基衍生物、亚磺酰基衍生物、烷基氨基、氣基、酯、醚、酰氨基、叠氮基、磺酸，氨磺酰基、疏代衍生物、氧基酯、氧基酰氨基、杂环、乙烯基、Cw烷氧基、Cw。芳氧基、C^。烷基、d—i。烯基、Cw。炔基、d—u)卣代烷基，其条件是2个或更多取代基可以构成一个附着与芳环的环。
"杂环"、"杂环基，，或"杂环烷基"、"杂环基"，指具有一个环或多个稠合环、环中具有1-10个碳原子和l-4个选自氮、硫或氧的杂原子的饱和或不饱和基团，在稠合环系统中，假如连接点在杂环上，一个或多个环可以是环烷基、芳基或杂芳基。"取代的杂环，，、"取代的杂环烷基"或"取代的杂环基"指用与取代的环烷基中定义的相同的l-3个单、双或三取代基取代的杂环基。
杂环基和杂芳基的例子包括但不限于氮杂环丁烷、吡咯、咪唑、吡啶、吡唑、嘧啶、吡唤、歧漆、中氮丐l、异巧1咮、叼1哚、二氢吲咮、吲唑、嘌呤、会嚷、异喹漆、哇淋、酞嚷、萘基吡啶、喹喔啉、喹唑啉、蝶啶、吵唑、咕啉、菲啶、菲咯啉、异噻唑、汾嗓、异噁唑、吩噻"秦、吩噁溱、咪唑烷、咪唑啉、哌啶、哌、秦、二氢吲咮、邻苯二甲酰亚胺、1,2， 3， 4 -四氢异喹啉、4，5，6，7-四氢苯并[b]噻吩、噻唑、噻唑烷、噻吩、苯并[b]瘗吩、吗啉基、硫代吗啉基(也称为疏吗琳基)、哌啶基、吡咯烷、四氢呋喃基等。
本发明中式(I)代表的化合物药学上可接受的盐类化合物可以为氟化物、氯化物、溴化物、碘化物、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、马来酸盐、富马酸盐、枸橼酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、扁桃酸盐、曱磺酸盐或对曱苯磺酸盐。
本发明中式(I)代表的化合物药学上可接受的酯类化合物，指可在体内水解的酯，包括在人体内降解释放出母体化合物或其盐的酯，合适的酯基团包括例如衍生自药学上可接受的脂族羧酸或脂族族醇，尤其是链烷酸(醇)、链烯酸(醇)、环烷酸(醇)和链烷二羧酸(二醇)的酯，其中优选的各烷基或烯基部分少于6个碳原子。
本文所述化合物对肿瘤细胞声长调节中涉及的蛋白质具有亲和性，具有治疗性和预防性作用，此类化合物能有效治疗以异常细胞增值为特征的
以下哺乳动物疾病例如肿瘤、息肉、子宫内膜异位症、白血病、自身免疫性疾病、癌症等。适合用本发明化合物进行治疗的具体疾病优选的治疗各种恶性肿瘤，药物所作用的肿瘤性疾病为广谱哺乳动物(包括人)身体引发的恶性肿瘤和癌症，其中优选的作用于人类肺癌、人类非小细胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌和黑瘤，尤其是固体肺瘤(例如，肺、卵巢癌、乳腺、胃肠、结肠、胰腺、膀胱、肾、前列腺、脑)以及各种造血系统癌(例如，Hodgkin氏疾病、非Hodgkin氏'淋巴癌、白血症)。其中所述的肿瘤性疾病选自白血病(包括急性白血病、急性淋巴白血病、急性髓细胞性白血病、成髓细胞白血病、前髓细胞性白血病、粒-单核细胞型白血病、单核细胞性白血病、红白血病、慢性白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴白血病)、真性红细胞增多、淋巴瘤、何杰金病、非何杰金病、多发性骨髓瘤、特发性巨球蛋白血症、实体瘤、肉瘤和癌、纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肉瘤、软骨肉瘤、骨源性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤因瘤、平滑肌肉瘤、横紋肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头腺癌、嚢腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、维尔姆斯肿瘤、子宫颈癌、子宫癌、睾丸肿瘤、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、硬脑膜肉瘤、黑素瘤、神经母细胞瘤和视网膜神经细胞瘤等。
本发明化合物的治疗方法包括将化合物以药学上可接受的制剂形式给予患者，其剂量足以有效抑制所述异常细胞增值。因此，本发明提供治疗患者的各种癌症的的方法，所述方法包括给予癌症患者lng/kg至500 ng/kg、更优选1 ^g/kg至约100 ^g/kg的抗增值化合物，其中癌症的进一步增值被抑制，优选肿瘤对治疗表现出部分反应或完全反应。本发明的化合物也可用作常规癌症治疗的辅助药，以治疗细胞凋亡抗 性肿瘤，并可用于治疗其它疾病，以克服抗药性。本发明的化合物可以与 至少一种常规癌症治疗同时或序贯给予。常规癌症治疗可以是放射治疗、 化学治疗和/或生物治疗。优选的化学治疗包括抗代谢药、烷化剂、植 物碱和杭生素。优选的为阿西维辛、阿柔比星、盐酸阿考达唑、阿克罗
宁、阿多来新、多柔比星、阿地白介素、阿利维A酸、别嘌醇钠、六甲 蜜胺、安波霉素、醋酸阿美蒽醌、氨鲁米特、安吖啶、阿那曲唑、氨茴霉 素、门冬酰胺酶、曲林菌素、阿扎胞苷、阿扎替派、阿佐霉素、巴马司他、 苯佐替派、贝沙罗汀、比卡鲁胺、盐酸比生群、二曱磺酸双奈法德、硫酸 博来霉素、布喹那钠、溴匹立明、白消安、卡麦角林、卡普睾酮、卡醋 胺、盐酸卡柔比星、塞来考昔、苯丁酸氮芥、西罗霉素、甲磺酸克立那托、 环磷酸胺、阿糖胞苷、达卡巴奉、盐酸柔红霉素、地西他滨、地扎胍宁、 地吖醌、多西他赛、屈洛昔芬、丙酸甲雄烷酮、达佐霉素、依达曲沙、盐 酸依氟鸟氨酸、依沙,星、巴普氨酯、依匹哌啶、盐酸表柔比星、厄布洛 唑、盐酸依索比星、雌莫司汀、雌二醇氮芥磷酸钠、依他硝唑、乙碘油 I131、依托泊苷、氯苯乙嘧胺、盐酸法罗唑啉、法扎拉滨、芬维A胺、氟 尿嘧啶脱氧核苷、磷酸氟达拉滨、氟尿嘧啶、氟西他滨、磷喹酮、福司曲 星钠、吉西他滨、醋酸戈舍瑞林、盐酸伊达比星、异环磷酸胺、伊莫福新、 盐酸依立替康、醋酸兰瑞肽、来曲唑、醋酸亮丙瑞林、盐酸利阿唑、洛美 曲索钠、洛莫司汀、盐酸洛索蒽醌、马索罗酚、美登素、盐酸氮芥、醋酸 甲地孕酮、醋酸美仑孕酮、美法仑、美诺立尔、巯噪呤、曱氨蝶呤、曱氧 沙林、氯苯氨啶、美妥替派、米丁度胺、米托洁林、米托马星、丝裂霉素、 米托司培、米托坦、盐酸米托蒽醒、麦考酚酸、诺考达唑、诺拉霉素、奥 昔舒仑、紫衫醇、帕米麟酸二钠、培门冬酶、培利霉素、溴新斯的明、硫 酸培来霉素、培磷酰胺、派泊溴烷、派泊舒凡等。
本发明的任一项化合物可以作为与由铂、钛、钒、铌、铝、铼或锡 的含有金属的抗肿瘤药物的组合物，优选的含有金属的抗肿瘤药物为顺 铀、卡柏、奥沙利粕、teraplatin 、 Platiniuln-DACH 、奥马賴、二氯 环戊二烯钬、二氯环戊二烯钒、二氯环戊二烯铌、二氯环戊二烯铝、二氯环戊二烯铼、二卣代二有机锡或其它含有金属的抗肿瘤药物。
作为其他肿瘤治疗手段的辅助治疗方案，优选的放射治疗包括光动 力学治疗、放射性核苷酸和放射免疫治疗。优选的生物治疗包括免疫治疗、 分化剂和靶向癌细胞生物学的药物。以上概述给出了相当广泛的本发明的 某些特征，以便理解其后的发明详述，也便于更好地了解本发明的所属领 域。根据以下发明详述，本发明的其它目的和特征将会是显而易见的。然 而，可以理解，实施例仅仅是为了说明的目的，并不作为本发明的限制性 定义，只有所附权利要求书才对本发明进行限定。
根据临床需要可制成不同给药方式和剂型，药物制剂的给药方式为 全身给药或局部给药，剂型包括静脉、口服、皮下、动脉内给药或局部 给药的方式对患者进行治疗。
本发明的上述目的可以通过下列合成路线来实现 通过1， 2， 3， 4， 5-取代的环戊二烯和N-取代的马来酸酐反应得到目 标化合物。
具体的合成路线如下图所示:
(l)
具体实施例方式
下面用实施例具体说明本发明，这些实施例不应理解为任何意义上 的对本发明的限制。
实施例1 10， lO-二甲氧基-1， 7， 8， 9-四氯-4-氮杂-N-乙基-三 环(5. 2. 1. 02'6)葵烷-8-烯-3， 5-二酮(1)的合成
将2. 6g(10mmo1) 3， 3-二曱氧基-1， 2， 3， 4-四氯环戊二烯溶于 于80mL乙醚中，加入N-乙基马来酰胺1.5g(12mmo1),回流搅拌反应5 个小时，蒸处溶剂，柱层析得到白色固体(l) , 3. lg,收率81%。熔点124-126匸。元素分析C13H13N04C14:理论值％: C40. 13, H 3. 37， N 3. 60; 实验值％: C復22， H3.46, N 3. 63。 NMR: S(ppm， CD3C1) ， 3. 65 (s， 3H)， 3. 61(s， 2H)， 3. 59(s， 3H) ， 3.49(m， 2H) ， 1.09(m， 3H)。
实施例2 10， 10-二曱氧基-l， 7, 8, 9-四溴-4-氮杂-N-乙基-三环(5. 2. 1. 02'6)葵烷-8-烯-3， 5-二酮(2 )的合成
合成方法同实施例l，由3， 3-二甲氧基-l， 2， 3, 4-四溴环戊二 烯和N-乙基马来酰胺反应。得淡黄色固体(2)，收率73%,熔点105-109 X:。元素分析d化3N04Br4，理论值％: C 47.73, H 4.01， N 4.28;实 验值％: C 47. 79 H 4. 06, N 4. 36。力-隨:S(ppm， CD3C1), 3.67(s, 3H), 3.62(s， 2H)， 3. 58(s， 3H) ， 3.46 (m， 2H) ， 1.07(m， 3H)。
实施例3 10， 10-二甲氧基-1， 7， 8， 9-四甲基-4-氮杂-N-乙基-三环(5. 2, 1. 02'6)葵烷-8-烯-3， 5-二酮(3 )的合成
合成方法同实施例l，由3， 3-二甲氧基-1, 2， 3， 4-四甲基环戊 二烯和N-乙基马来酰胺反应。得白色固体(3)，收率78%，熔点lM-l39 ■C。元素分析(:17}125冊4，理论值％: C 66.43， H 8. 20, N 4. 56;实验值 %: C 66.49 H 8.26， N 4. 66。
NMR: S(ppm， CD3C1) ，3. 67 (s， 3H)， 3. 62(s， 2H)， 3. 58(s， 3H), 3. 46 (m， 2H) ， 2. 34 (m， 6H) ， 1. 34 (m， 6H)， 1.07(m， 3H)。
实施例4 10， 10-二曱氧基-1, 7， 8， 9-四氯-4-氮杂-N-苯基-三环(5. 2. 1. 02'6)葵烷-8-烯-3， 5-二酮(4 )的合成
合成方法同实施例l，由3， 3-二曱氧基-1， 2， 3， 4-四氯环戊二 烯和N-苯基马来酰胺反应。得淡黄色固体(O,收率77%,熔点l25-127 X:。元素分析d7H!3NOXl4，理论值％: C 46.71， H 3.00， N 3.20;实 验值°/。 C 46. 75 H 3. 06， N 3. 26。 ^-NMR: S(ppm， CD3C1) ， 7. 45 (m， 3H)， 7.13(m， 2H)， 3.80(s， 2H) ， 3. 65 (s， 3H) ， 3. 61 (s， 3H)。
实施例5 10， lO-二甲氧基-1, 7， 8， 9-四溴-4-氮杂-N-苯基-三环(5. 2. 1. 02'6)葵烷-8-烯-3， 5-二酮(5 )的合成
合成方法同实施例l，由3， 3-二曱氧基-1， 2， 3， 4-四溴环戊二 烯和N-苯基马来酰胺反应。得黄色固体(5)，收率68%，熔点106-109
ii*C。元素分析C"Hu歸r4，理论值%: C 54.42， H 3.49， N 3.73;实 验值％: C 54. 49 H3. 46， N 3. 76。H-NMR: S(ppm， CD3C1) ， 7. 48 (m, 3H)， 7. 15(m， 2H)， 3. 83(s， 2H) ， 3. 68(s， 3H) ， 3. 63(s， 3H)。
实施例6 10, lO-二曱氧基-1, 7， 8, 9-甲基-4-氮杂-N-苯基-三环(5. 2. 1. 02'6)葵烷-8-烯-3， 5-二酮(6 )的合成
合成方法同实施例l，由13, 3-二甲氧基-1, 2， 3， 4-四曱基环戊 二烯和N-苯基马来酰胺反应。得黄色固体(6)，收率78%，熔点134-136 C。元素分析CnH25N04，理论值％: C 70.96, H 7.09, N 3.94;实验值 0/。C 70.90 H7. 06， N 3.96。'H-NMR:S(ppm， CD3C1)， 7.46 (m， 3H) ， 7.13(m， 2H)， 3. 82(s， 2H)， 3, 64(s, 3H) ， 3. 60(s， 3H) ， 2. 34 (m， 6H) ， 1.34(m， 6H)。
实施例7 10， lO-二甲氧基-1， 7, 8， 9-四氯-4-氮杂-N-千基-三 环(5. 2. 1. 02'6)葵烷-8-烯-3， 5-二酮(7 )的合成
合成方法同实施例l，由3， 3-二甲氧基-1， 2, 3, 4-四氯环戊二 烯和N-节基马来酰胺反应。得淡黄色固体(7)，收率72%，熔点113-116 匸。元素分析C]8H15N04C14，理论值％: C 47.92， H 3.35, N 3.10;实 验值％: C 47. 95 H 3. 26, N 3. 16。 'H-NMR: S(ppm， CD3C1) ， 7. 37(m， 2H)， 7.26(m， 3H)， 455 (s， 2H), 3.62(s， 6H) ， 3. 55(s， 3H)。
实施例8 10， 10-二甲氧基-1， 7, 8， 9-四氯-4-氮杂-N-(2-氯苯 基)-三环(5. 2. 1. 02'6)葵烷-8-烯-3， 5-二酮(8 )的合成
合成方法同实施例l，由3， 3-二甲氧基-1， 2， 3, 4-四氯环戊二 烯和N-(2-氯苯基)马来酰胺反应。得淡黄色固体(8),收率72%,熔 点122-125"C。元素分析C17H12N04C1"理论值%: C 43. 30， H 2. 56, N 2. 97; 实验值°/。C 43. 35 H 2.51， N 2.90。 5(ppm,CD3Cl)， 7.45 (m， 1H) ， 7.22(m， 2H), 7.15(m， 1H)，3. 81(s， 2H) ， 3.64(s， 3H) ， 3.61(s， 3H)。
实施例9 10, 10-二甲氧基-l， 7， 8， 9-四氯-4-氮杂-N-(2-氟苯 基)-三环(5. 2. 1. 02'6)葵烷-8-烯-3, 5-二酮(9 )的合成
合成方法同实施例l，由3， 3-二甲氧基-1， 2, 3, 4-四氯环戊二 烯和N-(2-氟苯基)马来酰胺反应。得淡黄色固体(9)，收率72%，熔
12点118-1221C。元素分析CnHnN(U:i4F，理论值%: C 44. 87， H2. 66， N 3.08;实验值%: C 44.80 H 2.59, N 2.99。 S(ppm, CD3C1), 7.44(m， 1H), 7,20(m， 2H)， 7.13(m， 1H)， 3.80(s， 2H)， 3.63(s， 3H) ， 3. 60(s， 3H)。
实施例IO 10, lO-二曱氧基-1， 7， 8， 9-四氯-4-氮杂-N-(4-甲苯 基)-三环(5. 2.1. 02'6)葵烷-8-烯-3， 5-二酮(10)的合成
合成方法同实施例l，由3， 3-二甲氧基-l， 2, 3， 4-四氯环戊二 烯和N-(4-曱苯基)马来酰胺反应。得淡黄色固体(IO),收率72%,熔 点101-104TC。元素分析C18H15N04C14，理论值%: C 47. 92， H 3. 35, N 3. 10; 实验值°/。C 44. 80 H 3.39， N 3.02。 S(ppm，CD3Cl)， 7.42 (m， 3H) ， 7. ll(m， 2H)， 3. 82(s， 2H)， 3.64(s， 3H) ， 3. 61(s， 3H) ， 2. 35(s， 3H)。
实施例ll细胞毒性药理实验
用SRB法测定目标化合物对3种人癌细胞的增殖抑制作用。取对数生 长期的人胃癌SGC-7901细胞、人宫颈癌HeLa细胞、人早幼粒性白血病 HL-6Q细胞、人肝癌细胞Bet-74Q2和人口腔上皮癌细胞KB等5种人癌细胞 以4xl04个/mL细胞接种于96孔板内。在37 X:、体积分数5 %的0)2饱 和湿度培养箱中培养12 h ，加入待测化合物处理48 h后，浮游细胞HL-60 需每孔加入50pL 4 C预冷的体积分数80 °/。的三氯醋酸，使其最终达到体 积分数为16 。/。；贴壁细胞则需每孔加入50jiL 4"C预冷的体积分数为50 % 三氯醋酸，使其最终达到体积分数为IO %。 4'C水箱固定细胞1 h后，每孔 加入50pL体积分数为O. 4 。/。的磺酰罗丹明B ，室温染色30min。最后每孔 加入150pL 10腿ol . 1/的Tris碱，在微量振荡器上振荡15 min ，直至染 料全部溶解。利用酶标仪在540 nm处测每孔溶液的吸光度值(A值)、 空白孔吸光度值。按以下公式计算目标化合物对肿瘤细胞体外增殖的抑制 率(inhibition rate ， IR):
<formula>formula see original document page 13</formula>
用ICPl. 0. 0软件计算药物的半数抑制浓度(IC5。)。并与阳性对照药罗 菲昔布和5-氟尿嘧啶比较。结果显示化合物2(23. 1)， 3(35.2)， 5(21.0)， 7(35. 4)对人胃癌SGC-7901细胞和人宫颈癌HeLa细胞的I"值低于低于P曰性对照药(59.6);化合物1(13.1)， 6(18.1), 8(25.1)， 9(28.1)， 10(29.1)对人早幼粒性白血病HL-60细胞的IC^值低于阳性对照药 (53.1)。所测试化合物对人早幼粒性白血病HL-60细胞、人肝癌细胞 Bet-7402和人口腔上皮癌细胞KB均有较强的抑制活性。
实施例12样品体外培养抗胖瘤作用实验
采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定所发明化合物对肿瘤细胞生长的 抑制效应。方法将含体积分数为10。/。新生小牛血清的RPMI-1640培养液 配制的小鼠肉瘤腹7jc抹(S一 、小鼠艾氏腹水瘤株(EAC)和小鼠肝癌腹水 抹(HeAP) 3种胂瘤细胞悬液分别接种于96孔培养板，每孔180j^L (接种 浓度为5 xi05/mL),同时加入受试化合物使每孔浓度分别为250、 50 、 10 、 2、 0.4ng/ mL共5个浓度，每个浓度均做3个复孔。将培养板置 于体积分数为5%0)2 、恒温37 X:、 100 %相对湿度的培养箱内培养，72 h 后每孔分别加入50yL MTT (1 mg/mL),继续培养4 h弃去上清液，每孔 加入150 mL二曱基亚砜(DMSO)，震荡溶解后采用3550型酶标仪在波长 595 mn处测吸光度(^)值，计算细胞存活率p细胞存活/ % ="实验组/^照组x 100%,将细胞存活率与化合物浓度的对数进行回归统计处理，计算半数 抑制浓度(p^。)，并与阳性对照药顺铂比较。结果显示化合物2~8对 3种肿瘤细胞林均显示出较强的抑制作用，作用均显著性高于阳性对照 药顺钿(P < 0. 01)。
权利要求
1. 式(I)为一种可用于治疗肿瘤的取代的三环(5.2.1.02，6)葵烷-8-烯-3，5-二酮化合物及其药学上可接受的盐或前药，及其与药学上可接受的载体的组合物其中，R1为具有1-10个碳原子的直链的或带支链的烷基、烷氧基或者芳香族取代基团，R2为卤素(氟、氯、溴、碘)或具有1-10个碳原子的直链的或带支链的烷基取代基团，R3为氢原子或具有1-20个碳原子，可以具有1或2个双键或三键的直链的或带支链的脂肪族或芳香族基团。
2. 前述权利要求的药物，可以是药学可接受的盐类化合物为氟化物、氯化物、溴化物、碘化物、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、马来酸盐、富马酸盐、枸橼酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、扁桃酸盐、曱磺酸盐或对曱苯磺酸盐。
3. 前述权利要求的药物，可以是药学可接受的酯类化合物，指可在体内水解的酯，包括在人体内降解释放出母体化合物或其盐的酯，合适的酯基团包括例如衍生自药学上可接受的脂族羧酸或脂族族醇，尤其是链烷酸(醇)、链烯酸(醇)、环烷酸(醇)和链烷二羧酸(二醇)的酯，其中优选的各烷基或烯基部分少于6个碳原子。
4. 权利要求1至权利要求3中任一项的化合物或药物组合物可以作为与其它抗肿瘤药物的组合物，其中组合用抗肿瘤药物选自小分子有机抗肿瘤分子、生物制剂或由铂、钛、钒、铌、铝、铼或锡的含有金属的抗肿瘤药物，包括凋亡诱导剂、多核苷酸(如核酶)、多肽(如酶)、药物、生物模拟物、生物碱、烷化剂、抗癌抗生素、抗代谢剂、新生血管发生抑制剂等药物，优选的含有金属的抗肿瘤药物为顺铂、卡铂、奥沙利铂、teraplatin 、 Platiniuln-DACH 、奥马賴、二氯环戊二烯钬、二氯环戊二烯钒、二氯环戊二烯铌、二氯环戊二烯铝、二氯环戊二烯铼、二卣代二有机锡或其它含有金属的抗肿瘤药物。
5. 权利要求1至权利要求3中任一项的化合物或药物组合物所作用的肺瘤性疾病为广镨哺乳动物(包括人)身体引发的恶性肺瘤和癌症，其中优选的作用于人类肺癌、人类非小细胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌和黑瘤，尤其是固体肿瘤(例如，肺、卵巢癌、乳腺、胃肠、结肠、胰腺、膀胱、肾、前列腺、脑)以及各种造血系统癌(例如，Hodgkin氏疾病、非Hodgkin氏、淋巴癌、白血症)。
6. 权利要求1至权利要求3中任一项的化合物或药物组合物可以通过静脉、口服、皮下、动脉内给药或局部给药的方式给予患恶性肿瘤的患者。
全文摘要
本发明涉及一系列作为抗癌化合物的取代三环葵烷化合物，及其药学上可接受的盐、酯或前药，新化合物与药学上可接受的载体的组合物，和新化合物的应用。本发明化合物可以相应的抑制恶性肿瘤生长，通过静脉、口服、皮下、动脉内给药或局部给药的方式给予恶性肿瘤患者进行治疗。
文档编号C07D209/00GK101463003SQ20081014741
公开日2009年6月24日 申请日期2008年8月15日 优先权日2008年8月15日
发明者湖 刘 申请人:湖 刘