含有烷基和芳基丙氨酸p2部分的丙型肝炎病毒的大环ns3-丝氨酸蛋白酶抑制剂的制作方法

专利名称：：含有烷基和芳基丙氨酸p2部分的丙型肝炎病毒的大环ns3-丝氨酸蛋白酶抑制剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及新的丙型肝炎病毒("HCV")蛋白酶抑制剂，包含一种或多种这样的抑制剂的药用组合物、制备这样的抑制剂的方法和使用这样的抑制剂治疗丙型肝炎和相关疾病的方法。本发明尤其公开了作为HCVNS3/NS4a丝氨酸蛋白酶抑制剂的新的大环化合物。本文公开的内容与2000年4月5日提交的待审专利申请顺序号的内容有关。
背景技术：
：丙型肝炎病毒(HCV)为一种(+)-有义单链RNA病毒，它作为主要病原体涉及非曱非乙型肝炎(NANBH),尤其是与血液相关的NANBH(BB-NANBH)(参见国际专利申请公布号WO89/04669和欧洲专利申请公布号EP381216)。NANBH区别于其它类型的病毒诱发的肝病，例如曱型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丁型肝炎病毒(HDV)、巨细胞病毒(CMV)和埃-巴二氏病毒(EBV),也区别于其它形式的肝病，例如酒精中毒和原发性胆汁性肝硬变。最近，多肽加工和病毒复制所必需的HCV蛋白酶已被鉴定，克隆和表达(参见例如美国专利号5,712,145)。这种约3000个氨基酸的多蛋白含有自氨基末端至羧基末端的核壳蛋白(C)、包膜蛋白(E1和E2)以及几种非结构蛋白(NS1、2、3、4a、5a和5b)。NS3为约68kda的蛋白，由HCV基因组的约1893个核苷酸编码，并且具有2个不同的结构域(a)由约200个N-末端氨基酸组成的丝氨酸蛋白酶结构域；和(b)在蛋白C-末端的RNA依赖性ATP酶结构域。由于蛋白质4序列、整体三维结构和催化机制的相似性，NS3蛋白酶被认为是胰凝乳蛋白酶家族的一个成员。其它类似胰凝乳蛋白酶的酶为弹性蛋白酶、Xa因子、凝血酶、胰蛋白酶、血纤蛋白溶酶、尿激酶、tPA和PSA。HCVNS3丝氨酸蛋白酶担负在NS3/NS4a、NS4a/NS4b、NS4b/NS5a和NS5a/NS5b接点的多肽(多蛋白)的蛋白酶解，因此在病毒复制期间负责生成四种病毒蛋白。HCVNS3丝氨酸蛋白酶已被作为抗病毒化学治疗学的具有吸引力的靶标。已经测定NS4a蛋白(约6kda的多肽)为NS3的丝氨酸蛋白酶活性的辅因子。经NS3/NS4a丝氨酸蛋白酶进行的NS3/NS4a接点的自动切割在分子内(即顺式)发生，同时其它的切割位点在分子间(即反式)进行。HCV蛋白酶的天然切割位点的分析揭示在Pl存在半胱氨酸，在Pl，存在丝氨酸，并且这些残基在NS4a/NS4b、NS4b/NS5a和NS5a/NS5b接点中严格保守。NS3/NS4a接点在Pl包含苏氨酸，在P1'包含丝氨酸。假设NS3/NS4a上的Cys—Thr取代以解释该接点需要顺式而不是反式加工。参见例如Pizzi等(1994)Proc.Natl.Acad.Sci(TJSA)91:888-892，Failla等(1996)Folding&Design1:35-42。NS3/NS4a切割位点也比其它的位点更耐受诱变。参见例如Kollvkhalov等(1994)J.Virol.68:7525-7533。也已发现切割位点的上游区域的酸性残基需要有效的切割。参见例如Komoda等(1994)JLVirol,68:7351-7357。已报道的HCV蛋白酶抑制剂包括抗氧化剂(参见国际专利申请公布号WO98/14181)、某些肽类和肽类似物(参见国际专利申请公布号WO98/17679,Landro等(1997)Biochem.i^:9340-9348，Ingallinella等(1998)Biochem.12:8906-8914,Llin&s-B匿et等(1998)Bioorg.Med.Chem.Lett.&1713-1718)、基于70-氨基酸多肽水蛭蛋白酶抑制剂c的抑制剂(Martm等(1998)Biochem.H:11459-11468，选自人胰分泌型胰蛋白酶抑制剂(hPSTI-C3)和小体所有组成成分(minibodyrepertoires)(MBip)的抑制剂亲和性(Dimasi等(1997)J.Virol,Zi:7461-7469),cVHE2("camelized"变体结构域抗体片段)(Martin等(1997)ProteinE亂!^:607-614)和ocl-抗胰凝乳蛋白酶(ACT)(Elzouki等)(l997)J.Hepat—22:42-28)。设计用来选择性破坏丙型肝炎病毒RNA的核酶最近已被》MK耒见,BmWofldTodav7、:4门998年"月10曰》。也参考1998年4月30日公开的PCT公布号WO98/17679(VertexPh腿aceuyticalsIncorporated)、1998年5月28日公开的WO98/22496(F.Hoffinam-LaRocheAG)和1999年2月18日公开的WO99/07734(BoehringerIngelheimCanadaLtd)。HCV已参与肝硬变且参与诱导肝细胞癌。目前患有HCV感染的患者预后是很差的。由于缺乏与HCV感染有关的免疫或者緩解，HCV感染比起其它形式的肝炎更难以治疗。目前数据表明硬变诊断后四年的生存率小于50%。据诊断患有定位可切除肝细胞癌的患者具有10-30%的五年生存率，而那些患有定位不可切除肝细胞癌的患者具有小于1%的五年生存率。参考A.Marchetti等Synlett,SI,1000-1002(1999)，其描述HCVNS3蛋白酶抑制剂的二环类似物的合成。其中所公开的化合物具有以下结构也参考WO00/09558(受让人BoehringerIngelheimLimited;2000年2月24日公开)，它公开了下式的肽衍生物也参考WO00/09543(受让人BoehringerIngelheimLimited;2000年2月24日公开)，它公开了下式的肽衍生物:R3其中各元素在此定义。该系列的示例性化合物为:丙型肝炎的目前疗法包括干扰素-cc(INFa)以及用利巴韦林和干扰素进行的联合疗法。参见例如，Beremguer等(1998)Proc.Assoc.AmPhvsic画110(2):98-112。这些疗法的持续应答率低且多发生副作用。参见例如，Hoofiiagle等(簡)NEngL.T.Med.336:347。目前，没有疫苗可用于HCV感染。2000年4月5日提交的待审专利申请，顺序号_，公开了某些作为HCV蛋白酶的抑制剂的大环化合物以及含有所述化合物的药用组合物。丙型肝炎病毒感染需要新的治疗和疗法。因此，本发明一个目的是提供用于治疗或者预防或者改善丙型肝炎的一种或多种症状的化合物。在此另一个目的是提供治疗或者预防或者改善丙型肝炎的一种或多种症状的方法。本发明另一个目的是提供使用在此提供的化合物来调节丝氨酸蛋白酶，特别是HCVNS3/NS4a丝氨酸蛋白酶活性的方法。在此另一个目的是提供使用在此提供的化合物来调节HCV多肽的加工的方法。发明概述在本发明的许多实施方案中，提供一类新的大环HCV蛋白酶抑制剂，包含一种或多种所述化合物的药用组合物、制备包含一种或多种这样的化合物的药用制剂的方法、以及治疗、预防或者改善丙型肝炎的一种或多种症状的方法。也I是供调节HCV多肽与HCV蛋白酶相互作用的方法。在此提供的化合物中，优选抑制HCVNS3/NS4a丝氨酸蛋白酶活性的化合物。本发明公开的化合物一般含有大约四个或更多个氛基酸残基以及少于大约十二个氨基酸残基。在本发明的主要实施方案中，本发明提供式I的大环化合物:e、x和y可以独立存在或不存在，如果存在则独立选自以下部分烷基、芳基、烷基-芳基、杂烷基、杂芳基、芳基-杂芳基、烷基-杂芳基、环烷基、烷基醚、烷基-芳基醚、芳基醚、烷基氨基、芳基氨基、烷基-芳基氨基、烷基硫醚、烷基-芳基硫醚、芳基硫醚、烷基砜、烷基-芳基砜、芳基砜、烷基-烷基亚石风、烷基-芳基亚砜、烷基酰胺、烷基-芳基酰胺、芳基酰胺、烷基磺酰胺、烷基-芳基磺酰胺、芳基磺酰胺、烷基脲、烷基-芳基脲、芳基脲、M曱酸烷基酯、jl^曱酸烷基-芳基酯、氨基曱酸芳基酯、烷基酰肼、烷基-芳基酰肼、烷基羟酰胺、烷基-芳基羟酰胺、烷基磺酰基、芳基磺酰基、杂烷基磺酰基、杂芳基磺酰基、烷基羰基、芳基羰基、杂烷基纟炎基、杂芳基羰基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、杂芳氧基羰基、烷基氨基羰基、芳基氨基羰基、杂芳基氨基羰基或它们的组合，条件是e、x和y又可以任选由下述部分取代芳族、烷基、烷基-芳基、杂烷基、芳基-杂芳基、烷基-杂芳基、环烷基、烷基醚、烷基-芳基醚、烷基硫醚、烷基-芳基硫醚、烷基砜、烷基-芳基砜、烷基酰胺、烷基-芳基酰胺、烷基磺酰胺、烷基胺、烷基-芳基胺、烷基-芳基磺酰胺、烷基脲、烷基-芳基脲、氨基曱酸烷基酯、氨基曱酸烷基-芳基酯、卤素、羟基氨基、肼基曱酸烷基酯、肼基甲酸芳基酯；R-C0R5或B(0R)2,其中r、h、oh、or8、nr9n10、cf3、其中:C2F5、C3F7、CF2R6、R6、COR7，其中R7=H、OH、OR8、CHR9R10或NR9111、其中R6、R8、W和R"独立选自H、烷基、芳基、杂烷基、杂芳基、环烷基、环烷基、芳基烷基、杂芳基烷基、CH(R")COOR11、CH(R")CONR121113、CH(R")CO丽CH(R2')COOR11、CH(Rr)CONHCH(R2')CONR12R13、CH(Rr)CONHCH(R2')R,、CH(R"CONHCH(R2')CO丽CH(R3')C00R11、CH(R')CO丽CH(R2')CO丽CH(R3')CONR121113、CH(R')CONHCH(R2')CO丽CH(R3〕CONHCH(R4')COOR11、CH(R"CONHCH(R2')CO丽CH(R3')CO丽CH(R4')CONR121113、CH(R)CONHCH(R2')CONHCH(R3')CO丽CH(R4')CONHCH(R5')C00R11、CH(R1')CONHCH(R2')CONHCH(R3')CONHCH(R4')CONHCH(r5')conr12r13，其中r1，、r2'、r3'、r4'、r5'、r11、r12、r"和r，独立选自H、烷基、芳基、杂烷基、杂芳基、环烷基、烷基-芳基、烷基-杂芳基、芳基-烷基和杂芳烷基；Z选自O、N或CH;W可以存在或不存在，并且如果W存在，则W选自C=0、C=S、S02或C二NR;Q是(NR)p、O、S、CH2、CHR、CRR'或朝向V的双键；A是O、CH2、(CHR)p、(CHR-CHR，)p、(CRR，》、肌S、S02、C二O或键；G是(CH2)p、(CHR)p、(CRR，)p、NR、O、S、S02、S(0)2NH、C=O或朝向E或V的双键；V是CH、CR或N;p是数字0-6;和R、R，、R2、R和R"虫立选自H;Cl-C10烷基；C2-C10链烯基；C3-C8环烷基；C3-C8杂环烷基、芳基、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、氨基、酰氨基、酯、羧酸、氨基曱酸酯、脲、S同、醛、氰基、硝基；杂芳基；烷基-芳基；烷基杂芳基；(环烷基)烷基和(杂环烷基)烷基，其中所述环烷基由3-8个碳原子、0-6个氧原子、氮原子、硫原子或磷原子组成，所述烷基由l-6个碳原子组成；所述烷基、杂烷基、链烯基、杂链烯基、芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基部分可以任选被取代，所述术语"被取代"指由一个或多个选自下述的部分任选和合适取代烷基、链烯基、炔基、芳基、芳烷基、环烷基、杂环、卤素、羟基、硫代、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、氨基、酰氨基、酯、羧酸、氨基甲酸酯、脲、酮、醛、氰基、硝基、磺酰胺、亚砜、砜、^黄酰脲、酰肼和异羟肝酸酯和硫脲。除了另有定义外，本文所使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员通常所理解的相同的意义。因此，例如术语烷基(包括烷氧基的烷基部分)指通过从具有1-8个、优选1-6个碳原子的直链或支链饱和烂中除去一个原子而衍生的一价基团；芳基一代表具有6-14个碳原子并且具有至少一个苯型环的碳环基团，所述碳环基团的所有可取代的芳族碳原子都作为可能的附着点。优选的芳基包括苯基、l-萘基、2-萘基和茚满基，特别是苯基和取代的苯基；芳烷基一代表含有通过低级烷基连接的芳基的部分；烷基芳基一代表含有通过芳基连接的低级烷基的部分；环烷基一代表具有3-8个、优选5或6个碳原子、任选取代的饱和碳环；杂环一除了以下定义的杂芳基外，代表具有至少一个中断碳环结构的O、S和/或N原子的饱和与不饱和环状有机基团，所述碳环结构由一个或多个环组成，其中每一个环是5、6或7元环并且可具有或不具有缺乏离域兀电子的双键，所述环结构具有2-8个、优选3-6个碳原子，例如2-或3-派咬基、2-或3-哌。秦基、2-或3-吗啉基、或2-或3-硫代吗啉基；卤素一代表氟、氯、溴和碘；杂芳基一代表环状有机基团，其具有至少一个中断碳环结构的120、S和/或N原子并且具有足够数目的离域7T电子以提供芳香性，所述芳族杂环基团具有2-14、优选4或5个碳原子，例如2-、3-或4-吡咬基、2-或3-呋喃基、2-或3-噻吩基、2-、4-或5-噻唑基、2-或4-咪唑基、2-、4-或5-嘧咬基、2-吡嗪基、或3-或4-哒嗪基等。优选的杂芳基是2-、3-和4-吡啶基；这些杂芳基也可以被任选取代。本发明也包括式I化合物的互变异构体、旋转异构体、对映异构体和其它光学异构体以及其药学上可接受的盐和溶剂合物。本发明的另一特点是含有作为活性成分的式I化合物(或它的盐、溶剂合物或异构体)与药学上可接受的载体或赋形剂的药用组合物。本发明也提供制备式I化合物的方法以及治疗疾病如HCV和相关疾病的方法。所述治疗方法包括给予患有所述一种或多种疾病的患者治疗有效量的式I化合物或含有式I化合物的药用组合物。也公开了式I化合物在制备用于治疗HCV和相关疾病的药物中的用途。优选实施方案详述在一个实施方案中，本发明^>开了作为HCV蛋白酶、特别是HCVNS3/NS4a丝氨酸蛋白酶抑制剂的式I化合物其中各部分如上所定义。一些优选的实施方案包括、但不限于上述通式I中各官能度的下述定义；对于相同和附加官能度的其它所需定义可以在结构和本申请的权利要求中发现，其也在本发明的预期之中。在优选的实施方案中，式I中的W可以选自以下部分<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>E可以是取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂烷基、取代或未取代的杂芳基或取代或未取代的环烷基，E的优选代表是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>R3的优选实施方案包括以下部分:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>其中R3G-H、CBb或其它烷基；R31=OH、O-烷基、NH2、N-烷基；和R"和R"可以相同或不同，并且独立选自H、F、Cl、Br和CH:X-Y部分的优选实施方案是以下结构:<image>imageseeoriginaldocumentpage16</image>在本申请的权利要求部分注释了式I所示化合物的上述各种定义的几种附加和进一步的改进。它们也由在说明书和权利要求中列出的多种化合物代表。认为这些改进、定义和限定代表了本申请的全部发明。下面列出了显示出良好HCV蛋白酶抑制活性的本发明的代表化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula><image>imageseeoriginaldocumentpage23</image><formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage25</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage29</formula><image>imageseeoriginaldocumentpage30</image>表l中列出了一些化合物的活性(以纳摩尔(nM)表示Ki值的范围)。表1中的实施例号指在本申请后面部分的实施例部分中的各结构式的编号。<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>HCV连续测试KP范围类别A=0.001-1.0mM，类别b=1.1-100在本部分的较后部分叙述了一些合成本发明的各类化合物的方法，并且也用示意图描述，之后描述说明性的例子。根据结构，本发明的化合物可以与有机或无机酸、或有机或无机碱形成药学上可接受的盐。用亍形成这些盐的合适的酸的实例有盐酸、硫酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、草酸、丙二酸、水杨酸、苹果酸、富马酸、琥珀酸、抗坏血酸、马来酸、曱磺酸和其它本领域技术人员已知的无机酸和羧酸。对于与碱的盐的形成来说，合适的碱有例如NaOH、KOH、NH4OH、氬氧化四烷基铵等。在另一个实施方案中，本发明提供含上述发明的大环化合物作为活性成分的药用组合物。通常所述药用组合物还含有药学上可接受的载体稀释剂、赋形剂或载体(本文中将它们共同称为载体材料)。由于它们的HCV抑制活性，这些药用组合物在治疗丙型肝炎和相关疾病时有效。在还一个实施方案中，本发明公开了制备含本发明大环化合物作为活性成分的药用组合物的方法。在本发明的药用组合物和方法中，活性成分一般与适合的根据计划的给药形式而选择的载体材料混合给予，包括例如口服片剂、胶嚢剂(固体填充、半固体填充或液体填充)、用于构成的散剂、口服凝胶剂、酏剂、可分散颗粒剂、糖浆剂、混悬剂等，并符合常规制药实践。例如，对于片剂或胶嚢形式的口服制剂来说，所述活性药物成分可以与任何口服无毒性药学上可接受的惰性载体如乳糖、淀粉、蔗糖、纤维素、^更脂酸4美、磷酸二钙、硫酸钙、滑石、甘露醇、乙醇(液体形式)等结合。而且，当要求或需要时，在所述混合物中也可以掺入合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂和着色剂。散剂和片剂可以包含大约5-95%的本发明组合物。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖类、玉米增甜剂、天然和合成树胶如阿拉伯胶、藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇和蜡。在润滑剂中可被提及用于这些剂型的有硼酸、苯曱酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括淀粉、甲基纤维素、瓜耳胶等。当合适时也可以包括甜味剂、矫味剂和防腐剂。以下将更详细地叙述在以上所提及的一些术语，即崩解剂、稀释剂、润滑剂、粘合剂等。另外，可以以持续释放形式制备本发明的组合物，以便提供任何一种或多种组分或活性成分的速率控制释放，从而得到最佳治疗效果，即HCV抑制活性等。用于持续释放的合适的剂型包括多层片或胶嚢，所述多层片含有不同崩解速率的层或控释聚合物基质(浸渍有活性组分并以片剂形式成型)，所述胶嚢含有这种浸透或包嚢的多孔聚合物基质。液体形式制剂包括溶液、悬浮液和乳剂。可被提及的例子有用于肠胃外注射的水或水-丙二醇溶液或向口服溶液、悬浮液和乳剂中添加增甜剂和遮光剂(pacifiers)。液体形式的制剂也可以包括用于鼻内给药的溶液。适合用于吸入的气雾剂制剂可以包括溶液和粉末形式的固体，它们可以与药学上可接受的载体如惰性压缩气体如氮气混合。为了制备栓剂，首先熔融低熔点的蜡例如脂肪酸甘油酯如可可脂的混合物，通过搅拌或类似的混合使活性成分均匀地分散到其中。然后将熔融均一的混合物倒入大小合适的模具中，冷却并从而固化。也可包括临用前转变为用亍口服或肠胃外给药的液体形式制剂的固体形式的制剂。这样的液体形式包括溶液、悬浮液和乳液。本发明的化合物也可以经皮传递。经皮化合物可以制备成乳膏、洗剂、气溶胶和/或乳剂并可以包括在经皮贴剂的基质中或者包含在如对该目的的领域是便利的贮库型中。优选所述化合物通过口力良给药。药物制剂优选以单位剂量形式存在。在这样的形式中，制剂可分为包含适量浩性成分的合适大小的单位剂量，例如达到所需目的的有效量。按照具体的应用，本发明活性组合物在制剂的单位剂量中的量通常可以在约1.0毫克-1,000毫克，优选约1.0-950毫克，更优选约1.0-500毫克之间变化或者调整，一般为约1-250毫克。所使用的实际剂量可依患者的年龄、性别、体重和待治疗疾病的严重性而变化。这样的技术是本领域技术人员熟知的。通常，包含活性成分的人口服剂型可每天给药1或2次。给药量和次数应根据主治医师的判断调节。口服给药的一般推荐每天剂量方案可以以单次或分开的剂量，在每天约1.0毫克-1,000毫克的范围内变化。以下描述一些有用的术语胶嚢剂一指由曱基纤维素、聚乙烯醇或变性明胶或淀粉制成以贮藏或容纳包含活性成分的组合物的特殊容器或者包封物。硬壳胶嚢一般由相对高的明胶强度骨架和猪皮肤明胶的掺合物制成。胶嚢本身可包含小量的染津牛、不透明剂、增塑剂和防腐剂。片剂一指包含与合适的稀释剂一起的活性成分的压制或模压固体剂型。通过压制混合物或经湿法制粒、干法制粒或者紧压法得到的颗粒，可制备片剂。口服凝胶剂一指分散或溶于亲水性半固体基质中的活性成分。用于构成的粉末指包含活性成分和能够悬浮在水或汁剂中的适宜稀释剂的粉末掺合物。稀释剂一指通常构成组合物或者剂型的主要部分的物质。合适的稀释剂包括糖类，如乳糖、蔗糖、甘露糖醇和山梨醇；衍生于小麦、玉米、大米和马铃薯的淀粉；以及纤维素例如孩(晶纤维素。组合物中稀释剂的量可在总组合物的约10-90%重量，优选约25-75%重量，更优选约30-60%重量，甚至更优选在约12-60%重量的范围内。崩解剂一指加入到组合物中以帮助其分裂(崩解)并释放出药物的物质。合适的崩解剂包括淀粉；"冷水可溶的"变性淀粉例如羧甲基淀粉钠；天然和合成胶类如槐树豆胶(locustbean)、梧桐胶、瓜尔胶、西黄蓍胶和琼脂；纤维素衍生物如甲基纤维素和羧甲基纤维素钠；樣么晶纤维素和交联孩么晶纤维素如交Jf关羧甲基纤维素钠；藻酸盐如藻酸和藻酸钠；粘土如膨润土；以及泡腾混合物。组合物中崩解剂的量可在组合物的约2-15%重量，更优选约4-10%重量的范围内。粘合剂一指使粉末粘合或者"胶着"在一起并通过使它们形成颗粒粘聚，因此在制剂中用作"粘合剂"的物质。粘合剂可增加已在稀释剂或者增量剂中可以得到的粘聚的强度。合适的粘合剂包括糖类如蔗糖；衍生于小麦、玉米、大米和马铃薯的淀粉；天然胶类如阿拉伯胶、明胶和西黄蓍胶；海藻衍生物如藻酸、藻酸钠和藻酸钓铵；纤维素材料如曱基纤维素和羧曱基纤维素钠和羟丙基曱基纤维素；聚乙烯吡咯烷酮；以及无机物例如硅酸铝镁。组合物中粘合剂的量可在组合物的约2-20%重量，更优选约3-10%重量，甚至更优选约3-6%重量的范围内。润滑剂一指加入到剂型中以便在其被压制后通过减少摩擦或磨损确保片剂、颗粒剂等自模具或者冲模中脱出的物质。合适的润滑剂包括金属硬脂酸盐如硬脂酸镁、硬脂酸钩或硬脂酸钾；硬脂酸；高熔点蜡；以及水溶性润滑剂如氯化钠、苯甲酸钠、乙酸钠、油酸钠、聚乙二醇和d，l-亮氨酸。压制前通常在很后的步骤中加入润滑剂，因为它们必须存在于颗粒的表面并介于它们与压片机的各部分之间。组合物中润滑剂的量可在组合物的约0.2-5%重量，优选约0.5-2%,更优选在约0.3-1.5%重量的范围内。助流剂一防止结块并改善颗粒的流动性质以使流动平滑和均匀的物质。合适的助流剂包括二氧化硅和滑石粉。组合物中助流剂的量可在总组合物的约0.1%-5%重量，优选约0.5-2%重量的范围内。着色剂一向组合物或者剂型提供着色的赋形剂。这样的赋形剂可包括食品级染料和吸附到合适的吸附剂例如粘土或氧化铝上的食品级染料。着色剂的量可在组合物的约0.1-5%重量，优选约0.1-1%重量之间变4匕。生物利用度一指与标准物或者对照物比一交，活性药物成分或者治疗部分自给药剂型吸收进入到全身循环中的速率和程度。制备片剂的常规方法是已知的。这样的方法包括干法例如直接压制和经过紧压法产生的颗粒的压制，或者湿法或其它的特殊方法。制备其它给药形式例如胶嚢剂、栓剂等的常规方法也是人们熟知的。本发明的另一个实施方案/>开以上公开的药用组合物用于治疗疾病例如丙型肝炎等的用途。方法包括给予患有这样一种或多种疾病和需要这样治疗的患者治疗有效量的本发明药用组合物。如早先说明的那样，本发明也包括所述化合物的互变异构体、对映体和其它的立体异构体。因此，如本领域技术人员已知的那样，一些本发明化合物可以异构体形式存在。这样的变体包括在本发明的范围内。本发明另一个实施方案公开制备在此公开的大环化合物的方法。通过本领域已知的几种技术可制备所迷化合物。在以下反应方案中概述代表性的示例方法。应当理解虽然以下示例的方案叙述主要衍生自在P2位上的间-酪氨酸或赖氨酸的大环化合物的制备，但任何天然和非天然氨基酸的合适的取代将导致形成所需的基于这些取代的大环化合物。以下是在叙述方案、制备和实施例中所使用的缩写THF四氢呋喃DMFWA^-二甲基曱酰胺EtOAc乙酸乙酯AcOH乙酸HOOBt3-羟基-l,2,3-苯并三溱-4(3/f)-S同EDC1l-(3-二曱基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐NMMN-曱基吗啉ADDPU'-(偶氮二羰基)二哌啶DEAD偶氮二羧酸二乙基酯MeOH曱醇EtOH乙醇Et20乙醚Bn千基Boc叔丁氧羰基CbzCp环戊基二烯基Ts对甲苯磺酰基Me曱基HATU六氟磷酸〇-(7-氳杂苯并三唑-1-基)-1^,:^,:^，，:^，-四曱基脲镜(uronium)Chg环己基甘氨酸Tyr酪氨酸G甘油TG硫甘油alloc烯丙氧MFMOC9-芴基甲氧羰基DdeN-l-(4,4-二曱基-2,6-二氧代亚环己-l-基)乙基tBu^又丁基equiv当量rel.int相对强度aq含水的rt室温satd々包和的Hex己烷NBA硝基苯曱酸PyBrOP六氟磷酸三(吡咯烷基)溴代憐DMSO二甲亚石风TFA三氟乙酸HOBt羟基苯并三唑Hiinigsbase二异丙基乙胺BOP六氟磷酸苯并三唑-l-基氧基三(二曱基絲)辚LDA二异丙基氨基化锂Ph3P三苯膦LAH氬化铝锂DMAP4-二甲基氨基吡啶DCC二环己基碳二亚胺MCPBA间氯过苯曱酸BINAP2,2，-双(二苯基膦基)-1,1，-联萘酚MeCN乙腈Pr丙基Ac乙酰基Ph苯基合成本发明化合物的一般方案:在以下方案中n是数字1-6。方案1:It由使用NMM、HOBt和EDC1将k与二肽lk偶合得到中间体lc开始合成k型化合物，其中R1、R2、R3、R，如上所定义，R"是酰胺、氨基曱酸酯或氢，R是烷基、芳基或芳基烷基。经Cs2C03在DMF中处理该中间体lf,随后光解得到化合物ld。将大环酯H水解并与合适的胺中间体偶合生成k型化合物。方案2:HQ在方案2中概括式k化合物的制备，其中R1、R2、R和n如上所定义，R，是烷基、杂烷基(OR"、SR"，、NR"R"，，其中R，，和R，"是烷基)、在氧原子的邻、间或对位的卣素取代基，R是烷基、芳基或烷基芳基，n是0隱5。在HOOBt、EDC1.HC1和NMM存在下，将间画酪氨酸-二肽2aJ禹合成链烯基羧酸。将得到的产物硼氢化得到化合物2t。在Mitsunobu条件下通过^f吏用三苯膦和ADDP完成大环化(A/"ra"o6w反应由D丄.Hughes在Org.Reactions,42(1992)335,JohnWiley&Sons,NewYork,L.Paquette,ed.中阐述)。用氢氧化锂将所述酯水解为酸后，将其偶合成胺中间体而得到2e。方莱3:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage41</formula>在方案3中概括式k化合物的制备，其中R，、R1、R2、R3、R和n如在方案1中所定义并且PG是Cbz、Boc或alloc。用DCC将化合物k与取代的组氨酸衍生物偶合。将化合物2!L脱保护并再用co-溴代酸处理得到k型化合物。在沸腾的曱基乙烯基酮中用Nal和Na2C03完成k的环化得到M。通过酯的水解以及随后与合适的胺中间体偶合将化合物l转变为k型化合物。方案4:<image>imageseeoriginaldocumentpage42</image>从k型化合物开始制备41型化合物，其中R，、R1、R2、R3、R、n和PG如在方案1中所定义。通过用光气处理将4i的醇转变为处。通过与alloc保护的Hl和Et3N偶合，将4!l转变为4fi。用Pd(PPh3)4将化的alloc基团脱保护得到纽，将其在Mits皿obu条件下进行环化得到4e。水解4eJ々酯并再用EDC1、HOOBt与胺偶合得到4L型化合物。由已知的化合物5aJf始制备5lL型化合物，其中R1、R2、R3、R，、PG和n如在方案1-3中所定义并且PG1是Cbz或Boc，PG2是alloc。通过与ROH和TsOH—起回流，将酸i转变为酯。通过用alloc-氯化物和三乙胺处理，使5lL的酚氧转变为alloc基团而得到5c。通过使用DCC和HOBt与保护的环己基甘氨酸偶合，将i的仲醇转变为型化合物。使用Pd(Ph3P)4和双曱酮，使組化合物的alloc基团脱保护。将k脱保护并用EDC1、HOOBt和合适的活化钌络合物处理，得到式5!的化合物。通过使用CS2C03并接着光解除去钌，将汪型化合物转纽、COOR变为式t的环状化合物。水解5§_的酯基并与胺中间体偶合得到a型化合物。方案6:纽Sf在方案6中概括式i化合物的制备，其中R1、R2、W如上所定义，R，是烷基、杂烷基(OR"、SR"，、NR"R，"，其中R"和R"，是烷基)、在邻、间或对位的卣素取代基，R是烷基、芳基或烷基芳基，PG是Cbz或Boc，n是0-5。在常规酯化条件(ROH、HC1)下，将间殃代苯基甘氨酸63_转变为它的酯。然后在HOOBt、EDC1.HC1和NMM存在下将所述产物偶合成N-保护的氨基酸。脱保护后，再将得到的胺偶合成末端链烯基羧酸而得到产物6d。使用钇催化剂的分子内Heck反应提供了所需的大环化合物^e_(R.F.Heck,i^arf.,22(1989)345-390详细说明了Heck反应)。用氢氧化锂将所述酯水解为酸后，将其偶合成胺中间体而得到6f。方案7:2fe在方案7中概括式IL化合物的制备，其中R1、R2、W如上所定义，R，是烷基、杂烷基(OR"、SR，"、NR，，R"，,其中R，，和R"，是烷基)、在邻、间或对位的卤素取代基，R是烷基、芳基或烷基芳基，n是O-5。氢化k的双键得到大环2a。将该酯水解为酸并"^妄着与胺中间体偶合得到Ib。方案8:在方案8中概括式SL化合物的制备，其中R1、R2、R"口上所定义，R，是烷基、杂烷基(OR"、SR"，、NR，，R，"，其中R"和R，"是烷基)、在氧原子的邻、间或对位的卣素取代基，R是烷基、芳基或烷基芳基，PG是Boc,n是0-5。在Mitsunobu条件(三苯膦和ADDP)下，将间-酪氨酸-二肽Si偶合成末端N-保护的氨基醇处。除去保护基团得到二胺盐酸盐M。通过使用光气或疑基二咪唑形成脲键完成大环化。然后用氬氧化锂将得到的酯水解成酸并接着偶合成胺中间体，得到所需的产物Sf。纽通过在二噁烷中用HCl将k脱保护并用EDC1、HOOBt与G)-羟基酸偶合开始合成1型化合物，其中取代基R1、R2、R3、R，、R和PG如在方案1中所定义，得到2!l型化合物。用Ph3p、ADDP将处型化合物进一步环化生成2iL型化合物。将环状化合物2iL脱保护并与合适的胺中间体偶合生成1型化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage47</formula>方案10:合成巡型化合物，其中R2，、R1，、R1、W如在方案l中所定义，Pd和PGS定义为保护基团，即Fmoc和Dde。P定义为固定所述化合物的聚合物载体，n是数字l-6。用于m型分子合成的工艺是使用Fmoc保护基团的标准固相肽合成法。首先通过哌啶处理将Fmoc保护的Sasarin树脂i脱保护，随后用HATU与Fmoc保护的氨基酸偶合,得到1Qk型化合物。除去皿的保护基团并用HATU与氨基酸偶合得到1Qc。经哌咬处理将附载于聚合物的l脱保护并与羟基酸偶合得到皿型的幾基酰胺。使皿的保护基团开裂并用HATU与保护的赖氨酸衍生物偶合，得到i型化合物。再一次将m的保护基脱保护并与Fmoc保护的氨基酸偶合，得到lfll型化合物。除去保护基团PG1和PG2并用二酸和HATU环化得到大环1Qg。用Dess-Martin试剂将*化合物氧化，最后用TFA从树脂中开裂得到IQL化合物。方案11:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage49</formula>从保护的酸1开始合成11￡_型化合物，其中R1、R2、R3、R4和n如在方案l中所定义，PG2是Cbz,P^是Bn,PG是Boc。通过用EDC1、HOOBt工艺与赖氨酸衍生物偶合将JJi转变为ilk型化合物。用LiOH.H20水解HlL的酯基团，f^与合适的胺中间体偶合得到lliL化合物。再在二嗨烷中用HC1处理并用EDC1、HOOBt与赖氨酸中间体偶合，形成lli型化合物。将11^化合物脱保护并用EDC1、HOOBt环化形成11￡_型化合物。中间体的制备:中间体A:步骤1:Q2N在(TC-5。C下，用2小时向搅拌的l-硝基丁烷(16.5g，0.16mol)和二羟乙酸在H20(28.1g,0.305mol)和MeOH(122mL)中的溶液中滴加入三乙胺(93mL,0.667mol)。将该溶液加温至室温，搅拌过夜并浓缩至干燥得到油状物。然后将该油状物溶于H20中并用10%HC1酸化至pH=1,随后用EtOAc萃取。用盐水洗涤合并的有机溶液，经Na2S04干燥，过滤并浓缩至干燥，得到产物ii(28.1g，产率99%)。步骤2:向搅拌的原料ii(240g,1.35mol)的乙酸(1.25L)溶液中加入10%Pd7C(37g)。将得到的溶液在59psi下氲化3小时，然后在60psi下氢化过夜。然后将乙酸蒸发并与曱苯共沸3次，之后用MeOH和乙醚研磨。将该溶液过滤并与曱苯共滞两次，得到为灰白色固体的iii(131g,500.891mol,66%)。步骤3:<image>imageseeoriginaldocumentpage51</image>在(TC下，向搅拌的氨基酸iii(2.0g,013.6mmol)在二嗨烷(10mL)和H20(5mL)中的溶液中加入1NNaOH溶液(4.3mL,14.0蘭ol)。将得到的溶液搅拌IO分钟，随后加入二碳酸二叔丁酯(O.llOg,14.0mmol)并在0。C下搅拌15分钟。然后将该溶液加温至室温，搅拌45分钟并保存在水箱中过夜，浓缩至干燥得到粗制物。向该粗制物在EtOAc(lOOmL)和;水中的溶液中加入KHS04(3.36g)和H20(32mL)并搅拌4-6分钟。然后分离有机层并将含水层用EtOAc萃取两次，用水、盐水洗涤合并的有机层，经Na2S04干燥，过滤并浓缩至干燥，得到为澄清的树胶状物的产物iv(3.0g,产率89%)。步骤4:<image>imageseeoriginaldocumentpage51</image>在-20。C下，向搅拌的iv(3.00g,12.0mmol)在DMF(15mL)和CH2Cl2(15mL)中的溶液中加入HOOBt(1.97g,12.0mmo1)、W-甲基吗啉(4.0mL，36.0mmol)和EDC1(2.79g,14.5mmol)并搅拌10分钟，随后加入HC1.H2N-Gly-OBn(2.56g,13.0mrno1)。将得到的溶液在-20。C下搅拌2小时然后保存在水箱中过夜并浓缩至干燥，随后用EtOAc(150mL)稀释。然后将所述EtOAc溶液用饱和NaHC03、H20、5%H3P04、盐水洗涤两次，经Na2S04干燥，过滤并浓縮至干燥，得到产物v(4.5g,940/0)。LRMSw/zMHT=395.1。步骤5:将原料v(7.00g,17.8mmol)的无水乙醇(300mL)溶液在室温、氢气氛、Pd-C(300mg,10%)的存在下搅拌。该反应过程经tlc监测。2小时后，将该混合物通过硅藻土垫过滤并将得到的溶液在真空中浓缩，得到产物vi(5.40g,定量)。LRMSm/zMfT-305.1。步骤6:viiv招在-20。C下，向二甲基胺盐酸盐(1.61g,19.7mmo1)、A^-Boc-苯基甘氨酸(4.50g,17.9腿ol)、HOOBt(3.07g,18.8腿ol)和EDC1(4.12g,21.5mmol)在无水DMF(200mL)和CH2C12(150mL)中的溶液中加入NMM(5.90mL,53.7mmol)。在此温度下搅拌30分钟后，将该反应混合物保存在水箱中过夜(18小时)。然后将其加温至室温并加入EtOAc(450mL)、盐水(100mL)和5。/。H3PO4(100mL)。分离各层后将该有机溶液用5%H3P04(100mL)、饱和碳酸氬钠水溶液(2x150mL)、水(150mL)和盐水(150mL)洗涤，干燥(MgS04)，过滤并在真空中浓缩得到粗制产物viii(4.86g),为白色固体，其没有进一步纯化而使用。52步骤7:将N-Boc-苯基甘氨酸二甲基酰胺viii(4.70g,粗产物)溶于4NHC1(60mL,240mmol)中并将得到的溶液在室温下搅拌。该反应过程经TLC监测。4小时后，将该溶液在真空中浓缩，得到为白色固体的ix，其没有进一步纯化而用在以下反应中。LRMSw/zMKT=179.0。步骤8:根据在^^土中所述的偶合步骤制备所需的化合物x。LRMSw/zMH^465.1。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage53</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage54</formula>根据在歩骤7中所述的步骤，从三肽x制备所需的中间体A。LRMSm々MfT=365.1。中间体B:步骤1:xii使用可买到的xi作为偶合配偶体通过中间体A、步骤8所述的步骤得到所需产物xii。将该粗制物充分纯化以便进一步研究。用97/33C,N54二氯曱烷/MeOH经快速层析将部分产品纯化。HRMS(FAB)对于C25H4oN307的计算值494.2866(M+H)+。实测值494.2863。步骤2:B通过中间体A步骤7所述的步骤得到所需产物B。该粗制物没有进一步纯化而使用。中间体C:步骤1:根据在中间体A^1_中所述的偶合步骤制备所需化合物xiii55步骤2:xiiixiv根据在中间体A步骤7中所述的步骤制备所需化合物xiv。步骤3:CH3根据在中间体A^_1中所述的偶合步骤制备所需化合物xvLRMSm/zMir=451.1。56步骤4:CH3c根据在中间体A步骤7中所述的歩骤制备所需中间体C。LRMSw々Mir=35U。其没有进一步纯化而使用。中间体D:根据在中间体A步骤7中所述的歩骤,由化合物v制备所需的中间体D。其没有进一步纯化而使用。57中间体E:步骤1:OH用可买到的xvii作为偶合配偶体，通过中间体A步骤8所述的歩骤得到所需的产物xviii。将该粗制物充分纯化以便进一步研究。步骤2:xviiiE通过中间体A歩骤7所述的步骤得到所雷的产物E。该粗制物没有进一步纯化而使用。中间体F:步骤1:xx用可买到的xix作为偶合配偶体，通过中间体A歩骤4所述的步骤得到所需的产物xx。将该粗制物充分纯化以便进一步研究。步骤2:通过中间体D中所述的步骤得到所需的产物F。中间体G:步骤1:G用烯丙基甘氨酸作为偶合配偶体，通过中间体A歩骤4所述的步骤得到所需的产物G。将该粗制物充分纯化。将该粗制产物用4NHC1/二瞎烷处理并在室温下搅拌50分钟。将该反应混合物浓缩至干燥，得到中间体G,其没有进一步纯化而使用。实施例实施例1:式l化合物的制备COOH将la的4-氯代丙酸(2.0g,10.8mmol)在二氯乙烷(200mL)中的溶液用CpRu(CH3CN)3PF6(4.7g，10.8mmol,1.0当量)处理并在回流下加60热2小时。当产物lc的无色晶体沉淀析出时将该反应混合物冷却至室温。滤出所述晶体并用l:lEt20/CH2Cl2的混合物洗涤，在真空中干燥。该无色晶体(3.3g)为分析纯。]HNMR(CD3C(0)CD3,400MHz,ppm,S,J)6.77(d，2H,J=7.0Hz),6.53(d,2H,J=7Hz),5.64(s,5H),2.87(t,2H,J=7.0Hz),2.74(t，2H，7=7.0Hz);MS:(电喷雾，m/z相对强度):350.9(CwH!4ClRu+,M",100);对于C14H14ClF602PRi^々CHN计算值C=33.92%,H=2.85%,CI=7.15%,P=6.25%实测值C=34.04%,H=3.04%，CI=7.09%,P=5.71%。步骤B:<image>imageseeoriginaldocumentpage61</image>将Boc-环己基甘氨酸一水合物Id(6.17g,24.00mmol)在无水CH2C12(50.0mL)中的溶液用4-曱基吗啉(2.64g,26.0腿ol,1.1当量)处理并冷却至-l(TC。向该混合物中加入氯曱酸异丁基酯(3.62g,3.5mL,1.1当量)并将该白色悬浮液搅拌直至浴温为-5。C。在一个单独的烧杯中将间-酪氨酸甲基酯盐酸盐(6.5g,26.5mmo1,1.1当量)溶于DMF(30mL)中并用4-曱基吗啉(2.64g，26.0mmo1,1.1当量)处理，在室温下搅拌"分钟。将该混合物加入到所述反应物中，同时伴有C02放出。将该反应混合物在室温下搅拌l小时并用1MHC1水溶液(100mL)稀释。用乙酸乙酯(3x200mL)萃取含7jc层并用1MHC1(1x100mL)、NaOH水溶液(lxl00mL)、盐水(lx100mL)萃取合并的有机层，干燥(Na2S04),在真空中浓缩并经层才斤(Si02,EtOAc/己烷3/7)纯化，得到5.3g(53%)偶合化合物lf，为无色泡沫。步骤C:将六氟.磷酸(T]-茂).[Ti"4-氯代苯基)]合钌基丙酸(cyclopentadiene-r)6-4-chlorophenylpropionicacid-rutheniumhexanesafluorophosphate)lc将lf(10g,23.04mmol)的溶液溶于HCl(在二嚼烷中的4M溶液,100mL)中并在室温下搅拌2-4小时。将反应混合物在真空中浓缩并将固体重悬浮在乙醚中。将其过滤并将固体用乙醚洗涤，干燥得到无色固体lg(8.2g,96%)!HNMR(d4-CD3OD,400MHz,S，ppm)7,09(t,1H,/=8.0Hz),6.71-6.36(m,3H),4.69(dd,1H,J=6.0Hz,3.2Hz),3.69(s,3H),3.66(d,1H,/=5.2Hz),3.15-3.10(dd,1H,/=5.6Hz,4.0Hz),1.87-1.69(m,6H),1.32-1.10(m,5H)。步骤D:OHBocHN'CIH3S'62(2.0g,4.0mmol)的DMF(20mL)溶液用HOBt(810mg，6.0mmol，1.5当量)和HMgsbase(2.6g,16.0mmol,4.0当量)处理。将该反应混合物冷却至0。C并用EDC1.HC1(888mg,5.0mmol,1.25当量)处理。将该反应混合物在0°C下搅拌30分钟并将胺盐lg(1.48g,4.0mmol)加入到该混合物中，在室温下搅拌12小时。将所述反应混合物在真空中浓缩并用H2O(200mL)稀释残余物，萃取进CH2C12(3x100mL)中。将合并的有机层用HC1水溶液(lx100mL)、NaHC03(1x100mL)、盐水(lxl00mL)萃取并干燥(Na2SO4),过滤，在真空中浓縮，并且棕色固体lh没有进行任何进一步纯<乜而用于环化作用。步骤E:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage63</formula>将(ti-茂).[ti6-(4-氯代苯基)]合钌基丙酸(cyclopentadiene-ri6-ruthenium-4-chlorophenylpropionicacid)-环己基甘氨酸-间酪氨酸-OCH3lh(1.47g，粗制)在无水DMF(150mL)中的溶液用Cs2CO3(2.40g,7.37n皿ol,5.0当量)处理并通过将干N2通入所述反应混合物中鼓泡进行脱气。将该反应混合物在室温下搅拌16小时并蒸馏除去过量的DMF。将残余物溶于H20(200mL)并用CH2C12(3x100mL)萃取。用盐水(IOOmL)萃取合并的有机层，干燥(Na2S04)，过滤，在真空中浓缩，所述残余物没有进一步纯化而用于钌的光解解络。将粗制钌络合物溶于乙腈(35mL)中，脱气并在Raynot(人=350nM)中光解48小时。将该反应混合物在真空中浓缩并将残余物经层析(Si02,EtOAc/己烷7:3)纯化，得到360mg(52%)无色固体li。将酸lj(100mg,0.22mmol)在无水DMF(2.5mL)中的溶液用HOOBt(45mg,0.33纖ol)和Htinigsbase(141mg,1.1mmol,5.0当量)步骤F:1i1j将二苯基醚li(300mg,0.65腿ol)在CH3OH(10mL)、CH2C12(20mL)和H20(5mL)中的溶液用LiOH.H20(90mg,2.2mmol,3.4当量)处理并在室温下搅拌2小时。将该反应混合物用HCl水溶液(6M)酸化并萃取到CH2Cl2(3x30mL)t。干燥(Na2S04)合并的有机层，过滤并在真空中浓缩得到无色酸lj(200mg,66%)。步骤G:64量)处理，搅拌20分钟。将反应混合物用胺B(118mg,0.27mmol，1.22当量)处理并在室温下搅拌12小时。在真空中浓缩该反应混合物并用H20(30mL)稀释。用CH2C12(3x50mL)和EtOAc(3x50mL)萃取含水层。用HC1水溶液(2M)、NaOH水溶液(2M)萃取合并的有机层，干燥(Na2S04),过滤，在真空中浓缩得到无色固体lk(79mg),其用于氧化。MS:(电喷雾，m/z相对强度)826[(M+l)+,100],494(20),94(30)。步骤H:将鞋基酰胺lk(130mg,0.16mmol)的DMF(2.0mL)溶液用Dess-Martin试剂(130mg,(U2mmol,2.0当量)处理。将该反应混合物在室温下搅拌2小时并将该混合物在真空中浓缩。将残余物经层析(Si02,CH30H/CH2C12:l:49)纯化，得到氧化的产物1(55mg，42%)，为无色固体。MS:(电喷雾，m/z相对强度)858[(M+CH3OH+l)+,100],824[(M+l)+,63]。实施例2:式2化合物的制备:步骤A:2将叔丁基酯1(50.0mg,60.0jomol)的溶液用TFA/CH2C12(1:1,4mL)处理并在室温下搅拌2小时。使所述酯相对于基线消失，之后进行TLC(CH30H/CH2C121:24)。脱保护完成后将该反应混合物在真空中浓缩并将残余物用庚烷(4.0mL)反复处理并浓缩，得到白色固体2(49mg,100%)。MS:(电喷雾,m/z相对强度)768[(M+l)+,100]。实施例3:式3化合物的制备:<image>imageseeoriginaldocumentpage67</image>将酸lj(100mg,0.22mmol)在无水DMF(2.5mL)中的溶液用HOOBt(45mg,0.33mmol)和Hiinigsbase(141mg,1.1mmol,5.0当量)处理。将该反应混合物冷却至O'C并用EDC1(63mg,0.33mmol,1.5当量)处理，搅拌20分钟。将反应混合物用胺E(79mg,0.27mmol,1.22当量)处理并在室温下搅拌12小时。将该反应混合物在真空中浓缩并用H20(30mL)稀释。用CH2C12(3x50mL)萃取含水层。用HC1水溶液(lM,30mL)、NaOH水溶液(lM,30mL)萃取合并的有机层，干燥(Na2S04)，过滤，在真空中浓缩，得到无色固体3a(58mg),其用于氧化。MS:(电喷雾,m/z相对强度)693[(M+l)+,100],637(41),494(55)394(51),338(13)。步骤B:3将醇3a(95mg,0.14mmol)的CH2C12(2.0mL)溶液用Dess-Martin试剂(116mg,0.28mmol,2.0当量)处理。将该反应混合物在室温下搅拌2小时并将该混合物在真空中浓缩。将残余物经层析(Si02,CH30H/CH2C121:32)纯化，得到氧化的产物3(47mg,42%)，为无色固体。MS:(电喷雾，m/z相对强度)691(M+l)+。实施例4:式4化合物的制备:步骤A:将叔丁基酯3(47.0mg,68.0Mmol)的溶液用HC1(4M二喊烷，5mL)处理并在室温下搅拌25小时。使所述酯相对于基线消失，之后进行TLC(CH30H/CH2C121:24)。脱保护完成后将该反应混合物在真空中浓缩并将残余物用庚烷(5.0mL)反复处理并浓缩，得到白色固体4(43mg,100%)。MS:(电喷雾，m/z相对强度)635[(M+l)+,100],465(62),336(62)。实施例5:式5化合物的制备:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage69</formula>70步骤A:5aCOOH化将4-氯代丁酸5a(3.0g，15.10mmol)的二氯乙烷(200mL)溶液用CpRu(CH3CN)3PF6lb(6.6g,15.10匪ol,1.0当量)处理并在回流下加热2.5小时。将该反应混合物冷却至Or并过滤。在真空中浓缩滤液并溶于CH3CN(10mL)中，用大量过量的Et20处理。经滗析乙醚将分离出的树胶状物分离并将残余物溶于CH2C12/CH30H(1:1,100mL)中，在真空中浓缩得到5b,为可以固化的棕色树胶状物(3.5g,46。/。)。步骤B:+o5c将羧酸5b(3.12g,5.95mmol)在无水DMF(20mL)中的溶液用Htinigsbase(3.07g,24.0画ol，4.0当量，4.4mL)和HOBt(1,2g,8.93mmol,1.5当量)处理。将反应混合物冷却至(TC并用EDCl(1.35g,7.43mmol，1.25当量)处理，搅拌1小时。向所述反应混合物中加入胺盐酸盐lg(2.65g,7.14mmol，1.2当量)并将反应混合物在室温下搅拌12小COOH5b时。蒸馏出DMF并将残余物用水稀释，用CH2Cl2萃取含水层。用NaHC03水溶液、HC1水溶液、盐水萃取合并的有机层，干燥(Na2S04),过滤，在真空中浓缩，将没有进一步纯化的粗制产物5c(4.3g)用于环化作用。HNMR(d4-CD3OD,400MHz,5,ppm)7.35(t,1H)，6.72-6.60(m,5H)，6.33-6.20(dd,2H),5.51(s，5H),4.19(d，1H),3.68(s，3H),3.19-2.83(m,2H),2.51-2.40(m,2H),2.40-2.25(m,2H),1.99-1.59(m,8H),1.35-0.98(m,5H);MS:(FAB,NBA-G/TG-DMSO,m/z相对强度):695.3([M-PF6〗+,100),232(20),171(30);HRMS对于C34H42N205ClRu+(M-PF6)+的计算值695.1832;实测值695.1845。步骤C:5c5d将氯代化合物5c(3.0g,3.6mmol)在无水DMF(300mL)中的溶液用干燥N2和Cs2C03(5.2g,16mmol,4.0当量)脱气并在室温下搅拌16小时。馏出溶剂DMF并将残余物用水稀释，用CH2C12(3x100mL)萃取。干燥(Na2S04)合并的有机层，过滤，在真空中浓缩并在真空下干燥过夜。.它没有进一步纯化而用于光解除去Ru。MSFAB(NBA-G/TG-DMSO695)([M画PF6]+,100)。(入-350nm)中光解48小时。将该反应混合物在真空中浓缩并将残余物经层析(Si02,EtOAc/己烷l:l)纯化，得到褐色固体5d(600mg,34%)。&NMR(CDC13,400MHz,S,ppm)7.58(d,1H,J=7.6Hz),7.14(t,1H,/=8.0Hz)，6.94(d,2H,J=8.4Hz),6.87(dd，1H,/=2.4,5.6Hz)，将醚5d(200mg,0.42mmol)在CH3OH(5mL)、CH2C12(10mL)和H20(0.5mL)中的溶液用LiOH.H20(18mg，0.44mmol,1.1当量)处理并在室温下搅拌12小时。将该反应混合物用HC1水溶液(12N,1mL)酸化并在真空中浓缩，得到酸5e,其没有进一步纯化直接用于偶合作用。6.73(d,IH,J=7.2Hz),6.59(s,IH),6.57(s,2H)，6.39(d，IH,8.0Hz),4.51(dt,IH,2.8，8.0Hz),3.80-3.62(m,IH)，3.62(s,3H),3.05-3.00(dd,lH，/=2.8,11.6Hz)，2.85(dd,1H,7=8.4,6.0Hz),2.76-2.72(m,IH),2.36-2.19(m,3H)，2.02(dd,IH,J=6.4,9.2Hz),1.8-1.73(m,IH),1.61-1.34(m,7H),1.41-0.71(m,7H)。MS(FAB,NBA-G/TG-DMSO,m々相对强度)493[(M+l)+,100],465(20),232(30),171(40);HRMS对于C29H37N2CV(M+l)+的计算值493.2702;实测值493.2699。步骤D:步骤E:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage73</formula>将酸5e的无水DMF(5.0mL)溶液用HOOBt(103mg,0.63mmol,1.5当量)、Htinigsbase(216mg,1.68腿ol,4.0当量)和胺B(270mg,O.63mmol,I.47当量)处理。将该反应混合物冷却至0。C并用EDCl(lOlmg,0.52mmo1,1.25当量)处理，在室温下搅拌12小时。将该反应混合物在真空中浓缩并用H20(30mL)稀释。将含水层用CH2Cl2(3x50mL)和EtOAc(3x50mL)萃取。用HC1水溶液pM)、NaOH水溶液(2M)萃取合并的有机层，干燥(Na2S04),过滤，在真空中浓缩得到无色固体5f(I"mg)，其用于氧化作用。MS:(电喷雾，m/z相对强度)840[(M+l)+，100]，394(100)。步骤F:5将醇5f(177mg,0.21mmol)的CH2C12(10.0mL)溶液用Dess画Martin试剂(n8mg,0.42mmol,2.0当量)处理。将该反应混合物在室温下搅拌3小时并将该混合物在真空中浓缩。将残余物经层析(Si02,CH30H/CH2C12l:49)纯化，得到氧化的产物5(23mg,13%),为无色固体。MS:(电喷雾，m/z相对强度)870[(M+CH3OH+l)+，50]，838[(M+l)+,100]。实施例6:式6化合物的制备:步骤A:将叔丁基酯5(50.0mg,60.0Mmol)的溶液用TFA/CH2C12(1:1,4inL)处理并在室温下搅拌7小时。使所述酯相对于基线消失，之后进行TLC(CH30H/CH2C121:24)。完成脱保护后将该反应混合物在真空中浓缩并将残余物用庚烷(4.0mL)反复处理并浓缩，得到白色固体6(14mg,100%)。MS:(电喷雾，m/z相对强度)782[(M+l)+,100]。实施例7:式7化合物的制备:步骤A:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage76</formula>将醇7a(9.2g,54.1mmol)的无水CH2C12(200mL)溶液用DMSO(35mL)和Et3N(16.4g，16.3mmol,23.4mL)处理。将该反应混合物冷却至0。C并用溶于DMSO(30mL)中的PyS03(12.9g,81.2腿ol,1.50当量)处理。将该反应混合物在0。C下搅拌0.5小时并在室温下搅拌6小时。将该反应混合物在真空中浓缩并用Et20(100niL)和H20(200mL)稀释。分离各层并用Et20(3x100mL)萃取含水层。用HC1(2M,3xl00mL)、盐水(lxlOOmL)萃取合并的有机层，在真空中浓缩并经层析(Si02,EtOAc/己烷l:7)纯化，得到醛7b,其放置后固化为蜡状固体(7.1g,77。/。)。对于C9H9C10的CHN计算值C:64.11。/。,H-5.38。/。；实测值C=64.08%,H=5.30%。步骤B:7b在0。C下，将thiethylphosponoacetate(6.72g,30mmol,1.2当量)的无水THF(100mL)溶液用NaH(60%分散体，1.5g,35mmol,1.4当量)处理。将该反应混合物在25。C下搅拌1小时直至不再放出H2。加入醛7b(4.2g,25.0mmol)的无水THF(5.0mL)溶液并将该反应混合物搅拌36小时。将反应混合物用H20(100mL)稀释并用Et20(3x70mL)萃取。干燥(MgS04)合并的有机层，过滤，在真空中浓缩并层析，得到a,P-不饱和酯7c(4.2g,71%)，其用于还原作用。步骤C:<image>imageseeoriginaldocumentpage77</image>将a,(3-不饱和酯7c(4.2g,8,0mmol)的EtOAc(50mL)溶液用Pd/C(10%w/w,500mg)处理并在50psi下氢化12小时。将该反应混合物通过硅藻土塞子过滤并在真空中浓缩滤液，得到还原的化合物7d(3.9g,93%)。步骤D:<image>imageseeoriginaldocumentpage77</image>将所述酯7d(3.9g,16.2mmol)的CH3OH/THF/H20(1:1:0.1,110mL)溶液用LiOH.H20(1.2g,30mmol,2.0当量)处理并在室温下搅拌5小时。将该反应混合物在真空中浓缩并将残余物用H20(100mL)稀释，萃取进Et20(3x50mL)中。将含水层酸化至pH~1(13MHC1)并用Et20(3x100niL)萃取混浊的含水层。干燥(MgS04)合并的有机层，过滤并在真空中浓缩，得到无色固体7e(3.1g,96%)。对于CnH13C102的CHN计算值C=62.12%,H=6.16%;实测值C=62.27%，H=6.23%。将4-氯代苯基戊酸7e(3.0g,14.15mmol)的二氯乙烷(150mL)溶液用CpRu(CH3CN)3PF6lb(6.75g,15.10画ol,1.0当量)处理并在回流下加热2.5小时。将该反应混合物冷却至0'C并过滤。在真空中浓缩滤液并溶于CH3CN(20mL)中，用大量过量的Et20处理。经滗析乙醚将分离出的树胶状物分离并将残余物溶于CH2Cl2/CH30H(l:l，100mL)中，在真空中浓缩得到7f，为棕色树胶状物，其可以固化(4.36g,58%)。MS:(电喷雾,m/z相对强度)379[(M-PF6)+,100]。步骤F:7g将羧酸7f(3.12g,5.95mmol)的无水DMF(20mL)溶液用Hiinigsbase(3.07g,24.0讓ol,4.0当量，4.4mL)和HOBt(1.2g,8.93醒ol,1.5当量)处理。将反应混合物冷却至CTC并用EDC1(1.35g,7.43mmol,1.25当量)处理并搅拌1小时。向所述反应混合物中加入胺盐酸盐lg(2.65g,7.14mmol,1.2当量)并将反应混合物在室温下搅拌12小时。蒸馏出DMF并将残余物用水稀释，用CH2Cl2萃取含水层。用NaHC03水溶液、HC1水溶液、盐水萃取合并的有才几层，干燥(Na2S04)，过滤，在真空中浓缩，所述粗制产物7g(4.3g)没有纯化用于进一步的环化作用。力NMR(d4-CD3OD,400MHz,S,ppm)7.35(t，1H),6.72-6.60(m，5H),6.33-6.20(dd，2H),5.51(s,5H),4.19(d,1H),3.68(s，3H),3.19-2.83(m,2H)，2.51-2.40(m,2H)，2.40-2.25(m,2H),1.99-1.59(m，8H),1.35-0.98(m，5H);MS(FAB,NBA國G/TG-DMSO，m/z相对强度)695.3([M-PF6〗+，100),232(20),171(30);HRMS对于C34H42N205ClRu+(M-PF6)的计算值695.1832;实测值695.1845。步骤G:用干燥N2和Cs2C03(5.2g,16mmol,4.0当量)将氯代化合物7g(3.0g,3.6mmol)的无水DMF(300mL)溶液脱气并在室温下搅拌16小时。馏出溶剂DMF并将残余物用水稀释，用CH2C12(3x100mL)萃取。干燥(Na2S04)合并的有机层，过滤，在真空中浓缩并在真空中干燥过夜。它没有进一步纯化而用于光解除去Ru。MSFAB(NBA-G/TG-DMSO)695[(M-PF6)+,100]。(X=MOnm)中光解48小时。将该反应混合物在真空中浓缩并将残余物经层析(Si02,EtOAc/己烷l:l)纯化，得到褐色固体7h(600mg,3479%)。HNMR(CDC13,400MHz,S,ppm)7.58(d,1H,J^7.6Hz),7.14(t，1H,J=8.0Hz),6.94(d,2H,J=8.4Hz),6.87(dd,1H,J=2.4,5.6Hz),6.73(d,1H,J=7.2Hz),6.59(s,1H),6.57(s，2H)，6.39(d,1H,J=8.0Hz),4.51(dt,1H,J=2.8,8,0Hz),3.80-3.62(m,IH)，3.62(s,3H),3.05-3.00(dd,1H,J=2.8,11.6Hz),2.85(dd,1H,/=8.4,6.0Hz),2.76-2.72(m,1H),2.36-2.19(m,3H),2.02(dd，1H,J=6.4,9.2Hz),1.8-1.73(m,1H),1.61-1.34(m,7H)，1.41-0.71(m,7H)。MS(FAB,NBA-G/TG-DMSO,w々相对强度)493[(M+l)+,100],465(20),232(30),171(40);HRMS对于。291137]^205(]^+1)+的计算值493.2702;实测值493.2699。步骤H:7h7i将醚7h(220mg，0.46mmol)在CH3OH(3.0mL)、CH2C12(10mL)和1120(0.5mL)中的溶液用LiOH,H20(18mg，0.44mmol,1.1当量)处理并在室温下搅拌12小时。将该反应混合物用HC1水溶液(13M，1mL)酸化并在真空中浓缩，得到酸7i,其没有进一步纯化直接用于偶合作用。步骤I:将酸7i的无水DMF(3.0mL)溶液用HOOBt(94mg,0.75mmol,1.6当量)、Hiinigsbase(237mg,1.84讓ol,4.0当量)和胺B(246mg，0.58mmol,1.47当量)处理。将该反应混合物冷却至(TC并用EDCl(110mg,0.58mmol,1.25当量)处理，在0。C下搅拌25分钟、12小时。将该反应混合物在真空中浓缩并用H20(30mL)稀释。用CH2C12(3x30mL)萃取合并的含7jc层。用HC1水溶液(1M,60mL)、NaOH水溶液(60mL)萃取有机层，干燥(Na2S04),过滤，在真空中浓缩得到无色固体7j(230mg)，其用于氧化作用。MS:(电喷雾,m/z相对强度)854[(M+l)+,100],479(70)，327(50),27U(100)。步骤J:将醇7j(220mg,0.26匪ol)的CH2C12(3.0mL)溶液用Dess-Martin试剂(218mg，0.51mmol,2.0当量)处理。将该反应混合物在室温下搅拌并将该混合物在真空中浓缩。将残余物经层析(Si02,CH30H/CH2C12l:24)纯化，得到氧化产物7(23mg,13%),为无色固体。MS:(FAB,m/z相对强度)852[(M+l)+,43],796(100),768(20),461(20),433(50)，405(50),336(30),294(50)。实施例8:式8化合物的制备一将叔丁基酯7(32.0mg,37.0jjmol)的溶液用TFA/CH2C12(1:1,5.0mL)处理并在室温下搅拌4小时。使所述酯相对于基线消失，之后进行TLC(CH30H/CH2C121:24)。完成脱保护后将该反应混合物在真空中浓缩并将残余物用庚烷/CH30H(4.0mL)反复处理并浓缩，得到褐色固体8(29.0mg,100%)。MS:(电喷雾，m/z相对强度)796[(M+l)+,酬。实施例9:式9化合物的制备:ooJo"o将Boc-甘氨酸9a(1.75g，10.0mmol)的无水DMF(50mL)溶液用HOOBt(2.65g,15mmo1,1.5当量)和EDC1(2.86g,15.0讓o1,1.5当量)处理。将该反应混合物用Htinigsbase(5.16g，40mmol,4.0当量，7.3mL)处理。将该反应混合物搅拌1小时并加入间酪氨酸-OCH3.HClle(2.5g，ll.5mmol，1.1当量)，在25。C下搅拌12小时。将该反应混合物在真空中浓缩并将残余物用NaHC03水溶液稀释，萃取到CH2Cl2中。浓缩合并的有机层并将残余物经层析(Si02,EtOAc/己烷1:1)纯化，得到无色固体9b(3.4g,90%)。步骤B:BocHN^Y^OO9b9c将9b(4.6g,13.06mmol)的HC1(在二螺烷中的4M溶液，50mL)溶液在室温下搅拌3小时。将反应混合物在真空中浓缩并将残余物在高真空中干燥，得到为细粉末的9c,其用于下一步骤中。&NMR(CD3OD,400MHz,S,ppm)8.67(d,1H,J=7.9Hz),7.10-7.07(m,1H),6.68-6.64(m,2H),4.75-4.70(m,1H),3.75-3.61(m,2H),3.66(s,3H)，3.10(dd,1H,/=5.2,8.5Hz)，2.90(dd,1H,J=8.8Hz,5.0Hz)。84步骤C:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage85</formula>将[CpRu(Ti6-4-氯代苯基丙酸)〗PF6lc(3.0g,46.01腿ol)的无水DMF(60mL)溶液用HOBt(1.3g,9.16mmol，1.5当量)和Hiinigsbase(3.22g,4.60mL,25.0mmol,4.0当量)处理。将该反应混合物冷却至0。C并用EDC1(I.75g，9.16mmol,l.5当量)处理。将该反应混合物在O。C下搅拌30分钟并加入甘氨酸铵盐9c(1.75g,6.06mmol,1.0当量)。将该反应混合物在室温下搅拌12并在真空中蒸馏出DMF。将残余物用HC1水溶液(lM,100mL)稀释并萃取入CH2C12(3x100mL)。将合并的有机层用NaHC03水溶液(1x100mL)、盐水(50mL)萃取，干燥(Na2S04),过滤，在真空中浓缩，得到棕色固体9d(1.5g,34%),其用于环化作用。MS:(电喷雾，m/z相对强度)585[(M-PF6)+,100],459(30),373(30),198(20)。9d3e在室温下用干燥N2将钌络合物9d(1.5g,2.05mmol)的无水DMF(100mL)溶液脱气并加入Cs2CO3(5.0g,15mmol，7.5当量)，在室温下搅拌12小时。蒸馏除去溶剂DMF并将残余物用7jc(100mL)稀释，用CH2C12(3x100mL)萃取。用盐水(IOOmL)萃取合并的有机层，干燥(Na2S04)，过滤，在真空中浓缩并在真空中干燥过夜。它没有进一步纯化而用于光解除去Ru。将来自上述步骤的环化化合物溶于CH3CN(30mL)中并过滤到石英管中。将该溶液脱气并在Raynot(X-350nm)中光解48小时。将该反应混合物在真空中浓缩并将残余物经层析(Si02,EtOAc)纯化，得到褐色固体9e(230mg,30%)。力NMR(CDC13,400MHz,S,卯m)7.23-7.18(m,2H),7.09-7,01(m,3H),6.76(dd,1H,J=2.4,8.8Hz),6.66(d,1H,J=7.6Hz),6.47(d,1H,J=5.6Hz),6.17(s,1H),5.64(s,1H),4.69(q,1H,7=4.4Hz),3.77(s，3H),3.68-3.51(m，2H),3.35(dd,1H,J-4.0,10.8Hz),3.05(dd,1H,J=5.2,9.2Hz),2.96-2.92(m,2H),2.61-2.56(m,1H),2.30-2.29(m,1H);13CNMR:(CDC13,100MHz，Sppm)172.3,171.4,168.1,159.9,155.4,137.6，136.4，131.0,130.0,129.5,123.3,122.4，121.0,117.7,117.1,53.6,53.0,43.6,39.9,36.1,32.3。MS(电喷雾，m/z相对强度)383[(M+l)+,100]，279(20)。86在室温下将环状化合物9e(150mg,0.4mmol)在THF(4.0mL)、H2O(4.0mL)中的溶液与LiOH.H2O(41.0mg,1.0腿o1,2.5当量)一起搅拌3小时。将该反应混合物用浓HCl(2.0mL)酸化并在真空中浓缩。在真空中干燥固体外并且没有进一步纯化而将其用于进一步的偶合作用。步骤F:将水解的酸9f在无水DMF(4.0mL)和CH2Cl2(4.0mL)中的溶液用HOOBt(103mg,0.58mmol,1.5当量)处理并冷却至0°C,加入Hiinigsbase(206mg,1.60纖ol,4.0当量，295fiL)。向该混合物中加入EDCl步骤E:(112mg,0.58mmol,1.5当量)并将该反应混合物在0'C下搅拌0.5小时，用胺盐酸盐B(206mg,0.48mmol,1.2当量)处理。将该反应混合物贮存在水箱中48小时并在真空中浓缩除去DMF和CH2C12。将残余物用HC1水溶液(2M)稀释并用CH2C12(3x50mL)萃取。将合并的有机层用HC1水溶液(1M,3x50mL)、NaOH水溶液(2M)、盐水(100mL)萃取，干燥(Na2S04)并在真空中浓缩。不经进一步纯化而将残余物9g(200mg)氧化。步骤G:将醇9g(200mg,0.27mmol)的CH2C12(3.0mL)溶液用Dess-Martin试剂(342mg,0.81mmol,3.0当量)处理。将该反应混合物在室温下搅拌3小时并用NaHC03水溶液和Na2S203水溶液稀释。将该反应混合物在室温下搅拌20分钟并将该反应混合物用CH2C12(3x30mL)萃取。用盐水(50mL)萃取合并的有机层，干燥(Na2S04)，过滤，在真空中浓缩，将残余物经层析(Si02,CH3OH(2MNH3)/CH2Cl21:19)纯化，得到酮酰胺9(100mg,50%),为无色固体。MS:(电喷雾，m/z相对强度)742([M+l]+,100)，686(80)。实施例10:式10化合物的制备<formula>formulaseeoriginaldocumentpage89</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage89</formula>将叔丁基酯9(100mg,0.13mmol)的无水CH2Cl2(4.0mL)溶液用TFA(4.0mL)处理并在室温下搅拌5小时。将该反应混合物在真空中浓缩并将残余物反复溶解于曱苯/CH2Cl2中并在真空中浓缩数次，得到细的无色固体10。MS:(FAB,NBA7DMSO,w/z相对强度)686[(M+l)+:40],460(20)，307(100),289(60);HRMS对于C36H40N5O9(M+l)+的计算值686.2825;实测值686.2840。备在陽20。C下，向胺盐酸盐lg(1.20g,3.23mmol)、6-庚烯酸(0.610g,4.68謹ol)、HOOBt(0.765g,4.69mmol)和EDC1(1.07g，5.58mmol)在无水DMF(50mL)和CH2C12(50mL)中的溶液中加入NMM(1.55mL，14.1mmo1)。在此温度下搅拌30分钟后，将该反应混合物保存在水箱中18小时。然后将其温热至室温。加入EtOAc(150mL)、盐水(50mL)和5%H3P04(50mL)。分层后，将该有机溶液用5%H3P04(80mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(2x80mL)、水(80mL)和盐水(80mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并在真空中浓缩。快速层析(2-5。/。MeOH-CH2Cl2)，得到lla(1.46g,3.28mmol,定量)，为白色固体。力NMR(400MHz,d6-DMSO)S9.25(s,1H),8.31(d,J=7.2Hz,1H),7.70(d,/=9.2Hz,1H),7.05-7.01(m,1H),6.62-6.58(m,3H),5.82-5.72(m，1H),5.02-4.91(m，1H)，4.43-4.38(m,1H),4.23-4.19(m,1H),3.55(s，3H),2.93-2.80(m,2H),2.51-1.97(m,2H),1.66-0.86(m,15H);13CNMR:(d6-DMSO,125MHz),S171.9,171.8,171.1,157.2，138.6,138.4,129.1,119.5,115.8,114.6,113.5,56.5,53.5,51.6,36.5,34.8，32.8,29.0,28.0,27.8,25.8，25.5:24.8;HRMS，附/z445,2683(对于(:251136:^205的计算值445.2702,误差:4ppm)。步骤B:11a11b在氮气氛、0。C下，小心地向lla(1.46g,3.28mmol)的无水THF(60mL)溶液中加入硼烷-THF溶液(12mL,1.0M,12mmol)。将得到的溶液在0'C、氲气氛下搅拌1小时40分钟。然后加入乙醇(4mL)和pH7緩冲液(8mL),随后加入30%11202水溶液(7.5mL)。在O'C下搅拌20分钟后，将其加温至室温并搅拌2小时。加入EtOAc(200mL)和盐水(100mL)并分离各层。用EtOAc(2x150mL)萃取含水溶液。用硫酸镁干燥合并的有机溶液，过滤并在真空中浓缩。快速层析(2-5%MeOH-CH2Cl2),得到lib(1.05g,2.18mmol,68%)，为白色固体。&NMR(400MHz,d6-DMSO)S9.25(s,1H),8.30(d,/=7.2Hz,1H),7.68(d,/=9.2Hz,1H),7.05-7.01(m,1H),6.62-6.58(m,3H),4.43-4.18(m,3H),3,55(s,3H),3.37-3.33(m,2H),2.93-2.80(m,2H),2.20-2.03(m,2H),1.66-0.87(m,19H);13CNMR(d6-DMSO，125MHz),d172.1,171.8,171.2,157.2，138.4,129.1,119.5,115.8,113.5,60.7，56.5,53.5,51.7,36.5,35.1,32.6,32.4,29.0,28.5,28.0,25.8，25.6,25.4,25.2;HRMS,m/z463.2813(对于C25H36N205的计算值463.2808，误差1ppm)。91步骤C:在0。C向酚醇lib(1.00g,2.16mmol)和三正丁基膦(1.10mL,4.28mmol)在无水CH2Cl2(100mL)和THF(40mL)中的溶液中加入ADDP(1.08g,4.28mmol)。在0'C下搅4半1小时后，将该溶液加温至室温并在氨气氛下搅拌3小时。TLC指示原料完全消耗。在真空中除去溶剂后，将残余物经快速层析(0-3n/。MeOH的CH2Cl2溶液)部分纯化，得到大环化合物llc(650mg,1.46mmol,68%)。&NMR(400MHz,4誦DMSO)S8.58((!，/=8.3Hz,1H),7.76(d,/=9.2Hz,1H),7.18-7.14(m,1H),6.76-6.65(m,3H),4.77-4.71(m,1H),4.32(t,/=8.5Hz,1H),3.97-3.93(m,1H),3.82-3.78(m,1H),3.67(s,3H),3.18-3.14(m,1H),2.98-2.92(m,2H),2.32-2.25(m,1H),2.02-2.01(m,1H),1.99-0.87(m,19H);13CNMR(d6-DMSO,125MHz),5172.1,171.6,171.4,160.1,158.8，139.0，129.1，121.1,113.0,111.9,66.4,56.1,52.0,50.1,40.6,34.9，34.2,28.7,28.3,26.8，26,3,25.9,25.5,25.2,24.2;HRMS,附/z445.2685(对于C25H36N205的计算值:445.2702,误差4ppm)。步骤D:11c"d在室温下，将氬氧化锂水溶液(70mg,15mLH20,2.92mmol)加入到甲基酯11c(330mg,0.742mmol)在THF(20mL)和乙醇(IOmL)中的溶液中。将该混合物在室温下搅拌3小时。由TLC监测该反应过程。将该溶液在真空中浓缩后，加入EtOAc(100mL)、6NHC1溶液(IOmL)和水(50mL)并分离各层。用EtOAc(2x80mL)萃取含水溶液。合并有机溶液、经硫酸镁干燥，过滤并在真空中浓缩，得到lid(260mg,0.604mmol,81%),为白色固体。HNMR(400MHz,d6-DMSO)S8.43(d,</=8.3Hz,1H),7.73(d,/=9.3Hz,1H),7.17-7.13(m，1H),6.77-6.66(m，3H),4.67-4.62(m,IH)，4.32-4.28(m,1H),3.98-3.93(m,1H),3.81-3.75(m,1H),3.17-3.13(m,1H),2.97-2.90(m，1H),2.32-2.26(m,IH)，2.01-1.97(m,1H),1.67-0.85(m,19H);13CNMR(de-DMSO,125MHz),S173.2，171.6，171.3,158.8，139.3,129.0,121.1,113.1，111.9,66.4，56.1，50.8,35.1,34.3,28.8，28.3,26.9,26.3,25.9,25.6，25.5,25.2，24.2;HRMS,m々431.2564(对于C25H36N205的计算值431.2546,误差4ppm)。步骤E:在-20。C下，向酸lid(0.140g,0.325腿ol)、胺B(0.140g,0.325mmol)、HOOBt(56mg，0.343mmol)和EDC1(75mg,0.391画ol)在无水DMF(40mL)和CH2Cl2(20mL)中的溶液中加入NMM(0.107mL,0.973mmol)。在此温度下搅拌30分钟后，将该反应混合物保存在冰箱中18小时。然后加入EtOAc、盐水和5%H3P04。用5%H3P04、饱和碳酸氬钠水溶液、水和盐水顺序洗涤分离的有机溶液，经硫酸镁干燥，过滤并在真空中浓缩。快速层析(2-5%MeOH-CH2Cl2)得到lie,为非对映异构体的混合物(0.170g,0.211mmol,65%),为白色固体，其没有进一步纯化而用于下一步反应中。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage95</formula>在室温下，向羟基酖胺lie(0.29g，0.36mmol)和Dess-Martin试剂(0.45g,1.06匪ol)的混合物中加入无水CH2Cl2(60mL)、DMF(3mL)和DMSO(3mL)。将得到的溶液在室温下剧烈搅拌2.5小时。加入多量的Dess-Martin试剂(300mg,0.71mmol)并将该反应混合物再撹拌1小时。加入饱和碳酸氬钠水溶液和亚硫酸氬钠溶液(各40mL)并将该混合物剧烈搅拌10分钟，然后加入EtOAc(200mL)和水(30mL)并分离各层。用50/oH3PO4溶液(2xl00mL)和饱和NaHCO3溶液(100mL)洗涤有机溶液，经硫酸镁干燥，过滤并在真空中浓缩。快速层析(1-5%MeOH-CH2Cl2)得到11(100mg,0,124醒ol,35%)，为白色固体。HNMR(400MHz,d6-DMSO)S8.79-8.69(m,2H),8.36-8.16(m,2H),7.72-7.68(m,1H)，7.42-7.33(m,5H),7.17-7.13(m,1H)，6.77-6.63(m，3H),5.30-5.27(m,1H),5.09-5.04(m,1H),4.85-4.76(m,1H),4.29-4.25(m,1H),3.98-3.74(m,1H),3.02-2.85(m,2H),2.32-2.27(m，1H),2.04-1.96(m,1H),1.72-0.81(m,35H);13CNMR(d6-DMSO,125MHz),5196.5，196.2，171.65，171,61，171.5,171.14,171.07,169.4,167.6,160.7,158,84,158.79,139.5，139.3，136.6,136,5，128.92,128.90，128.7,128.6128.1,127.7,127.4,12线121.34,121.28,113.1,112.9,112.0,111.981.3,66.34,66.30，56.92,56.87,56.3，56.2,53.4,53.3,51.5,50.9,41.541.4，40.8，40.7,36.6,36.1,34.4,34.3,31.8,31.6,30.4,29.1,28.9,28.4:28.3,27.5,26.8,26.21,26.17,25.9,25.59，25.55,25.0,24.2,18.74,18.66:13.5，13.4;HRMS,w/z804.4542(对于C25H36N205的计算值804.4548:误差1ppm)。实施例12:式12化合物的制备12步骤A:<image>imageseeoriginaldocumentpage97</image>将叔丁基酯11(56.8mg,0.0706mmol)在三氟乙酸(15mL)和CH2Cl2(15mL)中的溶液在室温下搅拌4小时。在真空中除去挥发性物后，将残余物溶于50%MeOH-CH2Cl2(3mL)中并在真空中浓缩至干燥，得到灰白色固体12(50mg,0.0669mmol,95%)。^NMR(400MHz,d6-DMSO)S8.75-8.71(m,2H)，8.36-8.16(m,2H),7.72-7.69(m,1H),7.39-7.31(m,5H)，7.17-7.13(m,1H),6.76-6.63(m,3H),5.37-5.35(m,1H),5.07-5.04(m,1H)，4.85-4.76(m,1H),4.29-4.25(m,1H),3.97-3.74(m，4H),3.02-2.86(m,2H),2.32-2.26(m,1H)，2.01-1.97(m，1H),1.70-0.82(m,26H);13CNMR(d6-DMSO,125MHz),S196.5,196.2，171.63，171.59,171.52,171.48,171.1,171.06,167.4,160.6,158.82，158.78,153.4，139.4,137.1,137.0,128.91,128.88,128.7,128.65,128.61,128.5,128.43,128.39,128.33,128.32，128.14,128.12,128.0,127.7,128.7,127.63,127.59,127.5,127.4,126.8,121.3,115.9,113.1,112.9,112.8,112.0,111.9,111.88,66.33，66.29,56.3,56.2,56.17,53.34,53.31,53.27,51.1,50.9,41.5,40.84,40.77,40.7,40.6,40.56,40.53,40.5,38.7,38.6,38.56,38.53,36.6，36.1,34.4,34.3,31.8,31.6,29.4,29.1,29.0,e28.9,28.4,28.3,28.2,26.9，26.8,26.79,26.20,26.16,25.88,25,86,25.79,25.75,25.71,25.66,25.57,25.54，25.4,25.0,24.2,18.7,18.6,13.5,13.4;HRMS,m々748.3947(对于C25H36N205的计算值748.3922,误差3ppm)。实施例13:式13化合物的制备除了用6_羟基己酸代替6-庚烯酸(39%)外，根据实施例11、歩骤i的方法制备所需的化合物13a。根据实施例11、步骤C的方法由13a制备所需的化合物13b,产率74%。步骤C:13b<13C根据实施例11、歩骤D的方法,由相应的甲基酯13b制备所需的大环酸i:3c，产率88%,为白色固体。oCHs13d根据实施例11、歩骤E的方法,由13c和B制备所需的化合物13d，产率48%。100步骤E:<image>imageseeoriginaldocumentpage101</image>根据实施例11、歩骤F的方法,由13d制备所需的化合物13产率70%。实施例14:式14化合物的制备<image>imageseeoriginaldocumentpage101</image><formula>formulaseeoriginaldocumentpage102</formula>步骤A:将3-碘代-苯基丙氨酸(analine)15a(2.50g,8.59mmol)和浓盐酸(2mL,24mmol)的曱醇溶液加热至回流18小时。在真空中除去溶剂，得到白色固体15b，其没有进一步纯化而用于歩骤B中。步骤B:15c根据实施例11、歩骤A的方法,由15b制备所需的化合物15c，产率84%。其没有进一步纯化而用于下一反应中。步骤C:15c15d根据实施例11、步骤A的方法,由15c制备所需的化合物15d(定量)。其没有进一步纯化用于下一反应中。根据实施例ll、歩骤A的方法，由15d制备所需的化合物15e，产率68%。其没有进一步纯化用于下一反应中。15e15f将装在厚壁管中的15e(1.16g,2.04mmol)、三乙胺(2.90mL,20.6mmol)在无水乙腈(25mL)和DMF(20mL)中的溶液经氩气起泡5分钟。在室温下向该溶液中快速加入四(三苯膦)钯(O)(235mg,0.203mmol)。将该管用Teflon螺旋盖密封并在油浴中加热至85-90。C。搅拌3小时后，将其冷却至室温，小心打开并倒在EtOAc(100mL)上。将该溶液用5%H3P04(4x50mL)和水(50mL)洗涤。经硫酸4美干燥有机层，过滤并在真空中浓缩。快速层析(l-4。/。MeOH-CH2Cl2)，得到大环化合物15f(330mg,0.749匪ol,37%)。步骤F:15f1Sg根据实施例11、步骤D的方法，由15f定量制备所需的化合物15g。其没有进一步纯化用于下一反应中。步骤G:化h根据实施例11、歩骤F的方法,由15g制备所需的化合物15h，产率为77%。其没有进一步纯化用于下一反应中。步骤H:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage106</formula>根据实施例1、歩骤H的方法,由15h制备所需的化合物15，产率为55%。实施例16:式16化合物的制备<formula>formulaseeoriginaldocumentpage106</formula>步骤A:根据实施例12、歩骤A的方法，由15定量制备所需的化合物16。实施例17:式17化合物的制备<formula>formulaseeoriginaldocumentpage108</formula>根据实施例11、歩骤D的方法,由17a制备所需的化合物17b,其没有进一步纯化用于下一反应中。向15f(150mg,0.340醒ol)在EtOH(10mL)和EtOAc(5mL)中的溶液中加入IO%4皮钯碳(20mg)。将该悬浮液在氢气下搅拌8小时，在此期间用TLC监测反应过程。通过硅藻土垫过滤后，在真空中除去溶剂，得到产物，为白色固体17a(150mg,0.339mmol,定量)。其没有进一步纯化用于下一反应中。步骤B:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage108</formula>步骤C:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage109</formula>根据实施例11、步骤E的方法,由17b制备所需的化合物17c产率为"。/。(步骤B和C).其没有进一步纯化用于下一反应中。步骤D:17根据实施例11、歩骤F的方法，由17c制备所需的化合物17产率为46%。实施例18:式18化合物的制备步骤A:18根据实施例12、歩骤A的方法，由17定量制备所需的化合物18。实施例19:式19化合物的制备步骤A:19b根据实施例11、歩骤C的方法，由lg和19a制备所需的化合物l外，产率为64%。步骤B:19b19c根据实施例1、歩骤C的方法,由19b制备所需的化合物19c其没有进一步纯化而用于下一反应中。112步骤C:HCIH2N.19c19d在室温下，向二胺盐19c(75mg,1.52mmol)和^J^二咪唑(260mg,1.60mmol)在乙腈(400mL)中的悬浮液中加入三乙胺(0.26mL,1.85mmol)。将该混合物搅拌3天。在真空中除去溶剂。将残余物溶于EtOAc/THF(100/50mL)中并将该溶液用5%H3P04洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并在真空中浓缩。快速层析(2-10。/。MeOH-CH2Cl2)，得到19d(290mg,0.651誰ol,43%)，为白色固体。步骤D:根据实施例ll、歩骤D的方法，由19d制备所需的化合物19e产率为97%。其没有进一步纯化而用于下一反应中。113<formula>formulaseeoriginaldocumentpage114</formula>步骤F:19根据实施例11、歩骤F的方法，由19f制备所需的化合物19，产率为66%。将两种产物经快速层析(0-5%MeOH-CH2Cl2)部分分离。实施例20:式20化合物的制备20步骤A:20根据实施例12、歩骤A的方法,由19制备所需的化合物20。实施例21:式21化合物的制备将5-己烯-l-醇21a(10g,50mmol)的乙醚(lOOmL)溶液用三乙胺(10.1g,100mmol,2.0当量)处理并冷却至0°C。滴加入光气的苯溶液(20%,100mL,20g,200mmol,4.0当量)并将该反应混合物在室温下搅拌12小时。过滤分离出的三乙胺盐酸盐并在真空中浓缩滤液。残余物21b没有纯化直接用于进一步的研究。步骤B:<image>imageseeoriginaldocumentpage117</image>将lf(8.0g,18.43麵ol)的CH2C12(100mL)溶液用三乙胺(2.43g,24.0mmol,1.3当量)处理。将该反应混合物冷却至-78。C并滴加入氯曱酸烯丙基酯(2.9g,24mmol，1.3当量)。将该反应混合物在室温下搅拌12小时并将该反应混合物用H20(100mL)和HC1水溶液(2M,200mL)稀释。用EtOAc(3x200mL)萃取含水层。用盐水萃取合并的EtOAc层，干燥(Na2S04),过滤并在真空中浓缩，残余物21c直接用于Boc脱保护。WNMR(CHC13,300MHz,S,ppm)7.29(t,1H,J=6.0Hz),7.06-6.98(m,3H)，6.41(d，1H，《/=5.4Hz),6.05-5.95(m,1H),5.42(dd,IH,J-1.2,13.2),5.31(dd,lH,</=1.2,13.2),5.10(d，111,/=6.6Hz),4.91-4.87(q,1H),4.74(d,1H,J=4.5Hz),3.95-3.92(m，1H),3.70(s,3H):3.12(d,1H,J=4.2Hz),1.81-1.51(m,6H),1.43(s,9H),1.21-0.91(m,6H)。步骤C:2化21d将21c(1.5g)的HC1(4M,在二嗨烷中，100mL)溶液在室温下搅拌3小时。原料消失后进行TLC，并且一旦原料消失则将该反应混合物在真空中浓缩，将残余物21d在泵中干燥。其没有进一步纯化而用于偶合作用。步骤D:21e将胺盐酸盐21d(4.0g,8.9mmol)的CH2C12(50mL)溶液用三乙胺118(2.73g,27mmol，3.0当量，3.8mL)处理并冷却至-78。C。滴加入氯曱酸酯21b(2.3g,13.3mmol,1.5当量)的CH2C12(30mL)溶液。将该反应混合物在室温下搅拌过夜并用HC1水溶液(1M,150mL)稀释。用EtOAc(3xl00mL)萃取含7jc层。将合并的乙酸乙酯层用H2O(100mL)、盐水(100mL)萃取，干燥(Na2S04),过滤并在真空中浓缩,，将残余物经层析(Si02,EtOAc/己烷3:7)纯化，得到21e，为无色固体(5g,80%)。步骤E:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage119</formula>在0°C下，将alloc-保护的化合物21e(4.0g,7.2mmol)的无水THF(60.0mL)溶液用双甲酮(dimedione)(2.01g,14.4mmol,2.0当量)、Pd(PPh3)4(830mg,0.71mmol，10mol%)处理并在室温下搅拌1小时。将该反应混合物在真空中浓缩，将残余物经层析(Si02,EtOAc/己烷,3:7)纯化，得到脱保护的醇21f,为无色固体(2.7g,79%)。&NMR(CDC13,300MHz,Sppm)7.44(bs,1H),7.09(s,1H,/=6.0Hz),6.75-6.72(m,2H),6.58-6.48(m,2H),5.81-5.71(m,1H),5.55(d,1H,7=7.2Hz)，4.98(ddd,1H,J=1.5,1.2,9Hz)，4.92(dd,1H,/=4.5,0.9Hz),4.88-4.83(m，1H),4.12-3.97(m,IH)，3.71(s,3H),3.09-2.98(m,2H),2.08-2.03(m,2H),1.722-1.40(m,10H),1.24-0.94(m,5H);13CNMR(100MHz,S)171,6,157.3,156.6，138.3,136.6,129.8,123.5,120.6,117.0,114.9,114.6,65.7,60.1，53.2，52.5,40,4,37.1,33.3,29.6,28.6，28.3,26.0,25.9，25.1;对于C25H36N206的CHN计算值C=65.20%,H=7.88%,N=6.08%;实测值C=64.90%,H=7.98%，N=6,01%。NH=o:H步骤F:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage120</formula>将烯21f(650mg,1.4mmol)的无水THF(5.2mL)溶液冷却至0。C并用BH3.THF(在THF中的1M溶液,4.2mL,4.2mmol,3.0当量)处理。将该反应混合物在室温下搅拌2小时并小心加入EtOH(2.0mL),同时有氬气放出。在氢气完全放出后，将该反应混合物用pH7緩沖液处理并在0°C下用H202水溶液(30%,5.0mL)处理。除去冰浴并将该混合物在室温下搅拌3-4小时。将该反应混合物用EtOAc(3x100mL)萃取。用H20、盐水萃取合并的有机层，干燥(MgS04),过滤，在真空中浓缩并将残余物经层析(Si02,EtOAc/己烷，3:7)纯化，得到硼氩化的产物，为无色固体21g(400mg,60%)[a〗D86.4(c0.3CHC13,25。C);HNMR(CDC13,400顧z,S)7.26(s,1H),7.08(t,1H,■/=5.7Hz),6.83(d,lH乂-6.0Hz),6.71(dd,IH乂-1.2，4.5Hz),6.57(bs,1H),6,54(d,1H,J=5.7Hz),5.68(d,1H,J=6.9Hz),4.85(dq,1H，/=4.2,1.8Hz)，4.05-3.97(m,3H),3.69(s,3H)，3.60(t,2H,J=4.8Hz),3.08-2.97(m,2H),1.77-1.53(m，10H),1.42,1.25(m,4H),1.24-0.92(m，5H);13CNMR(CDC13,100MHz,171.8,171.8,157.6,156.9,136.9,130.0,120.8,117.0,114.8,65.7,62.7,60.3,53.3,52.7，40.5,37.4,32.5，29.7,29.0,28.8,26.2,26.0，25.6,25.4,MS(FAB,NBA/DMSO,m/z,相对强度)479([M+l]+,100),296(40),196(25),156(25),136(25),112(20)。HRMS对于(32必39:^20701+1)+的计算值479.2760;实测值479.2757。NH广步骤G:21g21h将PPh3(385mg,1.47腿ol,1.75当量)的CH2C12(10mL)溶液用化合物21g(400mg,0.84mmol)处理并冷却至0。C。滴加入DEAD(220mg,1.26mmol,1.5当量)的CH2C12(10mL)溶液并在室温下搅拌3小时。将该反应混合物在真空中浓缩并将残余物经层析(Si02,EtOAc/己烷1:9)纯化，得到环状产物21h，为无色固体(110mg，250/0)。步骤H:2化2"U将环状氨基甲酸酯21h(200mg，0.44mmol)在二瞎烷(30mL)、CH3OH(20mL)和CH2C12(20mL)中的溶液用LiOH.H20(80mg,2.0mmol，4.5当量)处理并在室温下搅拌4小时。将该反应物在真空中浓缩并用HC1(在二嗯烷中的4M溶液，10mL)稀释。经冷冻干燥机除去水，得到直接用于偶^ft用的晶体酸21i。121步骤I:21j将水解的酸21i(210mg,0.47mmol)在无水DMF(5.0mL)和CH2C12(5.0mL)中的溶液用HOOBt(125mg,0.70mmol,1.5当量)处理并冷却至0°C，加入Hiinigsbase(258mg,2.0mmol,4.0当量，369^L)。向该混合物中加入EDCl(134mg,0.70mmol,1.5当量)并将该反应混合物在0。C下搅拌0.5小时，用胺盐酸盐B(253mg，0.58mmol,1.25当量)处理。将该反应混合物贮存在水箱中24小时并在真空中浓缩以除去DMF和CH2C12。将残余物用HC1水溶液(2M,30mL)稀释并用CH2C12(3x50mL)萃取。用HCl水溶液(2M,30mL)、NaOH水溶液(lM)、盐水(2x50mL)萃取合并的有机层，干燥(MgS04)并在真空中浓缩。将没有进一步纯化的残余物21j(220mg)氧化。将醇21j(220mg,0.26mmol)的CH2C12(5.0mL)溶液用Dess-Martin试剂(200mg，0.47mmol,1.8当量)处理。将该反应混合物在室温下搅拌l小时并用NaHC03水溶液(15mL)和Na2S203水溶液(15mL)稀释。将该反应混合物在室温下搅拌20分钟并用CH2C12(3x30mL)萃取反应混合物。用Na2C03水溶液萃取合并的有机层，干燥(Na2S04)，过滤，在真空中浓缩并将残余物经层析(Si02,CH3OH(2MNH3)/CH2C12l:20)纯化，得到酮酰胺21(60mg，27%),为无色固体。实施例22:式22化合物的制备22步骤A:22将叔丁基酯21(50mg,0.059mmol)的无水CH2C12(2.0mL)溶液用TFA(2.0mL)处理并在室温下搅拌4小时。将该反应混合物在真空中浓缩并将残余物反复溶于庚烷/CH2Cl2中，在真空中浓缩数次，得到细的褐色固体22(47mg),将其在真空中干燥。实施例23:式23化合物的制备23124步骤A:23a将酸Id(255mg,1.0mmol)的DMF(2.0mL)溶液用HOBt(202mg,1.5当量)和Hiinigsbase(517mg,4.0mmol,4.0当量，738pL)处理。将该反应混合物冷却至(TC并用DCC(258mg,1.25mmol,1.25当量)处理。将该混合物搅拌1小时后，加入组氨酸-OCH3.2HC123a(242.0mg,1.0mmol)并在室温下搅拌过夜。将该反应混合物在真空中浓缩并萃取入EtOAc(3x50mL)和NaHC037jc溶液(50mL)。在真空中浓缩合并的有机层并将残余物经层析(Si02，CH30H/CH2C121:19)纯化，得到二肽23b,为无色固体(380mg,.93%)。&NMR(dfi-DMSO,400MHz,S,卯m)8.17(d,IH,J"=7.2Hz)，7.48(s,IH)，6.77(s,IH)，6.57(bs,IH),5.54(d,1H，《/=7.6Hz),4.47(q,IH,/=7.2Hz),3.79(t,IH,J=8.4Hz),3.55(s，3H),3.36-3.20(m,2H)，2.94-2.82(m,2H),1.70-1.47(bm,6H)，1.35(s,9H),1.46-0.85(m,5H);13CNMR(d6-DMSO,100MHz,Sppm)172.5,171.9,157.3,155.9，135.4,78.6,59.5，52.9,52.3,34.1,29.6,28.9，28,6,26.5，26.3，26.0,25.2;FABMS:(NBA-G/TG-DMSO，相对强度)409[(M+l)+,1001,353(10),170(20);HRMS对于C2。H33N406的计算值:409.2451;实测值409.2466;对于C20H32N4O5的CHN计算值C=58.81%,H-7.90%,N=13.72%;实测值C=58.70%,H=7.78%,N=13.43%。125步骤B:23c将co-溴代庚烯酸(223mg，1.0mmol)的DMF(3.0mL)溶液用脱保护的胺盐酸盐23b(380mg,1.0mmol,1.0当量)处理并加入Hiinigsbase(387mg，3.0mmol,3.0当量)。^!夺该反应混合物用PyBroP(465mg,1.0mmol)处理并在室温下搅拌3小时。将该反应混合物在真空中浓缩并将残余物经层析(Si02,CH30H/CH2C12,1:19)纯化，得到无色固体(220mg,50%)。MS(FAB)515.2[(M+l)+，100〗，513.2[(M+l)+,95],469(60),433(20),170(40)。HRMS对于C23H38BrN404的计算值513.2076，实测值513.2073。步骤C:将溴代化合物23c(100mg,0.23mmol)的2-丁酮(4.0mL)溶液用Na2C03(31.0mg,0.29画ol,1.25当量)和Lil(50mg,0.37mmol，1.3当量)处理并在回流下加热24小时。将该反应混合物在真空中浓缩并将残余物用7jc稀释。将残余物用CH2Cl2(3x30mL)萃取。干燥(Na2S04)合并的有机层并经层析(Si02,CH3OH/CH2Cl21:19)纯化，得到环化的化合物23d(25mg,31%);Rf:0.68(2MNH3，在CH30H/CH2C121:19126<formula>formulaseeoriginaldocumentpage127</formula>将曱基酯23d(200mg,0.46腿ol)在CH3OH(5.0mL)和H20(0.5mL)中的溶液用LiOHH20(30mg,0.75mmol，1.6当量)处理。将该反应混合物在室温下搅拌15小时并在真空中浓缩，在泵中干燥得到7JC解的化合物23e,其直接用于偶合作用。中)；HNMR(CDC13，400固z，S,ppm)8,17(d，1H，J=8.8Hz),7.33(s,1H),6.48(d，1H,J=8.4Hz),4.90-4.85(m,IH)，4.26(t,1H,J=8.0Hz),3.82-3.74(m，2H)，3.69(s,3H),3.16-3.11(m,2H)，2.91-2.84(m，1H),2.30-2.01(m,2H),1.65-1.59(m,11H),1.18-0.96(m,11H);13CNMR(CDC13，100MHz,Sppm)172.8，172.4,171.9,138.2,136.8,57.6,52.5,51.7,46.6,41.6,36.0，30.9,29.5,28.8,27.3，26.7,26.4,26.3,26.2,25.2,24.8;MS:(电喷雾，w/z相对强度)433.1[(M+l)+，100];HRMS对于C23H37N404的计算值433.2815;实测值433.2822。步骤D:步骤E:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage128</formula>将酸23e在CH2C12(3.0mL)和DMF(5.0mL)中的溶液用HOOBt(115mg,0.70mmol,1.50当量)和EDC1(113mg,0.60mmol,1.25当量)处理。然后将该反应混合物用Et3N(190mg,1.88mmol,271pL,4.0当量)和胺盐酸盐B(201mg,0.5mmol,1.1当量)处理。将该反应混合物在室温下搅拌13小时并用H20稀释。用CH2C12(3x50迈L)萃取含水层并将合并的有机层用NaOH水溶液(1M,50mL)萃取，干燥(Na2S04)。过滤干燥的有机层并在真空中浓缩，得到无色残余物23f(442mg)，将其在真空中干燥并直接用于进一步的氧化作用。MS:(电喷雾，m/z相对强度)794[(M+l)+，100]。步骤F:23将鋒基酰胺23f(50mg，0.064mmol)的CH2C12(3.0mL)溶液用Dess-Martin试剂(53mg,0.13mmol,2.0当量)处理并在室温下搅拌3小时。将该反应混合物用饱和Na2S203水溶液(20mL)稀释并在室温下搅拌15分钟。用CH2Cl2(3x30mL)萃取含7jc层。干燥(Na2S04)有机层，过滤，在真空中浓缩并经层析(Si02,CH30H/CH2C12,1:15)纯化，得到酮酰胺23(20mg,40%);MS:(FAB,NBA-G/TG-DMSO,m/z相对强度):824[(M+CH3OH)+,100],792[(M+l)+，60],447(20);HRMS对于C42H62N708(M+l)+的计算值792.4660;实测值792.4659。129实施例24:式24化合物的制备:将叔丁基酯23(17mg,21.5jumol)的无水CH2C12(2.0mL)溶液用TFA(2.0mL)处理并在室温下搅拌8小时。使所述酯相对于基线消失,之后进行TLC(CH30H/CH2C121:19)。将该反应混合物在真空中浓縮并将残余物反复溶于CH30H/庚烷/CH2Cl2中，在真空中浓缩数次得到24,为细的无色固体(7mg)。MS:(电喷雾，m々相对强度)768[(M+CH3OH)+,100],736[(M+l)+,60],46(10)。实施例25:式25化合物的制备:25将Boc-4-氯代苯基丙氨酸25a(523mg,1.75mmol)的二氯乙烷(37mL)溶液用CpRu(CH3CN)3PF6lb(760mg,1.75mmol,1.0当量)处理并在回流下加热2小时。将该反应混合物冷却至0'C并过滤。在真空中浓缩滤液并溶于最少量的CH3CN中，用大量过量的Et20处理。将分离出的固体分离并溶于CH2C12/CH30H(1:1,50mL)中，在真空中浓缩得到25b，为棕色泡沫(640mg,69。/Q)。:oohNHBoc25b》h一p+^131步骤B:25c将羧酸25b(2.4g,3.80mmol)的无水DMF(15mL)溶液用HMgsbase(1.64g,12.64mmol,4.0当量，2.9mL)和HOBt(661mg,4.38mmol,1.5当量)处理。将该反应混合物冷却至0'C并用EDC1(699mg,3.95mmol，1.25当量)处理，搅拌15分钟。向该反应混合物中加入胺盐酸盐lg(1.50g，4.00mmol,1.2当量)并将反应混合物在室温下搅拌12小时。蒸馏出DMF并将残余物用水(30mL)稀释，用CH2C12(3x50mL)萃取含水层。用NaHCO3水溶液(30mL)、HC1水溶液(30mL)、盐水萃取合并的有机层，干燥(Na2S04)，过滤并在真空中浓缩，将粗制产物2Sc(2.5g，69%)不经纯化用于进一步的环化作用。用干燥的N2将化合物25c(100mg,0.11mmol)的无水DMF(10mL)溶液脱气并用Cs2C03(170mg,0.5mmol，5.0当量)处理，在室温下搅拌12小时。蒸馏出溶剂DMF并将残余物用水(35mL)稀释，用CH2C12(3xl00mL)萃取。干燥(Na2S04)合并的有机层，过滤，在真空中浓缩并在真空中干燥过夜。其没有进一步纯化而用于光解除去Ru。将得自以上步骤的环化化合物溶于CH3CN中并在Raynot(入=350nm)中光解48小时。将该反应混合物在真空中浓缩并将残余物经层析(Si02,EtOAc/己烷2:1)纯化,得到25d，为褐色固体(29mg,46%);MS(FAB,NBA-G/TG-DMSO,m/z相对强度)580[(M+l)+,80],524(100)，418(40),462(30),452(20),313(60),253(20)。步骤D:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage133</formula>将酯25d(150mg,0.26腿ol)在THF(3mL)、CH3OH(3.0mL)和H20(3.0mL)中的溶液用LiOH.H20(18mg,0.43mmol,1.65当量)处理并在室温下搅拌35分钟。将该反应混合物用浓HC1(13M,1mL)酸化并萃取进CH2Cl2(3x50mL)中。干燥(Na2S04)合并的有机层，过滤并在真空中浓缩得到酸25e，其没有进一步纯化直接用于偶合作用。步骤E:将酸25e(150mg,0.27mmol)的无水CH2C12(2.0mL)溶液用HOBt(62mg，0.40醒ol)和Htinigsbase(139mg,1.1mmol,4.0当量)处理。将该反应混合物冷却至0。C并用EDC1(53mg,0.34ramol,1.25当量)处理，搅拌30分钟。将该反应混合物用胺F(88mg,0.29mmol,1.22当量)处理并贮存在水箱中12小时。将该反应混合物在真空中浓缩并用H20(50mL)稀释。用CH2C12(3x50mL)萃取含水层。用HC1水溶液(1M,3x20mL)、NaOH水溶液(1M,3x20mL)萃取合并的有机层，干燥(Na2S04)，过滤并在真空中浓缩得到无色固体25f(138mg)，将其用于氧化作用。134<image>imageseeoriginaldocumentpage135</image>将醇25f(140mg,0.143證ol)的CH2C12:THF(1:1，5.0mL)溶液用Dess-Martin试剂(121mg,0.42mmol,3.0当量)处理。将该反应混合物在室温下搅拌2小时并将该混合物在真空中浓缩。将残余物经层析(Si02,CH30H/CH2C12l:32)纯化，得到氧化产物25(57mg，41%),为无色固体。实施例26:式26化合物的制备:<image>imageseeoriginaldocumentpage135</image>200910006736.9步骤A:26将千基酯25(30mg,38.0Mmol)的CH3OH/THF(l:l,4.0mL)溶液用Pd/C(20mg,10%)处理并将氢气通入其起泡。加入一滴乙酸以加速还原作用。将该反应混合物通过硅藻土塞过滤并在真空中浓缩滤液。没有进一步纯化而对残余物26进^^分析。实施例27:式27化合物的制备BocHNn:PHNNH136步骤A:27a将酸25e(100mg,0.17画01)的无水01202溶液用HOOBt(41mg，0.26mmol)和Htinigsbase(91mg,0.70mmol，4.0当量)处理。将该反应混合物冷却至0。C并用EDC1(35mg,0.22mmol，1.25当量)处理，搅拌30分钟。将该反应混合物用胺D(71mg,0.22mmol,1.22当量)处理并贮存在水箱中12小时。将反应混合物在真空中浓缩并用H2O(30mL)稀释。用CH2C12(3x30mL)萃取含水层。用HC1水溶液(IM,30mL)、Na2COs水溶液(1M,30mL)萃取有机层，干燥(Na2S04)，过滤并在真空中浓缩得到27a无色固体(l19mg)，其用于氧化作用。MS(FAB),842[(M+l),100],765(20),735(10),657(20),575(10),492(10),464(20)，446(30)。HRMS对于C^HeoNsCho(M+l)+的计算值'.842.4339;实测值842.4336。137<formula>formulaseeoriginaldocumentpage138</formula>将醇27a(120mg,0.143mmol)的CH2C12:THF(1:1,3.0mL)溶液用Dess-Martin试剂(180mg,0.42mmol,3.0当量)处理。将该反应混合物在室温下搅拌2小时并将混合物在真空中浓缩。将残余物经层析(Si02，CH30H/CH2Cl2l:32)纯化，得到氧化产物27,为无色固体。MS(FAB,NBA-G/TG-DMSO,m々相对强度)，840[(M+l)+,50]。HRMS对于C46H58N501Q(M+l)+的计算值840.4184;实测值840.4199。实施例28:式28化合物的制备<formula>formulaseeoriginaldocumentpage138</formula>步骤B:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage138</formula>步骤A:AH将卡基酯27(40mg,47.0^mol)的CH3OH/THF(l:1,6.0mL)溶液用Pd/C(30mg，10%)处理并将氢气通入其起泡。加入一滴乙酸以加速还原作用。将该反应混合物通过硅藻土塞过滤并在真空中浓缩滤液得到28。实施例29:式29化合物的制备:29BocHNBocHN139将4-氯代苯基丙氨酸29a(1.5g,7.5mmol)在THF(20mL)和H20(20mL)中的溶液用NaOH(900mg,22.5mmol，3.0当量)处理并冷却至0°C。滴加入乙酰氯(707mg，9.00mmol,1.25mmol)的THF(10mL)溶液并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将该反应混合物用HC1水溶液(1M,10mL)酸化并用CH2C12(3x30mL)萃取。干燥(Na2S04)合并的有机层，过滤并在真空中浓缩得到29b，其没有纯化用于下一步骤中。步骤B:29b29c将N-乙酰基-4-氯代苯基丙氨酸29b(1.39g,5.75mmol)的二氯乙烷(118mL)溶液用CpRu(CH3CN)3PF6lb(2.5g，5.8mmol,1.0当量)处理并在回流下加热2小时。将该反应混合物冷却至0。C并过滤。在真空中浓縮滤液并溶于CH3CN(15mL)中，用Et2O(150mL)处理。经滗析所述醚将分离出的树胶状物分离并将残余物溶于CH2C12/CH30H(l:l,50mL)中，在真空中浓缩得到29c，为棕色泡沫(2.2g,69%)。MS:(电喷雾,m/z相对强度):408[(M-PF6)+,100〗。140将羧酸29c(2.0g，4.00mmol)的无水DMF(20mL)溶液用Httnigsbase(2.06g,16.0mmol，4.0当量，2.9mL)和HOBt(810mg,6.0mmol,1.5当量)处理。将该反应混合物冷却至0。C然后用EDC1(888mg,5.0mmol，1.25当量)处理并搅拌0.5小时。向该反应混合物中加入胺盐酸盐lg(1.48g,7.14mmol,1.2当量)并将该反应混合物在室温下搅拌12小时。蒸馏出DMF并将残余物用水稀释，将含水层用CH2C12(3x100mL)萃取。用NaHCO3水溶液p00mL)、HC1水溶液(100mL)、盐水萃取合并的有机层，干燥(Na2S04)，过滤并在真空中浓缩，将粗制产物29d(1.2g,38%)不经进一步纯化用于环化作用。步骤C:29c141步骤D:29d29e用干燥N2将氯代化合物29d(1.2g，1.5mmol)的无水DMF(120mL)溶液脱气并用Cs2CO3(2.4g,7.4mmol,5.0当量)处理，在室温下搅拌23小时。蒸馏出溶剂DMF并将残余物用水(300mL)稀释，用丙腈(3x100mL)萃取。干燥(Na2S04)合并的有机层，过滤并在真空中浓缩，在真空中干燥过夜。其没有进一步纯化用于光解除去Ru。(X=350nm)中光解48小时。将该反应混合物在真空中浓缩并将残余物经层析(Si02,EtOAc/己烷4:1)纯化，得到褐色固体29e(240mg,38%)。MS(FAB,NBA-G/TG-DMSO,w/z相对强度)，522[(M+l)+,100〗。步骤E:29e幼f将酯29e(200mg,0.42mmol)在CH3OH(5mL)、CH2C12(13mL)和H20(2.0mL)中的溶液用LiOH.H20(41mg,1.0画ol,2.4当量)处理并在室温下搅拌3小时。将该反应混合物用HC1水溶液(13M，1mL)142酸化并萃取进CH2Cl2(3x50mL)和EtOAc(3x50mL)中。干燥(Na2S04)合并的有机层，过滤并在真空中浓缩得到酸29f(178mg)，其没有进一步纯化直接用于偶合作用。将酸29f(卯mg,0.18mmol)的无水DMF(l.OmL)溶液用HOBt(45mg,0.33mmol,1.6当量)、Hiinigsbase(142mg,1.1mmol,5.0当量)和胺B(118mg,0.28mmol,1.47当量)处理。将该反应混合物冷却至0'C并用EDCl(63mg，0.33mmoU.6当量)处理并在(TC下搅拌20分钟、12小时。将该反应混合物在真空中浓缩并用H20(30mL)稀释。用CH2C12(3x30mL)和EtOAc(3x30mL)萃取合并的含水层。用NaOH水溶液(2M,30mL)萃取有机层，干燥(Na2S04),过滤并在真空中浓缩，得到无色固体29g(50mg,32。/。)，将其用于氧化作用。MS:(电喷雾，w々相对强度)883[(M+l)+，100〗，522(30)，394(60)。步骤F:0143将醇29g(50mg,60.0iumol)的CH2C12(2.0mL)悬浮液用Dess-Martin试剂(40mg,O.94mmol,2.0当量)处理。将该反应混合物在室温下搅拌3小时并将混合物在真空中浓缩。将残余物经层析(Si02,CH30H/CH2C12l:32)纯化，得到氧化产物29(41mg,80%)，为无色固体。MS:(FAB,w/z,相对强度)881[(M+l)+,100],825(170)，248(100)。实施例30:式30化合物的制备:3030将叔丁基酯29(23.0mg,26.0Mmol)的溶液用TFA/CH2C12(1:1，2.0mL)处理并在室温下搅拌4小时。使所述酯相对于基线消失，之后进行TLC(CH30H/CH2Cl2l:24)。完成脱保护后，将该反应混合物在真空中浓缩并将残余物反复用庚烷/CH2Cl2(4.0mL)处理，浓缩得到褐色固体30(13.0mg,100%)。MS:(电喷雾，w/z相对强度)825[(M+l)+,100]。实施例31:式31化合物的制备:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage145</formula>步骤A:将酸29f(150mg,0.29mmol)在无水DMF(4.0mL)、CH2Cl2(3.0mL)中的溶液用HOBt(58mg,0.44匪ol)和HMgsbase(149mg,1.1腿ol,4.0当量)处理。将该反应混合物冷却至O'C并用EDCl(82mg,0.44mmol,1.5当量)处理，搅拌30分钟。将该反应混合物用胺E(88mg,0.29mmol,1.22当量)处理并在室温下搅拌12小时。将反应混合物在真空中浓缩并用H20(30mL)稀释。用CH2C12(3x30mL)萃取含7Jc层。用HC1水溶液(lM，3x20mL)、NaOH水溶液(1M,3x20mL)萃取合并的有机层，干燥(Na2S04),过滤并在真空中浓缩，得到无色固体31a(56mg),其用于氧化作用。MS:(电啧雾，m/z相对强度)750[(M+l)+,20],663(10)，522(10),416(20)，247(30)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage147</formula>将醇31a(56mg,75jjmol)的CH2C12(5.0mL)溶液用Dess-Martin试剂(93mg,0.22mmol,3.0当量)处理。将该反应混合物在室温下搅拌4小时并将混合物在真空中浓缩。将残余物经层析(Si02，CH30H/CH2C121:19)纯化,得到氧化产物31(34mg,60%),为无色固体。MS:(电喷雾，附/z相对强度)748[(M+l)+，35]，692(5),279(100)。实施例32:式32化合物的制备:步骤A:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage148</formula>将叔丁基酯31的溶液用TFA/CH2C12(1:1，4.0mL)处理并在室温下搅拌4小时。使所述酯相对于基线消失，之后进行TLC(CH30H/CH2C121:24)。完成脱保护后，将该反应混合物在真空中浓缩并将残余物反复用庚烷/CH2Cl2(4.0mL)处理，浓缩得到32，为褐色固体。实施例33:式33化合物的制备步骤A:33a将酸33a(4.5g,25.0mmol)在二螺烷(30mL)和苯(80mL)中的溶液用BnOH(8.0g,74謹ol，3.0当量)和TsOH.H20(713mg,3.75謹ol，10mol%)处理。当用迪安-斯达克装置分离水时，将该反应混合物在回流下加热5小时。将该反应混合物在真空中浓缩并将残余物经层析(Si02，EtOAc/己烷3:7)纯化，得到千基酯33b，为无色油状物(4.2g,62%);Rf:0.22(EtOAc/己烷3:7);13CNMR(CH3OD,75MHz,S):175.1,158.2,139.7,130.3,129.5,129.3,121.7，117.4,114.6,73,1,67.6,41.6;MS(FAB,G/TG-DMSO,w/z,相对强度)351([M+DMSO]+,70),273([M+l]+,100)，255(20),227(30)，181(40);HRMS:对于C16H〗704(M+l)+的计算值272.1049;实测值272.1054。步骤B:O33b33c将苄基酯33b(3.8g,12.9mmol)的CH2C12(100mL)溶液用Et3N(1.55g，15.4腿ol,2.2mL,1.1当量)处理，冷却至-78。C(2-PrOH,干冰)并滴加入氯曱酸烯丙基酯(1.84g,15.36mmol,U当量)的CH2C12(10149mL)溶液。将该反应混合物加温至室温并用HC1水溶液(lM,100mL)稀释。用EtOAc(3x100mL)萃取反应混合物。用HC1水溶液(100ml,1M)、盐水(100mL)洗涤合并的有机层，干燥(MgS04),在真空中浓缩得到33c，其没有进一步纯化用于下一步骤中。Rf:0.43(EtOAc/Hex7:13);13CNMR(CH3OD,75MHz,S):174.8,162.5,155.0,152.5,140.3,137.1,132.8,130.3,129.6,129.5,129.4，123,2,120.3,119.4,72.7，70.1,67.7,41.2,29.9。步骤C:33c33d将Boc-环己基甘氨酸一水合物Id(6.02g,23.4mmol,2.0当量)的溶液溶于CH2C12中并干燥(MgS04)。将该混合物过滤并再将残余物与曱苯一起共沸干燥。将残余物溶于CH2Cl2中并用HOBt(4.73g,35.1腿ol,2.9当量)、EDC1(6.7g,35.1mmol,2.9当量)和Hiinigsbase(8.31g,64.3mmol,11mL)处理。将其在室温下搅拌30分钟，加入alloc保护的醇33c(4.3g,12.04mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌36小时并用HCl水溶液(lM,100mL)稀释，用EtOAc(3x100mL)萃取。用NaOH水溶液(lM,lOOmL)、盐水(IOOmL)萃取合并的有机层，干燥，在真空中浓缩并经层析(Si02,EtOAc/Hexl:4)纯化，得到缩肽(depsipeptide)33d(7.1g,100%)。Rf:0.18(EtOAc/Hex1:4);HRMS:对于C2sH3407(M-Boc)+的计算值496.2335;实测值496.2333。150步骤D:<image>imageseeoriginaldocumentpage151</image>将alloc-保护的缩肽33d(7.8g,13.0mmol)的无水THF(200mL)溶液在氮气氛下用双曱酮(3.27g,23.4mmol,2.0当量)和Pd(Ph3P)4(780mg,0.67mmol,5mol%)处理。将该反应混合物在室温下搅拌1小时并在反应物消失后进行TLC(EtOAc/Hex1:4)。将该反应混合物在真空中浓缩并将残余物经层析(Si02,EtOAc/己烷l:4)纯化，得到酚33e(5.2g,78%)，为无色泡沫状物。Rf:0.52(EtOAc/己烷3:7);&NMR(dpCD3OD,300MHz,S):7.4-7.19(m,5H),7.15-6.99(m,1H),6.68-6.55(m，4H),5.43-5.01(m,3H)，4.6(bs，2H)，4.11-4.00(m,IH)，3.18-2.91(m,2H)，1.80-1.55(bs，6H),1.39(s,9H),1.21-0.89(m,6H);13CNMR(CH3OD,75MHz,S,非对映异构体的混合物)171.6,169.4,169.3,161.1,157.1，157.0,137,2,136.9，135.4，135.3，129.2,129.1,128.2,128.2,128.0,120.3,120.1,116.0,115.9,113.6,94,8,79.3,73.6,73.5,66.7,66.6,58.6,58.5,40.0，39.9,36.8,29.1,27.7，27.3,25.5。MS(电喷雾，m/z，相对强度)1023([2M+1]+,20);512([M+l]+,20),412([M國Boc〗+,100),202(40)HRMS对于C24H3oN05(M-Boc)+的计算值412.2123;实测值412.2119。将Boc-保护的胺33e(5.2g,10.7mmol)的溶液与HC1(4M,二Pl烷,200mL，800腿ol,80当量)一起搅拌直至经TLC(EtOAc/Hex3:7)指示原料相对于基线消失。将该反应混合物在真空中浓缩并在高真空中干燥，残余物33f直接用于下一步骤中。&NMR(drCD3OD,300MHz,S):7.40-3.23(m,5H),7:07(q,1H,7=13Hz),6,77-6.6(m,3H)，5.33-5.41(m,1H),5.3-5.05(2AB,2H),3.99-3.85(m，1H)，3.35-22(m，2H),2.00-1.5(m,5H),1.50-0.80(m,6H);MS:(FAB,G/TG-DMSO,m々，相对强度)412([M+l]+,100);HRMS:对于。24113。:^051VT的计算值:412.2123;实测值:412.2139。将[CpRu(nS-4-氯代苯基丙酸)]PF6lc(2.0g,4.03mmol)的无水DMF(20mL)溶液用HOBt(835mg，6.0腿ol,1.5当量)和Hiinigsbase(2.06g,2.95mL,16mmol，4.0当量)处理。将该反应混合物冷却至0°C并用EDC1(1.15g,6.0mmol,1.5当量)处理。将该反应混合物在(TC下搅拌30分钟。将胺盐酸盐加入到在无水DMF(10mL)中的33f(1.8g,4.03mmol，1.0当量)中。将该反应混合物在室温下搅拌12小时并真空蒸馏出DMF。将残余物用HC1水溶液(lM,100mL)稀释并萃取到CH2C12(3x100mL)中。用NaHC03水溶液(3x50mL)、盐水(IOOmL)萃取合并的有机层，干燥(Na2S04)，过滤并在真空中浓缩得到棕色固体Wg(3.5g),其用于环化作用。MS:(电喷雾，w/z，相对强度)743[(M-PF6)+,100],304(60);HRMS:对于QsRnNOsClWRu(M-PF6)+的计算值744.1666;实测值744.1694。步骤G:33933h将ti-钌络合物33g(3.5g,3.93m迈ol)的无水DMF(300mL)溶液用干燥的氮气脱气并用Cs2C03(6.5g,19.95mmol,5.0当量)处理，在室温下搅拌16小时。将该反应混合物在真空中浓缩以除去DMF,用H20(100mL)稀释残余物。将该反应混合物用CH2C12(3x100mL)萃取。用盐水萃取合并的CH2Cl2层，干燥(Na2S04)，过滤并在真空中浓缩得到33h,其直接用于光解作用。MS:(电喷雾，m/z，相对强度)708[(M-PF6)+,100];HRMS:对于C38h4GNO6102Ru(M-PFs)+的计算值:708.1892;实测值708.1918。153步骤H:将环化的钌络合物33h(3.5g,3.9mmol)的CH3CN(60mL)溶液脱气并在石英管中在X-350nm下、分两批光解，各进行48小时。将所述反应混合物集中在一起并经层析(Si02,CH2C12/Et209/1)纯化，得到,环状缩肽，为非对映异构体的混合物(700mg,34。/。)。将这些非对映异构体经层析(己烷/CH2CyEt206:3:1)分离，得到两种非对映异构体33i(370mg,18%)和33j(216mg,11%)，为无色固体。Rf0.28(己烷:EtOAc3:2);[a〗D=25(c0.15,CHC13，20°C):IR(纯的，cm")3329(w),2960(m),2926(s),2854(s),1745(s),1680(m),1589(m),1506(m),1446(m),1365(w),1259(s),1099(m),1030(s)，800(s),752(m),698(w),619(w);!HNMR(CDC13，300MHz,S):7.36-7.23(m,5H),7.18-6.99(m,4H),6.81(d,1H,J=7.5Hz),6.74(dd，1H,7=2.7,5.7Hz)，6.30(S，1H),5.75(d,1H,7=7.2Hz),5.61(dd,1H,J=2.4Hz,5.4Hz),5.18,5.14(AB,2H，7=12.3Hz),4.23(dd，1H,J=4.2Hz,3.3Hz),3.26-3.01(m,2H),2.98-2.85(m,2H),2.68-2.64(m,1H),2,38-2.34(m,1H),1.96-1.51(m,6H),1.51-0.96(m，5H);13CNMR:(CDC13，75MHz,S,ppm)177.3,171.1,168.7,159.8,155.3,138.6,135,4,134.9,131.2,129.7,129.2,128.7，126.6:126.1,123.3,120.8,120.8，117.5,114.2,71.8,57.5,56.9，41.5,39.0,35.7,32.6，31.3,29.0，27.6,26.0，25.9。FAB(NBA/DMSO,m/e，相对强度):542[(M+l)+,100〗，514(15)，450(5),307(8),232(5)，154.1(17)，136(14);HRMS:对于C33H36N06(M+1)、々计算值542.2543;实测值542.2541;对于C33H35N06.0.5H20的CHN计算值C71.98%,H6.59%,N2.54%;实测值C72.56%,H7.05%，N2,63%。步骤I:33i33k将苄基酯33i(360mg,0.66mmol)的CH3OH/EtOAc(1:1，50mL)溶液用Pd(OH)2处理并氬化(50psi)12小时。将该反应混合物通过硅藻土塞过滤并将滤饼用CH30H/CH2C12(1:1,50mL)冲洗。在真空中浓缩滤液，将残余物33k(330mg)不经纯化用于偶合作用。Rf:0.58(CH30H/CH2C121:19);MS:(电喷雾，m/z'相对强度)827.2[(M+l)+,100〗，694(20),539(40),466(10),174(70);HRMS:对于C46H58N4O10(M+l)+的计算值827.4231;实测值827.4215。155<formula>formulaseeoriginaldocumentpage156</formula>将酸33k(165mg,0.31mmol)在无水DMF(5.0mL)和CH2C12(5.0mL)中的溶液用HOBt(83mg，0.46mmol,1.5当量)处理并冷却至0°C,加入Htinigsbase(159mg,1.23mmol，4.0当量，229jiL)。向该混合物中加入EDCl(89mg,0.47mmol,1.5当量)并将该反应混合物在(TC下搅拌1小时，用胺盐酸盐B(159mg，0.372mmo1,1.2当量)处理。将该反应混合物在室温下搅拌48小时并在真空中浓缩以除去DMF和CH2C12。将残余物用水稀释并用CH2C12(3x50mL)萃取。用HC17Jc溶液(1M,3X50mL)、NaOH水溶液(1M,3x50mL)和盐水(100mL)萃取合并的有机层并在真空中浓缩。不经进一步纯化而将残余物331氧化。步骤J:步骤K:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage157</formula>将醇331(330mg,0.4mmol)的CH2C12(5.0mL)溶液用Dess-Martin试剂(424mg,1.00mmol,2.5当量)处理。将该反应混合物在室温下搅拌1小时并用NaHC03水溶液(50mL)和Na2S203水溶液(50mL)稀释。将该反应混合物在室温下搅拌20分钟并用CH2C12(3x50niL)萃取反应混合物。用盐水(50mL)萃取合并的有机层，干燥(Na2S04)，过滤，在真空中浓缩并将残余物经层析(Si02，EtOAc/己烷1:1)纯化，得到酮酰胺33(180mg,55%)，为无色固体。Rf:0.63(CH3OH/CH2Cl21:19);MS:(电喷雾，w/z'相对强度)857.2([M+CH3OH]+，40),825.2([M+l]+,100)。实施例34:式34化合物的制备:34步骤A:34将氧化的缩肽33(160mg,0.2mmol)的无水CH2C12(5.0mL)溶液用TFA(5.0mL)处理并在室温下搅拌7小时。将该反应混合物在真空中浓缩并将残余物反复溶于CH3OH/CH2Cl2/己烷(l:1:1)中并在真空中浓缩数次，得到褐色固体34(133mg,86。/。)，将其在真空中干燥。MS:(电喷雾，附/z,相对强度)769.2[(M+l)+,100],481(5),269(25),191(90)。35步骤A:将酸33k(165mg,0.31mmol)在无水DMF(5.0mL)和CH2C12(5.0mL)中的溶液用HOBt(83mg,0.46mmol,1.5当量)处理并冷却至0°C,加入Hiinigsbase(159mg,1.23mmol,4.0当量，229[iL)。向所迷混合物中加入EDCl(89mg,0.47mmol,1.5当量)并将该反应混合物在O"C下撹拌l小时，用胺盐酸盐A(159mg,0.372mmol,1.2当量)处理。将该反应混合物在室温下搅拌48小时并在真空中浓缩以除去DMF和CH2C12。将残余物用水稀释并用CH2Cl2(3x50mL)萃取。用HCl水溶实施例35:式35化合物的制备:液(lM,3x50mL)、NaOH水溶液(lM,3x50mL)、盐水(100mL)萃取合并的有机层并在真空中浓缩。不经进一步纯化将残余物35a氧化。MS:(电喷雾,w/z，相对强度)798.2[(M+l)+,30],479(10),391(20)，180(100)。步骤B:将醇35a(190mg,0.24mmol)的CH2C12(10mL)溶液用Dess-Martin试剂(423mg,1,0mmol,4.0当量)处理并在室温下搅拌1小时。将该反应混合物用NaHC03水溶液(50mL)稀释并萃取到CH2C12(3x50mL)中。用饱和Na2S203水溶液、盐水(3x50mL)萃取合并的有机层，干燥(Na2S04),过滤，在真空中浓缩并经层析(Si02,丙酮/己烷3:7->1:1)纯化，得到氧化的产物3S(163mg,86。/。)，为无色固体。MS:(电喷雾,w々，相对强度)796[(M+l)+,100],508(20),269(20)。实施例36:式36化合物的制备:<image>imageseeoriginaldocumentpage161</image>在0。C下，将BH3.THF(1M,在THF中，100mmol,100mL，3.0当量)的溶液滴加入到烯(5.0g,35mmol)的THF(100mL)溶液中并搅拌l小时。将该反应混合物用乙醇(20mL)处理。当不再放出氢气后，将反应混合物用pH7緩冲液(IOOmL)和H2O2(30体积，100mL)处理。将该反应混合物在室温下搅拌4小时并用HC1水溶液(IOOmL)猝灭。用Et20(3x100mL)萃取含水层。将合并的醚层用NaOH水溶液(1M,100mL)、盐水(100mL)萃取，干燥(MgS04)，过滤，在真空中浓縮并经层析(Si02,EtOAc/己烷2/3)纯化，得到为无色液体的醇(2.9g,520/0)。将羟基化酯的THF/H20/CH3OH(100mL,1:1:1)溶液用LiOH.H20(2.1g,51.2mmol，3.0当量)处理并在室温下搅拌3天。将该反应混合物在真空中浓缩并将含水层用乙醚(2x40mL)萃取。将含水层酸化至pH1并萃取到EtOAc(3x50mL)中。用盐水(IOOmL)萃取合并的有机层，干燥(MgS04)，过滤，在真空中浓缩并将残余物36b用于步骤B中的偶合作用。THNMR(300MHz,CD3OD,5)3.53(t,2H,J=6.6Hz),2.72(t，2H,J=7.2Hz),1.59(t,2H,J=7,5Hz),1.5(t，2H,J=7.5Hz),1.38-1.33(m,6H)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage162</formula>将co-鋒基庚酸36b(1.01g,6.93mmol)的CH2C12(40mL)溶液用Hiinigsbase(1.97g,15.24画ol，2.2当量，2.81mL)和胺盐酸盐33f(3.1g,6.93mmol,1,0当量)处理。将所述反应混合物冷却至0。C并用PyBrOP(3.22g,6.93mmol,1.0当量)处理。将反应混合物在室温下搅拌过夜并将反应混合物在真空中浓缩。将残余物经层析(EtOAc/己烷1:1)纯化，得到缩肽36c(2.5g,66%),为无色粘性油状物。！HNMR(CD3OD，400MHz,S,ppm):8.07(t,1H),7.33-7.21(m,4H),7.09-7.02(m,1H),6.67-6.63(m,3H),5.25-5.06(m,1H)，5.08(q，2H,J=7.5Hz),4.36-4.33(m,1H),3.51(dd，2H,J=5.4Hz,0.9Hz),3.11-2.96(m,2H),2.22-2.17(m，1H),1.99-0.90(m,14H)。13CNMR:(CD3OD,75MHz,S,ppm,非对映异构体的混合物)172.1，172.0，171.8，171.1，170.9,169.5,169.3，157.1,157.0,137.3,137.0,135.3,135.2,129.2,129.1,128.2,128.0，127.9，120.3,120.0,116.0,115.9,113.6,94.8,73.6,73.4,66.8,66.7，60.2,57.3,39.6,36.7,28.9,28.0,25.6,20.9,19.5,13;MS(FAB,NBADMSO，w/z,相对强度)562[(M+Na)+,20],540[(M+l)+,100〗，412(15),240(50),112(80)。)162将苄基酯(242mg,0.47mmol)的曱醇(30mL)溶液用Pd/C(10%重量)处理并在Parr上、40psi下氬化14小时。将该反应混合物通过硅藻土垫过滤并在真空中浓缩滤液，得到无色固体36e(181mg,93%),其用于偶M用。步骤C:在氮气氛下，将醇36c(2.5g,4.63mmol)的无水CH2C12(50mL)溶液用三苯膦(2.67g,10.2mmol,2.2当量)处理并冷却至0'C。将该反应混合物用DEAD(1.61g,9.26mmol,2.0当量)在CH2C12(30mL)中处理。将反应混合物加温至室温并搅拌2小时。将其在真空中浓缩并经层析(Et20/Hexl:3)纯化得到环状产物36d(530mg,21%)，为无色固体。MS:(FAB,NBA,DMSO，w/z,相对强度)522[(M+l)+,100]，494(60)，268(20),222(20);HRMS对于C31H4oN06(M+l)+的计算值:522.2856;实测值522.2864。步骤D:163步骤E:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage164</formula>将水解的酸36e(167mg,0.39mmol)的CH2C12(4.0mL)溶液用HOOBt(95mg，0.58mmol,1.5当量)处理并冷却至0°C,加入Hiinigsbase(202mg,1.56mmol,4.0当量，288jjL)。向该混合物中加入EDCl(lllmg,0.58mmol,1.5当量)，将反应混合物在O'C下搅拌0.5小时，并用胺盐酸盐(186mg,0.47mmol,1.20当量)处理。将该反应混合物在水箱中贮存24小时并在真空中浓缩以除去DMF和CH2C12。将残余物用HCl水溶液(2M,30mL)稀释并用CH2C12(3x50mL)萃取。用HCl水溶液(2M，30mL)、NaOH水溶液(1M)、盐7Jc(2x50mL)萃取合并的有机层，干燥(MgS04)并在真空中浓缩。不经进一步纯化而将残余物36f(100mg)氧化。HRMS对于C42H6QNs09(M+l)+的计算值778.4391;实测值778.4399。36f36将醇36f(100mg,0.13mmol)的CH2C12(5.0mL)溶液用Dess-Martin试剂(100mg,0.0.23mmol,1.8当量)处理。将反应混合物在室温下搅拌2小时并用NaHC03水溶液(15mL)和Na2S203水溶液(15mL)稀释。将反应混合物在真空中浓缩并将残余物经层析(Si02，丙酮/己烷3:7)纯化，得到酮酰胺36(61mg,61%)，为无色固体。MS(FAB,NBA/DMSO,w/z相对强度)776[(M+l)+,100〗，731(10),598(25)，570(15),485(20),358(20),247(50)。步骤F:实施例37:式37化合物的制备:33J37a将卡基酯33j(230mg,0.42mmol)的CH3OH/EtOAc(1:1,50mL)溶液用Pd(OH)2处理并氲化(50psi)12小时。将该反应混合物通过硅藻土塞过滤并将滤饼用CH3OH/CH2Cl2(l:l,50mL)冲洗。将该反应混合物在真空中浓缩，不经纯化而将残余物37a(177mg,93%)用于偶合作用。二步骤B:37b将酸37a(177mg,0.33mmol)在无水DMF(5.0mL)和CH2C12(5.0mL)中的溶液用HOBt(88mg,0.49mmol，1.5当量)处理并冷却至(TC,加入Hiinigsbase(175mg,1.35mmol,4.0当量，251^L)。向该混合物中加入EDC1(95mg，0.49mmol，1.5当量)并将反应混合物在0°C下搅拌1小时，用胺盐酸盐B(170mg,0.39mmol,1.2当量)处理。将该反应混合物在室温下搅拌48小时并在真空中浓缩以除去DMF和CH2C12。将残余物用水稀释并用CH2C12(3x50mL)萃取。用NaOH水溶液(IM,2X50mL)、盐水(100mL)萃取合并的有机层并在真空中浓缩。不经进一步纯化而将残余物37b(315mg)氧化。步骤C:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage168</formula>将醇37b(315mg,0.4国ol)的CH2C12(5.0mL)溶液用Dess-Martin试剂(424mg，1.00mmol,2.5当量)处理。将反应混合物在室温下搅拌1小时并用NaHC03水溶液(50mL)和Na2S203水溶液(50mL)稀释。将该反应混合物在室温下搅拌20分钟并将反应混合物用CH2C12(3x50mL)萃取。用盐水萃取合并的有机层，干燥(Na2S04),过滤，在真空中浓缩并将残余物经层析(Si02，EtOAc/己烷l:l)纯化，得到酮酰胺37(210mg,66%),为无色固体。Rf:0.63(CH3OH/CH2Cl21:19);MS:(电喷雾，m/z相对强度)857([M+CH3OH〗+，33),825([M+l〗+,40),191(100)。实施例38:式38化合物的制备:将氧化的缩肽37(200mg,0.24mmol)的无水CH2C12(5.0mL)溶液用TFA(5.0mL)处理并在室温下搅拌7小时。将反应混合物在真空中浓缩并将残余物反复溶于CH30H/CH2CV己烷(1:1:1)中，在真空中浓缩数次，得到褐色固体38(130mg,87%),将其在真空中干燥。MS:(电喷雾，w厶相对强度)769([M+l]+,45),294(45),191(100)。步骤A:将酸22(40mg,0.06mmol)在CH2C12(0.5mL)和DMF(0.5mL)中的溶液冷却至0。C并用Me2NH.HC1(15mg,0.18mmol,3.0当量)和Hiinigsbase(31mg，0.24mmol，44fiL，4.0当量)处理。然后将反应混合物用PyBrOP(55mg,0.12mmol,2.0当量)处理并贮存在水箱中12小时。将该黄色反应混合物在真空中浓缩并将残余物经层析(Si02,EtOAc/己烷梯度3:2—l:0)纯化，得到不纯的产物，将其用(丙酮/己烷l:6)再纯化一次得到二曱基酰胺39，为无色固体(14mg,35%)。MS:(电喷雾，w/z相对强度)791[(M+l)+，50],391(40),276(50),176(100)。实施例40:式40化合物的制备:用于固相偶合反应的一般步骤在由底部安装有聚丙烯玻璃料的聚丙烯注射器筒构成的反应容器中进行合成。在标准固相技术下将Fmoc-保护的氨基酸偶合。在每一个反应容器中装载100mg起始Fmoc-Sieber树脂(大约0.035mmol)。将所述树脂用2mL份的DMF洗涂(2次)。通过用2mL哌啶的DMF溶液(20%v/v)处理20分钟除去Fmoc保护基团。用2mL份的DMF洗涤所述树脂(4次)。用0.12mmolFmoc-氨基酸、0.12mmolHATU和0.24mmolDIPEA在DMF(2mL)中进行偶合。振荡2小时后，对所述反应容器进行排液并将树脂用2mL份的DMF洗涤(4次)。用下面的Fmoc-氨基酸或封端基团重复偶合循环。方案10:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage172</formula><image>imageseeoriginaldocumentpage173</image>将Fmoc-Sieber树脂40a(0.035mmol)用2mL派"定的DMF溶液(20%v/v)处理20分钟，随后用2mL份的DMF洗涤(4次)。将DMF(2mL)加入到该树脂中，随后加入Fmoc-苯基甘氨酸(0.12mmol)、HATU(0.12mmol)和DIPEA(0.24mmol)。在室温下振荡2小时后，将所述树脂用2mL份的DMF洗涤(4次)，得到结合树脂的化合物40b。将结合树脂的化合物40b用2mL哌啶的DMF溶液(20%v/v)处理20分钟。随后用2mL份的DMF洗涤(4次)。将DMF(2mL)加入到该树脂中，随后加入Fmoc-甘氨酸(0.12mmol)、HATU(0.12mmol)和DIPEA(0.24mmol)。在室温下振荡2小时后，将所述树脂用2mL份的DMF洗涤(4次)得到结合树脂的化合物40c。将结合树脂的化合物40c用2mL哌啶的DMF溶液(20%v/v)处理20分钟，随后用2mL份的DMF洗涤(4次)。将DMF(2mL)加入到该树脂中，随后加入N-Fmoc-丙基异丝氨酸(O12mmol)、HATU(0.12mmol)和DIPEA(0.24mmol)。在室温下振荡2小时后，将所述树脂用2mL份的DMF洗涤(4次)得到结合树脂的化合物40d。将结合树脂的化合物40d用2mL派梵的DMF溶液(20%v/v)处理20分钟，随后用2mL份的DMF洗涤(4次)。将DMF(2mL)加入到该树脂中，随后加入Fmoc-赖氨酸(Dde)(0.12mmo1)、HATU(0.12mmol)和DEPEA(0.24mmol)。在室温下振荡2小时后，将所述树脂用2mL份的DMF洗涤(4次)得到结合树脂的化合物40e。将结合树脂的化合物40e用2mL哌咬的DMF溶液(20%v/v)处理20分钟，随后用2mL份的DMF洗涤(4次)。将DMF(2mL)加入到该树脂中，随后加入Fmoc-环己基甘氨酸(0.12mmol)、HATU(0.12mmol)和DIPEA(0.24mmol)。在室温下振荡2小时后，将所述树脂用2mL份的DMF洗涤(4次)得到结^^树脂的化合物40f。将结合树脂的化合物40f用2mL哌啶的DMF溶液(20%v/v)处理20分钟。用2mL份的DMF洗涤所述树脂(4次)得到结合树脂的化合物40g。将结合树脂的化合物40g用2mL份肼的DMF溶液(2%v/v)处理5分钟(3次)。将该树脂用2mL份的DMF洗涤(4次)得到结合树脂的化合物40h。在室温下将结合树174脂的化合物40h用在2mLDMF中的0.035mmol戊二酸、0.07mmolHATU和0.14mmolDIPEA处理16小时。将该树脂用2mL份的DMF(4次)、THF(4次)和DCM(4次)洗涤得到结合树脂的化合物40i。在室温下将结合树脂的4匕合物40i用0.14m迈olDess-Martinperiodinane和0.14mmolt-BuOH在2mLDCM中的溶液处理4小时。将该树脂用2mL份iPrOH在DCM中的溶液(20%v/v)、THF、THF的水溶液(50%v/v)(4次)、THF(4次)和DCM(4次)洗涤得到结合树脂的化合物40j。将结合树脂的化合物40j用4mLTFA的DCM溶液(2%v/v)处理5分钟。将滤液力。入到1mL的AcOH中并将该溶液经真空离心浓缩，得到化合物40(0.0117g,产率48%)。MS(LCMS-电喷雾)698.2MlT。实施例41-53:式41-53化合物的制备:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage176</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage177</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage178</formula>使用与实施例40的合成所示相似的固相法，合成化合物41-53。实施例54:式54化合物的制备<formula>formulaseeoriginaldocumentpage179</formula>向搅拌的Boc-环己基甘氨酸-OH(2.33g,9,07mmol)在DMF(20mL)和CH2Cl2(20mL)中的溶液中加入HOBT(1.48g,9.07mmol)、EDCl(1.91g,9.97mmol)和NMM(2.99mL，27.2mmol)。将该溶液在-20。C下搅拌IO分钟，随后加入H-Lys(Z)-OMe.HCl并在-2(TC下搅拌半小时，保存在水箱中过夜。然后将该溶液浓缩至干燥，之后用EtOAc、饱和NaHC03萃取。用H20、盐水洗涤合并的有机层，经Na2S04干燥并浓缩至干燥，得到白色固体(4.83g,MPT=534.1)。步骤B:向搅拌的54b(4,86g,8.76mmol)在MeOH(10mL)和H20(7mL)中的溶液中加入LiOH(70mg,11.4mmol)。形成白色沉淀并将该溶液在室温下搅拌过夜，然后浓缩至干燥。然后将该粗制物分配在CH2Cl2和水之间。分离有机层并用盐水洗涤，经Na2S04干燥，过滤并浓缩至干燥，得到54c(4.55g,MH"-520.1)。步骤C:在-2CTC下，向搅拌的54c(4.3g,8.27mmol)在DMF(40mL)和CH2C12(40mL)中的冷溶液中加入HOBT(1.35g,8.27mmol)、EDCl(1.74g,9.1mmol)和NMM(2.73mL,8.27mmol)。将得到的溶液在-20。C下搅拌10分钟，随后加入胺G(2.32g，8.27mmol)并在-20。C下搅拌半小时，保存在水箱中过夜。按照步骤A的后处理步骤得到54d(6.21g,MPT=746.2)。步骤D:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage181</formula>54e将54d(6.16g,8.26mmol)的4NHCl/二嚼烷(40mL)溶液在室温下搅拌1小时并浓缩至干燥,得到粗制产物54e(5.70g,产率100%,MfT=646.3)。步骤E:在-20。C下，向搅拌的Boc-Glu(OBn)-OH在DMF(25mL)和CH2C1:(25mL)中的冷溶液中加入HOBT(1.29g，7.92誰ol)、EDC1(1.66g,8.71mmol)和NMM(2.61mL,23.7mmol)。将得到的溶液在-20。C下搅拌10分钟，随后加入54e(5.4g,7.916mmol)并在-20。C下搅拌半小时，保存在水箱中过夜。按照步骤A的后处理步骤得到粗制产物(7.14g,产率93.5%)。步骤F:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage182</formula>向搅拌的54f(6,9g,7.15mmol)的无水EtOH(350mL)溶液中加入在50%H20(w/w)中的10%Pd/C(2.8g)。将得到的溶液用H2净化并在H2氛下搅拌过夜。然后将该溶液通过硅藻土过滤并用EtOH/CH2Cl2洗涤滤液，然后浓缩至干燥，得到白色固体(1.44g)。将该固体用25%H2OMeOH洗涤并过滤通过烧结的漏斗，然后冷冻并冻干得到54g(4.12g,产率77.5%,!^=743.2)。步骤G:<image>imageseeoriginaldocumentpage183</image>在-20。C下，向搅拌的54g(0.5g,6.7mmol)在DMF(50mL)和CH2C12(50mL)中的冷溶液中加入HOBT(0.219.g,1.34mmol)、EDCl(0.271g，1.41mmol)和NMM(0.296mL,2.69mmol)。将得到的溶液在-20匸下搅拌25分钟，然后保存在冰箱中过夜。将该溶液浓缩至干燥，随后用EtOAc、饱和NaHC03萃取。然后将合并的有机层浓缩至干燥，得到54h(254mg,MI^=725.2)。步骤H:<image>imageseeoriginaldocumentpage183</image>向搅拌的54h(0.2g,0.27腿01)的无水012(312(20mL)溶液中加入Dess-Martinperiodinane(0.234g，0.55腿ol)。将得到的溶液在室温下搅拌l小时。用半小时向该溶液中滴加入H2O(0.010mL)的CH2C12(20mL)溶液并再剧烈搅拌2小时。然后将该溶液与50%Na2S2O3/50°/c^&和NaHC03—起搅拌半小时。分离有机层并用水、盐水洗涤，经Na2S04干燥，过滤，浓缩至干燥并在硅胶上经柱层析纯化，用10%MeOH/CH2Cl2洗脱，得到54(17mg,62%，MKT=723.2)。HCV蛋白酶抑制活性试验分光光度试H-按照由R.Zhang等，^""/y/c"/说0c/2ew"",，(1999)268-275描述的方法(其公开通过引用结合到本文中)，对本发明化合物进行HCV丝氨酸蛋白酶的分光光度试验。基于显色酯底物的蛋白酶解试验适用于HCVNS3蛋白酶活性的连续监测。底物衍生于NS5A-NS5B接合序列(Ac-DTEDVVX(Nva)，其中X=A或者P)的P侧，其C-末端羧基用4种不同的显色醇(3-或4-硝基苯酚、7-羟基-4-曱基香豆素或4-苯基偶氮苯酚)中的一种酯化。下面提出这些新的分光光度酯底物的合成、表征以及应用于高通量筛选和HCVNS3蛋白酶抑制剂的详细的动力学评价。材料与方法材料用于与试验有关的緩冲液的化学试剂得自SigmaChemicalCompany(St.Louis，Missouri)。用于肽合成的试剂得自AldrichChemicals,Novabiochem(SanDiego,California)、AppliedBiosystems(FosterCity,California)和PerseptiveBiosystems(Framingham,Massachusetts)。肽由人工合成或者在型号431A的自动ABI合成仪(得自AppliedBiosystems)上合成。型号LAMBDA12的UV/VIS分光计得自PerkinElmer(Norwalk,Connecticut)和96孑LUV板得自Corning(Corning,NewYork)。预温热封闭剂得自USAScientific(Ocala,Florida)184斥口96孑L板3走渴^U寻自LablineInstruments(MelrosePark,Illinois)。具有单色光源的SpectramaxPlus微量滴定板读数器得自MolecularDevices(Sunnyvale,California)。酶制备:通过采用先前公开的方法(D.L.Sali等，5zoc/^m/对^,(1"8)3392-3401)制备重组异源二聚体(heterodimeric)的HCVNS3/NS4A蛋白酶(林la)。使用先前经氨基酸分析定量的重组HCV蛋白酶标准物，通过Biorad染色法测定蛋白浓度。试验开始前，采用BioradBio-SpinP-6预装柱，将酶储备緩冲液(50mM磷酸钠pH8.0,300mMNaCl,10%甘油，0.05%十二烷基麦芽糖苷和10mMDTT)交换为试验緩冲液(25mMMOPSpH6.5,300mMNaCl,10%甘油，0.05%十二烷基麦芽糖芬，5juMEDTA和5juMDTT)。底物合成和纯化:如由R.Zhang等(出处同上)报道的那样进行底物的合成并且使用标准方法(K.Barlos等，丄A饥，12(1991)，513-520),通过将Fmoc-Nva-OH固定到2-氯三苯曱基氯树脂上启动。随后，或者人工或者在型号431的自动ABI肽合成仪上，采用Fmoc化学装配肽。或者通过在二氯曱烷(DCM)中的10。/。乙酸(HOAc)和10。/。三氟乙醇(TFE)30分钟，或者通过在DCM中的2%三氟乙酸(TFA)10分钟，自树脂裂解N-乙酰化和充分保护的肽片段。共沸蒸发(或者经Na2C03水溶液反复提取)合并的滤液和DCM洗液，除去在裂解中所用的酸。经Na2S04干燥DCM相并且蒸发。采用标准酸-醇偶合方法(K.Holmber等，4ctoC&m.Sca"d,Ml(1979),410-412)装配酯底物。将肽片段溶于无水吡啶(30-60mg/ml)中，向其中加入10摩尔等价物的发色团和催化量(0.1eq.)的对甲苯磺酸(pTSA)。加入二环己基碳二亚胺(DCC，3eq.)以启动偶合反应。经HPLC监测产物形成并发现反应在室温下12-72小时后完成。真空蒸发吡啶溶剂并经用曱苯共滞蒸发进一步除去。用95%在DCM中的TFA将肽酯脱保护2小时并用无水乙醚提取3次以除去过量的发色团。经反相HPLC在C3或C8柱上纯化脱保护的底物，用30%-60%185乙腈(使用6个柱体积)梯度洗脱。HPLC纯化后总收率为约20-30%。经电喷雾离子质谱证实分子量。在干燥下，以干燥粉末形式贮存底物。底物和产物的波谱:在pH6.5的试验緩冲液中得到底物和相应显色团产物的波i普。采用多倍稀释，在最佳脱峰波长下，l-cm比色杯(340nm对3-Np和HMC,370nm对PAP和400nm对4-Np)中测定消光系数。最佳脱峰波长定义为在底物与产物之间产生吸收度最大相对差异的波长(产物OD-底物OD/底物OD)。蛋白酶试验:在96孔微量滴定板中，采用200j^l反应混合物在30。C下进行HCV蛋白酶试验。使试验緩冲液条件(25mMMOPSpH6.5,300mMNaCl,10%甘油，0.05%十二烷基麦芽糖苷、5EDTA和5一DTT)对ns3/ns4a异源二聚体最佳化(D.L.Sali等，出处同上)。通常，将150m1緩冲液、底物和抑制剂的混合物加入到各孔(dmso最终浓度，4%v/v)中并且在30。C下预孵育约3分钟。然后将50yl在试验緩冲液中预温热的蛋白酶(12nM，30。C)用于启动所述反应(最终体积200yl)。采用配有单色光源的SpectromaxPlus微量滴定板读数器(通过利用截断滤膜的板读数器可得到可以接受的结果)，在试验全程(60分钟)监测板在合适的波长(对于3-Np和HMC为340nm,对于PAP为370nm,对于4-Np为400nm)下吸光度的变化。在合适的波长下监测Nva与发色团之间的酯键的蛋白酶剪切，相对于作为非酶促水解的对照的无酶空白。于30倍底物浓度范围(-6-200pM)内进行底物动力学参数的评价。采用线性回归测定最初速度，并且采用非线性回归分析(MacCurveFit1.1,K.Raner),通过将数据拟合到Michaelis-Menten方程式中获得动力学常数。假设酶完全活化，以计算转化数(Xcat)。抑制剂和灭活剂的评价:按照竟争抑制作用动力学的重排Michaelis-Menten方程式V。化=l+[l]o/(Ki(l+[S]。/Km))(其中v。为未抑制的初始速度，Vi为在任何给出的抑制剂浓度([l]。)下，在抑制剂存在下的初始速186度，且[S]。为所使用的底物浓度)，通过V。/Vi对抑制剂浓度([1]。)作图，在固定的酶和底物的浓度下，可实验测定竟争性抑制剂Ac-D-(D-Gla)-L-l-(Cha)-C-OH(27)、Ac-DTEDVVA(Nva)-OH和Ac-DTEDVVP(Nva)-OH的抑制常数(Ki)。采用线性回归拟合所得数据，并将所得到的斜率1/(K《1+[S]。/Km)用于计算JQ值。在以上提及的表1中给出了所得到的本发明各大环化合物的&值，其中按Ki值的范围的顺序排列化合物。从这些试验结果，技术人员应该意识到本发明化合物作为NS3-丝氨酸蛋白酶抑制剂具有优良的用途。细胞生物效'J定方法按照由S.Agrawal等，"DevelopmentandCharacterizationofHepatitisCVirusSerineProteaseCell-basedTrans-CleavageAssay"(丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶细胞-基反式切割测定法的开发和鉴定)，HepatologySupplementtoVolume30(No.4,笫2部分,1999年10月)，AbstractNo.615(ProceedingsofAASLD50thAnnualMeeting,Dallas,Texas,1999年11月5-9日)(其/>开通过引用结合到本文中)描述的方法，对本发明化合物进行HCV丝氨酸蛋白酶的细胞生物测定。在用质粒(表达包含NS5A/5B切割识别序列的报道蛋白底物)和1BNS4A2W2GS-GSNS3^117K表达载体以及作为控制细胞毒性的内标蛋白的YFPnl共转染的HeWHuh7细胞中进行所述测定。通过全细胞溶胞产物的SDS-PAGE随后通过采用针对报道底物的单克隆抗体的蛋白质印迹检测，测量蛋白酶活性。通过在磷光成像4义上扫描免疫印迹进行底物切割的定量。材料质粒DNAspBFP-5A/5B-GFP:表达所述底物的报道基因编码融合蛋白，后者包括被衍生于NS5A/5B切割识别序列的25个氨基酸分开的N'末端蓝色焚光蛋白(BFP)结构域和C'末端绿色焚光蛋白(GFP)结构域。当经合适波长的UV光激发时，GFP和BFP均为分别发射绿光或蓝光的基本上均匀的自动荧光蛋白。在GFP的发色团中的四个氨基酸取代改变发射波长并把蛋白转变为BFP。采用识别两种蛋白的单克隆抗体，通过免疫学方法在细胞溶胞产物中可检测底物和得到的GFP和BFP产物。BFP-5A/5B-GFP报道基因包含BFP和GFP自动荧光蛋白编码序歹寸(QuantumBiotechnologies,Inc.,Montreal,Canada),所述序歹寸^皮NS5A/5B切割识别序列分开，在pQB125克隆载体(QuantumBiotechnologies,Inc.)的NheI和BamHI限制性内切才亥酸酶位点之间祐二克隆。融合蛋白的表达处于CMV正启动子-增强子的控制下。载体的牛生长激素p(A)序列向mRNA才是供多腺香酸化信号。NS5A/5B切割序列为SSGADTEDVVCCSMSYTWTGALVTP。用DNA测序来证实克隆。P1B002:lbNS4A21-32GS-GSNS3-81117K:将亚型lb蛋白酶克隆为在栽体pClneo中的CMV启动子后的Xbal/Notl片段。YFPnl:YFPnl购自CLONTECH(PaloAlto,California)。将笫三种质粒加入到转染提供控制细胞毒性的内标蛋白且不影响蛋白酶切割的百分率。在合适的抗生物素选择下，于LB培养基中，在DH5ot细胞(得自LifeTechnologies)中维持和繁殖质粒DNAs,并且采用QIAfilterPlasmidKits(Qiagen,Valencia^California)纯化。细胞培养在补充有10。/。胎牛血清(FCS)、2mM谷氨酰胺和100u/ml青霉素-链霉素(BioWhitaker)、2%NaHC03的Eagle氏极限必需培养基(EMEM;BioWhittaker,Walkersville,Maryland)中维持和繁殖Hela细胞。在补充有10。/。胎牛血清(FCS)、100u/ml青霉素-链霉素(BioWhitaker)188和5mlNEAA(100x;BioWhittaker)/L的Dulbecco改进的Eagle氏培养基(DMEM;BioWhittaker)中维持和繁殖Huh7细胞。SOP方法转染前一天以6x104细胞/孔的密度将Hela细胞接种在24孔板(Falcon3047板)中并于37。C下在5%C02孵育器中生长过夜。转染当天将质粒DNAs在不含有核酸酶的水中稀释至最终浓度0.05jug/jul(Promega,Madison,Wisconsin,分类号P119C)。合并0.75jugBFP-5A/5B-GFP并与0.175jugP1B002(0.23X)和0.02jug的YFPnl混合。用不含有FBS、谷氨酰胺和抗生素的EMEM使DNAs的最终体积达到60jul。按5jul体积/jug总DNA的比例加入S叩erFectReagent(Qiagen,目录号301305),并在室温下将混合物涡旋约10秒钟且孵育IO分钟以形成复合物。当形成复合物时，吸出细胞培养板中的生长培养基，并用1ml不含有Ca2+、Mg^的PBS(BioWhitaker)洗涤细胞1次。将350EMEM(补充有合适的补充物-完全培养基)加入到包含转染复合物的试管中并将混合物上下吸打2-3次。将全部体积转移至24孔培养板的一个孔中。在37。C下和5。/。C02中，将Hela细胞与转染复合物孵育约3小时。通过吸出从细胞中除去包含转染复合物的培养基。在约lmlPBS中洗涤细胞一次，将PBS吸出，加入495jul完全EMEM^加入5jul化合物/孔。在37。C下和5。/。C02中，将细胞孵育22-24hr。细胞溶胞产物的制备自每孔吸出培养基并用DPBS洗涤1次。将细胞收获在100pl189的lxTns-SDS-BME样品緩冲液(OWL分离系统，Portsmouth,NewHampshire,编号ER33)中，并且转移至孩t量离心管中。然后，将其煮淬3-5分钟以裂解细胞。在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶上以10]ul/孔进行加样。在10cmx10cm12.5%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(OwlScientific,编号OG-0125B)上，在tris-甘氨酸-SDS緩冲液(OwlScientific)中，于30mamp下经电泳将溶胞产物分离。4吏用前，将PVDF膜(Immobilon-P;.45/am孔径；Millipore,Bedford,Massachusetts)在100%甲醇中浸泡10秒钟，然后将印迹置亍蒸馏水中。采用半-干燥电印迹仪在每块凝胶108mamp下90分钟将蛋白转移至PVDF滤膜(0.45jum,Millipore)。经ECF蛋白质印迹的蛋白的检测(AmershamPharmaciaBiotech，LittleChalfont,England),目录号RPN5780)。在水箱中，于2-4。C下，通过在~10ml的包含0.05%吐温20、pH7.4的PBS(SigmaChemicals，St.Louis,Missouri,目录号3563)中的5%封闭剂(得自试剂盒)，将PVDF滤膜封闭过夜。次日，用包含0.05。/。吐温20的TPBS洗涤緩冲液短暂冲洗膜两次，然后在包含0.05%吐温20、pH7.4的PBS中洗涤三次，每次5分钟。在包含0.05%吐温20、pH7.4的PBS中，将膜在12ml抗-GFP单克隆抗体的1:3000稀释液中孵育30分钟(Clontech,PaloAlto，California),而在同时加入1%BSA(牛白蛋白，得自Sigma的目录号A-2153)以减少背景。用TPBS短暂洗涤膜两次，然后在TPBS洗涤緩冲液中洗涤三次，每次5分钟。将膜在12ml在TPBS中的1:600稀释抗荧光素-连接的抗小鼠Ig中孵育30分钟。用TPBS短暂洗涤膜两次，然后在TPBS洗涤緩冲液洗涤三次，5分钟。为用ECF底物放大信号，将膜在10ml的1:2500抗荧光素碱性磷酸酶缀合物中孵育30分钟。用TPBS短暂冲洗膜两次，然后在TPBS洗涤緩冲液中冲洗三次，5分钟。按照制造商的说明书(等分试样和冷冻)，制备ECF底物溶液，将膜孵育2-3分钟，排出过量的试剂，然后用滤纸吸干，风干9-10分190钟，然后扫描。扫描膜:将印迹放在Storm860磷光成像仪的玻璃上。设立蓝色化学发光，200像素大小，700PMT电压。在ImageQuant中打开文件并通过产生围绕代表底物(S)、产物(P)和内部对照物(IC)的条带的正方形定量化。底物的切割百分率可作为P/(S+P)x100测量。与包括在每个印迹上的药物对照品的重复试验相比，测量由药物引起的切割的抑制作用。在Excel中建立报告。一些^f匕合物的结果如下实施例36的^f匕合物EC5o=9,实施例35的化合物EC5C)=20Mm根据这些试验结果，本领域技术人员应该意识到本发明化合物作为NS3-丝氨酸蛋白酶抑制剂具有优良的用途。权利要求1.一种表现出HCV蛋白酶抑制活性的化合物，包括所述化合物的对映异构体、立体异构体、旋转异构体和互变异构体，以及所述化合物的药学上可接受的盐或溶剂合物，所述化合物选自具有下示结构的化合物2.—种用于治疗与HCV蛋白酶有关疾病的药用组合物，所述组合物包括治疗有效量的一种或多种权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物和药学上可接受的载体。3.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物在制备用于治疗与HCV蛋白酶有关疾病的药物中的应用。全文摘要本发明公开了新的具有HCV蛋白酶抑制活性的大环化合物以及制备这些化合物的方法。在另一实施方案中，本发明公开了包括所述大环化合物的药用组合物以及使用它们治疗与HCV蛋白酶有关疾病的方法。文档编号C07D273/00GK101580536SQ20091000673公开日2009年11月18日申请日期2001年4月17日优先权日2000年4月19日发明者A·J·普伦盖,A·阿拉萨潘,B·A·麦克基特里克,F·G·恩约罗格,K·X·陈,S·文卡特拉曼,V·M·基里亚瓦拉布汉,V·S·马迪森,覃天佑申请人:先灵公司