专利名称：一类茚并异喹啉类雌激素受体α调节剂的抗乳腺癌用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一类茚并异喹啉类的雌激素受体a调节剂及其抗乳腺癌作用，并同时在子宫等部位产生调节作用。
背景技术：
近年来，乳腺癌已在女性中成为排名第一的常见恶性肿瘤，抗乳腺癌药物研究具有重要的学术和现实意义。研究发现,乳腺癌的发生发展与雌激素受体(estrogen receptor,ER)有关。ER是一种核受体，包括ERa和ERP两种亚型。ERa和ERP的氨基酸序列在DNA结合域(DNAbinding domain,DBD)和配体结合域(ligand binding domain, LBD)的同源性分别为 96%和53%。在经典的雌二醇作用的靶组织如子宫、乳腺等部位有大量ERa分布，非经典的雌二醇作用的靶组织如前列腺、睾丸、卵巢等部位中ERa低表达或不表达，而ERP高表达。此夕卜，ERa和ERP的转录活性及其与协同因子的相互作用也往往不同。ERa与雌激素结合后通过结合祀基因上的雌激素应答元件(estrogen responseelement, ERE)调节基因表达或与其他核蛋白相互作用以改变基因的转录活性。许多证据表明ERa是一个很有吸引力的抗乳腺癌治疗靶标。雌激素长期过度刺激、ER a表达水平增高或转录激活活性增强是导致乳腺 癌的一个重要因素。首先乳腺癌中存在的ER主要是ERa，当正常乳腺组织变成致瘤物时，ER a的水平增加而ERP水平降低。第二，乳腺癌作为一种激素依赖性肿瘤，其生长和转移受雌激素调节，而雌激素可通过其受体活化转录上调促细胞生长基因的表达。ERa的调节剂能调节雌激素作用的机制是与雌激素竞争结合受体上的LBD，与ER a结合形成二聚体复合物，改变ER a的构象，从而阻断共激活因子与ERa的AF2区相互作用，阻断雌激素结合的ERa在乳腺癌细胞中的生长促进作用。目前很多公司、科研机构都开展了针对ERa调节剂的研究，对ER的分子生物学功能的研究文献日益增多，相关专利也不断出现。他莫昔芬(Tamoxifen)是首个癌症祀向治疗药物，用于治疗乳腺癌，1977年作为选择性雌激素受体调节剂获得FDA的批准用于绝经后晚期乳腺癌的治疗。但是它对子宫细胞有刺激作用，长期使用易导致子宫内膜增生或子宫内膜癌，另外还能导致血管舒张、静脉血栓等副作用。1997年礼来公司的雷洛昔芬获得FDA批准用于治疗骨质疏松，2007年FDA批准了其新适应证，用于降低绝经后骨质疏松女性患者的乳腺癌风险。但雷洛昔芬被警告可增加卒中相关死亡风险。雷洛昔芬是第二代选择性雌激素受体调节剂，可以预防乳腺癌而不增加患子宫内膜癌风险。托瑞米芬是他莫昔芬的结构类似物，目前已经在美国等国家被批准用于治疗浸润性乳腺癌，较他莫昔芬有更小的潜在具遗传毒性作用，引起继发性子宫内膜癌的风险要小于他莫昔芬。由于雌激素替代疗法治疗更年期综合征、骨质疏松、老年痴呆症和心血管系统等疾病时能够显著降低绝经后骨质疏松性骨折和冠心病的发生率，但是可能诱发乳腺癌和子宫内膜癌；为克服雌激素致癌变的不良反应采取雌、孕激素联合使用的性激素替代疗法仍可能增加乳腺癌的发生率，还能导致的子宫内膜癌的发生，这些不良反应促使人们寻找一种对子宫和乳腺表现出抗雌激素作用而对骨髂和心血管系统具有雌激素样作用的药物。因此研究抗乳腺癌作用的ER a调节剂是研究选择性雌激素受体调节剂的重要基础。
发明内容
本发明的目的在于开发一类雌激素受体a调节剂在乳腺癌治疗中的应用。本发明筛选的化合物为一批定向合成的可结合ER a靶点的化合物，利用荧光偏振方法建立的高通量筛选模型对该批化合物进行体外筛选，通过功能性验证寻找先导化合物和候选药物，同时对筛选所得活性化合物进行初步药效学和机制研究，找到一类茚并异喹啉类结构的ER a调节剂，为抗乳腺癌治疗提供候选药物，并同时在子宫等部位产生调节作用。该类化合物由中国药科大学药物化学实验室合成，其中待测化合物001672和001626合成方法可从专利向华，王天麟，肖红，尤启冬，姚瑶，李骁博，廖清江.茚并异喹啉酮衍生物、其制备方法及其医药用途 ZL 20091 0233991. 7 和 Hua Xiang, Tianlin Wang, Hong Xiao,Qidong You, Yao Yao, Xiaobo Li, QingjiangLiao.1ndenoisoquinolinone derivatives,manufacturing method and medical use thereof. W02011047515A1.中获得。本发明的技术方案为建立ERa受体靶向调节剂筛选模型，初筛，复筛，构效关系分析，得到一类具有抗乳腺癌作用的候选药物。具体步骤如下步骤一建立ER a调节剂高通量筛选模型。
步骤二 通过阳性药验证模型。步骤三使用ERa调节剂高通量筛选模型对待测化合物进行初筛、复筛，绘制待测化合物拮抗雌二醇与ERa结合曲线并测定IC5tl值。本发明提供上述化合物或其药学上可接受盐及其药用组合物的医疗用途，尤其是在预防、延缓或治疗ERa参与介导的疾病，特别是抗乳腺癌药物中的用途。以上提及的定向合成的化合物在乳腺癌治疗中的作用属于本发明的保护范围。
图1:阳性药4-0^3111( 1€611拮抗雌二醇与￡1^结合的抑制曲线图。图2 :待测化合物001672拮抗雌二醇与ERa结合的抑制曲线图。图3 :待测化合物001626拮抗雌二醇与ERa结合的抑制曲线图。图4 :待测化合物000394拮抗雌二醇与ERa结合的抑制曲线图。图5 :待测化合物000356拮抗雌二醇与ERa结合的抑制曲线图。
具体实施例方式以下结合
本发明的
具体实施例方式1.待测化合物拮抗雌二醇与ERa结合活性测试I)实验材料Estrogen Receptor-alpha(ER a ) Human Recombinant(Invitrogen，USA)、FluormoneTMES2 (Invitrogen, USA)、ES2Screening Buffer (Invitrogen, USA)、Estradiol为本室保存标准品，国产分析纯、Tamoxifen为中国药科大学药物化学实验室提供的标准品、384 孔黑色微孔板(Corning, USA)、枪头(Axygen, USA)。2)实验步骤 待测化合物每种精确称量，加入DMSO溶剂成母液，然后使用ES2SCreeningBuffer配制待测化合物溶液至所需浓度，初筛浓度约为lX10_3mol/L。 溶液配制 2X Fluormone ES2/ER a Complex :使用 ES2Screening Buffer 配制2XFluormone 混合液使最终 FluormoneTM ES2 浓度为 9nM，ER a 浓度为 30nM。 进行竞争性结合实验先在384孔黑色微孔板每孔加入50 U I化合物，再每孔加A 50ul 2XFluormone ES2与ER a混合溶液。同时加入50 U I雌二醇溶液(InM), 50 U I2X Fluornone ES2与ER a混合溶液作为100%竞争结合对照、加入50 Buffer, 50 u I2X Fluormone ES2与ERa混合溶液作为0%竞争结合对照以及加入100 Buffer作为空白对照。避光操作。室温(20-25°C )孵育90min。 酶标仪读取每孔偏振值。2.数据处理I)根据公式计算阳性药和待测化合物拮抗雌二醇与ERa结合的抑制率2)绘制阳性药4-0^&1110^作11拮抗雌二醇与￡1^结合曲线并测定IC5tl值，见图1o3)使用毫偏值和对数浓度值作图，绘制待测化合物拮抗雌二醇与ERa结合曲线并测定IC5tl值，见图2-5。复筛实验结果体外雌激素受体a调节剂筛选模型测得阳性药4-OH-Tamoxifen的IC5tl为0. 34nM，筛选得到的化合物可以根据母核的结构总结为一类，结构式与体外雌激素受体a活性筛选IC5tl如下
权利要求
1.下式化合物或其药学上可以接受的盐
2.权利要求1要求保护的式(I)的化合物或其药学上可以接受的盐用于制备雌激素受体α调节剂的用途，并同时在子宫等部位产生调节作用。
3.按照权利要求2的用途，作为雌激素受体α调节剂，用于治疗乳腺癌，并同时在子宫等部位产生调节作用。
全文摘要
本发明涉及式(I)的雌激素受体调节剂或其药学上可接受的盐。此类化合物可以与雌激素受体α结合，有效地产生抗乳腺癌等作用，并同时在子宫等部位产生调节作用。此类化合物具有很强的体外结合雌激素受体α的作用，可以有效的拮抗雌激素与雌激素受体α的结合，从而治疗雌激素过多引起的乳腺癌，并同时在子宫等部位产生调节作用。
文档编号C07D221/18GK103044325SQ201210541290
公开日2013年4月17日 申请日期2012年12月12日 优先权日2012年12月12日
发明者严明, 向华, 张陆勇, 苗靖姗, 唐智超 申请人:中国药科大学