一种UGT1A1基因突变位点检测试剂盒的制作方法

文档序号:12249643阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种UGT1A1基因突变位点检测试剂盒,其特征在于,所述的试剂盒是由DNA微列阵芯片及4种核苷酸探针部分组成,所述的DNA微列阵芯片是由丙烯酰胺修饰的PCR产物及其他成分固定于用丙烯基团修饰的玻片上制成的,其中,所述的丙烯酰胺修饰的PCR产物部分由4种引物PCR扩增获得,所述的引物序列分别如SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.4所示,所述的核苷酸探针部分序列分别如SEQ ID NO.5,SEQ ID NO.6,SEQ ID NO.7,SEQ ID NO.8所示。

2.根据权利要求1所述的UGT1A1基因突变位点检测试剂盒,其特征在于,所述的其他成分是由浓度为42%的丙烯酰胺、浓度为38%的丙三醇以及浓度为18%的过硫酸铵组成的混合溶液。

3.根据权利要求1所述的UGT1A1基因突变位点检测试剂盒,其特征在于,采用PCR产物及其成分固定于丙烯基团修饰的玻片上所制成的DNA微阵列芯片,用于与相应的探针进行杂交反应。

4.根据权利要求3所述的UGT1A1基因突变位点检测试剂盒,其特征在于,在25℃~30℃的温度条件下进行所述杂交反应。

5.根据权利要求1所述的UGT1A1基因突变位点检测试剂盒,其特征在于,所述的检测试剂盒还包括阳性质控品,所述的阳性质控品为UGT1A1增强元件PBREM基因片段及UGT1A1启动子区片段。

6.根据权利要求1所述的UGT1A1基因突变位点检测试剂盒,其特征在于,所述DNA微列阵芯片的制备步骤如下:

1)点样,将所述由丙烯酰胺修饰后的PCR产物经无水乙醇沉淀后与其他成分混合成PCR产物预聚合物,然后将所述的PCR产物预聚合物和空白对照预聚合物手动点样于丙烯基团修饰的玻片上,其中,所述的其他成分为由浓度为42%的丙烯酰胺、浓度为38%的丙三醇以及浓度为18%的过硫酸铵组成的混合溶液,所述的空白对照预聚合物为水和所述的其他成分混合成的预聚合物;

2)固定,点样完成后,将玻片置于潮湿的盛有TEMED 的容器中,在真空状态下当TEMED挥发到玻片表面时,丙烯基团之间会发生共聚合反应,从而将丙烯酰胺修饰的PCR产物固定于用丙烯基团修饰的玻片上得到所述的DNA微列阵芯片。

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