重组人脱氧核糖核酸酶I的制备方法与流程

文档序号:12097237阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种表达载体,其特征在于,以pPIC9载体为骨架,其中包括rHuDNase I基因。

2.根据权利要求1所述的表达载体,其特征在于,所述rHuDNase I基因连接有6×His标签;所述rHuDNase I基因的插入位点为Xho I与Not I酶切位点之间。

3.一种工程菌,其特征在于,其为转化权利要求1或2所述表达载体的酵母菌。

4.根据权利要求3所述的工程菌,其特征在于,所述酵母菌为毕赤酵母GS115。

5.重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ的制备方法,其特征在于,发酵权利要求3~4任一项所述的工程菌。

6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述发酵的培养基为BMDY培养基。

7.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述发酵包括培养和诱导的步骤;

所述培养的温度为30℃,发酵罐搅拌速度为150rpm~300rpm;培养至菌体为10%;

所述诱导的诱导剂为甲醇,温度为30℃,搅拌速度为200rpm~450rpm。

8.根据权利要求7所述的制备方法,其特征在于,所述诱导剂的加入采用流加方式,其占培养基体积的1%。

9.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述发酵过程pH值为6.0。

10.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述发酵后进行纯化,所述纯化采用镍柱层析。

11.权利要求5~10任一项所述制备方法制备的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ。

12.权利要求11所述的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ在制备治疗呼吸道疾病的药物中的应用。

13.一种治疗呼吸道疾病的药物,其特征在于,包括权利要求5~10任一项所述制备方法制备的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ。

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