1.一种用于筛选强迁移能力的脐带间充质干细胞的流式试剂盒,其特征在于:试剂盒组成:具体说明如下:
⑴Standard Mixture:将ZPH-MMA30K型30微米标准微球溶于1.5mL蒸馏水,与F-13838型15微米标准微球相混合,超声处理30s后振荡混匀,存放于4℃条件下,得到Standard Mixture;
⑵Isotype Mixture:将350μL的PE-IgG1k抗体、250μL的APC-IgG1k抗体、1150μL的FITC-IgG1k抗体、250μL的PerCP-Cy5.5-IgG1k抗体相混合,避光存放于4℃条件下,得到Isotype Mixture;
⑶Positive Mixture:将295μL的PE-CD105抗体、295μL的APC-CD73抗体、115μL的FITC-CD90抗体、295μL的PerCP-Cy5.5-CD166抗体相混合,避光存放于4℃条件下,得到Positive Mixture;
⑷Negative Mixture:将240μL的FITC-CD11b抗体、952μL的PE-CD34/FITC-HLA-DR抗体、952μL的PE-CD45抗体、952μL的PE-CD19抗体、952μL的PE-CD80抗体、952μL的PE-CD86抗体相混合,避光存放于4℃条件下。
2.根据权利要求1所述的用于筛选强迁移能力的脐带间充质干细胞的流式试剂盒,其特征在于:操作步骤如下:
(1)取1.5*106量的脐带间充质干细胞样本,经离心、洗涤,用PBS重悬后制成密度为5*106cells/mL的细胞悬液A;
(2)取4支一次性流式上样管,分别命名为STD管、ISO管、POS管、NEG管;
(3)向STD管加入0.5mL PBS,向ISO管、POS管、NEG管分别加入100μL细胞悬液A;
(4)向ISO管、POS管、NEG管分别加入20μL Isotype Mixture、10μL Positive Mixture、50μL Negative Mixture,在15℃条件下避光孵育30min;
(5)向ISO管、POS管、NEG管均加入2mL PBS,在15℃条件下200g离心3min后去除上清液,重复本步骤2次;
(6)将Standard Mixture超声处理30s后振荡混匀后取25μL加入至STD管,向ISO管、POS管、NEG管分别加入500μL PBS,将STD管、ISO管、POS管、NEG管振荡混匀;
(7)依照STD管、ISO管、POS管、NEG管的顺序上机检测。