一种冻存外周血单个核细胞的高效复苏方法与流程

技术特征：

1.一种冻存外周血单个核细胞的复苏溶液，其组分包括AIM-V培养基、血清、Nuclease ultrapure，所述复苏溶液中血清的体积分数为5-20％，Nuclease ultrapure的含量为0.1-1U/mL；余量为AIM-V培养基。

2.根据权利要求1所述的复苏溶液，其特征在于，所述复苏溶液中血清的体积分数为10％，和/或，所述复苏溶液中Nuclease ultrapure的含量为0.2U/mL。

3.根据权利要求1或2所述的复苏溶液，其特征在于，所述血清选自自体血清、胎牛血清、AB血清、血清替代物、中的一种。

4.权利要求1-3任一项所述的复苏溶液在冻存外周血单个核细胞的复苏中的应用。

5.一种冻存外周血单个核细胞的复苏方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将冻存的外周血单个核细胞转移至-80℃的冻存盒中，平衡0.5-5min后，再转入金属浴中融化细胞，所述金属浴温度为37-42℃；

2)将融化后的细胞转移至权利要求1-3任一项所述复苏溶液中洗涤至少2次，离心收集细胞。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述冻存的外周血单个核细胞的制备方法，包括以下步骤：

1)对获得的外周血单个核细胞进行清洗，纯化；

2)用冻存液重悬外周血单个核细胞，获得细胞悬液，使细胞含量达到2～3×10⁷个/mL；

3)将步骤2)所得细胞悬液分装；

4)将分装后的细胞悬液留样待检，将分装后的其余细胞悬液放入4℃预温的程序降温盒中，转移到-80℃冰箱暂时储存；

5)待留样的细胞悬液检测合格后，将步骤4)暂时储存的细胞悬液冻存入库，长期保存。