1.一种哺乳动物细胞表达启动子,其特征在于,其采用够在哺乳动物细胞中长效、高量表达外源基因的且包含较少碱基数目的核酸序列。
2.一种哺乳动物细胞表达启动子的制造和使用方法,其特征在于,所述长效哺乳动物细胞表达启动子核酸序列的制造和使用方法包括以下步骤:
步骤一,通过化学合成的方式合成引物一:5’-ACGGGGTACCTCACTCTTGGCACGGGGAAT-3’;引物二:5’-GGAAGATCTCATTGACGTCAATCAAAATGTCGTAACAACTCC-3’ ;
步骤二,通过PCR反应,获得哺乳动物细胞表达启动子序列;
步骤三,通过限制性酶切位点:BglII 和Kpn1,上述哺乳动物细胞表达启动子序列插入包含有ori、卡纳抗性基因、sv40、sv40 polyA、多酶切位点序列的质粒骨架中,得到质粒;
步骤四,转染入E.Coli大肠杆菌进行质粒扩增,提取质粒,进行测序;
步骤五,将新获得的质粒插入SEAP和IL10目的基因,通过CsCL密度梯度离心法提取纯净质粒;
步骤六,将10ug质粒融入生理盐水中,通过液动基因传递方式导入昆明小鼠的肝脏中;
步骤七,在第12小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、21天、28天、42天、56天、90天,通过小鼠尾静脉取血,提取血浆;
步骤八,通过碱性磷酸酶试剂盒,检测血液中的SEAP含量。
3.如权利要求2所述的哺乳动物细胞表达启动子的制造和使用方法,其特征在于,所述哺乳动物细胞表达启动子序列适合于所有哺乳动物细胞表达的质粒和病毒载体。
4.如权利要求2所述的哺乳动物细胞表达启动子的制造和使用方法,其特征在于,所述哺乳动物细胞表达启动子为人源序列。
5.如权利要求2所述的哺乳动物细胞表达启动子的制造和使用方法,其特征在于,所述哺乳动物细胞表达启动子为短转录因子结合位点。