本发明涉及食品技术领域，尤其是涉及一种制备长链多不饱和脂肪酸磷脂的方法。
背景技术：
磷脂是含磷酸根的类脂化合物总称，是细胞膜的基本组成成分，是重要的生命物质。多不饱和脂肪酸具有促进胎儿发育、提高儿童智商、预防心血管疾病、降血脂、延缓衰老、预防老年性痴呆等生理功能。最近的研究表明，二十二碳六烯酸(dha)的生理功能因其在脂肪中的分子形式不同而不同，dha等n-3多不饱和脂肪酸在磷脂分子中比在甘油三酯分子中更利于人体消化吸收。因此，人们重视dha等n-3系列多不饱和脂肪酸(n-3pufa)与磷脂的双重作用。dha作为脂肪酸或其甲、乙酯及甘油酯容易氧化，而富含dha的磷脂则使其氧化稳定性增强，且磷脂分子形态可以原封不动地被细胞摄取，在细胞内分解为dha与磷脂，显示出增效作用，所以可以作为食品、化妆品、药品使用。
禽蛋蛋黄是一个非常复杂的体系，约占禽蛋重的26％-33％，蛋黄中含有丰富的脂肪，其中磷脂的组分占总脂的30％以上。与其它来源的磷脂相比，蛋黄不仅磷脂含量高，同时在组分组成和功能特性上表现出比大豆更好的特点，是优良的医用、食用的磷脂来源。蛋黄含有丰富的磷脂组分，在组成和功能上蛋黄磷脂比大豆磷脂有更多的优势。与大豆磷脂相比，蛋黄磷脂中的卵磷脂(pc)含量更高，达到了70％以上，为大豆磷脂的3倍，同时含有大豆磷脂中没有的神经鞘磷脂(sm)。已有研究表明，蛋黄磷脂中的高pc组成更有利于降低人体胆固醇含量。蛋黄磷脂含有较多的长链多不饱和脂肪酸(pufa)，研究显示，蛋黄磷脂脂肪酸中，高营养价值的pufa占30-40％，单不饱和脂肪酸(mufa)占20-25％，饱和脂肪酸(sfa)占45％。
现有技术大都仅涉及卵磷脂的制备，而对于长链多不饱和脂肪酸磷脂提取和制备、尤其是高含量的长链多不饱和脂肪酸磷脂提取和制备涉及较少。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种制备长链多不饱和脂肪酸磷脂的方法，本发明制备得到的产品中长链多不饱和脂肪酸磷脂的含量高。
本发明提供了一种制备长链多不饱和脂肪酸磷脂的方法，包括：
a)将禽蛋蛋黄经超临界co2萃取，得到脱去蛋黄油的脱油蛋黄粉；
所述萃取的温度为45～50℃；所述萃取的压力为26～50mpa；
b)将所述脱油蛋黄粉采用乙醇提取、浓缩、干燥，得到长链多不饱和脂肪酸磷脂。
优选的，步骤a)所述超临界co2萃取包括静态萃取和动态萃取；所述静态萃取的温度为45～50℃；所述静态萃取的压力为26～50mpa；静态萃取的时间为30～90min；所述动态萃取的温度为45～50℃；所述动态萃取的压力为26～50mpa；动态萃取的时间为15～60min。
优选的，步骤a)所述超临界co2萃取包括动态萃取；所述动态萃取的温度为45～50℃；所述动态萃取的压力为26～50mpa；动态萃取的时间为15～60min。
优选的，步骤b)所述乙醇为体积百分含量为80％～100％的乙醇。
优选的，所述脱油蛋黄粉与乙醇的质量比为1：(5～30)。
优选的，步骤b)所述提取为超声提取；所述超声的功率为50～900w。
优选的，所述提取温度为20℃～50℃；所述提取时间为1～3h。
优选的，所述禽蛋蛋黄为dha和epa总量在3％以上的禽蛋蛋黄粉。
优选的，步骤b)所述浓缩为减压浓缩；所述浓缩的温度为40～60℃；所述浓缩的真空度为-0.05～-0.1mpa；所述浓缩后的浓缩液为浓缩前浓缩液质量的1/5～1/50。
优选的，所述步骤b)所述干燥为真空干燥或真空冷冻干燥。
与现有技术相比，本发明提供了一种制备长链多不饱和脂肪酸磷脂的方法，包括：a)将禽蛋蛋黄经超临界co2萃取，得到脱去蛋黄油的蛋黄粉；所述萃取的温度为45～50℃；所述萃取的压力为26～50mpa；b)将所述脱油蛋黄粉采用乙醇提取、浓缩、干燥，得到长链多不饱和脂肪酸磷脂。本发明先采用超临界co2萃取脱除禽蛋蛋黄粉里面的蛋黄油，而后采用乙醇提取最后得到产品中总磷脂含量高，并且其中长链多不饱和脂肪酸磷脂含量高，本发明的方法简单，效果好。
具体实施方式
甘油c1和c2上的羟基被脂肪酸酯化，c3上的羟基被磷酸酯化，磷酸又与一极性醇(x—oh)连接，这就构成甘油磷脂。分子的非极性尾含有两个脂肪酸长链，甘油碳架上c1连接的常是饱和脂肪酸，其c2则常被不饱和脂肪酸占据。本发明所述的多不饱和脂肪酸磷脂，是指c1和c2上含有多不饱和脂肪酸的磷脂。
本发明提供了一种制备长链多不饱和脂肪酸磷脂的方法，包括：
a)将禽蛋蛋黄经超临界co2萃取，得到脱去蛋黄油的蛋黄粉；
所述萃取的温度为45～50℃；所述萃取的压力为26～50mpa；
b)将所述脱油蛋黄粉采用乙醇提取、浓缩、干燥，得到长链多不饱和脂肪酸磷脂。
本发明首先将禽蛋蛋黄经超临界co2萃取，得到脱去蛋黄油的蛋黄粉。
本发明的禽蛋优选为鸡蛋，包括但不限于鸭蛋、鹅蛋等。本发明对于所述禽蛋蛋黄的具体状态不进行限定，优选为禽蛋蛋黄粉。
本发明所述禽蛋蛋黄粉的来源不进行限定，可以为市售，也可以按照本发明的方法制备，优选具体为：
将禽蛋蛋黄杀菌后，喷雾干燥，得到禽蛋蛋黄粉；所述杀菌优选为巴士杀菌。
本发明的方法适用于所有的禽蛋的蛋黄粉中多不饱和脂肪酸磷脂的提取；优选采用禽蛋蛋黄粉为dha和epa总量在3％以上的禽蛋蛋黄粉。
本发明的禽蛋蛋黄经超临界co2萃取，优选为：将禽蛋蛋黄粉经超临界co2静态萃取和动态萃取，得到脱去蛋黄油的蛋黄粉。更优选具体为：将禽蛋蛋黄粉装入萃取釜中，通入压缩co2，控制压力，关闭萃取釜前后阀门，控制温度进行静态萃取；而后打开萃取釜阀门，通入压缩co2，控制压力，控制温度进行动态萃取。
本发明对于所述超临界co2萃取的萃取设备不进行限定，本领域技术人员熟知的即可，优选在超临界萃取仪即可。本发明的萃取反应优选在所述超临界萃取仪的萃取斧中进行。
本发明所述超临界co2萃取包括静态萃取和动态萃取；所述静态萃取的温度优选为45～50℃；更优选为46～50℃；最优选为47～50℃；所述静态萃取的压力优选为26～50mpa；更优选为28～48mpa；所述静态萃取的时间优选为30～90min；更优选为30～80min；最优选为30～70min；
所述动态萃取的温度优选为45～50℃；更优选为46～50℃；最优选为47～50℃；所述动态萃取的压力优选为26～50mpa；更优选为28～48mpa；所述动态萃取的时间优选为15～60min。
本发明也可以根据待提取物料的多少采用动态萃取的方式，此时，
所述超临界co2萃取包括动态萃取；所述动态萃取的温度优选为45～50℃；所述动态萃取的压力优选为26～50mpa；动态萃取的时间优选为15～60min。
采用上述萃取方式可以很好的去除蛋黄中的蛋黄油，采用本发明的静态萃取结合动态萃取的方式可以去除30％～45％的蛋黄油。
完成超临界co2萃取，得到脱去蛋黄油的蛋黄粉后，将所述脱油蛋黄粉采用乙醇提取，过滤，得到提取液。
优选具体为将所述蛋黄粉与乙醇混合，超声提取，过滤，得到提取液。
在本发明中，所述乙醇为体积百分含量优选为80％～100％的乙醇；更优选为85％～100％的乙醇；最优选为90％～100％的乙醇。
本发明对于所述乙醇的纯度和来源不进行限定，分析纯即可，市售即可。
所述蛋黄粉与乙醇的质量比优选为1：(5～30)；更优选为1：(7～30)；最优选为1：(10～30)。
混合后超声提取，本发明对于所述超声的具体仪器不进行限定，本领域技术人员熟知的即可；所述超声的功率优选为50～900w；更优选为100～900w；最优选为500～900w。
所述超声提取的温度优选为20℃～50℃；更优选为25℃～50℃；所述提取时间优选为1～3h。
超声提取后过滤，本发明对于所述过滤的具体方式不进行限定，本领域技术人员熟知的即可。
过滤后得到滤液，滤液经减压浓缩得到浓缩液。
本发明对于所述减压浓缩的具体仪器规格不进行限定，本领域技术人员熟知的即可。
在本发明中，所述浓缩的温度优选为40～60℃；所述浓缩的真空度优选为-0.05～-0.1mpa；所述浓缩后的浓缩液优选为浓缩前浓缩液质量的1/5～1/50。
得到浓缩液后，将浓缩液干燥，得到长链多不饱和脂肪酸磷脂。
在本发明中，所述干燥优选为真空干燥或真空冷冻干燥；更优选为真空冷冻干燥。
本发明对于所述真空干燥的具体参数和真空冷冻干燥的具体仪器和参数不进行限定，本领域技术人员熟知的即可。
本发明提供了一种制备长链多不饱和脂肪酸磷脂的方法，包括：a)将禽蛋蛋黄粉经超临界co2萃取，得到脱去蛋黄油的蛋黄粉；所述萃取的温度为45～50℃；所述萃取的压力为26～50mpa；b)将所述脱油蛋黄粉采用乙醇提取、浓缩、干燥，得到长链多不饱和脂肪酸磷脂。本发明先采用超临界co2萃取脱除禽蛋蛋黄粉里面的蛋黄油，而后采用乙醇提取最后得到产品中总磷脂含量高，并且其中长链多不饱和脂肪酸磷脂含量高，本发明的方法简单，效果好。
本发明优选采用如下方式对制备得到的长链多不饱和脂肪酸磷脂的结构和收率进行测定：
1、蛋黄和磷脂提取物中磷脂含量的检测方法：
标准曲线：以m(卵磷脂):m(脑磷脂)＝3:1配成混合脂标准品，(卵磷脂11.4mg、脑磷脂3.8mg用氯仿定容至50ml)，摇匀静置备用，按不同的浓度进行检测，得到硫氰亚铁铵法测定磷脂的标准曲线与回归方程，具体方法如下：分别取标准品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml用氯仿定容至3ml，加入2ml硫氰亚铁铵显色剂，充分震荡混匀后，在30℃水浴中放置30min，取下相液在475nm处测定吸光值。以标准浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，作出标准曲线。
本发明制备得到的长链多不饱和脂肪酸磷脂产品检测：取0.2g产品，用氯仿定容至50ml，取产品溶液0.1ml用氯仿定容至3ml，加入2ml硫氰亚铁铵显色剂，充分震荡混匀后，在30℃水浴中放置30min，取下相液在475nm处测定吸光值，将吸光值代入混合标准品的标准曲线即可得到蛋黄磷脂浓度，通过产品稀释倍数和样品质量换算，从而求得产品中磷脂含量。
2、磷脂中dha的测定
磷脂样品中dha、epa等多不饱和脂肪酸的测定：制备得到的长链多不饱和脂肪酸磷脂产品采用gb5009.168-2016食品安全国家标准食品中脂肪酸的测定。
为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的制备长链多不饱和脂肪酸磷脂的方法进行详细描述。
实施例1
富含长链多不饱和脂肪酸磷脂的鸡蛋蛋黄(dha、epa等总含量大于3％)为原料，装入超临界萃取仪萃取釜中，通入压缩co2，压力升至26mpa，关闭萃取釜前后阀门，温度控制至45℃，静态萃取30min；
静态萃取完成后，打开萃取釜前后阀门，通入压缩co2，保持压力26mpa，控制温度45℃，动态萃取15min，可以除去占蛋黄粉质量30.00％的蛋黄油；
完成超临界co2去除蛋黄油后，将脱油蛋黄粉与100％乙醇按1:5比例混合均匀，超声波(50w-900w)提取1小时，保持温度20℃，过滤，得到提取液；
将过滤液经减压浓缩，温度低于60℃，真空度为-0.05mpa～-0.1mpa，浓缩至提取液的1/50，得到浓缩液；
浓缩液进行真空干燥，得到长链多不饱和脂肪酸磷脂产品，含dha、epa等总长链多不饱和脂肪酸磷脂含量20.15％，总磷脂含量85.19％。
实施例2
富含长链多不饱和脂肪酸磷脂的鸡蛋蛋黄(dha、epa等总含量大于3％)为原料，装入超临界萃取仪萃取釜中，通入压缩co2，压力升至30mpa，关闭萃取釜前后阀门，温度控制至50℃，静态萃取60min；
静态萃取完成后，打开萃取釜前后阀门，通入压缩co2，保持压力30mpa，控制温度45℃，动态萃取60min，可以除去占蛋黄粉质量40.38％的蛋黄油；
完成超临界co2去除蛋黄油后，将脱油蛋黄粉与90％乙醇按1:20比例混合均匀，超声波(600w)提取2小时，保持温度30℃，过滤，得到提取液；
将过滤液经减压浓缩，温度低于60℃，真空度为-0.05mpa～-0.1mpa，浓缩至提取液的1/5，得到浓缩液；
浓缩液经真空冷冻干燥，得到长链多不饱和脂肪酸磷脂产品含dha、epa等总长链多不饱和脂肪酸磷脂22.34％，总磷脂含量87.45％。
实施例3
富含长链多不饱和脂肪酸磷脂的鸡蛋蛋黄(dha、epa等总含量大于3％)为原料，装入超临界萃取仪萃取釜中，通入压缩co2，压力升至45mpa，关闭萃取釜前后阀门，温度控制至50℃，静态萃取90min；
静态萃取完成后，打开萃取釜前后阀门，通入压缩co2，保持压力45mpa，控制温度50℃，动态萃取60min，可以除去占蛋黄粉质量44.98％的蛋黄油；
完成超临界co2去除蛋黄油后，将脱油蛋黄粉与90％乙醇按1:30比例混合均匀，超声波(900w)提取3小时，保持温度50℃，过滤，得到提取液；
将过滤液经减压浓缩，温度低于60℃，真空度为-0.05mpa～-0.1mpa，浓缩至提取液1/10，得到浓缩液；
浓缩液经真空冷冻干燥，得到长链多不饱和脂肪酸磷脂，含dha、epa等磷脂含量25.38％，总磷脂含量88.98％。
实施例4
富含长链多不饱和脂肪酸磷脂的鸡蛋蛋黄粉(dha、epa等总含量大于3％)为原料，装入超临界萃取仪萃取釜中，通入压缩co2，压力升至50mpa，关闭萃取釜前后阀门，温度控制至50℃，静态萃取90min；
静态萃取完成后，打开萃取釜前后阀门，通入压缩co2，保持压力50mpa，控制温度50℃，动态萃取60min，可以除去占蛋黄粉质量44.48％的蛋黄油；
完成超临界co2去除蛋黄油后，将脱油蛋黄粉与95％乙醇按1:10比例混合均匀，超声波(800w)提取3小时，保持温度40℃，过滤，得到提取液；
将过滤液经减压浓缩，温度低于60℃，真空度为-0.05mpa～-0.1mpa，浓缩至提取液的1/8，得到浓缩液；
浓缩液真空冷冻干燥，得到长链多不饱和脂肪酸磷脂，含dha、epa等磷脂含量28.48％，总磷脂含量87.46％。
比较例1
富含长链多不饱和脂肪酸磷脂的鸡蛋蛋黄粉(dha、epa等总含量大于3％)为原料，装入超临界萃取仪萃取釜中，通入压缩co2，压力升至26mpa，关闭萃取釜前后阀门，温度控制至45℃，静态萃取30min；
静态萃取完成后，打开萃取釜前后阀门，通入压缩co2，保持压力26mpa，控制温度45℃，动态萃取15min，可以除去占蛋黄粉质量30.00％的蛋黄油；完成超临界co2去除蛋黄油后，将脱油蛋黄粉采用夹带1％乙醇超临界co2萃取，保持压力30mpa，控制温度45℃，动态萃取120min，萃取液进行真空冷冻干燥，得到长链多不饱和脂肪酸磷脂产品，含dha、epa等总长链多不饱和脂肪酸磷脂含量20.16％，总磷脂含量80.13％。
比较例2
富含长链多不饱和脂肪酸磷脂的鸡蛋蛋黄粉(dha、epa等总含量大于3％)为原料，以料液比1:10的比例，加入95％乙醇水溶液，在45℃温度下提取120min，提取液经抽滤得到滤液，滤液经真空旋转蒸发(蒸发温度为50℃)，采用1:10丙酮冲洗，收集沉淀，并将沉淀经真空冷冻干燥，得到长链多不饱和脂肪酸磷脂产品，含dha、epa等总长链多不饱和脂肪酸磷脂含量19.38％，总磷脂含量78.56％。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。