一种可稳定保存的肺癌融合基因检测试剂盒的RNA质控品的制作方法

本发明属于基因检测领域，具体涉及一种可稳定保存的肺癌融合基因检测试剂盒的rna质控品。

背景技术：

肺癌是全世界范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，严重危害人类健康。2012年全球肿瘤流行病统计数据显示，全球每年的癌症新发病例约1410万例，死亡约820万例，其中，肺癌发病为182.5万例，死亡约159.0万，居首位例。肺癌分为非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer，nsclc)和小细胞肺癌，nsclc占全部肺癌的80％左右。染色体重排和基因重排是恶性肿瘤中常见的遗传学改变，2007年soda等首次在肺癌患者体内发现棘皮动物微管相关类蛋白4(eml4)基因与间变性淋巴瘤激酶(alk)的融合基因，该发现第一次证实了在nsclc中存在基因融合。alk融合基因作为一个新的癌基因参与nsclc的发展过程，其发生率约为5％，针对alk融合基因的靶向抑制剂吉非替尼、厄洛替尼、克唑替尼目前已经广泛应用于nsclc临床治疗。在nsclc中还发现ros1、ret融合基因。

在使用靶向抑制剂治疗肺癌前，融合基因筛查已经成为一项重要且必须的指标。美国国立综合癌症网络临床实践指南、欧洲肿瘤内科学会肺癌共识以及中国晚期非小细胞肺癌分子靶向治疗专家共识均明确建议：nsclc患者在接受治疗之前应先检测egfr、alk和ros1基因，根据基因状态决定相应的治疗策略，并建议在条件许可下同时进行三个基因的检测。

目前，检测肺癌驱动的融合基因的方法主要包括荧光原位杂交技术(fish)、免疫组织化学方法(ihc)和实时逆转录聚合酶链反应(rt-pcr)。基于上述方法已研发出了多种肺癌融合基因检测试剂盒，但是目前市面上并没有经济、有效、稳定和通用的肺癌融合基因检测试剂盒的质控品销售，且现有的rna质控品类产品多具有不稳定、易降解和不易保存等缺点，而质控品又是衡量和评估一款试剂盒检测准确性和稳定性等性能的重要方法和质量指标。

技术实现要素：

基于此，本发明的目的之一在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种可稳定保存的肺癌融合基因检测试剂盒的rna质控品，其制作成本低、性能稳定、易保存，可有效地监控人员操作、仪器状态以及试剂盒有效性等因素，极大地提高了肺癌融合基因检测的准确性和可靠性。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种可稳定保存的肺癌融合基因检测试剂盒的rna质控品，所述rna质控品包含以下组分：阳性参考品、阴性参考品和检测限参考品；

所述阳性参考品包含以下组分：所述肺癌融合基因rna、金精三甲酸铵盐、防腐剂和苯丁抑制素盐酸盐；

所述阴性参考品包含以下组分：非所述肺癌融合基因rna、金精三甲酸铵盐、防腐剂和苯丁抑制素盐酸盐；

所述检测限参考品包含以下组分：所述肺癌融合基因rna、非所述肺癌融合基因rna、金精三甲酸铵盐、防腐剂和苯丁抑制素盐酸盐，且所述肺癌融合基因rna占总rna的质量比为1～5％；

所述防腐剂选自甘氨酸、ε-聚赖氨酸或半胱氨酸。

优选地，所述阳性参考品、阴性参考品和检测限参考品中金精三甲酸铵盐、甘氨酸和苯丁抑制素盐酸盐的摩尔浓度为：金精三甲酸铵盐100～500μm、甘氨酸80～180mm和苯丁抑制素盐酸盐20～60nm。

优选地，所述阳性参考品、阴性参考品和检测限参考品中金精三甲酸铵盐浓度为200～400μm、甘氨酸浓度为90～110mm、苯丁抑制素盐酸盐浓度为30～50nm；更优选地，所述阳性参考品、阴性参考品、检测限参考品中金精三甲酸铵盐浓度为300μm、甘氨酸浓度为100mm、苯丁抑制素盐酸盐浓度为40nm。

优选地，所述阳性参考品、阴性参考品和检测限参考品中金精三甲酸铵盐浓度为100～500μm、ε-聚赖氨酸浓度为2～4mg/ml、苯丁抑制素盐酸盐浓度为20～60nm。

优选地，所述阳性参考品、阴性参考品和检测限参考品中金精三甲酸铵盐200～400μm、ε-聚赖氨酸浓度为2.5～3.5mg/ml、苯丁抑制素盐酸盐30～50nm；更优选地，所述阳性参考品、阴性参考品和检测限参考品中金精三甲酸铵盐浓度为300μm、ε-聚赖氨酸浓度为3mg/ml和苯丁抑制素盐酸盐浓度为40nm。

优选地，所述阳性参考品、阴性参考品和检测限参考品中金精三甲酸铵盐浓度为100～500μm、半胱氨酸浓度为5～10mm、苯丁抑制素盐酸盐浓度为20～60nm。

优选地，所述阳性参考品、阴性参考品和检测限参考品中金精三甲酸铵盐200～400μm、半胱氨酸浓度为5～10mm、苯丁抑制素盐酸盐30～50nm；更优选地，所述阳性参考品、阴性参考品和检测限参考品中金精三甲酸铵盐浓度为300μm、半胱氨酸浓度为7.5mm和苯丁抑制素盐酸盐浓度为40nm。

优选地，所述阳性参考品选自alk融合基因参考品、ros1融合基因参考品和ret融合基因参考品中的至少一种；

所述alk融合基因参考品包含以下组分：所述alk融合基因rna、金精三甲酸铵盐、防腐剂和苯丁抑制素盐酸盐；所述ros1融合基因参考品包含以下组分：所述ros1融合基因rna、金精三甲酸铵盐、防腐剂和苯丁抑制素盐酸盐；所述ret融合基因参考品包含以下组分：所述ret融合基因rna、金精三甲酸铵盐、防腐剂和苯丁抑制素盐酸盐。

优选地，所述阴性参考品选自bcr-abl融合基因参考品、aml1-eto融合基因参考品和cbfβ-myh11融合基因参考品中的至少一种；

所述bcr-abl融合基因参考品包含以下组分：bcr-abl融合基因rna、金精三甲酸铵盐、防腐剂和苯丁抑制素盐酸盐；所述aml1-eto融合基因参考品包含以下组分：aml1-eto融合基因rna、金精三甲酸铵盐、防腐剂和苯丁抑制素盐酸盐；所述cbfβ-myh11融合基因参考品包含以下组分：aml1-eto融合基因rna、金精三甲酸铵盐、防腐剂和苯丁抑制素盐酸盐。

优选地，所述阳性参考品中alk融合基因参考品选自alk-eml4、alk-kif5b、alk-klc1、alk-tfg、alk-tpr、alk-hip1、alk-strn、alk-dctn1、alk-sqstm1、alk-birc6和alk-cltc融合基因参考品中的至少一种；

所述ros1融合基因参考品选自ros1-cd74、ros1-slc34a2、、ros1-gopc、ros1-sdc4、ros1-tpm3、ros1-ezr、ros1-lrig3、ros1-kdelr2、ros1-lima1、ros1-msn、和ros1-tmem106b融合基因参考品中的至少一种；

所述ret融合基因参考品选自kif5b-ret和ret-ccdc6融合基因参考品。

优选地，所述阳性参考品中alk融合基因参考品选自alk-eml4、alk-kif5b和alk-tfg；

所述ros1融合基因参考品选自：ros1-slc34a2、ros1-cd74、ros1-ezr和ros1-sdc4；

所述ret融合基因参考品选自：ret-ccdc6。

上述阳性参考品，是发明人在工作中通过大量样本分析筛选后得出，以上述类型的融合基因作为阳性参考品，能够覆盖大部分的中国人群的肺癌类型，既有较好的参考效果，又能够降低成本。

本发明的另一目的，在于提供所述可稳定保存的肺癌融合基因检测试剂盒的rna质控品的制备方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为，一种可稳定保存的肺癌融合基因检测试剂盒的rna质控品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)阳性参考品的制备：①通过pcr扩增得到所述肺癌融合基因；②将所述肺癌融合基因和载体进行酶切，连接，转化感受态细胞，筛选获得含所述肺癌融合基因的阳性菌落并测序验证；③将测序结果正确的菌落进行超声诱导，制备假病毒溶液；④提取假病毒溶液的rna，加入金精三甲酸铵盐、防腐剂和苯丁抑制素盐酸盐，即得；

(2)阴性参考品的制备：①通过pcr扩增得到非所述肺癌融合基因；②将非所述肺癌融合基因和载体进行酶切，连接，转化感受态细胞，筛选获得含非所述肺癌融合基因的阳性菌落并测序验证；将测序结果正确的菌落进行超声诱导，制备假病毒溶液；④提取假病毒溶液的rna，加入金精三甲酸铵盐、防腐剂和苯丁抑制素盐酸盐，即得；

(3)检测限参考品的制备：①按步骤(1)所述方法制备得到所述肺癌融合基因rna；②按步骤(2)所述方法制备得到非所述肺癌融合基因rna；③将所述肺癌融合基因rna和非所述肺癌融合基因rna混合，使得所述肺癌融合基因rna占总rna的质量比为1～5％，加入金精三甲酸铵盐、防腐剂和苯丁抑制素盐酸盐，即得。

本发明还提供了所述可稳定保存的肺癌融合基因检测试剂盒的rna质控品在制备肺癌融合基因检测试剂盒中的用途。

本申请发明人发现，在rna质控品中添加金精三甲酸铵盐、甘氨酸和苯丁抑制素盐酸盐，能有效保护质控品中的rna，防止其降解，延长质控品的保质期。

相对于现有技术，本发明的有益效果为：(1)本发明提供的rna质控品中含有rna保护成分，各组分和用量是发明人通过大量的研究和分析得来的，可有效防止rna降解，使其更稳定，更易保存，延长产品的有效期；(2)本发明提供的肺癌融合基因检测试剂盒的rna质控品能有效监控试剂盒的准确性和稳定性，解决了试剂盒质量、性能评价的问题，保证肺癌融合基因筛查的准确性和可靠性，同时具有简捷、便利、使用成本低等优点；(3)本发明提供的肺癌融合基因检测试剂盒的rna质控品在保证检测试剂盒有效性的前提下，可监控人员操作和仪器状态等因素，进一步保证了检测结果的准确性。

附图说明

图1为实验组3的alk-eml4融合基因rna参考品在-80℃条件下保存2周后rna片段大小检测图。

图2为实验组3的alk-eml4融合基因rna参考品在37℃条件下保存2周后rna片段大小检测图。

图3为对照组1的alk-eml4融合基因rna参考品在-80℃条件下保存2周后rna片段大小检测图。

图4为对照组2的alk-eml4融合基因rna参考品在37℃条件下保存2周后rna片段大小检测图。

具体实施方式

为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

本发明肺癌融合基因检测试剂盒的rna质控品的一种实施例，包含阳性参考品、阴性参考品和检测限参考品。

所述阳性参考品包含alk融合基因参考品、ros1融合基因参考品和ret融合基因参考品。所述alk融合基因参考品包含alk-eml4、alk-kif5b、alk-klc1、alk-tfg、alk-tpr、alk-hip1、alk-strn、alk-dctn1、alk-sqstm1、alk-birc6和alk-cltc融合基因参考品；所述ros1融合基因参考品包含ros1-cd74、ros1-slc34a2、、ros1-gopc、ros1-sdc4、ros1-tpm3、ros1-ezr、ros1-lrig3、ros1-kdelr2、ros1-lima1、ros1-msn、和ros1-tmem106b融合基因参考品；所述ret融合基因参考品包含kif5b-ret和ret-ccdc6融合基因参考品。所述融合基因参考品分别含有相应的融合基因rna、金精三甲酸铵盐100μm、甘氨酸80mm和苯丁抑制素盐酸盐20nm。

所述阴性参考品包含bcr-abl融合基因参考品、aml1-eto融合基因参考品和cbfβ-myh11融合基因参考品。所述融合基因参考品分别含有相应的融合基因rna、金精三甲酸铵盐浓度为100μm、ε-聚赖氨酸浓度为2mg/ml、苯丁抑制素盐酸盐浓度为20nm。

所述检测限参考品包含alk-eml4、alk-kif5b、alk-klc1、alk-tfg、alk-tpr、alk-hip1、alk-strn、alk-dctn1、alk-sqstm1、alk-birc6、alk-cltc、ros1-cd74、ros1-slc34a2、、ros1-gopc、ros1-sdc4、ros1-tpm3、ros1-ezr、ros1-lrig3、ros1-kdelr2、ros1-lima1、ros1-msn、ros1-tmem106b、kif5b-ret和ret-ccdc6融合基因检测限参考品；所述融合基因检测限参考品分别包含相应融合基因rna、bcr-abl融合基因rna、aml1-eto融合基因rna、cbfβ-myh11融合基因rna、金精三甲酸铵盐浓度为100μm、半胱氨酸浓度为5mm、苯丁抑制素盐酸盐浓度为20nm，且所述融合基因rna占总rna的质量比为2％。

实施例2

本发明肺癌融合基因检测试剂盒的rna质控品的一种实施例，包含阳性参考品、阴性参考品和检测限参考品。

所述阳性参考品包含alk融合基因参考品、ros1融合基因参考品和ret融合基因参考品。所述alk融合基因参考品包含alk-eml4、alk-kif5b、alk-klc1和alk-birc6融合基因参考品；所述ros1融合基因参考品包含ros1-msn、ros1-ezr和ros1-tmem106b融合基因参考品；所述ret融合基因参考品包含kif5b-ret融合基因参考品。所述融合基因参考品分别含有相应的融合基因rna、金精三甲酸铵盐500μm、甘氨酸180mm和苯丁抑制素盐酸盐60nm。

所述阴性参考品包含aml1-eto融合基因参考品和cbfβ-myh11融合基因参考品。所述融合基因参考品分别含有相应的融合基因rna、金精三甲酸铵盐浓度为500μm、ε-聚赖氨酸浓度为4mg/ml、苯丁抑制素盐酸盐浓度为60nm。

所述检测限参考品包含alk-eml4、alk-kif5b、alk-klc1、alk-birc6、ros1-msn、ros1-ezr、ros1-tmem106b和kif5b-ret融合基因检测限参考品；所述融合基因检测限参考品分别包含相应融合基因rna、aml1-eto融合基因rna、cbfβ-myh11融合基因rna、金精三甲酸铵盐浓度为500μm、半胱氨酸浓度为10mm、苯丁抑制素盐酸盐浓度为60nm，且所述融合基因rna占总rna的质量比为1％。

实施例3

本发明肺癌融合基因检测试剂盒的rna质控品的一种实施例，包含阳性参考品、阴性参考品和检测限参考品。

所述阳性参考品包含alk融合基因参考品和ros1融合基因参考品。所述alk融合基因参考品包含alk-eml4、alk-kif5b、alk-klc1、alk-tfg、alk-tpr、alk-hip1、alk-strn、alk-dctn1、alk-sqstm1、alk-birc6和alk-cltc融合基因参考品；所述ros1融合基因参考品包含ros1-cd74、ros1-slc34a2、、ros1-gopc、ros1-sdc4、ros1-tpm3、ros1-ezr、ros1-lrig3、ros1-kdelr2、ros1-lima1、ros1-msn、和ros1-tmem106b融合基因参考品；所述融合基因参考品分别含有相应的融合基因rna、金精三甲酸铵盐400μm、甘氨酸110mm和苯丁抑制素盐酸盐35nm。

所述阴性参考品包含bcr-abl融合基因参考品、aml1-eto融合基因参考品和cbfβ-myh11融合基因参考品。所述融合基因参考品分别含有相应的融合基因rna、金精三甲酸铵盐浓度为400μm、ε-聚赖氨酸浓度为2.5mg/ml、苯丁抑制素盐酸盐浓度为35nm。

所述检测限参考品包含alk-eml4、alk-kif5b、alk-klc1、alk-tfg、alk-tpr、alk-hip1、alk-strn、alk-dctn1、alk-sqstm1、alk-birc6、alk-cltc、ros1-cd74、ros1-slc34a2、、ros1-gopc、ros1-sdc4、ros1-tpm3、ros1-ezr、ros1-lrig3、ros1-kdelr2、ros1-lima1、ros1-msn、和ros1-tmem106b检测限参考品；所述融合基因检测限参考品分别包含相应融合基因rna、bcr-abl融合基因rna、aml1-eto融合基因rna、cbfβ-myh11融合基因rna、金精三甲酸铵盐浓度为400μm、半胱氨酸浓度为8mm、苯丁抑制素盐酸盐浓度为35nm，且所述融合基因rna占总rna的质量比为5％。

实施例4

本发明肺癌融合基因检测试剂盒的rna质控品的一种实施例，包含阳性参考品、阴性参考品和检测限参考品。

所述阳性参考品包含alk融合基因参考品。所述alk融合基因参考品包含alk-eml4、alk-kif5b、alk-klc1、alk-tfg、alk-tpr、alk-hip1、alk-strn、alk-dctn1、alk-sqstm1、alk-birc6和alk-cltc融合基因参考品。所述融合基因参考品含有相应的融合基因rna、金精三甲酸铵盐300μm、甘氨酸100mm和苯丁抑制素盐酸盐40nm。

所述阴性参考品包含bcr-abl融合基因参考品、aml1-eto融合基因参考品和cbfβ-myh11融合基因参考品。所述融合基因参考品含有相应的融合基因rna、金精三甲酸铵盐浓度为300μm、ε-聚赖氨酸浓度为3mg/ml和苯丁抑制素盐酸盐浓度为40nm。

所述检测限参考品包含alk-eml4、alk-kif5b、alk-klc1、alk-tfg、alk-tpr、alk-hip1、alk-strn、alk-dctn1、alk-sqstm1、alk-birc6和alk-cltc检测限参考品；所述融合基因检测限参考品分别包含相应融合基因rna、cbfβ-myh11融合基因rna、金精三甲酸铵盐浓度为300μm、半胱氨酸浓度为7.5mm、苯丁抑制素盐酸盐浓度为40nm，且所述融合基因rna占总rna的质量比为3％。

实施例5

本发明肺基癌融合因检测试剂盒的rna质控品制备方法的一种实施例，包括以下步骤：

(1)阳性参考品的制备：①目的肺癌融合基因的制备：根据ncbi数据库中目的肺癌融合基因mrna序列，设计覆盖断裂点序列，合成目的肺癌融合基因。利用含有目的肺癌融合基因序列的dna为模板进行pcr扩增，引物序列如表1所示。将pcr产物进行琼脂糖凝胶电泳，对含有目的肺癌融合基因片段的条带切胶，用琼脂糖凝胶回收试剂盒进行目的肺癌融合基因的回收。②含目的肺癌融合基因的质粒载体构建和验证：分别用限制性内切酶对目的肺癌融合基因片段和载体进行双酶切，将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，并切胶回收。将酶切产物进行连接，得到连接产物，然后将连接产物转化感受态细胞，涂在lb培养基平板上，37℃倒置培养，挑选单个白色阳性菌落。提取阳性菌落的dna，进行pcr验证，将pcr验证为目的肺癌融合基因阳性的菌落进行测序验证。③目的肺癌融合基因假病毒溶液的制备：将经测序确认的单个阳性菌落接种至lb液体培养基中，经培养后，离心，弃上清，留沉淀。加入超声缓冲液(50mmol/ltris-hcl，ph8.0；2mmol/ledta；体积分数为20％的甘油；100mmol/lnacl；体积分数为0.1％的tritonx-100)，进行冰浴超声处理，超声条件为：350w，间歇5s，超声5s，30个循环。然后将超声产物于6000rpm离心10分钟，收集上清，即为假病毒溶液。④质控品制备：将dnasei加入到假病毒溶液中，消化溶液中的dna。利用trizol提取法提取假病毒溶液的rna，然后加入金精三甲酸铵盐、甘氨酸和苯丁抑制素盐酸，即得。

(2)阴性参考品的制备：①非目的肺癌融合基因的制备：根据ncbi数据库中非目的肺癌融合基因mrna序列，设计覆盖断裂点序列，合成非目的肺癌融合基因。利用含有非目的肺癌融合基因序列的dna为模板进行pcr扩增，引物序列如表1所示。将pcr产物进行琼脂糖凝胶电泳，对含有非目的肺癌融合基因片段的条带切胶，用琼脂糖凝胶回收试剂盒进行非目的肺癌融合基因的回收。②含非目的肺癌融合基因的质粒载体构建和验证：分别用限制性内切酶对非目的肺癌融合基因片段和载体进行双酶切，将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，并切胶回收。将酶切产物进行连接，得到连接产物，然后将连接产物转化感受态细胞，涂在lb培养基平板上，37℃倒置培养，挑选单个白色阳性菌落。提取阳性菌落的dna，进行pcr验证，将pcr验证为非目的肺癌融合基因阳性的菌落进行测序验证。③非目的肺癌融合基因假病毒溶液的制备：将经测序确认的单个阳性菌落接种至lb液体培养基中，经培养后，离心，弃上清，留沉淀。加入超声缓冲液(50mmol/ltris-hcl，ph8.0；2mmol/ledta；体积分数为20％的甘油；100mmol/lnacl；体积分数为0.1％的tritonx-100)，进行冰浴超声处理，超声条件为：350w，间歇5s，超声5s，30个循环。然后将超声产物于6000rpm离心10分钟，收集上清，即为假病毒溶液。④质控品制备：将dnasei加入到假病毒溶液中，消化溶液中的dna。利用trizol提取法提取假病毒溶液的rna，然后加入金精三甲酸铵盐、ε-聚赖氨酸和苯丁抑制素盐酸，即得。

(3)检测限参考品的制备：①按步骤(1)所述方法制备得到目的肺癌融合基因rna；②按步骤(2)所述方法制备得到非目的肺癌融合基因rna；③将目的肺癌融合基因rna和非目的肺癌融合基因rna混合，使得目的肺癌融合基因rna占总rna的质量比为2％，加入金精三甲酸铵盐、半胱氨酸和苯丁抑制素盐酸盐，即得。

表1引物序列

实施例6

本实施例对发明所述rna质控品中rna的保存效果进行研究。

1、实验设计

以阳性参考品中alk-eml4融合基因参考品为例，研究本发明质控品中rna在不同保存条件下的保存效果。设置实验组1～6和对照组1～2，实验组1～6中的alk-eml4融合基因参考品分别含有alk-eml4融合基因rna、金精三甲酸铵盐、防腐剂(甘氨酸、ε-聚赖氨酸、半胱氨酸)和苯丁抑制素盐酸盐，对照组1～2中的alk-eml4融合基因参考品分别含有alk-eml4融合基因rna和depc水，具体如表1所示：

表1实验设计

2、实验方法

按实施例5所述方法制备得到含有alk-eml4融合基因的假病毒溶液并提取假病毒溶液的rna，平均分为8个组，按表1的设计向rna溶液中加入金精三甲酸铵盐、甘氨酸和苯丁抑制素盐酸盐或depc水，制备得到各组alk-eml4融合基因参考品。实验开始前对各组alk-eml4融合基因参考品进行rna浓度测定，并记录。然后将各组alk-eml4融合基因参考品保存在相应的条件下，2周后通过agilent2100生物分析仪分别测定各组alk-eml4融合基因参考品的rna片段大小和浓度，以此检测各组alk-eml4融合基因参考品的稳定性及降解情况。其中，检测到3100-3200bp的rna片段说明alk-eml4融合基因参考品没有完全降解，同时利用以下公式计算alk-eml4融合基因参考品的降解率：降解率％＝(实验前rna浓度-实验后rna浓度)/实验前rna浓度×100％。

3、实验结果

2周后，对各组alk-eml4融合基因参考品进行检测，实验组3、实验组6、对照组1和对照组2的rna片段大小检测结果分别如图1、2、3和4所示，具体实验结果如表2所示：

表2实验结果

由上述实验结果可知，本发明提供的alk-eml4融合基因参考品中包含金精三甲酸铵盐、防腐剂和苯丁抑制素盐酸盐，在-80℃(实验组1～3)和37℃(实验组4～6)时均能显著提高rna的稳定性，可有效防止rna在保存过程中的降解，其中，实验组3和实验组6中的alk-eml4融合基因参考品对rna的保存效果最好。在相同保存条件下，对照组1～2参考品中rna的降解率显著高于本发明alk-eml4融合基因参考品。尤其是在37℃保存条件下，对照组2中的rna溶液在2周后完全降解(降解率100％)，而本发明alk-eml4融合基因参考品中rna降解率在30％以下(实验组4～6)。本发明实施例3的alk-eml4融合基因参考品中的rna在2周内未出现降解情况，根据医疗器械加速老化实验确定有效期的基本原理和相关方法可知，其有效期为3年6个月。本发明其他类型阳性参考品、阴性参考品和检测限参考品中rna的保存效果与本发明相似，具体数据省略。

实施例7

本实施例以实施例1中的肺癌融合基因检测试剂盒的rna质控品为例，研究所述rna质控品的准确性。

1、检测方法

利用高通量靶向测序法对rna质控品进行分析，评价所述rna质控品的准确性。

2、检测结果

检测结果如表3所示：

表3rna质控品准确性检测结果

由上述实验结果可知，阳性参考品、阴性参考品和检测限参考品中的融合基因均能准确检测，且融合基因类型完全符合。说明本发明提供的参考品准确率为100％。对实施例2～4中rna质控品的检测结果与实施例1相同，准确率均为100％，详细数据省略。

实施例8

本实施例以实施例1中的肺癌融合基因检测试剂盒的rna质控品为例，研究所述rna质控品的稳定性。

1、检测方法

利用高通量靶向测序法对随机抽取的三套不同生产批次的rna质控品进行分析。

2、检测结果

检测结果如表4所示：

表4三套不同批次的rna质控品稳定性检测结果

由上述结果可知，随机抽取的三套rna质控品的检测结果准确且融合基因型别完全一致，说明三套rna质控品之间的检测结果无差异，且检测结果完全正确。由于检测的三套rna质控品是随机抽取的，可推知其他rna质控品之间的检测结果也是一致的，说明本发明提供的rna质控品性能很稳定。且三套重复性参考品精密度符合变异系数(cv，％)不大于15.0。对实施例2～4中rna质控品的检测结果与实施例1相同，详细数据省略。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。