专利名称:扁蕾芴酮及其衍生物和它们的制备与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物医药化合物，具体地说是从湿生扁蕾全草中分离得到的一种新化合物(扁蕾芴酮)及其衍生物和它们在制备药物方面的用途。
背景技术：
湿生扁蕾(Gentianopsis paludosa Ma)属于龙胆科扁蕾属植物，藏药名称又叫机合斗，是一年生草本植物，主要分布在我国的西北地区。湿生扁蕾是全草入药，具有清热解毒的功效，治急性黄疸性肝炎、结膜炎、高血压、肠胃炎、腹泻、痔疮肿毒。藏医用全草治流行性感冒及胆病引起的发烧。用湿生扁蕾研制的扁蕾冲剂，在治疗小儿腹泻方面，疗效显著。
发明内容本发明的目的在于提供一种扁蕾芴酮新化合物及其衍生物和它们的制备与在制备药物方面的应用。
为实现上述目的，本发明利用现代分离技术和结构测定手段对湿生扁蕾进行化学成分研究过程中，从中分离得到了一种通式(1)的新化合物及其衍生物，并发现它们具有抗氧化、抗菌和平滑肌舒张的作用。
扁蕾芴酮及其衍生物，其化学结构通式如下式(1)， 式(1)其中R1、R2和R3可为H或-CH3。
其制备过程如下以湿生扁蕾(Gentianopsis paludosa Ma)全草为原料，经用75％乙醇水溶液回流提取得浸膏，浸膏悬浮在水中，依次用石油醚，氯仿，正丁醇反复萃取，得到正丁醇部分；正丁醇部分经80-100目的聚酰胺柱层析，再经硅胶柱层析，PTLC分离纯化，得到R1＝R2＝R3＝H的式(1)化合物。
所述扁蕾芴酮及其衍生物可在制备治疗高血压、肠胃炎、腹泻、流行性感冒药物中应用；具有式(1)化学结构通式的化合物也可作为食品抗氧化剂、植物杀菌剂，及药物中的钙离子拮抗剂。
本发明具有如下优点1)用本发明提供的方法对化合物A进行提取分离，简单方便，容易操作。
2)本发明化合物A结构新颖，为新化合物，药效高，可做为先导化合物，来设计开发出新型高效药物。
3)本发明具有抗氧化、抗菌和平滑肌舒张等活性；可用于制备医疗药物，特别是食品抗氧化剂、植物杀菌剂及钙离子拮抗剂等方面的药物。
具体实施方式实施例1 化合物A的提取分离以湿生扁蕾(Gentianopsis paludosa Ma)全草(1.0kg)为原料，经用75％乙醇回流提取得浸膏237g。浸膏悬浮在水中，依次用石油醚，氯仿，正丁醇反复萃取，得到正丁醇部分69g。正丁醇部分(60g)经聚酰胺柱(80-100目)层析，水、30％乙醇、50％乙醇、75％乙醇、95％乙醇洗脱，分为5个部分。50％乙醇部分经硅胶柱(200-300目)层析，石油醚-乙酸乙酯(10∶1-0∶10)洗脱，TLC检测洗脱液中的化学成分，化学成分相同的合并，共合并为I-IV4个部分。部分II用PTLC(300-400目)分离纯化，展开剂为石油醚-乙酸乙酯(2.5∶1)，展开后薄板上出现两条黄色的色谱带，把其中颜色较深的条带刮下来，用甲醇溶解，过滤，得到R1＝R2＝R3＝H的式(1)化合物(即化合物A，7mg)。
实施例2 化合物A的结构鉴定化合物A，黄色粉末(甲醇沉淀)，体积浓度10％H2SO4乙醇溶液显色为黄色，FeCl3反应呈阳性，提示有酚羟基的存在。结合质谱(APIESMS273.0[M-1]-)、高分辨质谱(HREIMS274.0481)确定分子式为C14H10O6，由此推出分子的不饱和度为10。
红外光谱提示分子中存在羟基(3444cm-1)，烷基(2925，2854cm-1)，羰基(1654cm-1)以及苯环骨架(1600，1575cm-1)。1H-NMR谱显示2个芳香氢δ7.26，7.08(各1H，d，J＝9.0Hz)，提示苯环上有两个邻位氢；2个烯键氢δ5.89，5.79(各1H，s)，提示有两个独立的双键氢；δ3.78(3H，s)处的氢信号提示有甲氧基的存在。13C-NMR谱给出14个碳信号，δ178.0，173.5提示两个羰基的存在。因为分子的不饱和度为10，所以该分子的结构除了有1个苯环，2个双键，2个羰基外，还有2个环状结构。COSY谱显示Hδ7.26与7.08相关，进一步证实了这两个苯环氢相邻；HSQC谱显示的碳氢相关信号有Hδ7.26与Cδ122.7，δ7.08与112.6，δ5.89与94.6，δ5.79与99.9，δ3.78与60.9；在HMBC谱中，苯环氢δ7.08与双键氢δ5.89都与碳δ178.0远程相关，双键氢δ5.89，5.79与碳δ173.5，99.6都有相关，由此确定了另外两个环B，C的结构。此外，甲氧基的位置也由HMBC谱确定(氢δ3.78与碳δ145.2相关)。因此，该化合物的结构鉴定为4，4a，6-三羟基-5-甲氧基-2，9-芴二酮，命名为扁蕾芴酮(gentianopfluorenone)。
化合物A结构测定的试验数据mp 229-231℃；APIES-MS273[M-H]-，HREI-MS274.0481，分子式C14H10O6；IR(KBr)cm-13444，2925，2854，1654，1600，1580，1428，1380，1315，1282，1174，1058，819；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.25(1H，d，J＝8.8Hz，H-7)，7.06(1H，d，J＝8.8Hz，H-8)，5.89(1H，s，H-1)，5.79(1H，s，H-3)，3.78(3H，s，5-OCH3)；13C-NMR(100MHz，DMSO-d6)δ94.56(C-1)，173.49(2-C＝O)，99.90(C-3)，162.87(C-4)，99.56(C-4a)，146.72(C-4b)，145.23(C-5)，148.89(C-6)，122.69(C-7)，112.62(C-8)，115.00(C-8a)，157.19(C-8b)，178.03(9-C＝O)，60.94(-OCH3)。
实施例3 化合物A的抗氧化作用化合物A和DPPH(二苯三硝基苯肼)分别溶于乙醇中，配成所需浓度，化合物A为10-4M、5×10-4M、10-3M，DPPH为2×10-4M。然后在水解管中等体积混合，通入氮气以置换出其中的空气，立即旋紧盖子。避光反应1h后测定反应液的OD＝517，计算DPPH的清除效率，DPPH清除效率＝(A0-A1)×100％/A0，其中，A0DPPH溶液+有机溶剂的吸光度；A2有机溶剂+抗氧化剂溶液的吸光度，DPPH的清除效率分别为42％，65％，97％；结果表明化合物A对DPPH有清除作用，具有一定的抗氧化活性。
实施例4 化合物A的抗菌作用利用K-B纸片扩散法和生长速率法分别测定了化合物A的抗细菌作用和抗真菌作用，细菌菌种为为金黄色葡萄球菌、白菜软腐病菌、柑桔溃疡、枯草芽孢杆菌，真菌为玉米大斑病菌、番茄早疫病菌、瓜类枯萎病菌、辣椒疫霉、毛霉、烟草炭疽。结果表明化合物A对所测试的菌种都有抑制作用，且对辣椒疫霉的作用最强。
实施例5 化合物A对离体平滑肌的作用化合物A与阿拉伯胶粉研磨，加蒸馏水配成待试液(0.1，0.2，0.3mg/ml)。取不同剂量的(0.05ml，0.1ml，0.2ml)待试液分别用蒸馏水稀释到1ml，依次加入到悬挂有离体肠管的台氏液24ml中，通过生物信号系统(BL-410生物机能实验系统，成都泰盟科技有限公司)可观察到三个剂量的化合物A对离体平滑肌的自发收缩均有抑制作用，且其高剂量抑制作用显著(P＜0.01)。
权利要求
1.扁蕾芴酮及其衍生物，其特征在于其化学结构通式如下式(1)， 式(1)其中R1、R2和R3可为H或-CH3。
2.按照权利要求
1所述扁蕾芴酮及其衍生物，其特征在于其中通式中的R1＝R2＝R3＝H。
3.一种权利要求
2所述扁蕾芴酮的制备，其特征在于以湿生扁蕾全草为原料，经乙醇水溶液回流提取得浸膏，浸膏悬浮在水中，依次用石油醚，氯仿，正丁醇反复萃取，得到正丁醇部分；正丁醇部分经80-100目的聚酰胺柱层析，再经硅胶柱层析，PTLC分离纯化，得到R1＝R2＝R3＝H的式(1)化合物。
4.一种权利要求
1所述扁蕾芴酮及其衍生物在制备治疗高血压、肠胃炎、腹泻或流行性感冒药物中的应用。
5.一种权利要求
1所述扁蕾芴酮及其衍生物的应用，其特征在于具有式(1)化学结构通式的化合物可作为食品抗氧化剂。
6.一种权利要求
1所述扁蕾芴酮及其衍生物的应用，其特征在于具有式(1)化学结构通式的化合物可作为植物杀菌剂。
7.一种权利要求
1所述扁蕾芴酮及其衍生物的应用，其特征在于具有式(1)化学结构通式的化合物作为钙离子拮抗剂在药物中应用。
专利摘要
本发明涉及生物医药化合物，具体地说是扁蕾芴酮及其衍生物和它们的制备与应用，其化学结构通式如下式(1)，其中R
文档编号A61P9/00GK1990447SQ200510136733
公开日2007年7月4日 申请日期2005年12月28日
发明者杜昱光, 王焕弟, 谭成玉, 白雪芳 申请人:中国科学院大连化学物理研究所导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan