[0036] 从上述试验结果可以看出：以乙腈-水作为流动相，体积比为25:75时，出峰时间 合适，分离度好，实现了对二苯乙烯苷顺反异构体很好的分离。（乙腈-水作为流动相的分 析液相色谱图见图la、图Ib和图Ic)。
[0037] 实施例2 :何首乌中顺式和反式二苯乙烯苷对照品的制备
[0038] (1)何首乌中二苯乙烯苷粗提物的制备
[0039] 何首乌药材500g，粉粹，70 %乙醇超声提取2次，每次0. 5h，过滤，合并滤液，减压 浓缩至无醇味。浓缩液用等体积石油醚萃取3次，萃取后水相用氨水调pH至10,用等体积 乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯相减压浓缩，得提取物3g，冰箱中冷藏保存备用。
[0040] (2)半制备高效液相色谱分离纯化
[0041] 将步骤（1)的提取物用甲醇溶解，再用微孔滤膜（0.45 μπι)进行过滤，制得样 品液，采用半制备高效液相色谱进行纯化，色谱条件为：色谱柱为Shim-pack PREP-ODS 柱（20mmX250mm，15 μπι)，流动相为乙腈-7义，体积比25:75,流速10mL/min，检测波长为 320nm，进样量为200 μ L，收集色谱峰，采用高效液相色谱法检测其纯度，合并相同馏分，即 分离得到顺式和反式二苯乙烯苷对照品，顺式-二苯乙烯苷的纯度为98. 90%，反式-二苯 乙烯苷的纯度为99. 66%。
[0042] 重复进样，连续制备，制备液相色谱图见图2,图2中I为顺式-二苯乙烯苷，II为 反式-二苯乙稀苷。
[0043] 对制备的产物进行结构分析，结果如下：
[0044] 峰 1(图 2 中 I): ESI-MS m/z 405 [M-H] . 1H-NMR (DMSO, IOlMHz) δ Η 7.73(lH,d，J = 12.4Hz,H-a)，7.03(2H，d，J = 8.4Hz,H-2'，6'），6.61(2H，d，J = 8. 4Hz, H-3'，5，），6. 40 (1H, d, J = 12. 4Hz, H- β )，6. 15 (1H, d, J = 2. 4Hz, H-6)，6. 02 (1H, d，J =2. 4Hz，H-4)，4.40(1? d，J = 8.0Hz，H-l"），3.23-3. 70 (6H，m，H-2"，6"）.13C-NMR(DMS 0, 400MHz) δ c 157. 0 (C-4? ), 154. 4 (C-3), 150. 6 (C-5), 136. 8 (C-2), 132. 6 (C- β ), 130. 5(C-2'，6'），130.0 (C-l'），128. 0(C-a )，125. 2(C-1), 115. 4(C-3'，5'），106. 8(C-1"），106. 5 (C-6), 103. 2(C-4), 77. 7(C-5"），76. 7(C-3"），74. 5(C-2"），70. 2(C-4"），61. 3(C-6"）。 通过与文献（董丽华，郭盼盼，郭栋，闫文英，王春英.顺式二苯乙烯苷的制备及结 构鉴定，河北医科大学学报，2014, 35(2) :166-169)比较，鉴定为顺式-二苯乙烯苷 (Cis-2, 3, 5, 4' -tetrahydroxy stilbene_2-〇-β -D-glycoside)〇
[0045] 峰 2 (图 2 中 II) :ESI-MS m/z 405 [M-H] · 1H-NmiUDMSO, 101MHz) δ H 7.67(lH，d，J = 16.4Hz，H-a)，7.44(2H，d，J = 8.4Hz，H-2'，6'），6.88(lH，d，J = 16. 4Hz, H- β )，6. 74 (2H, d, J = 8. 4Hz, H-3'，5，），6. 54 (1H, d, J = 2. 8Hz, H-6)，6. 18 (1H, d，J =2. 8Hz，H-4)，4. 40 (1H，d，J = 8. OHz，H-l")，3. 68 (1H，d，J = 11. 2Hz，H-6")，3. 55 (1H，dd，J =11.2, 4. 4Hz，H-6"），3.23-3. 35 (4H，m，H-2"，5"）.13C NMR(DMSO, 400MHz) δ c 157.6 (C-4， )，155. 1(05)，151. 1(03)，136.8(02)，132.4(01)，129.0(01'），128.9(0)，128.6(C-2'，6 '），121. 0(C-)，115. 9(C-3'，5'），107. 2(C-1"），103. l(C-4)，101. 5(C-6)，77. 6(C-5"），76. 6( C-3")，74. 5 (C-2")，69. 8 (C-4")，61. 2 (C-6")。通过与文献（万近福，杨昌红，董明，韦建 荣.珍珠菜的化学成分研究，天然产物研究与开发，2011，23:59-62)比较，鉴定为反式-二 苯乙稀苷（Trans-2, 3, 5, 4, -tetrahydroxystilbene-2-Ο-β -D-glycoside) 〇
[0046] 上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的 限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化， 均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种何首乌中顺式和反式二苯乙烯苷对照品的制备方法，其特征在于，包括以下步 骤： (1) 将何首乌药材干燥，粉碎，加入体积浓度为60-80 %的乙醇溶液提取，乙醇溶液的 加入体积与何首乌药材的质量比为lg: (6-10)ml，提取液过滤，滤液浓缩至无醇味，得浓缩 液； (2) 向步骤（1)制得的浓缩液中加入石油醚萃取，萃取后的水相调节pH至9-11，加入 乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相浓缩，得提取物； (3) 将步骤（2)的提取物采用半制备高效液相色谱进行分离纯化，色谱条件为：色谱柱 为Shim-pack PREP-ODS柱，流动相为乙腈-水，体积比25:75,收集色谱峰，检测其纯度，合 并相同馏分，即分离得到顺式和反式二苯乙烯苷对照品。2. 如权利要求1所述的何首乌中顺式和反式二苯乙烯苷对照品的制备方法，其特征在 于，步骤（1)中，加入乙醇溶液进行超声提取，提取次数为2-4次，每次0. 5-1小时。3. 如权利要求1所述的何首乌中顺式和反式二苯乙烯苷对照品的制备方法，其特征在 于，步骤（2)中，石油醚的加入量与浓缩液的体积比为I :(1-2)。4. 如权利要求1所述的何首乌中顺式和反式二苯乙烯苷对照品的制备方法，其特征在 于，步骤⑵中，乙酸乙酯的加入量与浓缩液的体积比为I :(1-2)。5. 如权利要求1所述的何首乌中顺式和反式二苯乙烯苷对照品的制备方法，其特征在 于，步骤（2)中，萃取后的水相中加入氨水进行pH调节。6. 如权利要求1所述的何首乌中顺式和反式二苯乙烯苷对照品的制备方法，其特征在 于，步骤（3)中，在采用半制备高效液相色谱进行分离纯化前，将步骤（2)制备的提取物用 甲醇溶解，再用微孔滤膜进行过滤，制得样品液。7. 如权利要求1所述的何首乌中顺式和反式二苯乙烯苷对照品的制备方法，其特征在 于，步骤（3)中，纯度检测采用的方法是高效液相色谱法，色谱条件为：色谱柱为YMC-Pack (：18色谱柱，流动相为乙腈-水，体积比25:75，流速为1.〇11117111111，检测波长为32〇11111。
【专利摘要】本发明公开了一种何首乌中顺式和反式二苯乙烯苷对照品的制备方法，包括以下步骤：(1)将何首乌药材干燥，粉碎，加入乙醇溶液提取，提取液过滤，滤液浓缩至无醇味，得浓缩液；(2)向浓缩液中加入石油醚萃取，萃取后的水相调节pH至9-11，加入乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相浓缩，得提取物；(3)提取物采用半制备高效液相色谱进行分离纯化，色谱条件为：色谱柱为Shim-pack？PREP-ODS柱，流动相为乙腈-水，体积比25:75，检测波长为320nm，收集色谱峰，检测其纯度，合并相同馏分，即分离得到顺式和反式二苯乙烯苷对照品。本发明制备得到高纯度反式-二苯乙烯苷和顺式-二苯乙烯苷单体，为研究其生理活性试验提供了纯品。
【IPC分类】C07H1/08, C07H15/203
【公开号】CN105061524
【申请号】CN201510471926
【发明人】王岱杰, 王晓, 耿岩玲, 段文娟, 赵恒强, 于金倩, 闫慧娇
【申请人】山东省分析测试中心
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2015年8月4日