一种地衣芽孢杆菌及微生物菌剂和它们在防治植物重茬病中的应用_2

文档序号:9541045阅读:来源:国知局
为0. 01-0.Ig,H聚磯酸钢的含量为碳酸巧的含量为0. 1-0.Sg,淀粉的含量为0. 1-lg。
[0030] 本发明如上所述的微生物菌剂可W使用保藏编号为CCTCCNO.M2013495的地衣芽 抱杆菌度acillusIicheni化rmis),通过常规的微生物菌剂制备方法制备得到,例如,可W 将保藏编号为CCTCCNO.M2013495的地衣芽抱杆菌在液态细菌培养基中进行培养,然后将 培养液与辅料混合均匀。
[0031] 其中,细菌培养基可W为常规使用的细菌培养基,例如可W包括可溶性淀粉培养 基、LB培养基和玉米粉培养基中的至少一种。可溶性淀粉培养基可W含有10-30g/L的可 溶性淀粉、0. 5-2g/L的KN03、0. 1-lg/L的而册〇4、0. 1-lg/L的M拆〇4 和 0. 1-lg/L的化Cl; LB培养基可W含有5-20g/L的蛋白腺、3-7g/L的酵母提取物和3-7g/L的化Cl;玉米粉培 养基可W含有10-30g/L的玉米粉。优选情况下,所述细菌培养基含有30-250g/L的豆粉、 20-120g/L的淀粉、0. 2-4g/L的氯化钢、0. 3-lg/L的碳酸巧、0. 1-0. 8g/L的磯酸二氨钟和 3-15g/L的硫酸亚铁。
[0032] 其中,培养的过程可W包括平板划线活化、一级种子培养、二级种子培养和H级扩 大培养。例如,培养的过程可W包括:(1)将保存的斜面菌种用平板划线法活化;(2)从平板 上挑取单菌落,并扩大培养制成IO-SOmL的一级种子;(3)将一级种子按照5-30倍的扩大 培养倍数进行二级扩大培养制成二级种子;(4)将二级种子按照5-30倍的扩大培养倍数进 行H级扩大培养。
[0033] 其中,活化和各级培养的条件可W包括;温度为30-37°C,pH值为7. 2-7. 6,培养时 间为8-20h,通风量为S-IOm3A,需要揽拌或摇动时的转速为200-30化/min。
[0034] 其中,将培养液与辅料混合的条件可W包括;混合的温度可W为10-35C,混合的 时间可W为10-30分钟。其中,混合完成后可W静置1-10小时。其中,将培养液与辅料混 合后,可W将混合后的物料进行干燥、粉碎或制粒,W方便储藏、运输和使用。
[0035]其中,在本发明特别优选的一种实施方式中,该微生物菌剂还含有枯草芽抱杆菌, 所述枯草芽抱杆菌的保藏编号为CCTCCNO.M2013496 ;且所述地衣芽抱杆菌与所述枯草芽 抱杆菌的CRJ比为1 ;(0. 1-0.3)。该优选实施方式中的微生物菌剂可W将保藏编号为CCTCC N0.M2013495的地衣芽抱杆菌和保藏编号为CCTCCN0.M2013496的枯草芽抱杆菌在液态细 菌培养基中进行培养,然后将培养液与辅料混合均匀。例如,可W将所述地衣芽抱杆菌的二 级种子液和所述枯草芽抱杆菌的二级种子液混合,然后按照5-30倍的扩大培养倍数进行H级扩大培养;然后将培养液与辅料混合均匀。
[0036] 本发明还提供了如上所述的地衣芽抱杆菌或如上所述的微生物菌剂在防治植物 重巷病中的应用。
[0037] 其中,所述植物为茄科植物、葫芦科植物、锦葵科植物、醫薇科植物和葡萄科植物 中的至少一种。
[0038] 其中,所述茄科植物包括番茄、辣椒和茄中的至少一种;所述葫芦科植物包括黄 瓜、西瓜和甜瓜中的至少一种;所述锦葵科植物包括棉花、荷麻和大麻穫中的至少一种;所 述醫薇科植物包括苹果、沙果、海棠、梨、桃、李、杏、梅、楼桃、批把、山桂、草奪和树奪中的至 少一种;所述葡萄科植物包括葡萄。
[0039] 其中,在使用时,可W将如上所述的地衣芽抱杆菌的培养液或如上所述的微生物 菌剂喷洒到植物的根部±壤中,或者在移植前使用如上所述的地衣芽抱杆菌的培养液如上 所述的微生物菌剂廳根,或者将如上所述的微生物菌剂埋入到植物±壤中。
[0040]W下,通过实施例进一步举例详细说明本发明,但是本发明的范围并不限制于W 下实施例中。
[00川 实施例1
[0042] 本实施例用于说明本发明的地衣芽抱杆菌的培养和微生物菌剂的制备。
[0043]将保藏编号为CCTCCNO;M2013495 的地衣芽抱杆菌度acillusIicheniformis) 的斜面菌种在LB平板(含有lOg/L的蛋白腺、5g/L的酵母提取物、5g/L的化Cl和3g/L的 琼脂糖,pH值7. 4,W下相同)上划线,并在37C下培养15小时,从平板上挑取单菌落,接 种于25mL的LB液体培养基(含有10g/L的蛋白腺、5g/L的酵母提取物和5g/L的化Cl,pH 值7. 4,W下相同)中,在37°C下25化/min的摇床上培养15小时,得到一级种子,将20mL 一级种子加入500mL的LB液体培养基中,在37°C下25化/min的摇床上培养15小时,得到 二级种子,将化的二级种子加入50L的LB液体培养基中,在37°C下25化/min的揽拌下且 IOm3A的通风量下培养15小时,得到培养液。采用血球板计数法测得培养液中的菌体浓度 为l〇9c即/血。
[0044] 将1重量份的草炭、0. 05重量份的胶原、0. 005重量份的H聚磯酸钢、0. 3重量份的 碳酸巧和0. 5重量份的淀粉混合得到辅料。将5化上述培养液与50kg辅料混合,并且将混 合后的物料干燥至总重量为7化g,然后制粒为直径约8mm左右的颗粒,即得到本发明的微 生物菌剂。
[004引 对比例1
[0046] 从石家庄金太阳生物有机肥有限公司购得地欣复合微生物肥料DX-01,取该肥料 Ig,加入IOmL生理盐水,浸泡10分钟后匀浆,将匀浆液用纱布过滤,将滤液接种于LB平板 上,37C下培养1化后,挑取芽抱杆菌的单菌落,并且用16SrDNA法鉴别芽抱杆菌的分类, 得到一株地衣芽抱杆菌。
[0047] 将上述地衣芽抱杆菌的斜面菌种在LB平板(含有lOg/L的蛋白腺、5g/L的酵母 提取物、5g/L的化Cl和3g/L的琼脂糖,抑值7. 4,W下相同)上划线,并在37°C下培养15 小时,从平板上挑取单菌落,接种于25mL的LB液体培养基(含有lOg/L的蛋白腺、5g/L的 酵母提取物和5g/L的化Cl,抑值7. 4,W下相同)中,在37C下25化/min的摇床上培养 15小时,得到一级种子,将20mL-级种子加入500mL的LB液体培养基中,在37°C下25化/min的摇床上培养15小时,得到二级种子,将化的二级种子加入50L的LB液体培养基中, 在37C下25化/min的揽拌下且IOm3A的通风量下培养18小时,得到培养液。采用血球板 计数法测得培养液中的菌体浓度为l〇9CFU/mL。
[0048] 将1重量份的草炭、0. 05重量份的胶原、0. 005重量份的H聚磯酸钢、0. 3重量份的 碳酸巧和0. 5重量份的淀粉混合得到辅料。将5化上述培养液与50kg辅料混合,并且将混 合后的物料干燥至总重量为7化g,然后制粒为直径约8mm左右的颗粒,即得到本对比例的 微生物菌剂。
[004引对比例2
[0050] 从美国ATCC购得一株地衣芽抱杆菌,该地衣芽抱杆菌的货号为10716。
[0051] 将上述地衣芽抱杆菌的斜面菌种在LB平板(含有lOg/L的蛋白腺、5g/L的酵母 提取物、5g/L的化Cl和3g/L的琼脂糖,抑值7. 4,W下相同)上划线,并在37°C下培养15 小时,从平板上挑取单菌落,接种于25血的LB液体培养基(含有lOg/L的蛋白腺、5g/L的
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