HPLC纯化，冻干，得纯品；用氨 基酸组成分析等方法确证结构。
[0032]可选的，所述片段合成法包括以下步骤：
[0033] A.脱除树脂:在母体肽树脂Fmoc-CLP-19-CTC加入三氟乙醇裂解试剂，15-30°C反 应60-120min后过滤，以DCM、THF依次洗涤树脂，收集滤液，减压旋蒸到没有液体蒸出；加入 H2O析出白色固体后加入THF溶解，溶解后加饱和食盐水溶液进行分液，减压旋蒸THF层得白 色固体，真空干燥，得除去CTC树脂的全保护Fmoc-CLP-19-OH;
[0034] B.偶联amPEG:在全保护Fmoc-CLP-19-OH中加入DMF和THF，搅拌溶解后，加入体积 比4-6倍的HOBt，冰水冷却下加入体积比为4-8倍的DIC;搅拌，加入含有体积比1 -4倍的 amPEG的DMF溶液;撤除水浴，15-30°C搅拌18h后，置于25-40°C油浴搅拌反应，TLC跟踪反应 进程;反应结束后转入较大的圆底烧瓶，旋蒸除去THF，冷却后加入冷冻的无水Et 2O，搅拌后 静置;静置后抽滤并用无水Et2O洗涤，真空干燥获得产物;上述产物加入DCM，搅拌全溶后加 入冷冻无水Et 2O，搅拌后抽滤，无水Et2O洗涤，真空干燥，得到全保护Fmoc-CLP-19-amPEG;
[0035] 0.除去?111〇(3全保护?1]1〇(3-〇^：)-19-&11^ :^6，加/\^丨。61^(1;[116的0]\0：7溶液，25-40°〇油浴 搅拌反应，反应结束后转入较大的圆底烧瓶，加入冷冻的无水Et2O，搅拌并抽滤，无水Et2O洗 涤，真空干燥后加入EtOH，搅拌全溶后加入冷冻无水Et2〇，搅拌后抽滤，用无水Et2〇洗涤，真 空干燥，得到侧链全保护的CLP-19-amPEG;
[0036] D.裂解去保护:冰冷下在侧链全保护CLP-19-amPEG中加入各组分体积比为94:3:2 :1的裂解试剂TFA/Thioanisole/EDT/anisole，电磁搅拌2-3h，氮气吹去大部分TFA，无水乙 醚沉降后离心；用DCM溶样，无水乙醚沉降，离心分出固体；再重复2次，冻干，得CLP-19-amPEG粗品，HPLC纯化、冻干获得纯品。
[0037] 本发明选取中国专利200510057195.4的RREMP作为母体分子(CLP-19)，对其碳端 进行PEG修饰，合成了一类CLP-19的amPEG偶联物;通过多浓度鲎试验、生物传感器亲和力试 验、细胞因子刺激试验、体外抗菌试验，获得了具有较理想的中和内毒素活性的CLP-19多肽 的amPEG偶联物，显示了进一步开发成为新型中和内毒素药物的潜力。利用本发明所获得的 经PEG修饰的CLP-19较未修饰CLP-19,其直接抗菌活性更优或相当，但前者显著提升了与 LPS的亲和力，具有更好的中和LPS特性，较CLP-19具有显著的进步，有望开发成为新型的脓 毒症治疗候选药物。
【附图说明】
[0038]图1、本发明的CLP-19-amPEG的色谱图（精肽）。
[0039] 图2、本发明的CLP-19-amPEG的质谱图。
[0040] 图3、本发明的Ac-CLP-19-amPEG的色谱图（精肽）。
[0041 ] 图4、本发明的Ac-CLP-19-amPEG的质谱图。
[0042]图 5、本发明的 CLP-19-amPEG、Ac-CLP-19-amPEG 对 LPS 致炎的 RAW264.7 细胞 TNF-a mRNA水平的影响。
【具体实施方式】
[0043]以下结合附图对本发明的【具体实施方式】进行详细说明。应当理解的是，此处所描 述的【具体实施方式】仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
[0044] 实施例1
[0045] 本实施例涉及Fmoc-CLP-19-CTC的固相合成用于说明本发明的CLP-19-amPEG的片 段合成法。下述操作仅仅是为了说明，而不是限制本发明。
[0046] 1 · lFmoc-CLP-19-CTC肽树脂的合成
[0047] 称取6.8g(2mmol，Sub 0.314mmol/g)Fmoc_Lys(Boc)-CTC Resin倒入合成柱中，称 取551^001-01^溶胀。3011^11后抽出溶剂，以351^30%六氢吡啶的01^溶液脱除多肽合成氨 基酸树脂的Fmoc保护基团，15min后用001、1^0!1、01^、001、01^依次洗涤，除尽六氢吡啶。 DCM，DMF依次洗涤，除去六氢R比啶(piperidine)。称取5g Fmoc-Lys(Boc)-OH于锥形瓶中，加 入01^溶解，加入19!1^01(：，1.1838!1(?丨和551^25%二异丙基乙胺的01^溶液。茚三酮检测 反应过程。偶联完成后，除去反应液，以DCM，MeOH，DMF，DCM，DMF依次洗涤肽树脂;加入20 % -50 %六氢咄咤的DMF溶液脱除氨基酸树脂的Fmoc保护基团，以DCM，MeOH，DMF，DCM，DMF依次 洗涤，除尽六氢吡啶。按照类似的方法，投入后续Fmoc保护的氨基酸、DIC及HOBt，进行后续 偶联，如此循环完成整个肽链的合成，得到Fmoc-CLP-19-CTC肽树脂9.673g;充分洗涤，MeOH 收缩，抽干，从合成柱中取出树脂，置冻干机中冻干，备用。
[0048] 取出0.5g Fmoc-CLP-19-CTC肽树脂，加入2mL DCM溶胀，30min后抽干，加入5mL 30 %六氢吡啶的DMF溶液脱除肽树脂的Fmoc保护基团，以DCM，MeOH，DMF，DCM，DMF依次洗涤， 除尽六氢吡啶，冻干。常规裂解[裂解剂(Reagent R) :TFA/Thioanisole/EDT/anisole 90: 5:3: 2，v/v，15mL;室温，3h]，无水乙醚多次沉降得粗肽，粗肽纯度88.27 %，进行MALDI-TOF MS检测证明母体合成成功。
[0049] 1 · 2乙酰化Fmoc-CLP-19-CTC肽树脂的合成
[0050] 取Fmoc-CLP-19-CTC肽树脂4.072g;以DCM-DMF溶胀，加入使用8倍量同等的乙酸酐 和DIEA，溶剂是DMF和DCM(3:1)的配比，室湿下反应时间45min，然后充分洗涤，MeOH收缩，抽 干，从合成柱中取出树脂，置冻干机中冻干，备用。
[0051 ] 1 · 3CLP-19-amPEG 的合成和乙酰化-CLP-19-amPEG 的合成
[0052] 称取7.980g Fmoc-NEP-CTC肽树脂，置于250mL的圆底烧瓶中，配制好的裂解液 70mL，r. t反应90min，过滤树脂，DCM(3x80mL)，THF(2x 60mL)洗涤树脂，收集滤液，减压旋蒸 到没有液体蒸出。加入80mLH20，析出大量白色固体，加入220mLTHF，固体溶解，加饱和食盐 水溶液，分液，减压旋蒸THF层得白色固体，真空干燥。最终得Fmoc-NEP-OH(碳端数基游离、 氮端及侧链全保护)6.5g，收率93.44%。
[0053] Fmoc-NEP-OH 2.6g，加入DMF 30mL、THF 20mL，搅拌，得无色透明溶液；加入HOBt 400mg(4x 0.701mmol)，揽摔，冰水冷却下加入DIC 0.6mL IOmin后，加入4.184g amPEG的 DMF溶液30mL。撤除水浴，室温搅拌18h后，置于35°C油浴搅拌反应。反应结束，转入1000 mL圆 底烧瓶，旋蒸除去THF，冷却后加入500mL Et2O，搅拌30min，静置Ih。抽滤，无水Et2O洗涤，真 空干燥。上述产物，加入50mL DCM，20mL EtOH，搅拌全溶后加入冷冻Et2O 800mL，搅拌 20min，抽滤，无水Et2。洗涤(3X IOOmL)，真空干燥，得到全保护Fmoc-CLP-19-amPEG 6.3g。
[0054] 全保护Fmoc-CLP-19-amPEG 6 · 3g，加入DMFlOOmL，piperidine40mL，经揽摔反应， Ih后转入1000 mL圆底烧瓶，加入冷冻的800mL Et2〇，搅拌30min，抽滤，无水Et2〇洗涤，真空干 燥。上述产物，加入50mL EtOH，搅拌全溶后加入冷冻无水Et2〇 800mL，搅拌40min，抽滤，无 水Et2O洗涤(4x lOOmL)，真空干燥，得到侧链全保护的CLP-19-amPEG 5.5g。
[0055] 取CLP-19-amPEG lg，冰冷下加入IOmL裂解试剂（TFA/Thioanisole/EDT/anisole， 90: 5 :3 : 2，v/v，25mL)，电磁搅拌3h，氮气吹去大部分TFA，200mL无水乙醚沉降，离心；IOmL DCM溶样，IOOmL无水乙醚沉降，离心分出固体;再重复2次，冻干，得CLP-19-amPEG粗品，HPLC 纯化、冻干，得纯品。
[0056] Ac-CLP-19-amPEG的合成反应的方法和配比同CLP-19-amPEG的合成。待获得乙酰 化CLP-19-amPEG粗品后，HPLC纯化、冻干，得纯品。
[0057] CLP-19-amPEG的色谱图（精肽)如图1所示，质谱图如图2所示。Ac-CLP-19-amPEG的 色谱图（精肽)如图3所示;CL