肿瘤抗原肽的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及可用作癌症的预防和/或治疗剂的来源于0R7C1的肿瘤抗原肤等。
【背景技术】
[0002] 生物体对肿瘤细胞和病毒感染细胞等的排斥中，细胞免疫、特别是细胞毒性T淋己 细胞(称为CTL)起到重要的作用。肿瘤细胞排斥的情况下，CTL识别肿瘤细胞上的抗原肤(月中 瘤抗原肤）与MHC(主要组织相容性复合物，Major Histocompatibility Complex)的复合 物，对肿瘤细胞进行攻击和破坏。即，肿瘤抗原肤是通过肿瘤特有的蛋白质、即肿瘤抗原蛋 白质在细胞内合成后由蛋白酶在细胞内分解而生成。生成的肿瘤抗原肤在内质网内与MHCI 类抗原化LAI类抗原）结合而形成复合物，并被运送至细胞表面进行抗原递呈。肿瘤特异性 CTL识别该设及抗原递呈的复合物，通过细胞毒性作用和淋己因子的产生而显示抗肿瘤效 果。随着运一系列作用的掲示，不断地开发出通过将肿瘤抗原蛋白质或肿瘤抗原肤用作所 谓的癌症免疫疗法制剂(癌症疫苗)来使癌症患者体内的癌症特异性CTL增强的治疗法。
[0003] 0R7C1(嗅觉受体家族7亚家族C成员UOlfactory rec邱tor,family 7,subfamily C,member 1))是属于嗅觉受体家族的G蛋白质偶联受体(G-protein-coupled receptors， GPCR)。0R7C1已知是在作为人结肠癌细胞株的SW480细胞、HCT15细胞和HT29细胞、作为人肺 癌细胞株的LHK2细胞的SP(侧群，Side Population)细胞中表达的基因（专利文献1)dSP细 胞被认为是含大量癌症干细胞的组分，被报道具有高致肿瘤性。
[0004] 癌症干细胞被认为是癌症的复发和转移的主要原因，近年来指出了癌症治疗中W 癌症干细胞为祀来抑制其增殖、迁移的重要性。实际对SW480细胞株转染针对0R7C1的siRNA 后，SP细胞组分的比例和致肿瘤性显著减少，所W0R7C1被认为在癌症干细胞的机能中承担 必不可少的角色。
[0005] 另外，0R7C1在正常组织中仅于睾丸内表达，所W被分类为"癌睾丸抗原"。癌睾丸 抗原被广泛认为是有希望用于癌症疫苗的祀分子。
[0006] 此外，0R7C1是有希望用于癌症疫苗的祀分子，实际上来源于0R7C1的部分肤被报 道是HLA-A24结合性肿瘤抗原肤(专利文献1)。
[0007] 另外，如上所述，与肿瘤免疫相关的CTL识别肿瘤细胞上的肿瘤抗原肤与HLAI类抗 原的复合物，对肿瘤细胞进行攻击和破坏。已知肿瘤抗原肤的HLA-A02限制性或HLA-A24限 制性通常分别独立，欧美人和日本人中化A-A02和化A-A24显示不同的抗原特异性。对于 0R7C1，也已知可与HLA-A24结合的来源于0R7C1的肿瘤抗原肤（专利文献1)，但是尚未发现 可与HLA-A02结合或者可与HLA-A02和HLA-A24两者结合的来源于0R7C1的肿瘤抗原肤。
[000引现有技术文献
[0009] 专利文献
[0010] 专利文献1:国际公开第2010/050190号文本
[0011] 发明的概要
[0012] 发明所要解决的技术问题
[OOU]本发明的目的在于提供可与HLA-A02结合或者可与HLA-A02和HLA-A24两者结合的 来源于OR7C1的肿瘤抗原肤W及含有该肿瘤抗原肤作为有效成分的可用于癌症的预防和/ 或治疗的医药组合物等。
[0014] 解决技术问题所采用的技术方案
[0015] 本发明人反复进行认真研究后，发现了 WGenbank登录号NP_945182登录的作为 0R7C1 (嗅觉受体家族7亚家族C成员1)(序列编号2)的部分肤的可与HLA-A02和HLA-A24两者 结合的肿瘤抗原肤。
[0016] 此外，本发明还发现该肿瘤抗原肤在体内或体外可用作癌症特异性CTL的诱导剂、 即癌症疫苗。该肿瘤抗原肤可用作结肠癌、肺癌、卵巢癌等癌症(肿瘤)疾病的预防和/或治 疗剂。此外，该肿瘤抗原肤可用作针对结肠癌、肺癌、卵巢癌等癌症(肿瘤)的肿瘤标记物。
[0017] 旨P，本发明为W下所示的发明。
[0018] [1]由W序列编号3、序列编号4、序列编号5、序列编号6和序列编号11中的任一个 表示的氨基酸序列形成的肤。
[0019] [2]由W序列编号3、序列编号4、序列编号5、序列编号6和序列编号11中的任一个 表示的氨基酸序列中，
[0020] (1)将C末端的氨基酸置换为疏水性氨基酸的氨基酸序列，或者
[0021] (2)在N末端和/或C末端添加有1个~数个氨基酸的氨基酸序列
[0022] 形成的肤。
[0023] [3巧日[2]的肤，其中，该肤由将W序列编号3、序列编号4、序列编号5、序列编号6和 序列编号11中的任一个表示的氨基酸序列的C末端的氨基酸置换为亮氨酸、鄉氨酸或异亮 氨酸的氨基酸序列形成。
[0024] [4巧日[2]的肤，其中，该肤由在W序列编号3、序列编号4、序列编号5、序列编号6和 序列编号11中的任一个表示的氨基酸序列的N末端或C末端添加了 1个氨基酸的氨基酸序列 形成。
[0025] [5]将多条表位肤连结而成的多表位肤，其中，作为该表位肤，包含至少1条[1]~ [4]的肤。
[0026] [6]含有[1]~[4]的肤或[引的多表位肤作为有效成分的医药组合物。
[0027] [7巧日[6]的医药组合物，其中，包含佐剂。
[0028] [引含有[1]~[4]的肤或[引的多表位肤作为有效成分的癌症的预防和/或治疗用 疫苗。
[0029] [9]含有[1]~[4]的肤或[5]的多表位肤作为有效成分的癌症的预防和/或治疗 剂。
[0030] [10]含有[1]~[4]的肤或[引的多表位肤作为有效成分的细胞毒性T细胞(CTL)的 诱导剂。
[0031] [11]编码[1]~[4]的肤或[引的多表位肤中的至少1个的多聚核巧酸。
[0032] [12]含有[11]的多聚核巧酸的表达载体。
[0033] [13]包含[12]的表达载体的基因导入用组合物。
[0034] [14]含有 W 下的(a)或(b):
[0035] (a) [11]的多聚核巧酸、
[0036] (b)[12]的表达载体
[0037] 中的任一个作为有效成分的用于癌症的治疗或预防的医药组合物。
[0038] [1引包括使W下的(a)或(b):
[0039] (a)[l]~[4]的肤或[引的多表位肤、
[0040] (b)编码上述(a)记载的肤中的至少1个的多聚核巧酸、
[0041] 与具有抗原递呈能力的细胞在体外接触的抗原递呈细胞的制造方法。
[0042] [16]包括使W下的(a)或(b):
[0043] (a) [1]~[4]的肤或[引的多表位肤、
[0044] (b)编码上述(a)记载的肤中的至少1个的多聚核巧酸
[0045] 中的任一个与外周血淋己细胞在体外接触的CTL的诱导方法。
[0046] [ 17 ]含有[1 ]~[4 ]的肤和HLA的HLA多聚体。
[0047] [18]含有[17]的HLA多聚体的诊断药物。
[0048] [19]识别[1]~[4]的肤与HLA的复合物的TCR样抗体。
[0049] [ 20 ]含有[19 ]的TCR样抗体的肿瘤检测剂。
[0050] [21]用于筛选可有效地适用[6]、[7]或[14]的医药组合物的患者的诊断药物，其 中，包含[17]的HLA多聚体或[19]的TCR样抗体。
[0051] 发明的效果
[0052] 通过本发明，能提供可用作CTL的诱导剂的肿瘤抗原肤、和含有该肿瘤抗原肤作为 有效成分的可用于癌症的预防和/或治疗的医药组合物等。
[0053] 附图的简单说明
[0054] 图1是表示W序列编号3表示的肤的采用干扰素丫 ELISP0T测试的体外的CTL诱导 能力的评价结果的图。纵轴表示每500000个接种细胞的斑点数。A表示利用HLA-A*02:01基 因导入小鼠的试验结果，B表示利用HLA-A巧4:02基因导入小鼠的试验结果。此外，黑柱（"w/ Peptide")和白柱（"w/o Peptide")分别表示将来源于给肤小鼠的脾细胞在存在给予肤的 条件下和不存在给予肤的条件下再次刺激培养的结果。即，黑柱和白柱的值的差表示通过 各肤的给予而在小鼠体内诱导的肤特异性CTL的数量。
[0055] 图2是表示W序列编号4表示的肤的采用干扰素丫 ELISP0T测试的体外的CTL诱导 能力的评价结果的图。纵轴表示每500000个接种细胞的斑点数。A表示利用HLA-A*02:01基 因导入小鼠的试验结果，B表示利用HLA-A巧4:02基因导入小鼠的试验结果。此外，黑柱（"w/ Peptide")和白柱（"w/o Peptide")分别表示将来源于给肤小鼠的脾细胞在存在给予肤的 条件下和不存在给予肤的条件下再次刺激培养的结果。即，黑柱和白柱的值的差表示通过 各肤的给予而在小鼠体内诱导的肤特异性CTL的数量。
[0056] 图3是表示W序列编号5表示的肤的采用干扰素丫 ELISP0T测试的体外的CTL诱导 能力的评价结果的图。纵轴表示每500000个接种细胞的斑点数。A表示利用HLA-A*02:01基 因导入小鼠的试验结果，B表示利用HLA-A巧4:02基因导入小鼠的试验结果。此外，黑柱（"w/ Peptide")和白柱（"w/o Peptide")分别表示将来源于给肤小鼠的脾细胞在存在给予肤的 条件下和不存在给予肤的条件下再次刺激培养的结果。即，黑柱和白柱的值的差表示通过 各肤的给予而在小鼠体内诱导的肤特异性CTL的数量。
[0057] 图4是表示W序列编号6表示的肤的采用干扰素丫 ELISP0T测试的体外的CTL诱导 能力的评价结果的图。纵轴表示每500000个接种细胞的斑点数。A表示利用HLA-A*02:01基 因导入小鼠的试验结果，B表示利用HLA-A巧4:02基因导入小鼠的试验结果。此外，黑柱（"w/ Peptide")和白柱（"w/o Peptide")分别表示将来源于给肤小鼠的脾细胞在存在给予肤的 条件下和不存在给予肤的条件下再次刺激培养的结果。即，黑柱和白柱的值的差表示通过 各肤的给予而在小鼠体内诱导的肤特异性CTL的数量。
[0058] 图5是表示W序列编号3表示的肤的采用人外周血单核细胞的CTL诱导能力的评价 结果的图。A表示利用来源于HLA-A*02:01阳性健康人的外周血单核细胞的试验结果，B表示 利用来源于HLA-A巧4:02阳性健康人的外周血单核细胞的试验结果。黑柱和白柱表示再刺 激和非再刺激的结果。即，黑柱和白柱的值的差表示通过肤的刺激培养而诱导的肤特异性 CTL的数量。纵轴表示各孔中确认的斑点数，横轴表示阳性的各孔。此外，黑柱表示在肤刺激 条件下检测到的斑点数，白柱表示在肤非刺激条件下检测到的斑点数(对照）。
[0059] 图6是表示W序列编号5表示的肤的采用人外周血单核细胞的CTL诱导能力的评价 结果的图。A表示利用来源于HLA-A*02:01阳性健康人的外周血单核细胞的试验结果，B表示 利用来源于HLA-A巧4:02阳性健康人的外周血单核细胞的试验结果。黑柱和白柱表示再刺 激和非再刺激的结果。即，黑柱和白柱的值的差表示通过肤的刺激培养而诱导的肤特异性 CTL的数量。纵轴表示各孔中确认的斑点数，横轴表示阳性的各孔。此外，黑柱表示在肤刺激 条件下检测到的斑点数，白柱表示在肤非刺激条件下检测到的斑点数(对照）。
[0060] 图7是表示W序列编号6表示的肤的采用人外周血单核细胞的CTL诱导能力的评价 结果的图。A表示利用来源于HLA-A*02:01阳性健康人的外周血单核细胞的试验结果，B表示 利用来源于HLA-A巧4:02阳性健康人的外周血单核细胞的试验结果。黑柱和白柱表示再刺 激和非再刺激的结果。即，黑柱和白柱的值的差表示通过肤的刺激培养而诱导的肤特异性 CTL的数量。纵轴表示各孔中确认的斑点数，横轴表示阳性的各孔。此外，黑柱表示在肤刺激 条件下检测到的斑点数，白柱表示在肤非刺激条件下检测到的斑点数(对