治疗骨破坏性疾病的贝壳杉烷型二萜化合物及制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药物技术领域，具体涉及从干燥的水菖蒲中分离得到的一种贝壳杉烷 型二萜类化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 水菖蒲为天南星科植物菖蒲Acorus calamus Linn.的干燥根茎，别名菖蒲，臭菖 蒲，白菖蒲等。以根茎入药，具有化痰开窍，除湿健脾，杀虫止痒之功效，主治痰厥昏迷、中 风、癫痫、惊悸健忘、耳鸣耳聋、食积腹痛、痢疾泄泻、风湿疼痛、湿疹、疥疮等。生于海拔 2600m以下的水边、沼泽湿地或湖泊浮岛上，在南北两半球的温带、亚热带，与我国各省均有 分布。我国民间在五月初五这天将艾叶、菖蒲和香薷等挂门上、佩香囊或以菖蒲煎汤来洗澡 以避除秽恶之气的习俗。印度从古代开始，就使用菖蒲的根茎和叶治疗各种疾病，并作为驱 避剂。
[0003] 我国水菖蒲的化学研究始于20世纪90年代，近年来，水菖蒲的化学成分研究一直 是学者们的研究热点，与其相关的化学成分研究的报道相对较多。研究表明，水菖蒲中主要 含有萜类，苯丙素，黄酮，生物碱和少量其他类成分。萜类成分是水菖蒲中发现的种类最多 的一类化合物。目前，从水菖蒲中发现的萜类成分多达83个，主要存在于水菖蒲的挥发油 中。按其结构的不同，分为单萜和倍半萜两类，其中以倍半萜为主。
[0004] 现在研究表明水菖蒲具有杀虫、抑菌、镇静、抗抑郁、抗氧化、抗炎、抗肿瘤和降血 糖等药理作用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从干燥的水菖蒲中分离得到的一种贝壳杉烷型二萜类 化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物(I):
[0008]
[0009]所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将干燥的水菖蒲粉碎，用70 ~80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的 正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中乙酸 乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用5%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇洗脱8个柱体积， 收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱浓缩物用 正相硅胶分离，依次用体积比为50:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个 组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1、5:1和2:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离， 用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓 缩得到纯的化合物(I)。
[0010] 进一步地，步骤(a)中，用75%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0011] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0012] -种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的载 体。
[0013] 所述的化合物(I)在制备治疗骨破坏性疾病的药物中的应用。
[0014] 所述的药物组合物在制备治疗骨破坏性疾病的药物中的应用。
[0015] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0016] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对 人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0018] 图1为化合物(I)结构式；
[0019] 图2为化合物⑴计算ECD和实验ECD图。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0021] 主要材料、试剂来源及仪器类型：
[0022]乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限 公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0023]实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0024] (a)将干燥的水菖蒲(8kg)粉碎，用75%乙醇热回流提取(30LX3次），合并提取液， 浓缩至无醇味(6L)，依次用石油醚(6L X 3次）、乙酸乙酯(6L X 3次)和水饱和的正丁醇(6L X 3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(375g)和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中 乙酸乙酯萃取物用AB-8大孔树脂除杂，先用5%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇洗脱8个 柱体积，收集70 %洗脱液，减压浓缩得70 %乙醇洗脱浓缩物（129g);(c)步骤(b)中70 %乙醇 洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1 (8个柱体积）、30:1 (8个柱体积）、15:1 (8 个柱体积)和5:1(10个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得至1」4个组分；（d)步骤(c)中组分 4(27g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1(8个柱体积）、5:1(10个柱体积)和2:1 (8个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2(15g)用十八烷 基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个 柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I) (138mg)。
[0025] 结构确证：白色无定形粉末;HR-ESMS显示[M+Na]+为m/z 385.1626，结合核磁特 征可得分子式为C2〇H26〇6，不饱和度为8。核磁共振氢谱数据δΗ(ρρηι，DMS0_d6，500MHz): H-1 (4.78，d，J=8.2)，H-2(5.61，m)，H-3(5.60，m)，H-5(3.01，br，s)，H-6(9.75，br，s)，H-9 (2.74，d，J = 9.7)，H-ll(3.33，m)，H-12(2.61，m)，H-12(2.14，dd，J=14.5,6.3)，H-13 (2.39，m)，H-14(3.37，m)，H-14(2.06，d，J=10.3)，H-15(5.55，s)，H-17(1.67，s)，H-18 (0.98，s)，H-19(0.97，s)，H-20(4.38，d，J = 8.6)，H-20(4.09，d，J = 8.6);核磁共振碳谱数 据Sc(ppm，DMS〇-d6,125MHz) :76.1 (CH，卜C)，119.7(CH，2-C)，136.4(CH，3-C)，31.3(C，4-C)， 54.2(CH，5-C)，206.0(CH，6-C)，175.6(C，7-C)，55.7(C，8-C)，45.3(CH，9-C)，50.8(C，10-C)，86.1(CH，11-C)，36.9(CH2，12-C)，46.0(CH，13-C)，34.1(CH2，14-C)，83.8(CH，15-C)， 80.4(C，16-C)，23.1(CH 3，17-C)，33.0(CH3，18-C)，23.1(CH3，19-C)，72.9(CH2,20-C);碳原 子标记参见图UIR光谱表明该化合物含有羟基(3473CHT 1)，羰基（16810^1)和双键（1632cm 一1)。13C NMR和DEPT谱显示20个碳信号，包括三个甲基，三个亚甲基(一个含氧亚甲基），九个 次甲基(三个含氧，两个烯属次甲基以及一个醛基碳），五个季碳(一个含氧季碳以及一个内 酯羰基碳）。核磁数据表明，该化合物为6,7_开环-对应-贝壳杉烷型-1，8-内酯二萜结构。 HMBC 谱中，H-150H5.55，s)与C-8(δC55·7)，C-9(δC45·3)和C-16(δC8(h4)的相关性表明C-l5位上连有羟基。R0ESY谱中H-15与H-13(δH2.39，m)的相关性表明C-15-OH为α构型。HMBC谱 中，Η2-14(δΗ3·37，πι和 2.06，d，J = 10.3Hz)，H-13，H2-12(SH2.61，n^P2.14，dd，J=14.5,6.3) 和Me-17(SH1.67，s)与连氧季碳C-16的相关性表明C-16位上连有一个羟基基团。R0ESY谱中 Me-17与Η-12α的相关性表明C-16-OH为β构型。此外，Η-1与Η-5的相关性表明Η-1和Η-5处于 同一侧，均为β构型。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和R0ESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据， 可基本确定该化合物如图1所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本 一致(图2)。
[0026]实施例2:化合物(I)药理作用试验 [0027] 一、材料和仪器
[0028] SD雄性大鼠（4周龄)购于河北医科大学动物实验中心，清洁级，体重150g。化合物 (I)自制，HPLC归一化纯度