一种雨生红球藻的诱导培养基的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及藻类培养基技术领域，具体涉及一种雨生红球藻的诱导培养基。
【背景技术】
[0002] 虾青素(Astaxanthin)是一种酮式类胡萝卜素，是迄今为止发现的自然界中抗氧化 能力最强的物质。动物学及临床试验表明天然虾青素具有良好的生物安全性和超强的抗氧 化性(Martin,Mark E.&Miguel ,2003)，具有很好的抗炎症、抗肿瘤、降血脂、延缓衰老、增强 免疫力、预防心血管疾病、防止体内代谢和紫外线辐射产生的自由基造成组织和光氧化损 伤等功能(Lorenz，R.T.，Cysewski&G.R. ,2000)。此外，奸青素还有具有显著的着色功能，主 要作为珍稀水产品、禽蛋、观赏动物的着色剂。由于天然虾青素具有良好的生物活性和生物 安全性。因此，天然虾青素在食品、医药化妆品、保健品、软饮料加工及水产品、家禽和家畜 (鸡、猪和牛）饲料添加剂等行业具有广阔的市场前景(Martin,Mark E.&Miguel ,2003)，目 前国际市场天然奸青素的价格在5000-6000美元/kg(Astaxanthin-a superb natural antioxidant.Algatech.com)。
[0003] 目前，虾青素的主要生产方法包括人工合成和生物获取两种方式。人工合成虾青 素不仅价格昂贵，而且同天然虾青素在结构、功能、应用、稳定性、吸收效果和生物安全性等 方面差别显著。除了人工合成的方法之外，天然虾青素的生物来源一般有3种:水产品加工 工业的废弃物、红发夫酵母(Phaffia rhodozyma)和微藻（雨生红球藻）（Higuera et al·， 2006)。然而，水产品加工工业的废弃物中虾青素含量较低，且提取费用较高，不适于进行大 规模生产，天然的红发夫酵母中虾青素平均含量也仅为0.40%，相比之下，雨生红球藻中虾 青素含量却高达1.0%~3.0%，因此被看作是天然虾青素的"浓缩品"和最佳生物来源 (01aizola，M.，Huntley&M.E.，2003)。雨生红球藻虾青素以其高含量、高品质、高的生物活 性受到了广大国内外学者的关注，成为近些年来国际上天然虾青素生产的研究热点，培养 雨生红球藻已成为未来获取天然虾青素的最佳途径，从而得到各国的大力推进。
[0004] 雨生红球藻的生活史相对比较复杂，伴随着的细胞形态变化也比较明显，最常见 的将红球藻细胞生活史分为四个阶段:细胞游动阶段、形成孢子阶段、孢子成熟阶段和萌发 阶段；雨生红球藻的细胞形态分为：绿色游动细胞、绿色不动细胞、褐色不动细胞和红色孢 子(Wenhui Gu et al.，2014)。当环境条件改变，雨生红球藻开始合成大量的虾青素来抵御 不利环境。研究表明盐胁迫是造成雨生红球藻大量积累虾青素的一个重要因素（陈峰等， 1999;邱保胜，2000;魏东等，2000)。
[0005] 我国大部分地区地下矿藏中含有丰富的芒硝;地下水中富含铁离子。而就目前的 研究阶段只有铁离子对其影响的相关研究(Kobayashi M，Kakizono T.，1992)而没有硫酸 钠、硫酸钠和铁离子的交互作用的相关研究的文献资料。因此，通过开展上述工作，寻找促 进雨生红球藻积累虾青素的合适的硫酸钠和铁离子浓度，无疑可加快的雨生红球藻工厂化 养殖产业的发展步伐。
【发明内容】
[0006] 为解决上述现有技术存在的问题，本发明提供了一种雨生红球藻的诱导培养基， 该培养基用于诱导培养基诱导培养雨生红球藻，可有效地提高虾青素的含量，从而有效地 提高虾青素的产量。
[0007] 实现本发明上述目的所采用的技术方案为：
[0008] -种雨生红球藻的诱导培养基，每升培养基中含有： Na2S04 1.25-1.95g f?嫁酸、II':铁 0.0丨丨447-0.023971 g NaGI 1.5g K2HPO.j 0.04g MgS04.7H：O 0,075g CaC!；.2H20 0.036g 柠檬酸 0.006 g EDTA-2Na 0.001 g
[0009] Na2(；O3 0.02 g hbBCb 0.00286 g MnCI：..4H；0 0.00186 g ZnS04.7H20 0.00022 g Na?.Mo04,2H'：0 0,00039 g CuS04.5H20 0.00008 g CoCi；,.6H20 0.00004 g Vm 0.000001 g V?i2 〇.〇〇〇〇〇〇01 g
[0010] VH 0.0000001 go
[0011] -种雨生红球藻的诱导培养基，每升培养基中含有： Na：S〇4 1.69g 柠檬酸亚铁 0.019] 35g NaCl l.5g K2HPO4 0.04g MgS(：)4.7H20 0.075g CaCh.2H_:0 0.036g 柠檬酸 0.006 g EDTA-2Na 0 001 g .Ra2C〇3 Q,.02 g:
[0012] H3BO; 0.00286 g MnCl2.4H；0 0.00186 g ZnS04.7H；-0 0.00022 g Na2Mo04.2H20 0.00039 g CuS04.5H：0 0.00008 g CoC1：..6H20 0.00004 g Vbi 0.000001 g Vbi2 〇.〇〇〇〇〇〇01 g Vh 0.0000001
[0013] 与现有技术相比，本发明的有益效果和优点在于：
[0014] 该培养基充分利用了硫酸钠和铁离子的交互作用对雨生红球藻的影响，诱导培养 雨生红球藻10天后，雨生红球藻细胞中虾青素的积累量达到最大。试验表明，用该培养基诱 导培养雨生红球藻10天，与对比例1相比，雨生红球藻细胞中生物量、虾青素浓度、虾青素含 量分别提高了 12.89%、49.54%、32.48%。由此可见，该培养基可有效地提高虾青素的含 量，从而有效地提高虾青素的产量，具有广阔的应用前景。
【附图说明】
[0015] 图1为实施例1的雨生红球藻的诱导培养基诱导培养雨生红球藻过程中藻细胞的 形态变化图。
【具体实施方式】
[0016] 下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
[0017] 实施例1
[0018] -种雨生红球藻的诱导培养基，每升培养基中含有： Na.：S04 1,25g 柠檬酸亚铁 （).017709g Nad 1.5g K2HPO4 0.04g MgS0^.7H：0 0.075g CaCh.2 丨七0 0.036g 柠檬酸 0.006 g EDTA-2Na 0.001 g Na.：CO, 0.02 g
[0019] H3BO3 0.00286 g MnCI；>,4H20 0.00186 g ZnS〇4.7H2〇 0.00022 g Na2Mo0.t.2H2〇 0.00039 g CuS04.5H：0 0.00008 g CoCl2,6H2〇 0.00004 g VBJ (维生素 Bl) 0.000001 g VB12 (维生素 B12) 〇.〇〇〇〇〇〇01 g i (维生素 H) 0.0000001 g〇
[0020] 该雨生红球藻的诱导培养基的制备方法，其步骤是：
[0021 ] 1、母液的配制
[0022] 1)将似(：1、1(2册〇4、]\%5〇4.7!12〇丄&(：12.2!12〇、柠檬酸40了厶-2似、似2〇)37个组分按照 所需的量分别配制100倍的母液，再分别存放于4°c的冰箱中；
[0023 ] 2)将H3B〇3、MnCl 2 · 4H20、ZnS〇4 · 7H20、Na2Mo〇4 · 2H20、CuS〇4 · 5H20、CoCl 2 · 6H20、Vbi、Vbi2 和Vh9个组分按照所需的量混合配制1000倍的母液，再存在于4°C的冰箱中；
[0024] 2、培养基的配制
[0025]将按要求配制成100倍的母液的各组分分别取10mL/L，将按要求配制成1000倍的 母液的组分取lmL/L，所需的Na2S04和柠檬酸亚铁按照所需的量现配现用，用蒸馏水定容至 1L后用1M的NaOH溶液或者HC1溶液调节pH至7.1，并用高压蒸汽灭菌锅灭菌20分钟，即得雨 生红球藻的诱导培养基。
[0026] 实施例2
[0027] -种雨生红球藻的诱导培养基，每升培养基中含有： Na2S〇4 1.35g 柠檬酸亚铁 0.013282g NaCl l.5g K2HP〇4 0.04g MgS〇4.7H20 0.075g CaCl；..2H：0 0.036g 梓檬酸 0.006 g EDTA-2Na 0.001 g Na2CQ3 0,02 g
[0028] H3BO：1 0.00286 g MnCI2.4H20 0.00186 g ZnS〇4.7H20 0.00022 g Na2Mo〇4.2H20 0.00039 g CuS04.5H：0 0.00008 g CoCl：.6H；0 O.OOOQ4 g Vm 0.000001 g VBi：. 〇.〇〇〇〇〇〇01 g Vh 0.0000001
[0029]该雨生红球藻的诱导培养基的制备方法和实施例1相同，只是Na2S〇4和梓檬酸亚铁 所需的量不同。
[0030] 实施例3
[0031] -种雨生红球藻的诱导培养基，每升培养基中含有： Na2S〇4 1,35g Ι?檬酸亚铁 0.022136g NaCI 1.5g K：HP〇4 0.04g MgS04,7H20 0.075g CaCl：.2H：0 0.036g 梓檬酸 0.006 g EDTA-2Na 0.001 g Na：C〇i 0.02 g
[0032] H3BO3 0.00286 g MnC'b，4H?0 0.00186 g Z11SQ4.7H2Q 0.00022 g Na2Mo04.2H：.0 0.00039 g CuS04.5H：0 0.00008 g CoCi2.6H20 0.00004 g VB1 0.000001 g VB12 〇.〇〇〇〇〇〇01 g ￥h 0.0000001 g,>
[0033] 该雨生红球藻的诱导培养基的制备方法和实施例1相同，只是Na2S〇4和梓檬酸亚铁 所需的量不同。
[0034] 实施例4
[0035] -种雨生红球藻的诱导培养基，每升培养基中含有： Na2S04 1 35g 柠檬酸亚铁 0,0:1770? NaCi 1.5g
[0036] K2HP〇4 0.04g MgS〇4.7H2〇 0.075g CaCb.2H2〇 0 036g 柠機酸 0.006 ：g EDTA-2Na 0.001 g Na:CO， 0.02 g H3BQ3 0.00286 g Μη01：.4Η：0 0.00186 g ZnS04.7H20 0.00022 g
[0037] Na2MoO^,2H20 0,00039 g CuS04.5H.〇 0.00008 g C0GI2.6H2O 0.00004 g ￥b1 0.000001 g ￥bi2 〇.〇〇〇〇〇〇01 g ￥h 〇.〇〇〇〇〇〇lgH
[0038] 该雨生红球藻的诱导培养基的制备方法和实施例1相同，只是Na2S〇4和梓檬酸亚铁 所需的量不同。
[0039] 实施例5
[0040] -种雨生红球藻的诱导培养基，每升培养基中含有： Na>SO.) 1.60g 柠檬酸亚铁 0 011447g NaGl 1.5g K：HP〇4 0.04g MgS04.7H：0 (X075g CaCl：.2H，0 0.036g
[0041 ] 衧檬酸 0,006 g EDTA-2Na 0.001 g Ka，C03 0.02 g H3BO3 0.00286 g MnCl2.4H2〇 0.00186 g ZnSG4.7H2G 0.00022 g Na2