专利名称：一种检测柑橘皮、籽原料中柠檬苦素类化合物含量的样品前处理方法
技术领域：
本发明涉及一种检测柑橘皮、籽原料中柠檬苦素类化合物含量的样品前处理方法。
背景技术：
芸香科植物(如柑橘等)中柠檬苦素类化合物的生物活性受到越来越多的关注，其在食品医药等领域的应用也越来越广泛。柠檬苦素类化合物的分离、纯化、检测技术也在不断发展中。获得原料后首先要检测其含量，以利于开展后面的提取纯化和产品品质控制工作。因此，能否快速、准确地检测原料中的柠檬苦素类化合物的含量将直接影响到柠檬苦素的生产效率。
目前，柠檬苦素类化合物的研究工作大都围绕其物质结构及功能活性研究，对柠檬苦素类化合物检测技术改进甚少。检测柑橘皮、籽原料中柠檬苦素类化合物含量的样品前处理方法，一般是将100g～500g原料进行粉碎后用石油醚或者乙醚提取多次，之后再以丙酮提取多次。丙酮提取物浓缩后溶于二氯甲烷，收集可溶的那一部分定容，测定目标化合物含量。这一类样品前处理方法主要存在以下几个问题1)样品的粉碎一般的化合物检测，样品都要作一定程度的破碎处理。理论上，破碎处理可以增大原料的比表面积。事实上，在提取过程中，破碎的原料并不是均匀地分散在溶媒中，而是沉积到提取容器的底部，传质阻力较大，同样也会造成提取时间长，溶剂用量大，提取不彻底等问题。
2)环保问题一般前处理方法所用到的溶剂都是沸点较低，且有一定毒害作用的有机溶剂。多次加热提取，浓缩，会带来部分溶剂的泄露，长期使用对操作者的健康将产生危害。
3)操作流程和成本一般方法样品前处理过程复杂，费时费试剂，成本较高。由于浓缩溶剂量较大，在有条件的实验室尚可用旋转蒸发仪来完成，但大多数基层工厂实验室难以达到。目前，国内试剂丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷和石油醚的价格都不低，因此，在样品的前处理上作一些改进，使其向低毒、低成本、高效方向发展，是原料中柠檬苦素类化合物含量检测方法的发展方向。
发明内容
本发明的目的在于提供一种检测柑橘皮、籽原料中柠檬苦素类化合物含量的样品前处理方法，该方法处理后的原料提取物经检测能稳定准确地反映柠檬苦素类化合物的含量水平。
本发明提供的一种检测柑橘皮、籽原料中柠檬苦素类化合物含量的样品前处理方法，包括下列步骤(1)将待测样品干燥后粉碎至60～80目；(2)称取粉碎样品0.200～0.500g，然后加入有机溶剂2～5ml，于高速混匀器上振荡提取2～3min，4000r/min离心5～10min，吸走上清液，物料重复以上操作3～5次，剩余物进行下一步操作；(3)加入丙酮2～5ml，振荡提取2～3min，4000r/min离心5～10min，收集丙酮提取物，重复此操作3～5次，提取物合并且予以吹干，得到丙酮提取物；(4)丙酮提取物中加入有机溶剂1～2ml，超声或者振荡溶解，4000r/min离心5～10min，收集溶解液，重复此操作3～5次，将溶解液合并，定容，检测。
上述技术方案中步骤(2)所述的有机溶剂为石油醚或乙醚；步骤(4)所述的有机溶剂为二氯甲烷或三氯甲烷。
与现有技术相比，本发明具有以下特点1.高速振荡提取粉碎样品，可以最大可能地使样品与提取溶剂接触，样品有效比表面积加大，提取效率得到提高。
2.少量多次提取利用了浓度差，使提取更彻底，结果更可靠。
3.前处理行为是在常温下进行，可有效地保护被测物免遭破坏。
4.样品前处理过程操作简单，温度低，有机溶剂用量少，使得操作过程毒性低，同时实验材料与试剂耗费少，实验成本也低。
5.样品前处理操作简单，工作量小，且占地少，一次能处理多个样品，大大提高了工作效率。
具体实施例方式
本发明通过以上所记载的有关工艺参数及试剂均可实现本发明的目的，而不仅仅局限于以下实施例。
实施例1取橘籽100g，干燥粉碎至80目，取9个平行样品，每个样品0.2g(精确到0.001g)，在其中3个样品中分别加入0.5ml浓度为100ug/ml的柠檬苦素标准液，按下列方法进行样品预处理样品先以3ml石油醚高速振荡脱脂2min，然后在4000r/min速度下离心10min，吸走上清液，再向样品中加入3ml石油醚，重复此操作2次；脱脂后的样品加入3ml丙酮高速振荡提取2min，4000r/min速度下离心10min，收集上清液，重复提取3次，合并丙酮提取液，40℃条件下将丙酮提取液吹干；丙酮提取物中加入1ml二氯甲烷，超声溶解，4000r/min速度下离心5min，收集上清液，重复溶解3次，合并二氯甲烷溶解液，并定容到10ml，待测。待测溶液经相同条件下的分光光度法检测(即一定量的待测溶液加无水乙醇到2ml，分别加浓度为0.125％的对-二甲氨基苯甲醛—硫酸乙醇溶液5ml，摇匀静置，30min后于500nm波长下测吸光值，按照标准曲线方程计算样品中柠檬苦素类物质的含量)。结果为6个平行样的含量分别为13.12mg/g，13.09mg/g，13.15mg/g，13.07mg/g，13.11mg/g，13.16mg/g，平均值13.12mg/g；3个加标回收率分别是87.6％，89.1％，88.9％。
实施例2取橘籽原料500g，干燥粉碎至60目，平行取3个样品，每个样品0.2g(精确到0.001g)，先以3ml石油醚高速振荡脱脂2min，然后在4000r/min速度下离心10min，吸走上清液，再向样品中加入3ml石油醚，重复此操作2次；脱脂后的样品加入3ml丙酮高速振荡提取2min，4000r/min速度下离心10min，收集上清液，重复提取3次，合并丙酮提取液，40℃条件下将丙酮提取液吹干；丙酮提取物中加入1ml三氯甲烷，高速振荡溶解，4000r/min速度下离心5min，收集上清液，重复溶解3次，合并三氯甲烷溶解液，并定容到10ml，待测。如实施例1的分光光度法检测结果分别为13.02％，12.95％，13.07％，平均为13.01％。
权利要求
1.一种检测柑橘皮、籽原料中柠檬苦素类化合物含量的样品前处理方法，其特征在于包括下列步骤(1)将待测样品干燥后粉碎至60～80目；(2)称取粉碎样品0.200～0.500g，然后加入有机溶剂2～5ml，于高速混匀器上振荡提取2～3min，4000r/min离心5～10min，吸走上清液，物料重复以上操作3～5次，剩余物进行下一步操作；(3)加入丙酮2～5ml，振荡提取2～3min，4000r/min离心5～10min，收集丙酮提取物，重复此操作3～5次，提取物合并且予以吹干，得到丙酮提取物；(4)丙酮提取物中加入有机溶剂1～2ml，超声或者振荡溶解，4000r/min离心5～10min，收集溶解液，重复此操作3～5次，将溶解液合并，定容，检测。
2.根据权利要求1所述的检测柑橘皮、籽原料中柠檬苦素类化合物含量的样品前处理方法，其特征在于步骤(2)所述的有机溶剂为石油醚或乙醚。
3.根据权利要求1所述的检测柑橘皮、籽原料中柠檬苦素类化合物含量的样品前处理方法，其特征在于步骤(4)所述的有机溶剂为二氯甲烷或三氯甲烷。
全文摘要
本发明公开了一种检测柑橘皮、籽原料中柠檬苦素类化合物含量的样品前处理方法，该方法包括下列步骤(1)将待测样品干燥后粉碎至60～80目；(2)称取粉碎样品0.200～0.500g，然后加入有机溶剂2～5ml，于高速混匀器上振荡提取2～3min，4000r/min离心5～10min，吸走上清液，物料重复以上操作3～5次，剩余物进行下一步操作；(3)加入丙酮2～5ml，振荡提取2～3min，4000r/min离心5～10min，收集丙酮提取物，重复此操作3～5次，提取物合并且予以吹干，得到丙酮提取物；(4)丙酮提取物中加入有机溶剂1～2ml，超声或者振荡溶解，4000r/min离心5～10min，收集溶解液，重复此操作3～5次，将溶解液合并，定容，检测。用本发明方法处理后的原料提取物经检测可稳定准确地反映柠檬苦素类化合物的含量水平。
文档编号G01N1/34GK1793821SQ200510101198
公开日2006年6月28日 申请日期2005年11月14日 优先权日2005年11月14日
发明者徐玉娟, 施英, 肖更生, 陈卫东, 张友胜, 吴娱明, 邹宇晓, 刘学铭 申请人:广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所, 广东宝桑园健康食品研究发展中心