专利名称：一种柠檬苦素类物质的提取方法
技术领域：
本发明涉及柠檬苦素类物质的提取方法，特别是涉及一种从柠檬籽中提取柠檬苦素类 物质的方法。
背景技术：
柠檬苦素类物质是指柠檬苦素及其类似物所组成的混合物，混合物中主要由柠檬苦 素、诺米林两种物质构成，它们都属三萜类的物质，是植物次生代谢的产物，主要存在于多种 芸香科和楝科植物中，也是引起柑橘类果汁苦味的主要物质,具有广泛的生物活性，如杀 虫、抗病毒、抗肿瘤形成和抑菌等作用。柠檬苦素类物质在抗癌、镇痛、调节体内胆固醇 水平,防止动脉粥样化和除虫等方面的作用，越来越受到人们的重视，但有关研究在国内刚刚 起步。由于柠檬苦素、诺米林结构相似，药理作用相同，所以统称为柠檬苦素类物质，通常 两者不用分离使用。现在市场上的柠檬苦素类物质主要是从甜橙籽或柚子籽中提取，提取 得到的柠檬苦素类物质价格昂贵，每千克近两万元。
大家知道，在柠檬的加工过程中会产生众多的柠檬籽，它含有较多的柠檬苦素类物质， 但是目前却未对它加以合理利用，浪费严重且污染环境。
目前对柠檬苦素类物质进行提取，常采用有机溶剂从甜橙籽或柚子籽中提取，所用机 溶剂为大量的石油醚。这种提取方法的成本高，有危险性，环境污染严重，且得到的拧檬 苦素类物质含量低,一般为80%。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从柠檬籽中提取柠檬苦素类物质的方法。这种方法制备成 本低、提取含量高。
本发明的目的是这样实现的 一种柠檬苦素类物质的提取方法，其特征在于它是将拧 檬籽作为原料，按下列步骤进行提取原料粉碎后加水和酶制剂进行酶解；静置，弃去酶解 液，然后在沉淀物加入乙醇浸提；再釆用吸附层析分离出浸提液中的拧檬苦素类物质，经干 燥制得。
为了便于粉碎，上述原料最好先干燥，再将其粉碎至过60 100目筛。如果过细，细粉 容易结块，粘在一起，不易和酶制剂混合均匀,如果太粗,则酶解时间长，拧檬苦素类物质释放 也不充分。
3上述酶解是指粉碎后的柠檬籽中加入柠檬籽3 5倍重量的水，再加入酶制剂纤维素 酶和果胶酶，它们在水中的量分别0.3% 0.6%和0.5 1.0%,以重量百分比计。加入酶制 剂,一方面是造成柠檬籽的细胞壁、果胶、纤维素的分解，而使柠檬苦素类物质释放；同时 柠檬籽中有约30%的柠檬苦素类物质，都是糖苷的形式存在，如柠檬苦素糖苷，诺米林糖苷 等，糖苷易溶于水,在现有提取过程中，因没有经酶制剂将糖苷水解为苷元形式，由于糖苷和 苷元的溶解性差异而没能提取,造成提取率低下,而在本发明加入的酶制剂可促使柠檬苦素 糖苷，诺米林糖苷等糖苷的糖苷键发生酶解而断裂,形成不溶于水的柠檬苦素、诺米林等苷 元，从而提高提取率。
酶解充分后，静置2 4h，弃去酶解液,将沉淀物加入95。/。乙醇搅拌混匀浸提l小时；收 集滤液浓縮至6(TC相对密度为1.20 1.30,再将浓縮滤液进行吸附层析分离提取柠檬苦素 类物质。吸附层析选用大孔树脂柱层析。
为了进一步提高柠檬苦素类物质的纯度，上述浓縮液进行大孔树脂柱层析后，还通过 硅胶色谱柱层析进行分离纯化。
具体地说，它是将柠檬籽作为原料，包括原料干燥，粉碎至60 100目，加水和酶制 剂进行酶解提取得酶解液；酶解充分后，静置2 411,弃去酶解液,在沉淀物中加入95%乙醇 搅拌混匀浸提l小时，收集滤液；将滤液浓縮至60'C的相对密度为1.20 1.30;再将浓縮 的滤液进行大孔树脂柱层析，用水洗脱去除具有一定极性水溶性物质，再加入乙醇进行梯 度洗脱，收集洗脱液并浓縮；得到的浓縮洗脱液进行硅胶色谱柱层析，用水洗至平衡，用 乙醇洗脱，分段收集洗脱液并混合，最后浓縮、干燥得柠檬苦素类物质。
上述酶解温度为35 45'C，时间5 7小时；上述大孔树脂柱为AB-8树脂，采用含量 20%、 40%、 70%的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集70%洗脱液并减压浓縮；浓縮洗脱液进 行硅胶色谱柱层析，用70%乙醇洗脱。
本发明的有益效果为
1、 发明人充分利用柠檬产品废弃物——柠檬籽作为原料，这样不仅将生产过程中产 生的废弃物进行充分利用，降低了对原材料的浪费，减少了环境污染；同时，还提高了拧 檬的附加值及工业生产的产值。发明人首创从柠檬籽中提取柠檬苦素类物质，且得到的拧 檬苦素类物质含量高，采用反相高效液相色谱法，使用C18色谱柱，以甲醇和水的混合液作 流动相，紫外检测器检测测定柠檬苦素类物质，其总含量达到95%(其中柠檬苦素50%以上、 诺米林达30%以上)。
2、 本发明采用的酶解提取方式，不同于现有技术常用的普通有机溶剂浸提工艺。采用酶解技术可提高柠檬苦素类物质的释放，同时有利于将糖苷分解为统一的苷元，提高收 率；提取率达90%，比之现有提取技术提取率高30%。
3、采用乙醇浸提、采用大孔树脂柱层析分离和硅胶色谱柱纯化，避免目前常用有机 溶剂提取法中使用大量有机溶剂而带来的高成本、危险性、以及环境污染问题。
具体实施例方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明方法，但是本发明方法并不因此而限制在所 述实施例的范围内。
实施例1: 一种柠檬苦素类物质的提取方法，其特征在于它是将柠檬籽作为原料，
原料先干燥再粉碎至过60目筛；
加入原料4倍量的水、0.4%纤维素酶和0.8%果胶酶在35°(:，酶解时间7小时，提取 得酶解液，这样可以分解细胞壁中的纤维素和果胶，使柠檬籽中的柠檬苦素类物质充分释 放出来，同时有利于将能溶于水的柠檬苦素类物质糖苷水解为柠檬苦素苷元，以利于后处 理；
酶解充分后，静置2 4h,弃去酶解液，在沉淀物中加入4-6倍重量的95%乙醇搅拌混匀 浸提1小时，收集滤液；将滤液浓縮至6(TC的相对密度为1.20 1.30;再将浓縮的滤液用 AB-8树脂柱层析，用水洗脱去除具有极性的水溶性物质，再加入含量分别为20%、 40%、 70%的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集70%洗脱液并减压浓縮；得到的浓縮洗脱液进行硅胶 色谱柱层析，用水洗至平衡，用乙醇洗脱，分段收集含有柠檬苦素类物质的洗脱液并混合， 最后浓縮、干燥得拧檬苦素类物质。
所得的拧檬苦素类物质经检测，其总含量为96%。
实施例2: —种柠檬苦素类物质的提取方法，其特征在于将拧檬籽清洗，干燥，粉
碎至过60 100目筛，用3倍原料量的水,加入0.5。/。纤维素酶(15u/mg)和0.9%果胶酶 (1.8u/mg)进行酶解，温度4(TC，时间6h;酶解充分后，静置2 4h,弃去上层酶解液，在沉淀 物中加入5倍重量95%乙醇搅拌混匀浸提1小时，收集滤液；将滤液浓縮至60'C时相对密 度为1.20 1.30;将浓縮滤液上大孔树脂柱(AB-8树脂)层析，用水洗脱，初步洗去水溶性 物质，加入乙醇至含醇量20%、 40%、 70%并收集70%的洗脱液,将收集的70%洗脱液减压浓 縮，将浓縮的洗脱液再上硅胶色谱柱层析，用水洗至平衡，用70%乙醇洗脱，分段收集洗脱 液，对各段收集洗脱液进行检测，将含有拧檬苦素类物质的洗脱液混合并减压浓縮,最后进 行喷雾干燥而制得柠檬苦素类物质。
所得的柠檬苦素类物质经检测，其总含量为94%。
权利要求
1、一种柠檬苦素类物质的提取方法，其特征在于它是将柠檬籽作为原料，按下列步骤进行提取原料粉碎后加水和酶制剂进行酶解；静置，弃去酶解液，然后在沉淀物加入乙醇浸提；再采用吸附层析分离出浸提液中的柠檬苦素类物质，经干燥制得。
2、 如权利要求1所述的柠檬苦素类物质的提取方法，其特征在于原料先干燥，再将其 粉碎至过60 100目筛；所述酶解是指粉碎后的柠檬籽中加入柠檬籽3 5倍重量的水，再加 入酶制剂纤维素酶和果胶酶，它们在水中的量分别0.3% 0.6%和0.5 1.0%，以重量百分比 计；酶解充分后，静置2 4h,弃去酶解液，将沉淀物中加入95%乙醇搅拌混匀浸提1小时；收 集滤液浓縮至60。C相对密度为1.20 1.30,再将浓縮滤液进行吸附层析分离提取拧檬苦素类 物质。
3、 如权利要求2所述的柠檬苦素类物质的提取方法，其特征在于所述吸附层析选用大 孔树脂柱层析。
4、 如权利要求2或3所述的柠檬苦素类物质的提取方法，其特征在于所述浓縮滤液进 行吸附层析分离后，再通过硅胶色谱柱层析进行分离纯化。
5、 如权利要求1所述的柠檬苦素类物质的提取方法，其特征在于它是将拧檬籽作为原 料；经干燥、粉碎至60 100目；加水和酶制剂进行酶解得酶解液；酶解充分后，静置2 4h， 弃去酶解液，在沉淀物中加入95%乙醇搅拌混匀浸提1小时，收集滤液；将滤液浓縮至6(TC的 相对密度为1.20 1.30;再将浓縮滤液进行大孔树脂柱层析，用水洗脱去除具有极性的水溶 性物质，再加入乙醇进行梯度洗脱，收集洗脱液并浓縮；得到的浓縮洗脱液进行硅胶色谱柱 层析，用水洗至平衡，用乙醇洗脱，分段收集洗脱液并混合，最后浓縮、干燥得拧檬苦素类 物质。
6、 如权利要求5所述的柠檬苦素类物质的提取方法，其特征在于所述酶解温度为35 45°C，时间5 7h;所述吸附层析选用的大孔树脂柱为AB-8树脂，采用含量20%、 40%、 70% 的乙醇溶液进行梯度洗脱，收集70%洗脱液并减压浓縮；浓縮洗脱液进行硅胶色谱柱层析， 用70%乙醇洗脱。
全文摘要
本发明涉及一种从柠檬籽中提取柠檬苦素类物质的方法。它是将柠檬籽作为原料，按下列步骤进行提取原料粉碎后加水和酶制剂进行酶解；静置，弃去酶解液，然后在沉淀物加入乙醇浸提；再采用吸附层析分离出浸提液中的柠檬苦素类物质，经干燥制得。本发明充分利用柠檬产品废弃物——柠檬籽作为原料，这样不仅将生产过程中产生的废弃物进行充分利用，降低了对原材料的浪费，减少了环境污染；且得到的柠檬苦素类物质含量高，其含量达到95％；其提取率达90％，比之现有提取技术提取率高30％；采用乙醇浸提、采用大孔树脂柱层析分离和硅胶色谱柱纯化，降低了生产成本。
文档编号A61K36/185GK101632743SQ200910104500
公开日2010年1月27日 申请日期2009年7月30日 优先权日2009年7月30日
发明者群 刘, 张承荣, 李天泉, 谈宗华 申请人:重庆长龙实业(集团)有限公司