对于人β1-肾上腺素受体（β1-AR）的结合化合物以及它们在测量自身抗β1-AR抗体中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及结合至人β1-肾上腺素受体的第二胞外环（β1-AR-ECII）的结合化合物/抗体，上述受体产生自/可获自具有选自由以下组成的组中的保藏号的宿主细胞/杂交瘤：DSM?ACC3121、DSM?ACC3174、DSM?ACC3175、DSM?ACC3176和DSM?ACC3177。结合化合物/抗体特别适用于在基于体外细胞的测定系统中确定自身抗β1-AR抗体，以表征和确定针对生物样品中的β1-AR-ECII的自身抗体。本发明的进一步的方面是编码所述结合化合物/抗体的核酸分子、载体、宿主细胞、用于生产本发明的结合化合物/抗体的方法、以及包括本发明的结合化合物/抗体的试剂盒。
【专利说明】对于人β 1-肾上腺素受体（β 1-AR)的结合化合物以及它们在测量自身抗β 1-AR抗体中的应用
[0001]本发明涉及结合化合物，其结合至人β?-肾上腺素受体的第二胞外环(β I-AR-ECII) (extracellular loop),并且本发明具体涉及结合化合物/抗体,其产生自和/或可获自保藏号为DSMACC3121的宿主细胞/杂交瘤。本发明还涉及结合至人β 1_肾上腺素受体的第二胞外环的抗体，其产生自/可获自保藏号为选自由DSM ACC3174、DSMACC3175、DSM ACC3176和DSM ACC3177组成的组中的宿主细胞杂交瘤。本发明的结合化合物/抗体特别适用于在体外测定中测定自身抗β I-AR抗体以在细胞ELISA测定中表征和确定针对生物样品中的β I-AR-ECII的自身抗体，上述细胞ELISA测定是基于在SF9细胞中由杆状病毒过表达人β I-肾上腺素受体（β 1-AR)。此外，在本发明中描述了编码所述结合化合物/抗体的核酸分子以及包含上述核酸分子的载体和宿主细胞。本发明还提供了用于生产本发明的结合化合物/抗体的方法。另外，描述了一种用于确定患有与人β I-肾上腺素受体（β 1-AR)相关疾病或有发展与人β I-肾上腺素受体（β 1-AR)相关疾病的风险的患者的方法，所述疾病如特发性扩张型心肌病（DCM)或缺血性心肌病（ICM)0本发明还涉及诊断装置、方法和应用，利用本发明的结合化合物/抗体来检测在生物样品中的分子/化合物，如自身抗MAR (β I-肾上腺素受体/β I-肾上腺素能受体）抗体。最后，描述了包括本发明的化合物的试剂盒。
[0002]病因不明的进行性心脏扩张和泵衰竭(心力衰竭，pump failure)已被称为〃特发性〃扩张型心肌病（DCM) (Richardson, Circulation93 (1996)，841-842)。DCM 是严重心脏衰竭的主要原因之一，具有上达至每百万人100位患者的年发病率以及每百万人300-400位患者的患病率（AHA报告2007)。目前，大部分的DCM被认为是由最初(主要是病毒性）感染引起，这导致急性心肌炎，其在免疫系统激活以后可以进展到(慢性）自身免疫性心肌炎，从而导致心脏扩张和严重的充血性心脏衰竭。尤其是当（a)伴随针对不同的肌细胞肌纤维膜或膜蛋白（其对于 心脏功能是必不可少的）的自身抗体的发展（Freedman, J. Clin. Invest? 113(2004)，1379-1382; Jahns, Trends Cardiovasc Medl6 (2006)，20-24)，或（b)伴随心肌的慢性炎症和病毒持续感染（Kiihl，Circulationll2 (2005)，1965-1970)时，会发生严重的充血性心脏衰竭。这些发现进一步得到以下事实的加强，即，患有DCM的患者在细胞免疫和体液免疫方面经常具有改变（Jahns, Trends Cardiovasc Medl6 (2006), 20-24, Limas Circulation95(1997)，1979-1980，Luppi, Circulation98(1998)，777-785，Mahrholdt, Circulationll4 (2006)，1581-1590)。在他们的体液反应的情况下，已发现，相当多的DCM患者发展针对各种心脏抗原的自身抗体。其中，仅有一个亚组的针对(人）β I-肾上腺素受体/β I-肾上腺素能受体（βΙ-AR)的第二胞外环的自身抗体已经显示出对于人β肾上腺素受体施加激动剂样（agonist-like)作用，从而发展为心脏扩张和功能障碍。
[0003]因此，已经从基于动物和患者的研究中积累了证据：即，靶向（人）β I-肾上腺素受体（β 1-AR)的功能活性的自身抗体在进行性心脏扩张和衰竭的发展和临床病程中发挥重要作用(Wallukat, Eur. Heart J. 12 (1991) ,178-181;Magnusson, Circulation89(1994)，2760-2767;Jahns, Circulation99(1999)，649-654 和 Iwata, J.Am. Coll.Cardiol. 37(2001)，418-424)。β I-肾上腺素受体（β I-AR)是G蛋白偶联的受体，其通过腺苷酸环化酶、环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate, cAMP)和PKA来引发信号。此信号通路调节肌浆钙浓度并增加心肌细胞收缩力。
[0004]在最近几年，已经由不同研究小组独立地证明，相关类别的自身抗体结合至β I-AR 的第二环并识别天然受体构象（Jahns Circulation99 (1999)，649-654; Iwata J AmColl Cardiol37 (2001), 418-424;Nikolaev J AmColl Cardiol50 (2007)，423-443 和 Elies JImmunol. 157 (1996)，4203-4211)。已表明这类构象抗β IAR-(ECII)抗体是功能活性的，并且似乎能够刺激细胞内 cAMP 产生（Jahns, Circulation99 (1999)，649-654 和 Nikolaev, AmColl Cardiol50 (2007) ,423-443)。此外，仅仅那些靶向第二胞外环（β l-AR-ECII)的抗3 1AR自身抗体似乎是功能活性的。相反，针对受体蛋白的氨基或羧基末端的抗体并不发挥生物学作用(ffallukat, Eur Heart J12 (1991) , 178-181; Elies, J Tmmunol. 157(1996)，4203-4211 和 Borda, Clin Exp Immunol. 57 (1984)，679-686)。 [0005]关于抗人β I-肾上腺素受体（β 1-AR)的第二胞外环的功能活性的自身抗体，已证明在健康个体中它们的流行度(传播）几乎可以忽略不计（<1%)，条件是，使用基于以其天然构象呈现靶标（即，（人）β 1-AR)的细胞系统的筛选程序（Jahns，Circulation99 (1999)，649-654)。通过采用这种筛选方法，还可以在患有慢性瓣膜性心脏病或高血压性心脏病的患者中排除自身抗 β I-AR 抗体的出现（Jahns, J. Am. Coll. Cardiol34 (1999)，1545-1551 )。相反，针对β I-AR的第二胞外环的自身抗体是众所周知的，并且取决于相应的研究或筛选方法，存在于大约30%-50%的DCM患者中。较小百分比的患有缺血性心肌病的患者，大约10%-20%，被判断为是抗 β I-AR 抗体阳性的（Stork, Am. Heart J. 152 (2006)，697-704)。这还得到来自Jahns等的先前数据的证实，从而呈现直接证据：即，β I-AR自身抗体在DCM中发挥因果作用并且不仅仅关联于心肌组织损伤或是心肌组织损伤的结果（Jahns，J. Clin.Invest.113(2004), 1419-1429)。
[0006]因此，除去针对人β I-AR的第二胞外环的自身抗体预期将会在DCM患者中产生改善的临床状态。患有DCM的患者的初期临床试验显示在用IgG免疫吸附（IA)治疗后，不仅心脏自身抗体滴度被降低，而且左心室功能得到改善（Felix. ,Am Coll Cardiol35 (2000), I590-1598;ffallukat, N. Engl. J. Med. 347(2002)，180;Muller, N Engl J Med347(2002)，1806和Muller, CirculationlOl (2000)，385-391)。降低心脏自身抗体的另一种方法是使用基于肽的疫苗以实现抗原特异性耐受和降低过度活跃的免疫系统的响应。例如，在W001/21660中，公开了若干与β I-AR的第二胞外环同源的(环）肽，并且提出将这些肽应用于扩张型心肌病（DCM)的医疗干预。此外，例如W001/21660提到，可以修饰这些肽以保护它们免受血清蛋白酶的作用，例如，通过环化作用。
[0007]两种治疗策略均需要用于筛查自身抗β I-AR抗体并因此可靠地确定阳性心脏衰竭患者(优选患有DCM)的可靠的诊断测定。在过去，进行了大量的努力来开发这样的测定。可以将这些方法分成两类：
[0008]-研究抗体激活人βI肾上腺素受体（β 1-AR)的功能能力的测定
[0009]-分析针对人βI肾上腺素受体的第二胞外环(人β I-AR的ECII环）的自身抗体的结合特性的测定。
[0010]建立功能测定，即对新生大鼠心肌细胞或鸡胚胎的收缩效果和受体介导的信号cAMP水平，并适用于检测功能抗β I-AR抗体（Nikolaev, Am. Coll. Cardiol. 50(2007), 423-443;ffallukat, Mol Cell Cardiol. 27(1995), 397-406, Erratum in: J Mol CellCardio127 (1995),2529;Baba,Ther Apher Dial. 12(2008), 109-116;Tutor, CardiovascRes76 (2007)，51-60)。通过程序来表征所有这些功能测定，其耗费时间和成本，并且不能合理地用来快速地筛查较大的患者群体（n> 1000 )。
[0011]还通过利用基于肽的ELISA研究了人自身抗β I-AR-抗体的结合。为此，将26聚体月太（His-Trp-Trp-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Cys-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-ArgCSEQ ID NO: 17)),其对应于人 β I-AR 的第二胞外环(氨基酸位置 197-222)，固定于微量滴定板上（Magnusson, J Clin Invest86 (1990), 1658-1663和 Labovsky Clin Exp Tmmunol 148 (2007), 440-149)。这种测定是充分 HTS(高通量筛查)适合的，但还没有同时在较大群体的患者和健康对照中研究它用作具有诊断相关性的筛查测定。
[0012]在本研究中，对于针对人β I-AR的自身抗体的存在，利用结合测定特别是使用全天然的人β I-AR基于细胞的竞争性ELISA测定亦或使用人β I-ARECII相应肽(参照上面提到的 26 聚体妝 His-Trp-Trp-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Cys-Asp-P he-Val-Thr-Asn-Arg (SEQ ID NO: 17)作为各自的结合革巴的测定来检查患有心脏衰竭特别是DCM患者。
[0013]鉴于现有技术，构成本发明的基础的技术问题是提供用于诊断和预测与人β I-肾上腺素受体（β 1-AR)相关的疾病的改进的装置和方法。
[0014]通过提供在权利要求中表征的实施方式来解决上述技术问题。
[0015]本发明涉及抗体/结合化合物，其结合至人β I-肾上腺素受体（β 1-AR)的第二胞外环。本发明的抗体结合至人β I-肾上腺素受体的第二胞外环，其是或包含如在SEQ IDNO: 17中描述的氨基酸序列。抗体/结合化合物可获自宿主细胞，例如杂交瘤，其具有选自由 DSM ACC312UDSM ACC3174、DSM ACC3175、DSM ACC3176 和 DSM ACC3177 组成的组中的保藏号。这些是本发明的特别优选的结合化合物/抗体。在若干手段和方法中如本文提供的诊断方法中采用这些结合化合物/抗体。
[0016]本发明还涉及建立用于检测如上文所描述的功能活性的人抗β I-AR自身抗体的基于细胞的竞争性ELISA。此测定使用完全天然β I-AR蛋白作为靶抗原来提供胞外域的正确折叠，其是确定表位特异性自身抗体的基本要求。为了优化测定的特异性，使用结合至人β I-AR的第二胞外环并且能够刺激受体活性的抗体/结合化合物开发了竞争性方法。
[0017]通过它们结合至相同或重叠表位并替换测试结合分子/抗体并因此降低免疫或生物学信号如ELISA信号的能力表征来自患者血清的功能相关的人抗β I-AR自身抗体。通过丙氨酸置换扫描进行的表位搜索已经产生了提示：在β I-AR的EC II环内，氨基酸序列NDPK (Asn-Asp-Pro-Lys)应该是相关表位的一部分。
[0018] 因此，本发明涉及具有一种或多种所期望的性能(包括高结合亲和力）的结合至人β I-肾上腺素受体（β I-AR-ECII)的第二胞外环的抗体。在本文和在诊断方法中描述的抗体结合至人β I-肾上腺素受体（β I-AR-ECII)的第二胞外环，其中人β I-肾上腺素受体(β I-AR-ECII)的所述第二胞外环是或包含如在SEQ ID NO: 17中描述的氨基酸序列。本文描述的抗β I-AR-ECII抗体产生自/可获自宿主细胞，例如具有选自由DSM ACC3121、DSMACC3174、DSM ACC3176和DSM ACC3177组成的组中的保藏号的杂交瘤。本发明还涉及在用于确定患有与人β I-肾上腺素受体相关的疾病或有发展与人β I-肾上腺素受体相关的疾病风险的患者的方法中使用本发明的抗体。如在本发明中已惊奇发现的，和多克隆(对照）抗体相比，产生自/可获自具有DSM ACC3121保藏号的杂交瘤细胞系23_6_7 (于2011年3月 15 日由 Corimmun GmbH 以识别标记（identification reference)//bIECII E3, 23-6-7 (抗β 1-AR)"保藏）的结合化合物/抗体或所述结合化合物/抗体的衍生物表现出对β I-肾上腺素受体的提高的亲和力。此外，本发明涉及（i)小鼠单克隆抗体或所述抗体的衍生物，产生自/可获自杂交瘤细胞系28-2-7 (于2012年5月16日由Corimmun GmbH以识别标记"blECII, 28-2-7〃 和保藏号 DSM ACC3175 保藏）、47_12_9 (于 2012 年 5 月 16 日由 CorimmunGmbH 以识别标记 〃blECII, 47_12_9〃 和保藏号 DSM ACC3176 保藏)、50_1_5(于 2012 年 5 月 16日由 Corimmun GmbH 以识别标记 〃blECII, 50_1_5〃 和保藏号 DSM ACC3177 保藏)和 55-4-10 ；以及（ii)大鼠单克隆抗体13F6 (于2012年5月16日由Corimmun GmbH以识别标记〃13/F6"和保藏号DSMACC3174保藏山羊多克隆抗体(参见随附实施例的图3至图5)。在随附的实施例中还示出并说明了，与山羊多克隆(对照）抗体相比，大鼠单克隆抗体13F6的特征还在于对β I-肾上腺素受体（β 1-AR)的显著提高的亲和力（图5)。鉴于对β I-AR的这种提高的亲和力，还可以使用单克隆大鼠13F6抗体(其可获自宿主细胞，例如杂交瘤，如以DSMACC3174保藏的)和13F6的衍生物，例如，在用于确定患有与人β ^肾上腺素受体相关的疾病或有发展与人β r肾上腺素受体相关的疾病的风险的患者的诊断方法中作为阳性对照（PC)(如下文所描述)。
[0019]如在本文中所使用的，术语〃β I-肾上腺素受体（β 1-AR) 〃优选指人β I-肾上腺素受体，其通常是 本领域技术人员已知的。例如，可以自技术人员已知的数据库获得人β I-肾上腺素能受体的编码序列。例如，如在本文中所使用的，人β I-AR(还被称为人β I肾上腺素受体（ADRBl))的序列（SEQ ID NO: I和2)可以获自数据库条目ΝΜ_000684 (版本NM_000684. 2 ；GI: 110349783)和 / 或 NP_000675 (版本号 NP_000675. I ;GI: 4557265)。
[0020]在本发明的情况下，人β I-肾上腺素受体的核酸序列包含以下（cDNA)序列(参照SEQ ID NO: I)：
[0021]
【权利要求】
1.一种抗体，所述抗体结合至人-肾上腺素受体的第二胞外环。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中，所述人βI-肾上腺素受体的第二胞外环是或包含在SEQ ID NO: 17中描述的氨基酸序列。
3.根据权利要求1或2所述的抗体，其中，所述抗体可获自具有选自由以下组成的组中的保藏号的宿主细胞：DSM ACC3121、DSM ACC3174、DSM ACC3175、DSM ACC3176 和 DSMACC3177。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体，其中，所述抗体可获自 (i)具有所述保藏号DSM ACC3121的宿主细胞并且其中所述抗体包含至少一个抗体轻链可变区以及至少一个抗体重链可变区，所述抗体轻链可变区分别具有SEQ ID NO: 10至SEQ ID NO: 12的CDR序列CDRLl至CDRL3 ;所述抗体重链可变区分别具有SEQ ID NO: 7至SEQID NO:9 的 CDR 序列 CDRHl 至 CDRH3 ； (?)具有所述保藏号DSM ACC3174的宿主细胞并且其中所述抗体包含至少一个抗体轻链可变区以及至少一个抗体重链可变区，所述抗体轻链可变区分别具有SEQ ID NO:34至SEQ ID NO: 36的CDR序列CDRLl至CDRL3 ;所述抗体重链可变区分别具有SEQ ID NO: 37至SEQ ID NO: 39 的 CDR 序列 CDRHl 至 CDRH3 ； (iii)具有所述保藏号DSMACC3175的宿主细胞并且其中所述抗体包含至少一个抗体轻链可变区以及至少一个抗体重链可变区，所述抗体轻链可变区分别具有SEQ ID NO:44至SEQ ID NO: 46的CDR序列CDRLl至CDRL3 ;所述抗体重链可变区分别具有SEQ ID NO: 47至SEQ ID NO:49 的 CDR 序列 CDRHl 至 CDRH3 ； (iv)具有所述保藏号DSMACC3176的宿主细胞并且其中所述抗体包含至少一个抗体轻链可变区以及至少一个抗体重链可变区，所述抗体轻链可变区分别具有SEQ ID NO:54至SEQ ID NO: 56的CDR序列CDRLl至CDRL3 ;所述抗体重链可变区分别具有SEQ ID NO: 57至SEQ ID NO: 59 的 CDR 序列 CDRHl 至 CDRH3 ;或 (V)具有所述保藏号DSM ACC3177的宿主细胞并且其中所述抗体包含至少一个抗体轻链可变区以及至少一个抗体重链可变区，所述抗体轻链可变区分别具有SEQ ID N0:64至SEQ ID NO:66的CDR序列CDRLl至CDRL3 ;所述抗体重链可变区分别具有SEQ ID NO:67至SEQ ID NO: 69 的 CDR 序列 CDRHl 至 CDRH3。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体，其中，所述抗体可获自 (i)具有所述保藏号DSMACC3121的宿主细胞并且其中所述抗体包含轻链可变区以及重链可变区，所述轻链可变区包含具有上达至十个保守氨基酸替代的SEQ ID NO:6的序列，所述重链可变区包含具有上达至十个保守氨基酸替代的SEQ ID N0:4的序列； (ii)具有所述保藏号DSMACC3174的宿主细胞并且其中所述抗体包含轻链可变区以及重链可变区，所述轻链可变区包含具有上达至十个保守氨基酸替代的SEQ ID NO:31的序列，所述重链可变区包含具有上达至十个保守氨基酸替代的SEQ ID NO:33的序列； (iii)具有所述保藏号DSMACC3175的宿主细胞并且其中所述抗体包含轻链可变区以及重链可变区，所述轻链可变区包含具有上达至十个保守氨基酸替代的SEQ ID N0:41的序列，所述重链可变区包含具有上达至十个保守氨基酸替代的SEQ ID NO:43的序列； (iv)具有所述保藏号DSMACC3176的宿主细胞以及其中所述抗体包含轻链可变区以及重链可变区，所述轻链可变区包含具有上达至十个保守氨基酸替代的SEQ ID NO:51的序列，所述重链可变区包含具有上达至十个保守氨基酸替代的SEQ ID NO:53的序列；或 (V)具有所述保藏号DSM ACC3177的宿主细胞并且其中所述抗体包含轻链可变区以及重链可变区，所述轻链可变区包含具有上达至十个保守氨基酸替代的SEQ ID N0:61的序列，所述重链可变区包含具有上达至十个保守氨基酸替代的SEQ ID NO:63的序列。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体，其中所述抗体可获自 (i)具有所述保藏号DSMACC3121的宿主细胞并且其中所述抗体包含轻链可变区以及重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6，所述重链可变区包含SEQ ID NO:4 ； (ii)具有所述保藏号DSMACC3174的宿主细胞并且其中所述抗体包含轻链可变区以及重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:31，所述重链可变区包含SEQ ID NO:33 ； (iii)具有所述保藏号DSMACC3175的宿主细胞并且其中所述抗体包含轻链可变区以及重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:41，所述重链可变区包含SEQ ID NO:43 ； (iv)具有所述保藏号DSMACC3176的宿主细胞并且其中所述抗体包含轻链可变区以及重链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO: 51，所述重链可变区包含SEQ ID NO: 53 ;或 (V)具有所述保藏号DSM ACC3177的宿主细胞并且其中所述抗体包含轻链可变区以及重链可变区，所述轻链 可变区包含SEQ ID NO:61，所述重链可变区包含SEQ ID NO:63。
7.一种抗体，所述抗体结合至与根据权利要求1至6中任一项所述的抗体相同的表位。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的抗体，其中，所述抗体是嵌合抗体、人源化抗体、双特异性抗体或全人源抗体。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的抗体，其中，所述抗体是单克隆抗体或多克隆抗体。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的抗体，其中，所述抗体是人单克隆抗体、小鼠单克隆抗体或大鼠单克隆抗体。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的抗体，其中，所述抗体可获自具有选自由以下组成的组中的保藏号的宿主细胞：DSM ACC312UDSM ACC3175、DSM ACC3176和DSM ACC3177,并且其中所述抗体是小鼠单克隆抗体。
12.根据权利要求1至10中任一项所述的抗体，其中，所述抗体可获自具有所述保藏号DSM ACC3174的宿主细胞并且其中所述抗体是大鼠单克隆抗体。
13.根据权利要求1至11中任一项所述的抗体，其中，所述抗体可获自具有所述保藏号DSM ACC3121的宿主细胞并且其中所述抗体进一步包含重链恒定区，其中所述重链恒定区包含Y I、Y 2a> Y 2b或Y 3小鼠重链恒定区或它们的变异体。
14.根据权利要求1至11中任一项或权利要求13所述的抗体，其中，所述抗体可获自具有所述保藏号DSM ACC3121的宿主细胞并且其中所述抗体进一步包含轻链恒定区，其中所述轻链恒定区包含K轻链恒定区或λ轻链恒定区。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的抗体，其中，所述抗体是选自由以下组成的组中的抗体片段：Fab、Fab’、Fab’ _SH、Fv、scFv、F(ab’) 2 和双体分子。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的抗体，其中，所述抗体可获自具有所述保藏号DSMACC3121的宿主细胞并且其中所述抗体具有以下性质中的至少一种： Ca)所述抗体以1000pM或更小的平衡解离常数（Kd)结合至所述人β r肾上腺素受体的第二胞外环；(b)在月太环(Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Gln)存在的条件下，与所述人β 1_肾上腺素受体的第二胞外环的结合亲和力被竞争性抑制，具有2000ρΜ或更小的IC50值；和/或 (c)与大鼠单克隆抗体相比，优选地与可获自具有所述保藏号DSMACC3174的宿主细胞的大鼠单克隆抗体相比，或与结合至所述人β「肾上腺素受体的第二胞外环的山羊多克隆抗体相比，以至少低10倍的亲和力（Kd)结合至所述人β r肾上腺素受体的第二胞外环。
17.根据权利要求16所述的抗体，其中，所述抗体可获自具有所述保藏号DSMACC3121的宿主细胞并且其中所述抗体以510pM或更小的平衡解离常数（Kd)结合至所述人β r肾上腺素受体的第二胞外环。
18.一种核酸分子，编码根据权利要求1至17中任一项所述的抗体。
19.一种载体,包含根据权利要求18所述的核酸。
20.一种宿主细胞， 包含根据权利要求18所述的核酸分子或根据权利要求19所述的载体。
21.根据权利要求20所述的宿主细胞，其中，所述宿主细胞是一种杂交瘤。
22.根据权利要求21所述的宿主细胞，其中，所述杂交瘤选自由DSMACC3121、DSMACC3174、DSM ACC3175 、DSM ACC3176 和 DSM ACC3177 组成的组。
23.一种用于产生根据权利要求1至17中任一项所述的抗体的方法，其中，所述方法包括培养根据权利要求20至22中任一项所述的宿主细胞以及从所述培养物中回收所述分子。
24.一种抗体，所述抗体结合至所述人^1-肾上腺素受体的第二胞外环，优选结合至在SEQ ID NO: 17中描述的所述人β 1_肾上腺素受体的胞外环，其中，所述抗体可获自根据权利要求23所述的方法。
25.一种用于确定具有与人P1-肾上腺素受体相关的疾病或有发展与人P1-肾上腺素受体相关的疾病风险的患者的方法，包括以下步骤： Ca)使人β r肾上腺素受体与所述患者的生物样品接触，从而容许包含在所述生物样品中的一种或多种分子或化合物结合至所述人β r肾上腺素受体； (b)使（a)的所述人β r肾上腺素受体与根据权利要求1至17中任一项所述的抗体接触，从而容许所述抗体结合至未被包含在（a)的所述生物样品中的一种或多种分子或化合物结合的人β r肾上腺素受体； (C)使未与（a)的所述生物样品接触的人β r肾上腺素受体与根据权利要求1至17中任一项所述的抗体接触，从而容许所述抗体结合至未与（a)的所述生物样品接触的所述人肾上腺素受体； (d)测量 (i)步骤（b)的所述人βr肾上腺素受体和所述抗体之间的结合信号，和 (ii)步骤（C)的所述人βr肾上腺素受体和所述抗体之间的结合信号；并且 (e)比较在（d)(i)中测得的所述结合信号与在（d) (ii)中测得的所述结合信号， 其中在（d) (i)中测得的结合信号至少40%低于在（d) (ii)中测得的结合信号，表明所述患者患有所述疾病或有发展所述疾病的风险。
26.根据权利要求25所述的方法，其中，所述抗体是可获自具有选自由组成的组中的保藏号的宿主细胞的抗体：DSM ACC3121、DSM ACC3174、DSM ACC3175、DSM ACC3176 和 DSMACC3177。
27.根据权利要求25或26所述的方法，其中，所述抗体是可获自具有所述保藏号DSMACC3121的宿主细胞的抗体。
28.根据权利要求25至27中任一项所述的方法，其中，在与生物样品或所述抗体接触前，将所述人P1-肾上腺素受体固定在固相上。
29.根据权利要求25至28中任一项所述的方法，其中，所述固相的材料选自由以下组成的组中--聚L-赖氨酸、聚D-赖氨酸预涂覆的琼脂糖凝胶、胶乳、玻璃、聚苯乙烯、聚乙烯、硝化纤维素和硅。
30.根据权利要求25至29中任一项所述的方法，其中，所述疾病选自由心脏病组成的组中，包括特发性扩张型心肌病（DCM)、缺血性心肌病（ICM)、查加斯病、感染性和非感染性心脏病、缺血性和非缺血性心脏病、炎性心脏病和心肌炎、心脏扩张、特发性心肌病、免疫性心肌病、心脏衰竭、以及任何心律失常，包括室性和室上性过早搏动。
31.根据权利要求30所述的方法，其中，所述疾病是特发性扩张型心肌病（DCM)。
32.根据权利要求30所述的方法，其中，所述疾病是缺血性心肌病（ICM)。
33.根据权利要求25至32中任一项所述的方法，其中，所述测得的结合信号包括标记根据权利要求1至17中 任一项所述的抗体。
34.根据权利要求33所述的方法，其中，所述结合化合物的所述标记包括发射信号的系统或者所述标记由包含发射信号的系统的一种或多种另外的第二分子或化合物所特异性地识别。
35.根据权利要求34所述的方法，其中，所述发射信号的系统包含发射该信号的酶。
36.根据权利要求34或35所述的方法，其中，所述一种或多种第二分子或化合物选自由肽、多肽、低分子量物质、抗体或它们的片段或衍生物组成的组中。
37.根据权利要求25至36中任一项所述的方法，其中，所述方法是ELISA、EIA或RIA。
38.一种诊断药剂，包含根据权利要求1至17中任一项所述的抗体，用于检测生物样品中的一种或多种分子或化合物。
39.根据权利要求38所述的诊断药剂，其中，所述抗体获自具有保藏号DSMACC3121的宿主细胞。
40.根据权利要求25至37中任一项所述的方法或根据权利要求38或39所述的诊断药剂，其中，所述生物样品包括血液、血浆或血清。
41.根据权利要求40所述的方法或诊断药剂，其中，所述生物样品包含一种或多种分子或化合物，所述分子或化合物选自由抗体、蛋白质、蛋白质片段、肽、氨基酸和/或它们的衍生物组成的组中。
42.根据权利要求41所述的方法或诊断药剂，其中，所述一种或多种分子或化合物是抗体。
43.根据权利要求42所述的方法或诊断药剂，其中，所述抗体是一种或多种自身抗β I-肾上腺素能抗体。
44.一种用于检测自身抗β I-肾上腺素能受体抗体的诊断试剂盒，包括根据权利要求1至17中任一项所述的抗体、根据权利要求20至22中任一项所述的宿主细胞或根据权利要求38至43中任一项所述 的诊断药剂。
【文档编号】G01N33/564GK104024275SQ201280028392
【公开日】2014年9月3日 申请日期:2012年6月6日 优先权日:2011年6月10日
【发明者】汉斯彼得·霍尔特霍夫, 马丁·乌格尔, 斯特凡·蔡比格, 马丁·J·洛泽, 罗兰·扬斯, 瓦莱丽·扬斯 申请人:科里木恩有限公司