砂缓冲液悬浮，加入0.5mg/mL的CA15-3单克隆抗体，室温(25°C )放10rpm缓慢旋转孵育30分钟，再加入蛋白终浓度为I %的牛血清白蛋白，封闭(指的是旋转过程中牛血清白蛋白与金磁颗粒表面被单克隆抗体结合后剩余的结合位点发生结合，可避免假阳性)30分钟；然后加入质量浓度10%氯化钠水溶液和Tween-80的混合液，继续缓慢旋转30分钟，充分混匀，再加浓度为I % PEG (MW = 2 X 14)，即获得金磁颗粒混悬液；所述金磁颗粒质量用量以缓冲液体积计为3mg/ml，所述缓冲液中Tween-80的体积终浓度为0.1?10%，所述蔗糖的质量终浓度为0.1?2g/L缓冲液，所述氯化钠水溶液中氯化钠的质量终浓度为
0.1?2g/L缓冲液；所述单克隆抗体与缓冲液体积比为0.03:1，所述牛血清白蛋白与缓冲液体积比为0.03:1，所述聚乙二醇水溶液与缓冲液体积比为0.01:1。
[0017]本发明还提供一种所述CA15-3检测试剂盒的应用，具体所述的应用为:将待测血液与金磁悬浮液混合后，加入测试条的加样孔，所述的测试条在加入待测血液后，若CA15-3检测条带和兔抗鼠IgG抗体对照条带均呈现肉眼可见的紫红色时，说明待测样品中CA15-3为阴性(即待测血液正常)，若CA15-3检测条带不显色，兔抗鼠IgG抗体对照条带呈现肉眼可见的紫红色时，说明待测样品中CA15-3为阳性(即待测血液异常，CA15-3含量增高)，若兔抗鼠IgG抗体对照条带不呈色，不管CA15-3检测条带是否呈色，均判定为该测试条失效。
[0018]本发明所采用的CA15-3配对抗体为单克隆抗体技术制备的单抗。利用竞争法检测CA15-3抗原的原理检测标本，当待测标本中含有CA15-3抗原时，且含量小于金磁颗粒上包被的抗体可参与反应的抗原结合位点时，抗原会先和部分金磁颗粒上偶联的抗体结合，随着层析作用的进行，剩余的金磁颗粒及结合物向前移动到达CA15-3抗原包被处的T线，剩余的金磁颗粒会与T线上的抗原结合，从而在T线处发生聚集，呈紫红色，而已经被样品中抗原结合的金磁颗粒结合物则继续层析，到达质控线C时，抗鼠的二抗会与CA15-3抗体结合，即在C线处同样出现金磁颗粒聚集，呈现紫红色，该结果为阴性(_)。假如样品中的含量高于金磁颗粒上抗体的结合位点所能参与反应的数量时，则抗原先与金磁颗粒结合，然后随着层析试纸条前行，越过T线，在C线处抗体与抗鼠二抗发生反应，从而聚集呈现紫红色，该结果被判定为阳性(+)。不管样品是阳性还是阴性，测试条的C线都应该呈现颜色，假如C线不显示颜色，则该试纸条无效。
[0019]本发明所述的硝酸纤维素膜上检测条带和对照条带按如下方法制备:分别将CA 15-3抗体和兔抗鼠IgG抗体以B1DOT平台上的BIRJET气压喷头喷到硝酸纤维膜对应的条带上，冷冻干燥制备而成。
[0020]本发明所述测试条盖上塑料盖板(塑料盖板在硝酸纤维素膜点样区位置有加样孔，在相应的T线和C线处有视窗，见图3)，并与3包干燥剂密封于铝箔袋中，50个测试条为一个包装，置于一个包装盒内，一盒一份说明书，一瓶5mL装的金磁颗粒混悬液，50个Eppenddorf管，室温避光保存，保质期为12个月。
[0021]与现有胶体金检测试剂条相比，本发明具有以下优点:
[0022]I)本发明通过对试纸条的改进，在普通胶体金试纸条中引入磁性颗粒，使得试纸条的检测灵敏度比传统的免疫层析技术提高2倍。
[0023]2)本发明操作简单，适合大规模生产，无需任何仪器。因此能广泛用于医院，血站防疫站，体检等大批量使用单位及一些采血现场、农村及基层诊所等小批量或单人份使用的单位使用，尤其适用于乳腺癌患者对乳腺癌转移情况的初检。
(四)
【附图说明】
[0024]图1为本发明试纸条结构示意图:1_硝酸纤维素膜，2-检测条带(T线)，3_对照条带(C线)，4-吸水垫，5-支撑板。
[0025]图2为本发明试剂盒结果的判定图。
[0026]图3为本发明试纸条外形图，T为CA15-3抗原检测条带，C为兔抗鼠抗体对照条带，I为加样孔，2为视窗。
[0027]图4为本发明金磁颗粒透射图。
(五)
【具体实施方式】
[0028]下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此:
[0029]实施例1半定量检测血液中CA15-3的金磁颗粒免疫层析测试条及试剂盒
[0030](I)测试条
[0031]A、抗体制备:选用商品化的CA15-3配对抗体及抗原，购自美国Calb1reagents。
[0032]B、硝酸纤维素膜及吸水垫的制备:选用商品化的常用硝酸纤维素膜和吸水垫，购自上海杰一生物。
[0033]C、试纸条的组装与切割:
[0034]下述操作必须在湿度小于20%，温度20-25°C的房间内进行。
[0035]测试条的组装:在20cm长的PVC支撑板(6.0cm*30cm,设有卡槽)上组装(可以事先组装好备用)20cm长的硝酸纤维素膜，并使用B1Dot dispensing apparatus (AUTOKUNHGS101)上的 BIRJET 气压喷头将 2 μ 1/cm, 1.0mg/mL 兔抗鼠 IgG 和 2 μ 1/cm, 0.06mg/mLCA 15-3抗原标准品分别喷到硝酸纤维膜对应的条带上作为T线和C线(T线在点样区与C线之间)，37°C，12小时烘干。然后在硝酸纤维素膜T线的一边组装上20cm长的吸水垫并设置点样区或者直接在硝酸纤维素膜上设置点样区，T线位于点样区和C线之间，多余的支撑板可以用剪刀剪掉。硝酸纤维素膜一端(远离T线的一端)置于吸水垫的上方，重叠放置，重叠部分的长度为2mm，T线和C线的间隔为0.5cm，硝酸纤维素膜上T线和C线各一条(见图1)。
[0036]试纸条的裁切:使用B1dot dispensing apparatus (AUTOKUN HGS201)选择与 T线与C线垂直的方向，将该试纸条的大小剪成宽度为4_，长度6cm。
[0037]试剂盒成品包装:将切好的试纸条盖上塑料盖板(塑料盖板在点样区位置有加样孔，在相应的T线和C线处有视窗，盖板上设有与支撑板卡槽配合的卡扣，见图3)，并与3包干燥剂密封于铝箔袋中。50个测试条为一个包装，置于一个包装盒内，一盒一份说明书，一瓶5mL装的金磁颗粒混悬液，50个Eppenddorf管，室温避光保存，保质期为12个月。
[0038](2)金磁颗粒悬浮液
[0039]磁性纳米粒子的制备:将0.5mg粒径为l_20nm的Fe3O4粉末超声分散到50ml体积浓度2%乙酸水溶液中，加入Img壳聚糖粉末，充分搅拌溶解获得均一的水相。取0.1ml山梨糖醇酐油酸酯(span-80)加入到盛有150ml液体石蜡的三口烧瓶中，机械搅拌速度为2000rpm条件下搅拌形成油相。将水相缓慢加入油相中，继续搅拌一段时间形成油包水小液滴后滴加质量浓度为10%的戊二醛水溶液，40°C交联反应2h，反应完全后再用质量浓度10% NaOH水溶液调整pH至pH = 10，40°C继续搅拌2h，反应液加入2倍体积的石油醚，抽滤，滤饼用石油醚和70°C无水乙醇各洗涤3次，冷冻干燥，获得磁性纳米粒子30mg，粒径为100-800nm，室温(25°C )保存。
[0040]金磁颗粒的制备:取30mg磁性纳米粒子，加入100ml ddH20，超声分散5min，加入Iml质量浓度I %氯化金水溶液，加热至沸腾后，迅速加入2ml质量浓度I %柠檬酸三钠水溶液，煮沸10分钟，永磁铁分离，pH = 9.0,0.05M硼酸-硼砂缓冲液洗涤三次，去除洗涤液，获得金磁颗粒45mg，粒径为500nm-l.3 μ m，通过能谱分析，测得金颗粒占金磁颗粒重量的40.73%，4°C保存备用。
[0041]金磁颗粒混悬液的制备:取30mg的金磁颗粒用1mL含终浓度lwt%鹿糖的pH =9.0,0.05M硼酸-硼砂缓冲液悬浮，使OD270 = 1.3。加入0.3mL0.5mg/mL的CA 15-3单克隆抗体(购自美国Calb1reagents)，室温、10rpm缓慢旋转孵育30分钟。再加入0.3mLU%(w/v)的牛血清白蛋白(购自阿拉丁试剂)室温封闭(指的是旋转过程中牛血清白蛋白与金磁颗粒表面被单克隆抗体结合后剩余的结合位点发生结合，可避免假阳性)30分钟。然后加入总体积2mL，1.2ml、lg/L的