硝酸纤维素膜，该硝酸纤维素膜由GE公 司提供（Hybond-E化产品号RPN303D)。各特异性抗体点阵排布于硝酸纤维素底膜，而在具 体的操作过程中，各特异性抗体的排布可W按照实验设计需要进行调整，根据不同的抗体 芯片排布阵列，控制全自动点样仪，制备出所需要的中间产品。
[0016] 采用本发明的用于筛选生物标记物的抗体芯片试剂盒，能够同时检测六十项细胞 因子，并且能够实现多样本多指标的并行检测，实现疾病生物标记物的高通量筛选，克服了 现有技术操作繁琐、检测指标单一、需有费仪器、灵敏度低等缺陷，具有廉价、便利、灵敏、准 确、高通量、标本用量少、能在普通实验室推广和规模化等优点。
【具体实施方式】
[0017] 为使本发明更加容易理解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，该 些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
[0018] 实施例1 ; 一种用于筛选生物标记物的抗体芯片试剂盒的制备。
[0019] 为了筛选病人标本中相应的生物标记物，制备固定有针对于如下蛋白质的特异 性抗体的底膜：血管生成素、脑源性神经营养因子、B-淋己细胞趋化因子、骨形态发生蛋 白-4、骨形态发生蛋白-6、CK目8-1、睫状神经营养因子、表皮生长因子、趋化因子、趋化因 子-2、趋化因子-3、成纤维细胞生长因子-6、成纤维细胞生长因子-7、FMS样酪氨酸激酶3 配体、趋化因子CX3化1、趋化因子（C-C基序）配体6、胶质细胞源性神经营养因子、粒细胞 集落刺激因子、趋化因子（C-C基序）配体1、Y-干扰素、膜岛素样生长因子结合蛋白-1、 膜岛素样生长因子结合蛋白-2、膜岛素样生长因子结合蛋白-4、膜岛素样生长因子1、白细 胞介素-10、白细胞介素-13、白细胞介素-15、白细胞介素-16、白细胞介素-1 a、白细胞介 素-1目、IL-1受体枯抗剂、白细胞介素-2、白细胞介素-3、白细胞介素-4、白细胞介素-5、 白细胞介素-6、白细胞介素-7、瘦素、LIGHT蛋白、单核细胞趋化蛋白1、单核细胞趋化蛋白 2、单核细胞趋化蛋白3、单核细胞趋化蛋白4、巨瞻细胞集落刺激因子、巨瞻细胞衍生的细 胞因子、单核因子诱导干扰素Y、巨瞻细胞炎性蛋白-1 5、巨瞻细胞炎性蛋白-3 a、中性粒 细胞激活蛋白-2、神经营养因子3、巨瞻细胞炎性蛋白-4、血小板衍生生长因子-BB、趋化因 子（C-C基序）配体5、干细胞因子、基质细胞衍生因子-1、趋化因子（C-C基序）配体17、转 化生长因子目1、转化生长因子目3、肿瘤坏死因子-a、肿瘤坏死因子-目。
[0020] 1、抗体的来源：
[0021] 采用针对表1中所列蛋白质的特异性抗体，抗体的用途、来源、浓度均在表1详细 说明。所有的检测抗体均用Pierce长臂生物素标记试剂盒（Cat#131093)标记。具体方法 如下；将待标记的检测抗体在大量的IxPBS缓冲液（1毫升抗体在1升的PBS)中透析H次， 每次至少6小时。测定抗体浓度后按每毫克抗体加入80微克生物素DMS0溶液，混匀，在室 温下反应4小时。用PBS溶液对生物素标记的抗体进行透析，去除游离的生物素并标定生 物素标记的检测抗体浓度。
[0022] 表1特异性抗体名称，抗体的用途、来源、浓度信息
【主权项】
1. 一种用于生物标记物筛选的抗体芯片试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括： 抗体芯片，包括底膜和在底膜表面上固定的60种细胞因子的特异性抗体、三种阳性对 昭. 生物素标记的细胞因子检测抗体混合物；和 辣根过氧化物酶标记的抗生物素蛋白链菌素。
2. 根据权利要求1所述的抗体芯片试剂盒，其特征在于：所述底膜为硝酸纤维素膜、聚 偏氟乙烯膜或者尼龙膜。
3. 根据权利要求1所述的抗体芯片试剂盒，其特征在于：所述60种细胞因子的 特异性抗体是通过以下方法固定在所述底膜上的：将所述特异性抗体混合溶解于含有 0. 01-10g/100ml牛白蛋白的Tris缓冲液中，配制浓度为0. 5-100ng/100ml的抗体溶液，取 50-500nl点样于底膜上，将点样好的底膜放于室温条件下静置5分钟到8分钟，于2°C到 8 °C保存备用。
4. 根据权利要求1所述的抗体芯片试剂盒，其特征在于：三种阳性对照是采用不同浓 度的生物素标记的小牛IgG，并作为不同微阵列间的标准化参照系。
5. 根据权利要求1所述的抗体芯片试剂盒，其特征在于，所述特异性抗体为选自针对 如下60种细胞因子的抗体：血管生成素、脑源性神经营养因子、B-淋巴细胞趋化因子、骨 形态发生蛋白-4、骨形态发生蛋白-6、CKi3 8-1、睫状神经营养因子、表皮生长因子、趋化因 子、趋化因子-2、趋化因子_3、成纤维细胞生长因子-6、成纤维细胞生长因子-7、FMS样酪 氨酸激酶3配体、趋化因子CX3CL1、趋化因子（C-C基序）配体6、胶质细胞源性神经营养因 子、粒细胞集落刺激因子、趋化因子（C-C基序）配体1、γ -干扰素、胰岛素样生长因子结合 蛋白-1、胰岛素样生长因子结合蛋白-2、胰岛素样生长因子结合蛋白_4、胰岛素样生长因 子1、白细胞介素-10、白细胞介素-13、白细胞介素-15、白细胞介素-16、白细胞介素 -I α、 白细胞介素-1 β、IL-1受体拮抗剂、白细胞介素-2、白细胞介素-3、白细胞介素-4、白细胞 介素-5、白细胞介素_6、白细胞介素-7、瘦素、LIGHT蛋白、单核细胞趋化蛋白1、单核细胞趋 化蛋白2、单核细胞趋化蛋白3、单核细胞趋化蛋白4、巨噬细胞集落刺激因子、巨噬细胞衍 生的细胞因子、单核因子诱导干扰素 Y、巨噬细胞炎性蛋白-I S、巨噬细胞炎性蛋白-3 α、 中性粒细胞激活蛋白-2、神经营养因子3、巨噬细胞炎性蛋白-4、血小板衍生生长因子-BB、 趋化因子（C-C基序）配体5、干细胞因子、基质细胞衍生因子-1、趋化因子（C-C基序）配体 17、转化生长因子β?、转化生长因子β 3、肿瘤坏死因子-α、肿瘤坏死因子-β。
【专利摘要】本发明公开了一种用于生物标记物筛选的抗体芯片试剂盒。所述试剂盒包括：抗体芯片，包括底膜和在底膜表面上固定的60种细胞因子的特异性抗体、三种阳性对照；生物素标记的细胞因子检测抗体混合物；和辣根过氧化物酶标记的抗生物素蛋白链菌素。本发明所述的试剂盒能够对多个样品同时检测六十种细胞因子，克服了现有技术操作繁琐、检测指标单一、灵敏度低等缺陷，具有廉价、便利、灵敏、准确、高通量、标本用量少、能在普通实验室推广和规模化等优点。
【IPC分类】G01N33-68
【公开号】CN104569418
【申请号】CN201310476932
【发明人】黄若磐
【申请人】广州瑞博奥生物科技有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2013年10月12日