溶液，然后向磷酸溶液中加入三乙胺，调pH值至7，即得。Agela-ASB C18(250mm X 4.6mm，5μπι)的色谱柱;柱温为20°C;流速控制在0.8mL/min;检测波长为200nm;进样量8μ L。在上述色谱条件下，对空白、标准工作溶液和样品溶液进行系统适用性试验，硫氰酸钠的 理论塔板7623,主峰与杂质峰的分离度大于2.0,拖尾因子1.25。根据3倍信噪比计算可得其 检测限为lmg/L，10倍信噪比计算可得其定量限为3.3mg/L。检测限可达到0.2mg/kg;该方法 进样质量浓度在5~500mg/L范围内线性良好。取生鲜乳5批以上按色谱条件进行检测，结果 定量范围〇.5~5〇11^/1^，回收率>85%。
[0030] 实施例2
[0031]乳及乳制品前处理步骤同实施例1。
[0032]确定色谱条件为：流动相为0.2 %磷酸三乙胺(pH = 7.0):乙腈=95: 5，以体积比 计；0.2%硫酸三乙胺采用如下方法配制：先将磷酸溶于去离子水中配制成质量浓度为 0· 2%的磷酸溶液，然后向磷酸溶液中加入三乙胺，调pH值至7，即得。Agela-ASB C18(250mm X 4.6mm，5μπι)的色谱柱;柱温为25°C;流速控制在0.8mL/min;检测波长为215nm;进样量9μ L。在上述色谱条件下，对空白、标准工作溶液和样品溶液进行系统适用性试验，硫氰酸钠的 理论塔板7623,主峰与杂质峰的分离度大于2.0,拖尾因子1.25。根据3倍信噪比计算可得其 检测限为lmg/L，10倍信噪比计算可得其定量限为3.3mg/L。检测限可达到0.2mg/kg;该方法 进样质量浓度在5~500mg/L范围内线性良好。取生鲜乳5批以上按色谱条件进行检测，结果 定量范围〇.5~5〇11^/1^，回收率>90%。
[0033] 实施例3
[0034] 乳及乳制品前处理步骤同实施例1。
[0035]确定色谱条件为:流动相为0.2%磷酸三乙胺(pH= 7.0):乙腈=95: 5; Agela-ASB C18 (250mm X 4.6mm，5μπι)的色谱柱;柱温为30°C;流速控制在0.8mL/min;检测波长为218nm; 进样量1〇此。在上述色谱条件下，对空白、标准工作溶液和样品溶液进行系统适用性试验， 硫氰酸钠的理论塔板7623,主峰与杂质峰的分离度大于2.0,拖尾因子1.25。根据3倍信噪比 计算可得其检测限为lmg/L，10倍信噪比计算可得其定量限为3.3mg/L。检测限可达到 0.2mg/kg;该方法进样质量浓度在5~500mg/L范围内线性良好。取生鲜乳5批以上按色谱条 件进行检测，结果定量范围0.5~50mg/kg，回收率>90%。
[0036] 通过以上不同实施案例可以看出，本发明采用高效液相色谱法测定，设备易得，灵 敏度高，采用碱性氧化铝柱进行固相萃取，回收率高且结果稳定。
[0037] 上述方式中未述及的有关技术内容采取或借鉴已有技术即可实现。
[0038] 还需要说明的是，在本说明书的教导下本领域技术人员还可以作出这样或那样的 容易的变化方式，诸如等同方式，或明显变形方式;上述变化方式均应在本发明的保护范围 之内。
【主权项】
1. 一种测定乳及乳制品中硫氰酸钠质量浓度的高效液相色谱方法，其特征在于，步骤 包括： (1) 乳及乳制品前处理步骤:先向乳或乳制品样品中加入乙腈，沉淀除去乳或乳制品样 品中的蛋白，然后用固相萃取柱除去乳或乳制品样品中的部分水溶性维生素和氨基酸，收 集洗脱液，再将洗脱液离心脱脂，备用待测； (2) 高效液相色谱检测步骤:确定色谱条件为:流动相选用磷酸三乙胺和乙腈的混合溶 液;色谱柱选用Agela-ASB C18色谱柱;柱温为25-30°C;流速控制在0.8mL/min;检测波长为 200-218nm;进样量为 8-10yL。2. 根据权利要求1所述的一种测定乳及乳制品中硫氰酸钠质量浓度的高效液相色谱方 法，其特征在于，步骤(1)中：所述乙腈与乳或乳制品样品的体积比为1:2-3。3. 根据权利要求1所述的一种测定乳及乳制品中硫氰酸钠质量浓度的高效液相色谱方 法，其特征在于，步骤(1)中：所述固相萃取柱采用碱性氧化铝作为填料。4. 根据权利要求1所述的一种测定乳及乳制品中硫氰酸钠质量浓度的高效液相色谱方 法，其特征在于，步骤(2)中：所述磷酸三乙胺和乙腈的体积比为95:5;磷酸三乙胺采用如下 方法配制:先将磷酸溶于去离子水中配制成质量浓度为0.2%的磷酸溶液，然后向磷酸溶液 中加入三乙胺，调pH值至7,即得。5. 根据权利要求1所述的一种测定乳及乳制品中硫氰酸钠质量浓度的高效液相色谱方 法，其特征在于，步骤(2)中：硫氰酸钠的理论塔板为7623,主峰与杂质峰的分离度大于2.0， 拖尾因子为1.25;根据3倍信噪比计算得其检测限为lmg/L，10倍信噪比计算得其定量限为 3.311^/1 ;绘制标准曲线，得到￥=18915乂-15581，1? = 0.999，检测限达到0.211^/1^。
【专利摘要】本发明公开了一种测定乳及乳制品中硫氰酸钠质量浓度的高效液相色谱方法，步骤如下：先向乳或乳制品样品中加入乙腈，沉淀除去乳或乳制品样品中的蛋白，然后用固相萃取柱除去乳或乳制品样品中的部分水溶性维生素和氨基酸，收集洗脱液，再将洗脱液离心脱脂，备用待测；确定色谱条件为：流动相选用磷酸三乙胺和乙腈的混合溶液；色谱柱选用Agela-ASB？Cl8色谱柱；柱温为25-30℃；流速控制在0.8mL/min；检测波长为200-218nm；进样量为8-10μL。本发明根据反相离子对色谱法的原理，建立了一种检测乳及乳制品中硫氰酸钠质量浓度的高效液相色谱方法，该方法具有前处理简单，检测灵敏度高、准确性好、结果稳定，可普及等优点。
【IPC分类】G01N30/89, G01N30/02
【公开号】CN105510461
【申请号】CN201510889639
【发明人】李彦, 付红蕾, 吴燕, 李辉, 穆阿丽, 庄桂玉
【申请人】青岛市动物疫病预防控制中心
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2015年12月4日