专利名称：一种快速繁殖穗花狐尾藻的方法
技术领域：
本发明涉及一种水生植物的组织培养方法，更具体涉及穗花狐尾藻(聚草)的一种快速繁殖方法，属于生物技术在水体植被恢复和水簇箱中水草种苗生产中的应用。
背景技术：
穗花狐尾藻(聚草)Haloragidaceae Myriophyllum spicatum属小二仙草科狐尾藻属，以其叶色翠绿或略带紫红色可供观赏，而且较抗污染，是生物食物链中的重要植物资源，又是水体植被恢复中的重要先锋水草。穗花狐尾藻的叶子呈羽毛放射状，在清水中栩栩如生，也是水簇箱中的常用品种。在自然界中繁殖系数低，如利用常规的扦插方法，形成不了规模化生产，难以满足水体植被恢复和水簇箱中植物材料的需求。
组织培养作为生物技术领域中的一种重要手段，利用植物细胞的全能性，如茎尖、嫩芽等组织，通过离体培养，产生愈伤组织、分化成苗、诱导生根，从而形成植物的无性系快速繁殖的植株。虽然组织培养是一种比较成熟的技术，其基本培养基一般采用MS，但对不同植物，从产生愈伤组织、分化成苗、诱导生根的不同生长阶段需要不同的营养配置，以及不同的生长条件。因此对穗花狐尾藻的组织培养，也需要特殊的培养基和培养条件。
发明内容
本发明的目的是，提供一种穗花狐尾藻快速繁殖的方法，该方法利用组织培养技术，将穗花狐尾藻培养物经消毒、诱导培养、分化与增殖及生根培养，可快速繁殖穗花狐尾藻，以满足水体植被恢复和水簇箱中植物材料市场的需求。
一种快速繁殖穗花狐尾藻的方法，该方法按下列步骤进行(1)取长度为3～5厘米的穗花狐尾藻茎段作为穗花狐尾藻培养物；(2)将穗花狐尾藻培养物用流水冲冼30～40分钟，再用75％的酒精棉球擦洗穗花狐尾藻培养物的表面，然后用0.1％的氯化汞浸泡6～8分钟，无菌水冲洗8～10分钟；(3)将经步骤(2)处理的穗花狐尾藻培养物接入诱导培养基中，培养20～25天；诱导培养基为每升MS基本培养基中加入0.09毫克KT(6-呋喃氨基嘌呤)、0.08毫克2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)、30克蔗糖、6克琼脂；其中每升MS基本培养基含NH4NO3(硝酸铵) 1650毫克KNO3(硝酸钾)1900毫克CaCl2·2H2O(二水氯化钙)440毫克MgSO4.7H2O(硫酸镁) 370毫克KH2PO4(磷酸二氢钾) 170毫克KI(碘化钾)0.83毫克H3BO3(硼酸)6.2毫克
MnSO4·4H2O(硫酸锰) 22.3毫克ZnSO4·7H2O(硫酸锌) 8.6毫克Na2MoO4·2H2O(钼酸钠)0.25毫克CuSO4·5H2O(硫酸铜) 0.025毫克CoCl2·6H2O(氯化钴) 0.025毫克FeSO4·7H2O(硫酸亚铁) 27.8毫克乙二胺四乙酸二钠37.3毫克肌醇100毫克烟酸0.5毫克盐酸吡哆醇 0.5毫克盐酸硫胺素 0.1毫克甘氨酸 2毫克余者为水；(4)将经步骤(3)培养的穗花狐尾藻培养物转接于分化与增殖培养基，培养30～45天长出许多穗花狐尾藻芽；分化与增殖培养基为每升MS基本培养基中加入1.2毫克BA(6-苄基腺嘌呤)、0.15毫克NAA(萘乙酸)、30克蔗糖、6克琼脂；(5)若将步骤(4)的穗花狐尾藻芽分株，可作为新的穗花狐尾藻培养物，重复步骤(4)可得到大量的穗花狐尾藻芽；(6)若将步骤(4)的穗花狐尾藻芽转接于生根培养基中诱导生根，培养20～30天即得到穗花狐尾藻苗；生根培养基为每升MS基本培养基中加入1升蒸馏水、4毫克BA(6-苄基腺嘌呤)、4毫克IAA(萘乙酸)、40克蔗糖、12克琼脂。
本发明具有如下优点本发明的诱导培养基、分化与增殖培养基及生根培养基是最适合穗花狐尾藻三个不同生长阶段---诱导培养、分化与增殖及生根培养的最佳培养基配方，一个穗花狐尾藻茎段经反复增殖，一年可繁殖上万株种苗，为水体植被恢复和水簇箱布景提供大量的种苗。
具体实施例方式一种快速繁殖穗花狐尾藻的方法，该方法按下列步骤进行(1)取长度为3～5厘米的穗花狐尾藻茎段作为穗花狐尾藻培养物；(2)将穗花狐尾藻培养物用流水冲冼30～40分钟，再用75％的酒精棉球擦洗穗花狐尾藻培养物的表面，然后用0.1％的氯化汞浸泡6～8分钟，无菌水冲洗8～10分钟；(3)将经步骤(2)处理的穗花狐尾藻培养物接入诱导培养基中，培养20～25天，穗花狐尾藻培养物开始萌动、生长；诱导培养基为每升MS基本培养基中加入0.09毫克KT(6-呋喃氨基嘌呤)、0.08毫克2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)、30克蔗糖、6克琼脂；其中每升MS基本培养基含NH4NO3(硝酸铵) 1650毫克KNO3(硝酸钾) 1900毫克CaCl2·2H2O(二水氯化钙) 440毫克
MgSO4.7H2O(硫酸镁) 370毫克KH2PO4(磷酸二氢钾) 170毫克KI(碘化钾)0.83毫克H3BO3(硼酸)6.2毫克MnSO4·4H2O(硫酸锰)22.3毫克ZnSO4·7H2O(硫酸锌)8.6毫克Na2MoO4·2H2O(钼酸钠) 0.25毫克CuSO4·5H2O(硫酸铜)0.025毫克CoCl2·6H2O(氯化钴)0.025毫克FeSO4·7H2O(硫酸亚铁) 27.8毫克乙二胺四乙酸二钠 37.3毫克肌醇 100毫克烟酸 0.5毫克盐酸吡哆醇0.5毫克盐酸硫胺素0.1毫克甘氨酸2毫克余者为水；(4)将经步骤(3)培养的穗花狐尾藻培养物转接于分化与增殖培养基，培养30～45天长出许多穗花狐尾藻芽；分化与增殖培养基为每升MS基本培养基中加入1.2毫克BA(6-苄基腺嘌呤)、0.15毫克NAA(萘乙酸)、30克蔗糖、6克琼脂；(5)若将步骤(4)的穗花狐尾藻芽分株，可作为新的穗花狐尾藻培养物，重复步骤(4)可得到大量的穗花狐尾藻芽；(6)若将步骤(4)的穗花狐尾藻芽转接于生根培养基中诱导生根，培养20～30天即得到穗花狐尾藻苗；生根培养基为每升MS基本培养基中加入1升蒸馏水、4毫克BA(6-苄基腺嘌呤)、4毫克IAA(萘乙酸)、40克蔗糖、12克琼脂。
实施本发明，可在短期内得到大量的穗花狐尾藻试管苗。
权利要求
1.一种快速繁殖穗花狐尾藻的方法，其特征在于，该方法按下列步骤进行(1)取长度为3～5厘米的穗花狐尾藻茎段作为穗花狐尾藻培养物；(2)将穗花狐尾藻培养物用流水冲冼30～40分钟，再用75％的酒精棉球擦洗穗花狐尾藻培养物的表面，然后用0.1％的氯化汞浸泡6～8分钟，无菌水冲洗8～10分钟；(3)将经步骤(2)处理的穗花狐尾藻培养物接入诱导培养基中，培养20～25天；诱导培养基为每升MS基本培养基中加入0.09毫克6-呋喃氨基嘌呤、0.08毫克2，4-二氯苯氧乙酸、30克蔗糖、6克琼脂；(4)将经步骤(3)培养的穗花狐尾藻培养物转接于分化与增殖培养基，培养30～45天长出许多穗花狐尾藻芽；分化与增殖培养基为每升MS基本培养基中加入1.2毫克6-苄基腺嘌呤、0.15毫克萘乙酸、30克蔗糖、6克琼脂；(5)将步骤(4)的穗花狐尾藻芽分株，作为新的穗花狐尾藻培养物，重复步骤(4)可得到大量的穗花狐尾藻芽；(6)将步骤(4)的穗花狐尾藻芽转接于生根培养基中诱导生根，培养20～30天即得到穗花狐尾藻苗；生根培养基为每升MS基本培养基中加入1升蒸馏水、4毫克6-苄基腺嘌呤、4毫克萘乙酸、40克蔗糖、12克琼脂。
全文摘要
本发明公开了一种快速繁殖穗花狐尾藻的方法，即以穗花狐尾藻的茎段为培养物，将穗花狐尾藻培养物经消毒、诱导培养、分化与增殖及生根培养，可快速繁殖穗花狐尾藻，一棵穗花狐尾藻茎段一年可繁殖上万株穗花狐尾藻种苗，为水体植被恢复和水簇箱布景提供大量的种苗。
文档编号A01G7/00GK1586153SQ20041006062
公开日2005年3月2日 申请日期2004年7月23日 优先权日2004年7月23日
发明者赵家荣, 徐惠珠, 刘艳玲, 徐立铭 申请人:中国科学院武汉植物园