小檗碱作为农用杀菌剂的新用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于农药应用技术领域，涉及小檗碱的新用途，具体的说是涉及小檗碱作 为农用杀菌剂的新用途。
【背景技术】
[0002] 小檗碱又称黄连素。是一种常见的异喹啉生物碱，分子式C2(]H1SN0 4，其结构如下：
[0003]
[0004] 小檗碱存在于小檗科等四个科十个属的许多植物中。1826年M.-E.夏瓦利埃和 G.佩尔坦从Xanthoxylonclava树皮中首次获得。小檗碱为一种季铵生物碱。从乙醚中可 析出黄色针状晶体；熔点145°C ;溶于水，难溶于苯、乙醚和氯仿。主要用于治疗胃肠炎、细 菌性痢疾等肠道感染、眼结膜炎、化脓性中耳炎等有效。近来还发现本品有阻断a-受体， 抗心律失常作用。
[0005] 小檗碱对溶血性链球菌，金黄色葡萄球菌，淋球菌和弗氏、志贺氏痢疾杆菌等均有 抗菌作用，并有增强白血球吞噬作用，对结核杆菌、鼠疫菌也有不同程度的抑制作用，对大 鼠的阿米巴菌也有抑制效用。小檗碱在动物身上有抗箭毒作用，并具有末梢性的降压及解 热作用。小檗碱的盐酸盐（俗称盐酸黄连素）已广泛用于治疗胃肠炎、细菌性痢疾等，对肺 结核、猩红热、急性扁桃腺炎和呼吸道感染也有一定疗效。中医常用黄连、黄柏、三颗针及十 大功劳等作清热解毒药物，其中主要有效成分即小檗碱。
[0006] 目前，小檗碱主要用于医药领域，而有关小檗碱的活性物质在农用抑菌活性方面 的研究较少。有报道指出，小檗碱能抵抗引起植物根腐病的多种瘤梗孢的侵染；邓业成 等研究发现，狭叶十大功劳根茎提取物对梨褐斑病具有较好的抑制作用，其有效中浓度为 1.798g/L〇
[0007] 公开于该【背景技术】部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应 当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的是拓展小檗碱的用途，为小檗碱作为农用杀菌剂的用途提供理论基 础。
[0009] 本发明提供的技术方案为：
[0010] 小檗碱作为农用杀菌剂的新用途，所述的农用杀菌剂的新用途是在防治植物病原 菌引起的植物病害的用途。
[0011] 作为优选，所述的植物病原菌包括植物病原真菌和植物病原细菌。
[0012] 作为优选，所述的植物病原真菌为玉米小斑病菌、香蕉弯孢霉叶斑病菌、烟草疫霉 病菌、柑橘绿霉病菌和烟草白絹病菌。
[0013] 作为优选，所述的植物病原细菌为水稻白叶枯病菌、水稻细菌性条斑病菌、李细菌 性穿孔病菌、核桃黑斑病菌和柑橘溃疡病菌。
[0014] 与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
[0015] 1.本发明使用的小檗碱是从狭叶十大功劳中提取、分离得到的，为将狭叶十大功 劳开发成一种植物源杀菌剂奠定了基础，丰富了具有杀菌作用的植物品种。
[0016] 2.发明人对小檗碱抑制多种植物病原菌的活性进行了深入研究，实验结果发现 小檗碱对多种植物病原菌具有较好的抑制作用，本发明为把小檗碱开发成为一种新农药提 供了理论基础。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合实施例对本发明的【具体实施方式】进行详细描述，但应当理解本发明的保 护范围并不受【具体实施方式】的限制。
[0018] 除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语"包括"或其变 换如"包含"或"包括有"等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它 元件或其它组成部分。
[0019] 发明人通过大量的筛选试验，发现小檗碱对多种农业植物病原菌具有较好的抑制 作用，这从以下生物测定实例可以清楚看出。
[0020]实施例1:小檗碱对棺物病原真菌的抑制作用
[0021] 参照慕立义（1991)的菌丝生长速率法，测试供试样品对不同植物病原真菌菌丝 生长速率的影响。
[0022] (1)供试菌种的活化：将供试真菌接种于9cm的PSA平板培养皿中，于28°C恒温培 养箱中培养，待菌落长至培养皿的2/3,用直径为7_的灭菌打孔器于菌落边缘打孔，制成 直径为7mm的菌饼，备用。
[0023] (2)带毒平板培养基的制备：称取适量的供试样品，用甲醇将其完全溶解后，用灭 菌水稀释制成样品溶液，吸取样品溶液加至定量为l〇〇mL的热融化并冷却至50°C左右的 PSA热培养基中，充分混匀，倒入直径9cm培养皿中，制成厚薄一致的带毒培养基，充分凝固 备用。
[0024] (3)对照设置：①空白对照（CK1):灭菌水对照；②溶剂对照（CK2):以能够溶解供 试样品且对真菌生长无明显影响的溶剂作为溶剂对照。
[0025] (4)处理步骤：分别挑取供试菌种的菌饼，倒置于带毒平板培养基的中央，每皿接 一个菌饼，每个处理3次重复，作好标记。将处理皿放置于28°C恒温培养箱中培养，定时观 察菌落生长状况。待对照组菌落的直径达培养皿直径的2/3以上时，用十字交叉法测量菌 落直径，作好记录。利用下列公式，计算活性物质对植物病原真菌的抑菌率：
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[0027] 在小檗碱浓度为0. lg/L下，采用上述的菌丝生长速率法测试小檗碱对16种植物 病原真菌的抑菌效果。结果表明，小檗碱对15种植物病原真菌具有一定的抑菌作用（表1)。 其中，小檗碱对玉米小斑病菌表现为完全抑制（抑制率达100% )，对香蕉弯孢霉叶斑病菌 和烟草疫霉病菌的抑制作用较强，抑制率在80%以上，对柑橘绿霉病菌和烟草白絹病菌也 有较好的抑制作用，抑制率在60%以上，但对茉莉叶点霉叶斑病菌、杧果拟盘多毛孢叶枯病 菌、猕猴桃棒孢霉、烟草棒孢霉叶斑病菌、烟草灰霉病菌、甘蓝黑斑病菌、香蕉炭疽病菌、水 稻稻瘟病菌、西瓜枯萎病菌及柑橘树脂病菌的抑制作用一般或较差，抑制率在6%~44% 之间，对水稻纹枯病菌几乎没有抑制作用。与清水处理相比，所用的溶剂对照对供试病原菌 无抑制作用。
[0028] 表1小檗碱对植物病原真菌的抑菌活性
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[0031] 实施例2:小檗碱对细菌的抑制作用
[0032] 参照抑菌圈法中的琼脂打孔扩散法，操作步骤如下：
[0033] (1)菌液的制备：将供试细菌于NA培养基中划线活化，于28°C恒温培养箱中培养 48h，再用灭菌环挑取培养好的细菌至NA液体培养中，置于28°C、120r/m振荡培养箱中振荡 培养24h，备用。
[0034] (2)带菌培养基的制备：将定量为lOOmL的NA培养基热融化完全，待其冷却至 45°C左右，吸取lmL培养好的细菌悬浮液注入培养基中，充分摇匀，均匀倒入直径为9cm培 养皿中，每皿约25mL NA培养基，凝固后备用。
[0035] (3)样品溶液制备：取完全溶解的样品溶液，用灭菌水稀释配制成需要的浓度，备 用。
[0036] ⑷对照设置：(a)药剂对照（CK1):以100mg/L医用链霉素作为阳性对照；(b)清 水对照（CK2):灭菌水对照；（c)溶剂对照（CK3):以溶解供试样品的溶剂作为溶剂对照。
[0037] (5)处理步骤：将直径为5_的打孔器用酒精灯火焰灭菌消毒，待其冷却后，在带 菌培养基上打孔，每皿打3-4孔（呈三角形或四方形），用灭菌的牙签挑走小孔里的培养基。 将配置好的样品溶液和对照溶剂依次有序的注入小孔中，每孔45 y L，做好标记，每个处理 3次重复。将处理好的皿置于28°C恒温培养箱中培养48h后，采用十字交叉法测量抑菌圈 直径。
[0038] 在浓度为lg/L下，测试小檗碱对7种植物病原细菌、2种常用植物病害生防细菌及 大肠杆菌和金黄色葡萄球菌这2种常见人体致病菌的抑菌活性。
[0039] 表2小檗碱对细菌的抑菌活性
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[0042]如表2所示，小檗碱对6种植物病原细菌均具有一定的抑菌活性，其中对水稻白叶 枯病菌的抑菌效果最好，抑菌圈直径达到32. 00mm ;其次为水稻细菌性条斑病菌和李细菌 性穿孔病菌，抑菌圈直径分别为14. 17mm和13. 17mm ;对核桃黑斑病菌、金黄色葡萄球菌和 柑橘溃疡病菌的抑菌圈直径在3-10mm之间；对生防菌枯草芽孢杆菌B47和B96的生长几 乎没有影响，抑菌圈直径分别为1. 50mm和0. 83mm ;对魔芋软腐病菌和大肠杆菌没有抑菌效 果。
[0043] 卖施例3:小檗碱对水稻细菌件条斑病菌的毒力
[0044] 参照杜连祥（2005) 0D值法测定样品对供试细菌的毒力。
[0045] (1)菌种制备