专利名称：一种昆虫细胞生长用培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种培养基，尤其是一种适宜多种昆虫细胞生长的培养基，属于细胞培养基技术领域。
背景技术：
昆虫细胞培养作为一项极具产业化发展潜力的技术，正在日益受到人们的关注。昆虫细胞培养基是培养昆虫细胞的关键物质，昆虫细胞的生长、增值、分化等过程都需要培养基，适宜的培养基对昆虫细胞的生长和增殖会起到极其重要的作用，可以获得较好的培养效果，使原代培养能维持高密度、贴壁的单层细胞。昆虫细胞生长过程中需要补充多方 面的营养物质，如多种氨基酸、维生素、辅酶、核酸、嘌呤、嘧啶、激素和生长因子。大部分昆虫细胞都是利用葡萄糖、果糖或麦芽糖作为主要碳源和能源，不同种类的昆虫细胞对氨基酸有不同的要求，至少有14种必需的氨基酸是细胞本身不能合成而必须由培养基提供的。昆虫细胞培养基经历了天然培养基、合成培养基和无血清培养基三个发展阶段.天然培养基取自动物体液，或者是从动物组织中提取的成分；合成培养基的各种成分都为公知成分；无血清培养基是在已知细胞所需营养物质和贴壁因子中加入适宜的细胞生长因子而得到的，可保证细胞生长良好，且无须补加血清。到目前为止，至少已报道了 60多种昆虫细胞培养基。不同细胞系选择的培养基以及培养条件有所不同。常用的有Grace、TC- 199、TC-100, IPL - 41、MGM - 443,MGM -448,MGM - 450、MM 和 M 3 等。虽然目前已有多种商品化培养基面世，但不同的昆虫细胞在不同培养基中的生长差异性较大，而能适应多种昆虫细胞生长的培养基至今还比较罕见，特别在新昆虫细胞系的建立方面，寻找适宜的培养基则是较大的难点。因此，有必要研发能够适于不同目昆虫细胞生长的培养基。
发明内容
本发明的目的在于提供一种昆虫细胞生长用培养基，以适于不同目的多种昆虫细胞的生长，从而为新昆虫细胞系的建立提供技术支持。本发明通过下列技术方案完成一种昆虫细胞生长用培养基，其特征在于每1000毫升培养基中含有下列组分
Grace培养基40 50g
海藻糖O. 5 3g
酵母抽提物O. 5 3g
胎牛血清100 200ml
水余量。所述Grace培养基为市购产品。所述海藻糖为市购的海藻糖Glucose产品。
所述酵母抽提物为市购的酵母抽提物TC-Yeastolate产品。所述胎牛血清为市购的灭活胎牛血清。所述水为纯净水。本发明提供的昆虫细胞生长用培养基经过下列方法制备将市售Grace培养基干粉40 50克溶解在纯净水中；依次加入O. 5 3g市售的海藻糖Glucose及O. 5 3g市售的酵母抽提物TC-Yeastolate ;用IN的NaOH或IN的HCl调节pH值至6. 1-6. 3，加入100-200ml市售的胎牛血清，加入纯净水补足1000ml，按常规过滤、灭菌，得适于不同目的多种昆虫细胞生长的培养基。本发明具有下列优点和效果采用上述方案获得的培养基，不仅配方科学合理，原 料易得，制备方法简单，而且经过对14种昆虫细胞的培养，结果显示，来源于鳞翅目、鞘翅目、直翅目、膜翅目、双翅目、同翅目等的多种昆虫细胞均适宜用本发明的培养基培养，大部分细胞能在本发明培养基中得以生长，且成功建立了多个有限细胞系和无限细胞系。
具体实施例方式下面通过实施例对本发明做进一步描述。实施例I
按1000晕升培养基的量进行下列备料
纯净水800 ml
市购Grace培养基40g
市购海藻糖3. Og
市购酵母抽提物O. 5g
市购胎牛血清200ml ；
经过下列方法
将市购的Grace培养基干粉45克溶解在适量纯净水中；依次加入3g市售的海藻糖Glucose及O. 5g市售的酵母抽提物TC-Yeastolate ;用IN的NaOH调节pH值至6. 1，加入200ml市售的胎牛血清，加入纯净水补足1000 ml，按常规过滤、灭菌，得适于不同目的多种昆虫细胞生长的培养基。实施例2
按1000晕升培养基的量进行下列备料
纯净水850ml
市购Grace培养基50g
市购海藻糖O. 5g
市购酵母抽提物3. Og
市购胎牛血清150ml ；
经过下列方法
将市购的Grace培养基干粉50克溶解在适量纯净水中；依次加入O. 5g市售的海藻糖Glucose及3g市售的酵母抽提物TC-Yeastolate ;用IN的HCl调节pH值至6. 3，加入150ml市售的胎牛血清，加入纯净水补足1000ml，按常规过滤、灭菌，得适于不同目的多种昆虫细胞生长的培养基。
实施例3
按1000晕升培养基的量进行下列备料
纯净水900ml
市购Grace培养基50g
市购海藻糖2. Og 市购酵母抽提物2. Og
市购胎牛血清IOOml ；
经过下列方法
将市购的Grace培养基干粉50克溶解在适量纯净水中；依次加入2g市售的海藻糖Glucose及2g市售的酵母抽提物TC-Yeastolate ;用IN的NaOH调节pH值至6. 2，加入IOOml市售的胎牛血清，加入纯净水补足1000ml，按常规过滤、灭菌，得适于不同目的多种昆虫细胞生长的培养基。实施例4
按1000晕升培养基的量进行下列备料
纯净水820ml
市购Grace培养基48g
市购海藻糖2. 5g
市购酵母抽提物I. 5g
市购胎牛血清180ml ；
经过下列方法
将市购的Grace培养基干粉48克溶解在适量纯净水中；依次加入2. 5g市售的海藻糖Glucose及L 5g市售的酵母抽提物TC-Yeastolate ;用IN的NaOH调节pH值至6. 2，加入180ml市售的胎牛血清，加入纯净水补足1000ml，按常规过滤、灭菌，得适于不同目的多种昆虫细胞生长的培养基。实施例5
按1000晕升培养基的量进行下列备料
纯净水880ml
市购Grace培养基45. 7g
市购海藻糖I. 9g
市购酵母抽提物2. 5g
市购胎牛血清120ml ；
经过下列方法
将市购的Grace培养基干粉45. 7克溶解在适量纯净水中；依次加入I. 9g市售的海藻糖Glucose及2. 5g市售的酵母抽提物TC-Yeastolate ;用IN的HCl调节pH值至6. 1，加入120ml市售的胎牛血清，加入纯净水补足1000ml，按常规过滤、灭菌，得适于不同目的多种昆虫细胞生长的培养基。实施例6
按1000晕升培养基的量进行下列备料
纯净水840ml市购Grace培养基45g
市购海藻糖3g
市购酵母抽提物3g
市购胎牛血清160ml ；
经过下列方法
将市购的Grace培养基干粉45克溶解在适量纯净水中；依次加入3g市售的海藻糖Glucose及3g市售的酵母抽提物TC-Yeastolate ;用IN的HCl调节pH值至6. 3，加入160ml 市售的胎牛血清，加入纯净水补足1000ml，按常规过滤、灭菌，得适于不同目的多种昆虫细胞生长的培养基。为表明本发明的技术效果，下面通过具体试验例加以验证。试验用培养基Schneider、TC-100、Grace和本发明实施例的培养基。培养过程按常规将各昆虫细胞分别用上述不同的四种培养基进行培养。结果如下
I.短翅鸣螽胚胎细胞
试验采用Schneider、TC-100、Grace、和本发明实施例I的培养基共四种，分别对短翅鸣螽胚胎细胞进行培养，结果显示在本发明实施例I的培养基及Schneider培养基中生长的短翅鸣螽胚胎细胞长势较好，培养初期细胞形态多样，贴壁生长状态，细胞透亮、有光圈，细胞在培养一段时间后增殖，并进行了传代。成功建立短翅鸣螽胚胎细胞系3个，均为RIRI改良Grace培养基培养。结果见表I。表I
权利要求
1. 一种昆虫细胞生长用培养基，其特征在于每1000毫升培养基中含有下列组分Grace培养基40 50g海藻糖O. 5 3g酵母抽提物O. 5 3g胎牛血清100 200ml水余量。
全文摘要
本发明提供一种昆虫细胞生长用培养基，其特征在于每1000毫升培养基中含有下列组分Grace培养基40～50g，海藻糖0.5～3g，酵母抽提物0.5～3g，胎牛血清，100～200ml，余量为水。采用上述方案获得的培养基，不仅配方科学合理，原料易得，制备方法简单，而且经过对14种昆虫细胞的培养，结果显示，来源于鳞翅目、鞘翅目、直翅目、膜翅目、双翅目、同翅目等的多种昆虫细胞均适宜用本发明的培养基培养，大部分细胞能在本发明培养基中得以生长，且成功建立了多个有限细胞系和无限细胞系。
文档编号C12R1/91GK102776148SQ201210309760
公开日2012年11月14日 申请日期2012年8月28日 优先权日2012年8月28日
发明者丁伟峰, 何钊, 冯颖, 孙龙, 张欣, 李娴, 马涛 申请人:中国林业科学研究院资源昆虫研究所