Noey2基因突变检测体系及其试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种NOEY2基因突变检测体系及其试剂盒，包括用于检测NOEY25205T>C、5813DELA、6141G>A及6270G>A四个突变位点的引物序列，还包括可靠性高、获取简便、可规模化应用的对应野生型和突变型对照。本发明的NOEY2基因突变检测体系及其试剂盒揭示了用于检测的HRM反应体系，可以覆盖多突变位点检测，特异性强，具有快速、准确、高灵敏度等特点。
【专利说明】N0EY2基因突变检测体系及其试剂盒
【技术领域】
[0001] 本发明设计涉及一种基因突变的检测产品以及该产品所用到的特异性引物，属于 生物【技术领域】。
【背景技术】
[0002] ARHI (Aplysia Ras Homology member I)基因是1999年发现的母源印记抑癌基 因，又名N0EY2,定位于1ρ31，大约8kb，包括一个启动子、两个外显子和1个内含子，带一个 687bp的蛋白编码区编码一个26KD的小GTP结合蛋白，是ras/rap超家族成员之一，与该家 族成员有50-60%的家族同源性，在肝脏、胰腺、脑、膀胱和前列腺等人体多种组织中均有表 达，在正常卵巢组织中ARHI表达最高。
[0003] ARHI (N0EY2)相当于功能上的单倍体，正常细胞中母源性ARHI等位基因上发生 CpG岛甲基化修饰，使其转录活性受到抑制而不表达，但可依靠父源性ARHI等位基因转录、 翻译具有正常功能的ARHI蛋白；还可起到抑制癌细胞增殖的作用。而一旦父源性等位基因 受损或丢失，相当于两个抗癌的等位基因序列丢失，从而导致ARHI基因失活，增加了肿瘤 的易感性。诸多研究表明ARHI在调节细胞增殖、凋亡、侵袭转移、信号转导等方面起重要作 用。研究还显示在卵巢癌组织中常出现ARHI基因表达下调或缺失；ARCHl的表达缺失也可 能与乳腺癌的转移机制有关；ARHI在胰腺癌等组织中也有较高比例的缺失。
[0004] ARHI (N0EY2)基因的失活原因主要有杂合性丢失（loss of heterozygosity)、甲 基化或乙酰化异常及基因突变。研究显示ARHI基因突变与早期癌变相关。2009年JuLun Yang 等（N0EY2 mutations in primary breast cancers and breast hyperplasia, The breast，2009,18 (3)，197 - 203 )通过对50例乳腺癌及相应癌旁组织，和50例乳腺良性 病变组织的DNA进行PCR扩增，然后测序分析N0EY2基因的启动子、外显子和内含子区域的 突变情况，其蛋白表达情况通过免疫组化方法验证；结果发现42%的乳腺癌组织发生N0EY2 基因突变，34%癌旁组织发生N0EY2基因突变，乳腺良性病变组织N0EY2基因无突变。多方 面的研究均显示N0EY2基因的突变检测可为早期肿瘤的基因诊断提供借鉴信息。
[0005] 因此，开发一种检测N0EY2基因热点突变的产品，以实现高灵敏度、低成本、方便 快捷的N0EY2基因突变检测是非常有必要的。
【发明内容】
[0006] 本发明要解决的技术问题是提供一种可以覆盖多突变位点检测，且快速、准确、高 灵敏度的N0EY2基因突变检测体系及其试剂盒。
[0007] 本发明为解决上述技术问题提出的一种技术方案是：一种N0EY2基因突变检测体 系，其特征在于：包括用于检测N0EY2 5205T>C突变位点的正向检测引物N0EY1F和反向检 测引物N0EY1R，用于检测N0EY2 5813 DEL A突变位点的正向检测引物N0EY2F和反向检测 引物N0EY2R，用于检测N0EY2 6141G>A突变位点的正向检测引物N0EY3F和反向检测引物 N0EY34R，以及用于检测N0EY2 6270G>A突变位点的正向检测引物N0EY4F和反向检测引物 N0EY34R ； 所述NOEYlF的核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示； 所述NOEYlR的核苷酸序列如SEQ ID No. 2所示； 所述N0EY2F的核苷酸序列如SEQ ID No. 3所示； 所述N0EY2R的核苷酸序列如SEQ ID No. 4所示； 所述N0EY3F的核苷酸序列如SEQ ID No. 5所示； 所述N0EY34R的核苷酸序列如SEQ ID No. 6所示； 所述N0EY4F的核苷酸序列如SEQ ID No. 7所示。
[0008] 上述技术方案的一种优选是：上述N0EY2基因突变检测体系还包括阴性对照和阳 性对照； 所述阴性对照分别是针对检测N0EY2 5205T>C突变位点的野生型对照一、针对检测 N0EY2 5813 DEL A突变位点的野生型对照二、针对检测N0EY2 6141G>A突变位点的野生型 对照三和针对检测N0EY2 6270G>A突变位点的野生型对照四； 所述阳性对照分别是针对检测N0EY2 5205T>C突变位点的突变型对照一、针对检测 N0EY2 5813 DEL A突变位点的突变型对照二、针对检测N0EY2 6141G>A突变位点的突变型 对照三和针对检测N0EY2 6270G>A突变位点的突变型对照四。
[0009] 上述技术方案的一种优选是：上述野生型对照一是以未突变基因组为模板，以 N0EY1F和N0EY1R为引物进行扩增，而获得的产物； 所述野生型对照二是以未突变基因组为模板，以N0EY2F和N0EY2R为引物进行扩增，而 获得的产物； 所述野生型对照三是以未突变基因组为模板，以N0EY3F和N0EY34R为引物进行扩增， 而获得的产物； 所述野生型对照四是以未突变基因组为模板，以N0EY4F和N0EY34R为引物进行扩增， 而获得的产物。
[0010] 上述技术方案的一种优选是：上述突变型对照一是以含N0EY2 5205T>C突变位点 的基因组为模板，以N0EY1F和N0EY1MR为引物，以N0EY1MF和N0EY1R为引物，分两组进行 PCR扩增，再将获得的两组产物等量混合，以N0EY1F和N0EY1R为引物进行PCR扩增，再将获 得的产物，按体积比与野生型对照一进行混合，而获得的混合物； 所述突变型对照二是以含N0EY2 5813 DEL A突变位点的基因组为模板，以N0EY2F和 N0EY2MR为引物，以N0EY2MF和N0EY2R为引物，分两组进行PCR扩增，再将获得的两组产物 等量混合，以N0EY2F和N0EY2R为引物进行PCR扩增，再将获得的产物，按体积比与野生型 对照二进行混合，而获得的混合物； 所述突变型对照三是以含N0EY2 6141G>A突变位点的基因组为模板，以N0EY3F和 N0EY3MR为引物，以及N0EY3MF和N0EY34R为引物，分两组进行PCR扩增，再将获得的两组产 物等量混合，以N0EY3F和N0EY34R为引物进行PCR扩增，再将获得的产物，按体积比与野生 型对照三进行混合，而获得的混合物； 所述突变型对照四是以含N0EY2 6270G>A突变位点的基因组为模板，以N0EY4F和 N0EY4MR为引物，以及N0EY4MF和N0EY34R为引物，分两组进行PCR扩增，再将获得的两组产 物等量混合，以N0EY4F和N0EY34R为引物进行PCR扩增，再将获得的产物，按体积比与野生 型对照四进行混合，而获得的混合物； 所述体积比的比值是1 : 9、1 : 99或1 : 999; 所述N0EY1MF是覆盖N0EY2 5205T>C突变点碱基的正向检测引物，所述N0EY1MR是覆 盖N0EY2 5205T>C突变点碱基的反向检测引物； 所述N0EY2MF是覆盖N0EY2 5813 DEL A突变点碱基的正向检测引物，所述N0EY2MR是 覆盖N0EY2 5813 DEL A突变点碱基的反向检测引物； 所述N0EY3MF是覆盖N0EY2 6141G>A突变点碱基的正向检测引物，所述N0EY3MR是覆 盖N0EY2 6141G>A突变点碱基的反向检测引物； 所述N0EY4MF是覆盖N0EY2 6270G>A突变点碱基的正向检测引物，所述N0EY4MR是覆 盖N0EY2 6270G>A突变点碱基的反向检测引物。
[0011] 上述技术方案的一种优选是：上述突变型对照一是以含N0EY2 5205T>C未突变位 点的基因组为模板，以NOEYlF和N0EY1MR为引物，以N0EY1MF和NOEYlR为引物，分两组进 行PCR扩增，再将获得的两组产物等量混合，以NOEYlF和NOEYlR为引物进行PCR扩增，再 将获得的产物，按体积比与野生型对照一进行混合，而获得的混合物； 所述突变型对照二是以含N0EY2 5813 DEL A未突变位点的基因组为模板，分别以 N0EY2F和N0EY2MR为引物，以N0EY2MF和N0EY2R为引物，分两组进行PCR扩增，再将获得的 两组产物等量混合，以N0EY2F和N0EY2R为引物进行PCR扩增，再将获得的产物，按体积比 与野生型对照二进行混合，而获得的混合物； 所述突变型对照三是以含N0EY2 6141G>A未突变位点的基因组为模板，分别以N0EY3F 和N0EY3MR为引物，以N0EY3MF和N0EY34R为引物，分两组进行PCR扩增，再将获得的两组 产物等量混合，以N0EY3F和N0EY34R为引物进行PCR扩增，再将获得的产物，按体积比与野 生型对照三进行混合，而获得的混合物； 所述突变型对照四是以含N0EY2 6270G>A未突变位点的基因组为模板，以N0EY4F和 N0EY4MR为引物，以及N0EY4MF和N0EY34R为引物，分两组进行PCR扩增，再将获得的两组产 物等量混合，以N0EY4F和N0EY34R为引物进行PCR扩增，再将获得的产物，按体积比与野生 型对照四进行混合，而获得的混合物； 所述体积比的比值是1 : 9、1 : 99或1 : 999; 所述N0EY1MF是覆盖N0EY2 5205T>C突变点碱基的正向检测引物，所述N0EY1MR是覆 盖N0EY2 5205T>C突变点的碱基的反向检测引物； 所述N0EY2MF是覆盖N0EY2 5813 DEL A突变点碱基的正向检测引物，所述N0EY2MR是 覆盖N0EY2 5813 DEL A突变点碱基的反向检测引物； 所述N0EY3MF是覆盖N0EY2 6141G>A突变点碱基的正向检测引物，所述N0EY3MR是覆 盖N0EY2 6141G>A突变点碱基的反向检测引物； 所述N0EY4MF是覆盖N0EY2 6270G>A突变点碱基的正向检测引物，所述N0EY4MR是覆 盖N0EY2 6270G>A突变点碱基的反向检测引物 上述技术方案的一种优选是：上述N0EY1MF的核苷酸序列如SEQ ID No. 8所示； 所述N0EY1MR的核苷酸序列如SEQ ID No. 9所示； 所述N0EY2MF的核苷酸序列如SEQ ID No. 10所示； 所述N0EY2MR的核苷酸序列如SEQ ID No. 11所示； 所述N0EY3MF的核苷酸序列如SEQ ID No. 12所示； 所述N0EY3MR的核苷酸序列如SEQ ID No. 13所示； 所述N0EY4MF的核苷酸序列如SEQ ID No. 14所示； 所述N0EY4MR的核苷酸序列如SEQ ID No. 15所示。
[0012] 上述技术方案的一种优选是：上述PCR扩增产物经稀释后最优浓度为25?30ng/ μ?〇
[0013] 上述技术方案的一种优选是：上述Ν0ΕΥ2基因突变检测体系，其特征在于：还包括 PCR反应液，所述PCR反应液由HRM Master Mix和MgCl2配置而成。
[0014] 为了保证检测结果的准确性和灵敏度，上述技术方案的一种优选是：上 述体系的体积为ιομ?; 所述用于检测Ν0ΕΥ2 5205T>C突变位点的体系中的各组分及其用量是25mM的MgCl2为 L 2μ1，1〇μΜ 的 N0EY1F 为 0· 2μ1，1〇μΜ 的 N0EY1R 为 0· 2μ1，模板 DNA 为 5 ?10ng，HRM Master Mix为5μ1，其余是纯水； 所述用于检测Ν0ΕΥ2 5813 DEL A突变位点的体系中的各组分及其用量是25mM的 MgCl2 为 L 2μ1，1〇μΜ 的 N0EY2F 为 0· 2μ1，1〇μΜ 的 N0EY2R 为 0· 2μ1，模板 DNA 为 5 ?IOng, HRM Master Mix为5μ1，其余是纯水； 所述用于检测Ν0ΕΥ2 6141G>A突变位点的体系中的各组分及其用量是25mM的MgCl2 为 L 2μ1，1〇μΜ 的 N0EY3F 为 0· 2μ1，1〇μΜ 的 N0EY34R 为 0· 2μ1，模板 DNA 为 5 ?10ng，HRM Master Mix为5μ1，其余是纯水； 所述用于检测Ν0ΕΥ2 6270G>A突变位点的体系中的各组分及其用量是25mM的MgCl2 为 L 2μ1，1〇μΜ 的 N0EY4F 为 0· 2μ1，1〇μΜ 的 N0EY34R 为 0· 2μ1，模板 DNA 为 5 ?10ng，HRM Master Mix为5μ1，其余是纯水； 所述模板DNA是样品、阳性对照或阴性对照。
[0015] 本发明为解决上述技术问题提出的另一种技术方案是：一种采用上述检测体系的 Ν0ΕΥ2基因突变检测试剂盒。
[0016] 本发明具有积极的效果： (1)本发明的Ν0ΕΥ2基因突变检测体系及其试剂盒利用高分辨率熔解曲线法（HRM法)， 采用特异引物组合，制备了可靠性高，获取简便，适于规模化应用的野生型对照及突变型对 照作为阴性对照和阳性对照，能检出〇. 1%的突变，极大地提高了检出率。采用本发明的 Ν0ΕΥ2基因突变检测体系及其试剂盒，检测结果与传统测序结果的符合度为100%，灵敏度 更高。
[0017] (2)本发明的Ν0ΕΥ2基因突变检测体系及其试剂盒，检测过程闭管操作，检测时间 在1小时以内，方便快捷，且通量更高。
[0018] (3)本发明的Ν0ΕΥ2基因突变检测体系及其试剂盒能覆盖检测四种Ν0ΕΥ2基因的 热点突变，采用特异的引物组合及合适的Mg 2+浓度，使得检测结果无杂峰，具有高特异性。
[0019] (4)本发明的N0EY2基因突变检测体系及其试剂盒成本极低，每样品检测试剂耗 材成本控制在人民币8元左右。
【专利附图】
【附图说明】
[0020] 图1是以阴性对照为基线，以NOEYlF和NOEYlR为引物检测样本1的N0EY2 5205T>C突变位点的差异视图。
[0021] 图2是以阴性对照为基线，以N0EY2F和N0EY2R为引物检测10%、1%及0. 1%的突 变对照二的差异视图。
【具体实施方式】
[0022] 下面通过实施例对本发明进行具体的描述，有必要在此指出的是以下实施例只用 于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术人员可 以根据上述本
【发明内容】
对本发明作出一些非本质的改进和调整。下述实施例中，若非特意 表明，所用的试剂均为分析纯，所用试剂均可从商业渠道获得。文中未注明具体条件的实验 方法，通常按照常规条件如J.萨姆布鲁克等编著的科学出版社2002年出版的《分子克隆实 验指南》一书中所述的条件，或按照制造商所建议的条件。除非另行定义，文中所使用的所 有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或 均等的方法及材料皆可应用于本发明中。 实施例
[0023] 一、试剂盒的组成。
[0024] 本实施例的N0EY2基因突变检测试剂盒包括PCR反应液、引物混合液、突变型对照 液(阳性对照液)和野生型对照液(阴性对照液)。PCR反应液、引物混合液、突变型对照液和 野生型对照液分别置于不同的试管中，如表1所示。
[0025] 表1试剂盒组成表
【权利要求】
1. 一种N0EY2基因突变检测体系，其特征在于：包括用于检测N0EY2 5205T>C突变位 点的正向检测引物N0EY1F和反向检测引物N0EY1R，用于检测N0EY2 5813 DEL A突变位点 的正向检测引物N0EY2F和反向检测引物N0EY2R，用于检测N0EY2 6141G>A突变位点的正 向检测引物N0EY3F和反向检测引物N0EY34R，以及用于检测N0EY2 6270G>A突变位点的正 向检测引物N0EY4F和反向检测引物N0EY34R ; 所述N0EY1F的核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示； 所述N0EY1R的核苷酸序列如SEQ ID No. 2所示； 所述N0EY2F的核苷酸序列如SEQ ID No. 3所示； 所述N0EY2R的核苷酸序列如SEQ ID No. 4所示； 所述N0EY3F的核苷酸序列如SEQ ID No. 5所示； 所述N0EY34R的核苷酸序列如SEQ ID No. 6所示； 所述N0EY4F的核苷酸序列如SEQ ID No. 7所示。
2. 根据权利要求1所述的N0EY2基因突变检测体系，其特征在于：还包括阴性对照和 阳性对照； 所述阴性对照分别是针对检测N0EY2 5205T>C突变位点的野生型对照一、针对检测 N0EY2 5813 DEL A突变位点的野生型对照二、针对检测N0EY2 6141G>A突变位点的野生型 对照三和针对检测N0EY2 6270G>A突变位点的野生型对照四； 所述阳性对照分别是针对检测N0EY2 5205T>C突变位点的突变型对照一、针对检测 N0EY2 5813 DEL A突变位点的突变型对照二、针对检测N0EY2 6141G>A突变位点的突变型 对照三和针对检测N0EY2 6270G>A突变位点的突变型对照四。
3. 根据权利要求2所述的N0EY2基因突变检测体系，其特征在于： 所述野生型对照一是以未突变基因组为模板，以N0EY1F和N0EY1R为引物进行扩增，而 获得的产物； 所述野生型对照二是以未突变基因组为模板，以N0EY2F和N0EY2R为引物进行扩增，而 获得的产物； 所述野生型对照三是以未突变基因组为模板，以N0EY3F和N0EY34R为引物进行扩增， 而获得的产物； 所述野生型对照四是以未突变基因组为模板，以N0EY4F和N0EY34R为引物进行扩增， 而获得的产物。
4. 根据权利要求3所述的N0EY2基因突变检测体系，其特征在于：所述突变型对照一 是以含N0EY2 5205T>C突变位点的基因组为模板，以N0EY1F和N0EY1MR为引物，以N0EY1MF 和N0EY1R为引物，分两组进行PCR扩增，再将获得的两组产物等量混合，以N0EY1F和 N0EY1R为引物进行PCR扩增，再将获得的产物，按体积比与野生型对照一进行混合，而获得 的混合物； 所述突变型对照二是以含N0EY2 5813 DEL A突变位点的基因组为模板，以N0EY2F和 N0EY2MR为引物，以N0EY2MF和N0EY2R为引物，分两组进行PCR扩增，再将获得的两组产物 等量混合，以N0EY2F和N0EY2R为引物进行PCR扩增，再将获得的产物，按体积比与野生型 对照二进行混合，而获得的混合物； 所述突变型对照三是以含N0EY2 6141G>A突变位点的基因组为模板，以N0EY3F和 N0EY3MR为引物，以及N0EY3MF和N0EY34R为引物，分两组进行PCR扩增，再将获得的两组产 物等量混合，以N0EY3F和N0EY34R为引物进行PCR扩增，再将获得的产物，按体积比与野生 型对照三进行混合，而获得的混合物； 所述突变型对照四是以含N0EY2 6270G>A突变位点的基因组为模板，以N0EY4F和 N0EY4MR为引物，以及N0EY4MF和N0EY34R为引物，分两组进行PCR扩增，再将获得的两组产 物等量混合，以N0EY4F和N0EY34R为引物进行PCR扩增，再将获得的产物，按体积比与野生 型对照四进行混合，而获得的混合物； 所述体积比的比值是1 : 9、1 : 99或1 : 999; 所述N0EY1MF是覆盖N0EY2 5205T>C突变点碱基的正向检测引物，所述N0EY1MR是覆 盖N0EY2 5205T>C突变点碱基的反向检测引物； 所述N0EY2MF是覆盖N0EY2 5813 DEL A突变点碱基的正向检测引物，所述N0EY2MR是 覆盖N0EY2 5813 DEL A突变点碱基的反向检测引物； 所述N0EY3MF是覆盖N0EY2 6141G>A突变点碱基的正向检测引物，所述N0EY3MR是覆 盖N0EY2 6141G>A突变点碱基的反向检测引物； 所述N0EY4MF是覆盖N0EY2 6270G>A突变点碱基的正向检测引物，所述N0EY4MR是覆 盖N0EY2 6270G>A突变点碱基的反向检测引物。
5.根据权利要求3所述的N0EY2基因突变检测体系，其特征在于：所述突变型对照 一是以含N0EY2 5205T>C未突变位点的基因组为模板，以N0EY1F和N0EY1MR为引物，以 N0EY1MF和N0EY1R为引物，分两组进行PCR扩增，再将获得的两组产物等量混合，以N0EY1F 和N0EY1R为引物进行PCR扩增，再将获得的产物，按体积比与野生型对照一进行混合，而获 得的混合物； 所述突变型对照二是以含N0EY2 5813 DEL A未突变位点的基因组为模板，分别以 N0EY2F和N0EY2MR为引物，以N0EY2MF和N0EY2R为引物，分两组进行PCR扩增，再将获得的 两组产物等量混合，以N0EY2F和N0EY2R为引物进行PCR扩增，再将获得的产物，按体积比 与野生型对照二进行混合，而获得的混合物； 所述突变型对照三是以含N0EY2 6141G>A未突变位点的基因组为模板，分别以N0EY3F 和N0EY3MR为引物，以N0EY3MF和N0EY34R为引物，分两组进行PCR扩增，再将获得的两组 产物等量混合，以N0EY3F和N0EY34R为引物进行PCR扩增，再将获得的产物，按体积比与野 生型对照三进行混合，而获得的混合物； 所述突变型对照四是以含N0EY2 6270G>A未突变位点的基因组为模板，以N0EY4F和 N0EY4MR为引物，以及N0EY4MF和N0EY34R为引物，分两组进行PCR扩增，再将获得的两组产 物等量混合，以N0EY4F和N0EY34R为引物进行PCR扩增，再将获得的产物，按体积比与野生 型对照四进行混合，而获得的混合物； 所述体积比的比值是1 : 9、1 : 99或1 : 999; 所述N0EY1MF是覆盖N0EY2 5205T>C突变点碱基的正向检测引物，所述N0EY1MR是覆 盖N0EY2 5205T>C突变点的碱基的反向检测引物； 所述N0EY2MF是覆盖N0EY2 5813 DEL A突变点碱基的正向检测引物，所述N0EY2MR是 覆盖N0EY2 5813 DEL A突变点碱基的反向检测引物； 所述N0EY3MF是覆盖N0EY2 6141G>A突变点碱基的正向检测引物，所述N0EY3MR是覆 盖N0EY2 6141G>A突变点碱基的反向检测引物； 所述N0EY4MF是覆盖N0EY2 6270G>A突变点碱基的正向检测引物，所述N0EY4MR是覆 盖N0EY2 6270G>A突变点碱基的反向检测引物。
6. 根据权利要求4或5所述的N0EY2基因突变检测体系，其特征在于：所述N0EY1MF的 核苷酸序列如SEQ ID No. 8所示； 所述N0EY1MR的核苷酸序列如SEQ ID No. 9所示； 所述N0EY2MF的核苷酸序列如SEQ ID No. 10所示； 所述N0EY2MR的核苷酸序列如SEQ ID No. 11所示； 所述N0EY3MF的核苷酸序列如SEQ ID No. 12所示； 所述N0EY3MR的核苷酸序列如SEQ ID No. 13所示； 所述N0EY4MF的核苷酸序列如SEQ ID No. 14所示； 所述N0EY4MR的核苷酸序列如SEQ ID No. 15所示。
7. 根据权利要求3至5之一所述的N0EY2基因突变检测体系，其特征在于：所述PCR扩 增产物经稀释浓度达到25?30ng/W。
8. 根据权利要求1或2所述的N0EY2基因突变检测体系，其特征在于：还包括PCR反 应液，所述PCR反应液由HRM Master Mix和MgCl2配置而成。
9. 根据权利要求8所述的N0EY2基因突变检测体系，其特征在于：所述体系的体积为 iom ； 所述用于检测N0EY2 5205T>C突变位点的体系中的各组分及其用量是25mM的MgCl2为 1. 2Pl，10剛的 N0EY1F 为 0? 2Pl，10剛的 N0EY1R 为 0? 2W，模板 DNA 为 5 ?10ng，HRM Master Mix为5W，其余是纯水； 所述用于检测N0EY2 5813 DEL A突变位点的体系中的各组分及其用量是25mM的 MgCl2 为 1. 2W，10剛的 N0EY2F 为 0? 2W，10剛的 N0EY2R 为 0? 2W，模板 DNA 为 5 ?10ng， HRM Master Mix为5W，其余是纯水； 所述用于检测N0EY2 6141G>A突变位点的体系中的各组分及其用量是25mM的MgCl2为 1. 2W，10剛的 N0EY3F 为 0? 2W，10剛的 N0EY34R 为 0? 2W，模板 DNA 为 5 ?10ng，HRM Master Mix为5Ml，其余是纯水； 所述用于检测N0EY2 6270G>A突变位点的体系中的各组分及其用量是25mM的MgCl2为 1. 2W，10剛的 N0EY4F 为 0? 2W，10剛的 N0EY34R 为 0? 2W，模板 DNA 为 5 ?10ng，HRM Master Mix为5Ml，其余是纯水； 所述模板DNA是样品、阳性对照或阴性对照。
10. -种采用如权利要求1所述的检测体系的N0EY2基因突变检测试剂盒。
【文档编号】C12Q1/68GK104388540SQ201410542659
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年10月15日 优先权日:2014年10月15日
【发明者】王明 申请人:上海赛安生物医药科技有限公司