专利名称：凝胶生物固定剂的制备的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种凝胶生物固定剂的制备，它属于生物学领域。
凝胶生物固定剂主要用于医学，如解剖学，组织学，胚胎学和病理学的标本固定，也可用于动物、兽医、植物、昆虫学以及自然博物的陈列标本固定。
固定是保存细胞内细微结构和成份的最基本又是最重要的一项技术。现有的固定剂大体分为四类(1)醛剂，如甲醛、戊二醛、丙烯醛、多聚甲醛等;(2)氧化剂，如溴酸、过锰酸钾、重铬酸钾等;(3)蛋白变性剂，如醋酸、甲醇、乙醇等;(4)其它，如氯化汞、苦味酸等。上述各类中以醛剂较为理想。这些固定剂都呈溶液、粉末或结晶等状态，可单独使用，也可混合使用，但其不足之处是要配制成液体使用。由于六十年代的电子显微镜和免疫学发展，从组织细胞的固定技术发展到细胞分子水平的固定，无论石蜡切片、冰冻切片或超薄切片，每产生一种新技术，就会产生一种新的固定方法。1963年申请的美国专利US-3249502《防腐材料及其制造方法》就是使用甲醛、纤维素和水的胶状混合物。但其不足之处是用途单一，只能作一般固定，不能供电镜标本用;缺乏保护细微结构的成份;也不能作邮寄活检组织标本用。
本发明的目的是提供一种凝胶生物固定剂，它将液态固定方法转变为凝胶固定方法，以克服液态固定方法的不足。本固定剂与轻质塑料盒配合使用，可作邮寄生物标本，尤其适用于医学活体组织病检。
本发明的目的是这样实现的它采用天然高分子表面活性剂、有机固定剂和保护细胞的无机盐构成一种凝胶状态的生物固定剂。
天然高分子表面活性剂的种类很多，本品固定剂选用多糖类表面活性剂为羧甲基纤维素钠和阿拉伯树胶。羧甲基纤维素钠具有极性高的亲水性原子团的阴离子羧基，它水溶液的表面张力为47-53达因/厘米(在25℃下)，在石蜡界面的界面张力为19-23达因/厘米(在25℃下)，浓度为0.001-1%范围内的表面张力和界面张力变化不大，羧甲基纤维素钠价格便宜，亲水性好，迂水即膨胀成粘性高胶体。非离子的多糖物阿拉伯树胶和非离子的多元醇如丙三醇、蔗糖等为调节胶体的粘稠度。所以，本品是一种良好的胶体稳定剂或增稠剂。
本品的制备是将所需的水溶性固定液引入亲水基的表面活性剂中形成下列型号的凝胶生物固定剂。有机固定剂主要选用醛剂，若用于光镜检查标本，则选用甲醛;若用于电镜检查标本，则选用多聚甲醛、戊二醛;若用于陈列保存原色标本，则选用水化氯醛。乙醇在本品中具有多用途，固定组织和组织脱水，降低冰点(达零下25℃)，无机盐主要保护细胞内环境和调整pH值。
本凝胶生物固定剂的优点是克服液态固定剂的弊病，改变传统的浸泡法固定标本，它对组织穿透力强，固定组织速度快，对2-3毫米厚度的组织只需3-4小时，延长时间不会造成组织变硬、变脆、变形等人为改变，固定剂具有促媒染作用，适用于光镜组织学检查，也可作为电镜样品的预固定。凝胶生物固定剂用于陈列标本只须直接固定(一步法)。本品具有防熔、防冻作用，适应我国南北方，寒暑季节都能应用，凝胶不外溢，易于保存，固定容器不用密封，便于携带和运输，本品可批量生产各种型号的凝胶生物固定剂。本剂软管包装，配备塑料固定盒，小标本可邮寄交流，使用方便。本品易溶于水、酒精，从塑料固定盒中取出已固定的组织可用水洗，亦可直接脱水，进行常规石蜡切片或超薄切片，供生物标本光镜或电镜观察。
本凝胶生物固定剂系列的最优配方如下1.JX-100型-专供光镜标本固定。羧甲基纤维素钠5-10克，阿拉伯树胶6克，40%甲醛10-20毫升，95%酒精20-40毫升，丙三醇12-14毫升，用蒸馏水或0.1M(克分子浓度)磷酸缓冲液加至总容积100毫升，再用1N氢氧化钠或1N(当量浓度)氯化氢调至pH值为7.2-7.4。
2.JX-101型-专供快速石蜡切片的标本固定。羧甲基纤维素钠7克和阿拉伯树胶5克混合，正丁醇20毫升，丙酮5-10毫升，40%甲醛20毫升，甘油15毫升的混合液，用蒸馏水或0.1M磷酸缓冲液加至总容积100毫升，再用10%碳酸钠调至pH值为7.2-7.4。
3.JX-200型-专供电镜标本固定。1.3M多聚甲醛和0.2M焦磷酸钠混合水浴加热，滴加1N氢氧化钠直到清亮，冷却备用。羧甲基纤维素钠7-10克，25%戊二醛2.5-4.5毫升，清亮多聚甲醛25毫升，用蒸馏水或0.1M磷酸缓冲液加至总容积100毫升，调至pH值为7.4。
4.JX-500型-专供保持自然色彩的陈列标本固定。羧甲基纤维素钠2.3克，和阿拉伯树胶3克，蒸馏水10-15毫升拌匀，40毫升蒸馏水中溶解醋酸钾3克，氯化钠9克，硝酸钾19克，硫酸钾1克，硫酸钠11克，碳酸氢钠10克，水化氯醛5克，溶后再加入甘油50毫升，倒入胶内即可。
权利要求
1.一种凝胶生物固定剂，其特征在于，由天然高分子表面活性剂、有机固定剂及无机盐构成，凝胶与固定剂之比为1∶10-20，固定剂与轻质塑料盒配合使用，可作邮寄活检组织标本用。
2.根据权利要求1所述的凝胶生物固定剂，其特征在于，上述的凝胶由天然高分子的多糖类表面活性剂、羧甲基纤维素钠和阿拉伯树胶组成。
3.根据权利要求1所述的凝胶生物固定剂，其特征在于，上述的有机固定剂选用醛剂，如甲醛、多聚甲醛、戊二醛或水化氯醛。
全文摘要
本发明涉及一种凝胶生物固定剂的制备方法，它主要用于医学，如解剖学，组织学，胚胎学和病理学的标本固定，也可用于动物、兽医、植物、昆虫学以及自然博物的陈列标本固定。本固定剂是将液态固定方法转变为凝胶固定方法，它与轻质塑料盒配合使用，可作邮寄活检组织标本用。本固定剂采用天然高分子表面活性剂，有机固定剂及保护细胞的无机盐构成一种凝胶状态的生物固定剂。有机固定剂主要选用醛剂。
文档编号C12N11/02GK1048887SQ8910473
公开日1991年1月30日 申请日期1989年7月21日 优先权日1989年7月21日
发明者沈建雄 申请人:中国人民解放军第一医院