专利名称：野黄芩甙元和野黄芩甙在制备抗肿瘤药物中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种黄酮类化合物的制药用途，具体涉及野黄芩甙元和野黄芩甙在制备抗肿瘤药物中的用途。
背景技术：
野黄芩甙元和野黄芩甙均属于黄酮类化合物，可从半枝莲等植物中提取得到。其中野黄芩甙元(又名野黄芩素，英文名Scutellarein)分子量为286，分子式C15H10O6，结构式如下 野黄芩甙的分子量为463，分子式C21H19O12，结构式为 其中R1代表葡萄糖醛酸基。
有关野黄芩甙元和野黄芩甙的药理作用还不是很清楚。有文献报道野黄芩甙元具有一定的抗炎，抗氧化作用。
迄今未见有关野黄芩甙元和野黄芩甙在抗肿瘤作用上的报道。
发明内容
本发明的问世部分是基于这样一个发现野黄芩甙元和野黄芩甙或其可药用盐具有明显的抗肿瘤作用；本发明从而提供了一种野黄芩甙元和野黄芩甙或其可药用盐在制备抗肿瘤药物中的用途。
本发明的一个方面是涉及下列通式(I)的野黄芩甙元和野黄芩甙或其可药用盐在制备抗肿瘤药物中的用途 其中，R1代表氢或葡萄糖醛酸基；所述肿瘤选自肺癌、白血病、胃癌、大肠癌、肝癌、食道癌、乳腺癌或黑色素瘤。
本发明的另一个方面是涉及一种药物组合物，该组合物包括上述通式(I)化合物或其可药用盐以及可药用载体或赋形剂。
本发明的具体实施方式
将在以下部分阐述。本发明的其他特点、目的和优势将通过以下阐述得以彰显。
具体实施例方式本发明的野黄芩甙元和野黄芩甙是自然存在的且可以从某些植物如半枝莲中分离得到。本发明的野黄芩甙元和野黄芩甙也可通过商业途径获得或者通过本领域的普通合成技术、微生物技术以及动植物细胞合成制得。用于分离或合成本发明的野黄芩甙元和野黄芩甙的化学品包括溶剂、试剂、催化剂、保护基团试剂、去保护基团试剂。所述分离与合成还可以包括加入或去除适宜的保护基团以最终得到所需野黄芩甙元和野黄芩甙的步骤。用于制备本发明的野黄芩甙元和野黄芩甙的合成化学转化和基团保护(去保护)的方法对本领域的普通技术人员来说是公知的，可参见R.Larock，Comprehensive OrganicTransformations，VCH Publishers(1989)；T.W.Green and P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，3rdEd.，John Wiley and Sons(1999)，L.Fieser and M.Fieser，Fieser and Fieser’s Reagents forOrganic Synthesis，John Wiley and Sons(1994)；and L.Paquette，ed.，Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis，John Wiley and Sons(1995)及其后续著作。
本发明的野黄芩甙元和野黄芩甙的可药用盐包括各种无机或有机酸盐如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、扁桃酸盐和草酸盐；各种无机或有机碱盐如氢氧化钠、三羟甲基氨基甲烷(TRIS，tromethane)和N-甲基-葡萄糖胺。
本发明的野黄芩甙元和野黄芩甙可以通过肠道或者非肠道途径给药。肠道给药制剂包括但不限于胶囊、片剂、乳剂、水悬浮剂、胶体液、溶液、微胶囊、丸剂、锭剂、颗粒剂、粉剂。常用于片剂的可药用载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还会加入硬脂酸镁等润滑剂。常用于胶囊剂的可药用载体包括乳糖和干玉米淀粉。当制成口服水悬浮剂和/或乳剂时，野黄芩甙元和野黄芩甙可悬浮或溶解于油相里并与乳化剂或悬浮剂相结合。如果需要，也可以加入一些甜味剂和/或香味剂和/或增色剂。
非肠道给药制剂包括注射剂、霜剂、膏剂、贴剂或喷雾剂。非肠道给药途径包括皮下、皮内、动脉、静脉、肌肉、关节、滑液、胸骨、鞘内、病灶内、颅内注射或滴注。其它给药途径可包括局部、直肠、经鼻、经颊、阴道、舌下、粘膜、气管或尿道。此外，本发明的野黄芩甙元和野黄芩甙还可以通过气雾吸入或植入蓄积或针刺等方式给药。
本发明的野黄芩甙元和野黄芩甙可被制成无菌注射剂，如无菌水相或油相悬浮液。该悬浮液可按本领域的常规方法，使用适宜的分散剂或湿润剂(如Tween80)及悬浮剂等制得。它还可以是在可肠道外给药的无毒稀释剂或溶剂中的水溶液或悬浮液，如在1，3-丁二醇中的溶液。相关的可用载体或溶剂包括甘露醇、水、林格氏液、等渗氯化钠等。另外，无菌的固定油(bland fixed oil)常被作为溶剂或悬浮剂的媒介，因而包括合成甘油单酯或甘油二酯在内的多种柔和的固定油均适用。脂肪酸，如十八烯酸及其甘油酯衍生物(如橄榄油或蓖麻油，特别是其聚氧乙烯基衍生物)等可用于制备所述注射剂。所述油溶液或悬浮液还可包含一种长链的乙醇稀释剂或分散剂或羧甲基纤维素或类似的其他分散剂，此类物质常用于制备可药用乳剂和/或悬浮剂。其它一些制剂常用的表面活性剂如Tweens或Spans和/或其他类似的乳化剂或生物利用度促进剂等也同样可用于制备本发明的药物组合物。
本发明的野黄芩甙元和野黄芩甙可制成栓剂通过直肠给药，方法是将野黄芩甙元和野黄芩甙与适宜的非刺激性赋形剂混合，后者在室温下为固体而在直肠温度下为液体，因而该栓剂可溶解于直肠中并释放出活性成份。此类赋形剂包括但不限于可可油、蜂蜡和聚乙烯。本发明的野黄芩甙元和野黄芩甙的局部给药制剂(如油膏)可直接用于患处。此类局部制剂含有活性成份及可药用载体，后者包括但不限于矿物油、液体石油、白石油、丙二醇、聚氧乙烯或聚氧丙稀化合物、乳化腊或水。
另外，本发明的野黄芩甙元和野黄芩甙还可制成洗剂或油剂。适用的载体包括但不限于矿物油、三梨醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鲸腊酯、十六烷醇、2-十八烷醇、苯甲基乙醇或水。本发明的野黄芩甙元和野黄芩甙还可制成灌肠剂等用于直肠局部给药。局部透皮贴剂亦在本发明的保护范围之内。本发明的野黄芩甙元和野黄芩甙亦可经鼻喷雾或者吸入给药，即按本领域的常规方法，使用苯甲基乙醇或其他防腐剂、吸收促进剂、碳氟化合物和/或其他增溶剂或分散剂制得盐溶液。
本发明的野黄芩甙元和野黄芩甙还可通过植入给药。采用植入给药方式可达到在给药对象体内持续，定时释放本发明的化合物的效果。另外，植入给药还能在局部组织和器官定位给药(Negrin et al.，Biomaterials 22(6)563，2001)定时释放技术亦可用于本发明的野黄芩甙元和野黄芩甙的给药中，如基于聚合体技术的定时释药胶囊、缓释技术和制剂包裹技术(如聚合体和脂质体)等。
贴剂同样包括在本发明的保护范围之内。其包括基层(如聚合体、布、纱和绷带)和本发明的药物组合物。基层的一边可设有一保护层以防止活性成份的流出。所述贴剂还可含有一用于固定的粘合剂，后者可以是一种自然的或者合成的物质，当其与给药对象的皮肤接触时可暂时粘附于皮肤上。粘合剂可以是防水的。
“可药用载体”不会破坏本发明的野黄芩甙元和野黄芩甙的药学活性，同时其有效用量，即能够起到药物载体作用时的用量对人体无毒。“可药用载体”包括但不限于离子交换材料、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、自乳化药物传递系统(SEDDS)如d-α-维生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯、吐温(Tweens)或其他类似聚合介质等药物制剂用的表面活化剂、血清蛋白如人血清白蛋白、缓冲物质如磷酸盐、氨基乙酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸部分甘油酯混合物、水、盐、电解质如硫酸盐精蛋白、磷酸氢二纳、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、硅胶、硅酸镁等。聚乙烯吡咯酮、纤维素物质、聚乙烯醇、羧甲基纤维素钠、聚丙稀酸酯、乙烯-聚氧乙烯-嵌段聚合物和羊毛酯、环糊精如α-、β-及γ-环糊精或其经化学修饰的衍生物如2-和3-羟丙基-β-环糊精等羟烷基环糊精或其他可溶性衍生物等均可用于促进本发明的野黄芩甙元和野黄芩甙的药物传递。
本领域的技术人员应知如何通过本领域的常规技术，将本发明的野黄芩甙元和野黄芩甙与可药用载体或赋形剂混合在一起，制备本发明的抗肿瘤药物组合物。
本发明的野黄芩甙元和野黄芩甙或其可药用盐的用量可根据给药途径、患者的年龄和体重、所治疗肿瘤的类型及严重程度的不同而不同，其日剂量可以是0.001～100mg/kg，可一次或多次给药。
为了便于理解本发明，特列举以下实施例。其作用应被理解为是对本发明的诠释而绝非对本发明的任何形式的限制。
实施例1 野黄芩甙及野黄芩甙元对体外肿瘤细胞生长抑制作用的实验受试药物野黄芩甙及野黄芩甙元(现有商品)溶于二甲基亚砜(DMSO)，实际测试时按1/1000稀释使用。
阳性对照药物5-氟脲嘧啶，溶于DMSO，实际测试时按1/1000稀释使用。
方法与结果通过MTT测定法来测定出野黄芩甙及野黄芩甙元对人肺癌细胞株A549、人白血病细胞株HL60、人胃癌细胞株MKN28、人大肠癌细胞株HCT116、人肝癌细胞株HepG2、人食道癌细胞株TE-1、人乳癌细胞株MCF-7的增殖抑制来测出各IC50浓度，以及阳性对照药物5-氟脲嘧啶的IC50浓度。同时将人正常纤维细胞作为对照。
测定方法将上述各细胞株悬浮在含有10％(小)牛胎儿血清的细胞培养液中，以5×103/孔播种于96孔细胞培养盘。在培养24小时后，加入野黄芩甙或野黄芩甙元于培养液里，最终浓度野黄芩甙元0.3-200μg/ml，野黄芩甙0.6-350μg/ml，5-氟脲嘧啶0.01-10μg/ml。培养3天后作MTT测定。以未加野黄芩甙及野黄芩甙元的各细胞作为对照，测试出对各肿瘤细胞50％增长阻止浓度(IC50)。
结果见表1
从表1中可以见，野黄芩甙元及野黄芩甙对受试肿瘤细胞都有很明显的抑制作用。而与阳性对照药物5-氟脲嘧啶相比，野黄芩甙及野黄芩甙元对人正常纤维细胞无任何毒性作用。
实施例2 野黄芩甙元对小鼠移植肿瘤细胞生长抑制作用的动物实验20克左右C57纯种小鼠10匹为一组，分为对照组，高低用量组各一组，共三组。分别测定野黄芩甙元对小鼠移植肿瘤细胞生长抑制作用的实验。
在各小鼠的皮下种植1×105个B16黑色素瘤细胞。在移植肿瘤细胞后第2日以5mg/kg为低用量组，15mg/kg为高用量组将溶解于四甘醇的野黄芩甙元注射于动物腹腔。隔日注射一次，在连续给药15日后停止给药。于开始给药的第28日，处死小鼠，剥离瘤块，以瘤重量为指标，计算肿瘤生长抑制率。抑瘤率(％)＝(1-实验组瘤重/模型对照组瘤重)×100％。
结果见表2
从表2中可以见，野黄芩甙元对移植小鼠黑色素瘤有明显的抑瘤作用，有一定的用量依赖关系。证明野黄芩甙元有比较明显的抗肿瘤效应。
实施例3 野黄芩甙对小鼠移植肿瘤细胞生长抑制作用的动物实验20克左右C57纯种小鼠10匹为一组，分为对照组，高低用量组各一组，共三组。分别测定野黄芩甙对小鼠移植肿瘤细胞生长抑制作用的实验。
在各小鼠的皮下种植1×105个B16黑色素瘤细胞。在移植肿瘤细胞后第2日以10mg/kg为低用量组，30mg/kg为高用量组将溶解于四甘醇的野黄芩甙元注射于动物腹腔。隔日注射一次，在连续给药15日后停止给药。于开始给药的第28日，处死小鼠，剥离瘤块，以瘤重量为指标，计算肿瘤生长抑制率。抑瘤率(％)＝(1-实验组瘤重/模型对照组瘤重)×100％。
结果见表3
从表3中可以见，野黄芩甙对移植小鼠黑色素瘤有明显的抑瘤作用，有一定的用量依赖关系。证明野芩甙元有比较明显的抗肿瘤效应。
上文所列的各相关文献均以全篇引入本申请作为参考。本发明所涉及的多个方面已做如上阐述。然而，应理解的是，在不偏离本发明之精神与范围的前提下，对上述描述的任何修饰都是允许的。同样，类似的情况也包括在权利要求中。
权利要求
1.下述通式(I)的化合物或其可药用盐在制备抗肿瘤药物中的用途 其中，R1代表氢或葡萄糖醛酸基；所述肿瘤选自肺癌、白血病、胃癌、大肠癌、肝癌、食道癌、乳腺癌或黑色素瘤。
2.权利要求1的用途，其中当R1代表氢时，所述化合物为野黄芩甙元。
3.权利要求1的用途，其中当R1代表葡萄糖醛酸基时，所述化合物为野黄芩甙。
4.一种药物组合物，该组合物包括下列通式(I)化合物或其可药用盐以及可药用载体或赋形剂 (I)其中，R1代表氢或葡萄糖醛酸基。
5.权利要求4的药物组合物，其中当R1代表氢时，所述化合物为野黄芩甙元。
6.权利要求4的药物组合物，其中当R1代表葡萄糖醛酸基时，所述化合物为野黄芩甙。
全文摘要
本发明涉及一种黄酮类化合物的制药用途，具体涉及野黄芩甙元和野黄芩甙在制备抗肿瘤药物中的用途。本发明开发了野黄芩甙元和野黄芩甙新的医药用途。
文档编号A61P35/00GK1872047SQ20051002644
公开日2006年12月6日 申请日期2005年6月3日 优先权日2005年6月3日
发明者吴一心 申请人:吴一心