内酰胺化合物的制作方法

专利名称：：内酰胺化合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及药物和有机化学领域，并涉及抑制p-淀粉状蛋白肽(p-amyloidpeptide)释放和/或其合成的化合物，
背景技术：
：PCT申请PCT/US97/22986中描述了一些内醜胺化合物，这些化合物可抑制p-淀粉状蛋白肽释放和/或其合成，并因此可用于治疗阿尔茨海默氏病(Alzheimer，sdisease),本发明提供了新的结晶(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰基)-1-(L-丙氨耽基)-(S)-l-氡基-3-甲基-2，3，4,5-四氢-lH-3-苯并氮杂萆-2-新二水合物、其组合物、使用该结晶二水合物的方法、制备该结晶二水合物的方法以及制备其中间体的方法.本发明结晶二水合物可用于抑制p-淀粉状蛋白肽释放和/或其合成，并因此可用于治疗阿尔茨海默氏病因为(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁耽基)-1-(L-丙氨酜基)-(S)-l-氨基-3-甲基-2，3,4，5-四氨-lH-3-苯并氮杂革-2-稱可用于治疗阿尔茨海默氏病，所以需要以纯的、稳定的结晶形式制得该化合物以满足严格的药物要求和规范.本发明新的结晶二水合物具有适于方便地以商业规模配制例如口服片刑的性质.制备(N)—((S)-2-羟基-3-甲基-丁耽基)-1-(L-丙氨耽基)-(S)-l-氨基-3-甲基-2，3，4，S-四氩-lH-3-苯并氛杂萆-2-嗣的方法也需要是便于以工业规模搮作的方法.此外，产物应当呈易于过滤、易于干燥和便于贮存的形式.此外，本发明结晶二水合物具有合适的加工和贮存性质.已经发现，(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰基)-l-(L-丙氛酰基)-(S)-l-氨基-3-甲基-2，3，4,S-四氦-lH-3-苯并氣杂苯-2-嗣可以以具有有利性质的二水合物形式制得，并且该新形式的制备方法实现了上述所需特征.发明概述本发明提供了(N)-((S)-2-幾基-3-甲基-丁酰基)-1-(L-丙氨耽基)-(S)-l-氨基-3-甲基-2，3，4,5-四氢-lH-3-苯并氮杂萆-2-稱二水合物.在另一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，其中包含(N)—((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰基)-1-(L-丙氨跌基)—(S)-1-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氢-111-3-苯并氮杂萆-2-稱二水合物和可药用稀释刑.在一个本发明方法方面中，本发明涉及抑制p-淀粉状蛋白肽释放和/或其合成的方法，包括给有此需要的患者施用有效量的(N)一((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰基)-1-(L-丙氨跣基)一(S)-1-氨基-3-甲基-2,3，4，5-四氢-lH-3-苯并氮杂箪刁-稱二水合物.在一个特别的方法实施方案中，本发明提供了治疗阿尔茨海默氏病的方法，包括给有此需要的患者施用有效量的(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁跣基)-l-(L-丙氨酰基)-(S)-l-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氩-lH-3-苯并氮杂蕈-2-嗣二水合物.本发明还提供了预防或抑制阿尔茨海默氏病进行的方法，包括给有此需要的患者施用有效量的00-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰基)-1-(L-丙氨跣基)—(S)-1-氛基-3-甲基-2，3，4，5-四氢-lH-3-苯并氮杂萆-2-酮二水合物，也就是说，本发明提供了(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰基)-1-(L-丙氨酜基)■>(S)-1-氨基-3-甲基-2，3,4，5-四氦-lH-3-苯并氮杂蕈-2-嗣二水合物在制备用于抑制p-淀粉状蛋白肽释放和/或其合成，包括用于治疗阿尔茨海默氏病的药物中的应用.在另一个实施方案中，本发明提供了制备00一((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰基)-l-(L-丙氛酰基)-(S)-l-氨基-3-甲基-2，3，4,5-四氢-lH-3-苯并氮杂蕈-2-稱二水合物的方法.在另一个实施方案中，本发明提供了制备内酰胺化合物，包括(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰基)-1-(L-丙氛酰基)-(S)-1-氨基-3-甲基2，3，4，5-四氩-lH-3-苯并氮杂罩-2-明的方法以及制备其中间体的方法.发明详迷本文所用术语具有下述含义适于"ee"或"对映体过量"是指一种对映体E,在两种对映体的混合物(B,+E2)中的过量百分比，并且是通过公式((B,-E2)+(E,+E2))xlOO%-ee计算的.如本领城众所周知的，对映体过量可通过化合物或其衍生物的毛细管电泳和手性HPLC来测定.在本文中，使用关于甘油醛的异构体立体化学的(R)-和(S)-的Cahn-Prelog-Ingold命名和L-和D-命名来描述具体异构体.本发明提供了(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰基)-l-(L-丙氨耽基)-(S)-1-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氩-lH-3-苯并氮杂蕈-2-酮二水合物，特别是结晶(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁耽基)-l-(L-丙氨酰基)-(S)-1-氡基-3-甲基-2，3，4，5_四氛-lH-3-苯并氮杂蕈-2-嗣二水合物.可采用多种方法来确定结晶形式的有机化合物的特征.例如，这些方法包括差示扫描量热法、罔态NMR光谦测定法、红外光详法和X-射线粉末衍射.在这些方法当中，X-射线粉末衍射和固态NMR光详法在鉴定和区別晶形方面非常有用.X-射线粉末衍射分析是如下所述进行的.用玛瑙研钵和研扦将样本轻微研磨或不研磨，将样本装栽到用于X-射线粉末衍射测定的样本固定器上.X-射线粉末衍射图样是用装配有CuKa源a-1.54056A)的SiemensD5000X-射线粉末衍射仪测定的，其中该衍射仪在50kV和40mA运转，并且使用1咖的发散狭缝尺寸、1咖的接收狭缝和0.1咖的检测器狭缝.每个样本以0.02。的步长和3秒/步的最大扫描速度在4°-35。(20)之间扫描.使用Kevex固态硅锂检测器收集数据.最理想地，常規运行硅标准物来检查该装置准线.晶体学领域众所周知的是，对于给定晶形，衍射峰的相对强度和峰宽可能会由于多种因素，包括择优取向和/或粒径效应而变化，当存在择优取向和/或粒径效应时，峰强度可能会改变，但是多晶型物的特征峰位置不变，参见例如TheUnitedStatesPharmacopoeia#24，NationalFormulary#19,p.1843-1844,2000,使用研磨来将本文公开的某些衍射困的峰强度的强度差异减到最少.然而，如果研磨显著改变衍射图或改变样本的晶态，则应当使用未研磨样本的衍射困.研磨用小的玛瑙研钵和研扦.在研磨期间，将玛瑙研钵固定，并给研枰施加轻微压力.5峰位置是以2e值获得的，并且对于大多数显著特征(大于20%的相对强度)，峰强度是用双衍生峰挑选法测定的.因此，本发明涉及结晶(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁耽基)-1-(L-丙氨酰基)-(8)-1-氨基-3-甲基-2,3，4，5-四氦-111-3-苯并氮杂萆-2-嗣二水合物，其特征在于表1所示的X-射线粉末衍射困样，表1列出了2e值和大于20%的相对强度(1。/11()。)，其中测定的是未研磨样本以及研磨5和10分钟后的样本，并且是使用上述方法和CuKa照射测定的.表l<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>为了将择优取向和/或粒径效应减至最小，研磨5和10分钟的样本的强度更代表衍射困样.还应当注意，该表中列出的是计算机生成的、未舍入的数字.因此，适当制得的结晶(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁跣基)-l-(L-丙氨酰基)-(S)-l-氨基-3-甲基-2，3,4，5-四氩-lH-3-苯并氮杂罩-2-稱二水合物的特征可在于使用CuKa照射的以2e值表示的X-射线衍射图样具有在表1中所述的峰，特别具有在8.36、12.43、15.34、19.22、20.50或20.63的峰；更特别具有在8.36、12.43或15.34的峰；在8,36和12.43;8.36和15.34;8.36、12.43和15.34;或者在8.36、12.43、15.34、19.22、20.50和20.63的峰.结晶(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰基)-1-(L-丙氨酖基)-(S)-l-氨基-3-甲基-2，3M,5-四氩-lH-3-苯并氮杂苯-2-稱二水合物还可以通过固态NMR光谦法来确定特征.固态"C化学位移不仅反映了晶体中分子的分子结构，还反映了晶体中分子的电子环境.固态NMR("C)分析可使用"C交叉极化/幻角自旋(CP/MAS)来进行.NMR(固态NMR或SSNMR)光谦是用在100.580MHz碳頻运转的、装配有全固体辅助部件和Varian7咖VTCP/MAS探针的VarianUnity400MHz光谦仪获得的.获得参数如下90°质子r.f.脉冲宽度4.0ns，接触时间1.0ms，脉冲重复时间5s，MAS频率7.0kHz,谱宽50kHz,和取数时间50ms.化学位移是相对于外标六甲基苯的甲基(8-17.3ppm)而言的，也就是用六甲基苯置换样本.(N)—((S)_2-鞋基-3-甲基-丁酰基)-1-(L-丙氨酰基)一(S)-l-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氬-lH-3-苯并氮杂罩-2-嗣二水合物的化学位移数据(根据下述峰分配)如表2所示.21<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>星号(o是指在中断的去耦光详中显示的峰.因此，结晶(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁跣基)-l-(L-丙氨跣基)-(S)-l-氨基-3-甲基-2,3，4，5-四氛-lH-3-苯并氮杂萆-:2-嗣二水合物的特征可在于具有下列化学位移(ppm)的回态13C核磁共振16.6;176.7、174.1、169.9、136.9、134.8、132.1、127.9、128.9、124.0、75.6、51.3、46.9、35.3、31.1、21.4或16.6;更特别是75.6、35.3、21.4或16.6;75.6、35.3、21.4和16.6当中的任何两个；75.6、35.3、21.4和16.6;或176.7、174.1、169.9、136.9、134.8、132.1、127.9、128.9、124.0、75.6、51.3、46.9、35.3、31.1、21.4和16.6.本发明另一个实施方案提供了制备(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁跣基)-l-(L-丙氨酖基)-(S)-l-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氳-lH-3-苯并氮杂革-2-酮二水合物的方法，包括将00-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰基)-l-(L-丙氨酰基)-(S)-l-氨基-3-甲基-2，3,4,5-四氦-lH-3-苯并氮杂罩-卜酮从含水溶刑中在生成00-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰基)-1-(L-丙氨酰基)一(S)-1-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氦-lH-3-苯并氮杂萆-2-新二水合物的条件下结晶.形成(N)-((S)-2-鞋基-3-甲基-丁酰基)-1-(L-丙氨酰基)—(S)-l-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氢-lH-3-苯并氮杂萆^-酮二水合物的精确条件可凭经验确定，并且仅可能给出已发现在实践中合适的多种方法，因此，例如(N)-((S)-2-轻基-3-甲基-丁酰基)-l-(L-丙氨耽基)-(S)-1-氨基_3-甲基-2，3,4，5-四氯-lH-3-苯并氮杂萆-P稱二水合物可通过在控制的条件下结晶来制得.从溶液中结晶和浆化技术在本发明范闺内，特别是，本发明二水合物可通过从含水溶刑中结晶来制得.合适的溶刑是能够在所用浓度下含有足够的水以形成本发明二水合物的溶剂.优选的溶刑是可与水混溶的溶刑，例如丙酮、低级醇(例如甲醇、乙醇和异丙醇)、乙酸和乙猜.在实践中已经发现，含水丙稱是优选的.对于给定的含水溶刑，所用的水的量取决于与在水中相比(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰基)-1-(L-丙氨耽基)-(S)-1-氨基-3-甲基-2,3，4，5-四氦-lH-3-苯并氮杂罩-2-酮在溶剂中的相对溶解度以及采用的是结晶技术还是浆化扶术.结晶一般是这样进行的将(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁跣基)-1-(L-丙氨跣基)-(S)-1-氨基-3-甲基-2,3，4，5-四氦-lH-3-苯并氮杂箪-2-稱溶解在含水溶剂中，然后将该溶液冷却，再加入或不再加入水，以生成固体.结晶一般是在约401C至所选含水溶刑的回流温度的初始温度下进行.然后将该混合物冷却以生成结晶二水合物.有利起见可加入晶种.优选将结晶溶液緩慢地冷却.最适宜的是，将结晶混合物冷却至环境温度-约-20TC的温度.在另一个实施方案中，本发明提供了制备内跣胺化合物，包括(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰基)-1-(L-丙氨跌基)-(S)-l-氨基-3-甲基-2，3,4，5-四氢-lH-S-苯并氮杂箪-2-酮的方法以及制备其中间体的方法.更具体来说，在一个方法实施方案中，本发明提供了制备式I内跌胺化合物的方法式I其中R,是坑基、链烯基、炔基、环烷基、环烯基、取代的烷基、取代的链烯基、取代的炔基、取代的环坑基、取代的环烯基、芳基、杂芳基和杂环基；R:是烷基、取代的烷基、链烯基、取代的链烯基、炔基、取代的炔基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环基；R3是烷基，X,是氩、幾基或氣，x,是氩、羟基或氟，或者X,和X:—起形成氧代基；且V是独立地选自下列的l-3个基团氩、羟基、酰基、酰氣基、烷基、取代的烷基、烷氣基、取代的烷氣基、链烯基、取代的链烯基、炔基、取代的炔基、氨基、氨基酰基、烷芳基、芳基、芳氧基、羧基、羧基烷基、氛基、由素、硝基、杂芳基、碟代烷氣基(thioalkoxy)、取代的硤代烷氣基和三卣代甲基；包括(al)通过其分级结晶来拆分式(4)内耽胺V其中R3和V的定义同式I化合物所述，其分级结晶是通过将其二苯甲酰基酒石酸盐(dibenzolytartarates)、(R)—(-)-10-棹脑磺酸盐和(D)-(-)-扁桃酸盐分級结晶来进行的，以获得式(10)化合物；(b)与式PgNH-CHR广C(0)-A所示适当的氨基保护的氨基酸偶联，其中R2的定义同式I化合物所迷，A是活化基团例如-OH、-Br或-Cl，且Pg是氡基保护基，以生成式(ll)化合物；(c)将式(ll)化合物脱保护，以生成式(12)化合物；和No163r10(d)将式(12)化合物与式R,CX,X2-C(0)A,适当化合物偶联，其中R,、X,和X:的定义同式I化合物，且A,是活化基团例如-OH、-Br或-Cl;或者(a2)将式(10)化合物与式R,CX,X广C(0)NH-CHR广C(0)-A化合物偶联，其中R,、R2、X,和X2的定义同式I化合物，且A是活化基团例如-OH、-Br或-Cl.本文所用的下列术语具有下述含义"坑基"是指优选具有1-10个碳原子的、更优选具有1-6个碳原子的一价烷基.该术语的实例有甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、正己基等，术语"C,-C4烷基"是指优选具有1-4个碳原子的一价烷基.该术语的实例有甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基，"取代的烷基"是指具有1-5个、优选1-3个选自下列的取代基的优选具有1-10个碳原子的烷基烷氣基、取代的烷氧基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、酰基、酰基氨基、酰氣基、氨基、氨基耽基、氨基耽氧基、氛基、卣素、羟基、羧基、稱基、疏代嗣基、羧基烷基、巯基(thiol)、硫代烷氧基、取代的硫代烷氧基、芳基、芳氧基、杂芳基、杂芳氧基、杂环基、羟基氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO广烷基、-SO广取代的烷基、-SO广芳基、-SO广杂芳基、一烷基氨基、二烷基氨基、一(取代的坑基)氨基、二(取代的烷基)氨基、一芳基氨基、二芳基氨基、一杂芳基氨基、二杂芳基氛基、一杂环基氨基、二杂环基氨基，和具有选自下列的不同取代基的不对称二取代的胺烷基、取代的烷基、芳基、杂芳基和杂环基."亚烷基"是指优选具有1—10个破原子、更优选具有1-6个破原子的二价亚烷基.该术语的实例有亚甲基(-CHr)、亚乙基(-CH2CH2-)、亚丙基异构体(例如-CH2CH2CH广和-CH(CH3)CH2-)等."取代的亚坑基"是指具有l-3个选自下列的取代基的优选具有l-10个碳原子的亚烷基烷氣基、取代的烷IL基、酰基、耽基氨基、酰氧基、氨基、氨基酰基、氛基酰氧基、氛基、由素、羟基、羧基、嗣基、疏代嗣基、羧基烷基、巯基、疏代烷氣基、取代的疏代烷氧基、芳基、杂芳基、杂环基、硝基、一烷基氨基、二烷基氨基、一(取代的烷基)氨基、二(取代的烷基)氨基、一芳基氨基、二芳基氨基、一杂芳基氨基、二杂芳基氨基、一杂环基氨基、二杂环基氨基，和具有选自下列的不同取代基的不对称二取代的胺烷基、取代的烷基、芳基、杂芳基和杂环基.此外，这样的取代的亚坑基包括其中亚烷基上的2个取代基稠合以形成与该亚烷基稠合的一个或多个环烷基、芳基、杂环基或杂芳基的那些.这样的祸合的环烷基优选含有1-3个稠合的环结构."亚链烯基"是指优选具有2一10个碳原子、更优选具有2-6个碳原子的二价亚链烯基，该术语的实例有亚乙烯基(-CH"CH-)、亚丙烯基异构体(例如-CH2CH-CH-和-C(CH3)CH-)等."取代的亚链烯基"是指具有1-3个选自下列的取代基的优选具有2-10个碳原子的亚链烯基烷氧基、取代的烷氧基、酰基、酰基氨基、酰氣基、氛基、氨基酰基、氦基酰氣基、氛基、由素、羟基、羧基、W基、疏代嗣基、羧基烷基、巯基、硖代坑氧基、取代的疏代烷氣基、芳基、杂芳基、杂环基、硝基、一烷基氨基、二烷基氨基、一(取代的烷基)氨基、二(取代的烷基)氨基、一芳基氨基、二芳基氨基、一杂芳基氨基、二杂芳基氨基、一杂环基氨基、二杂环基氨基，和具有选自下列的不同取代基的不对称二取代的胺烷基、取代的烷基、芳基、杂芳基和杂环基.此外，这样的取代的亚烷基包括其中亚烷基上的2个取代基稠合以形成与该亚烷基稠合的一个或多个环烷基、芳基、杂环基或杂芳基的那些."烷芳基"是指在亚烷基部分中优选具有1一8个破原子、并且在芳基部分中优选具有6-10个碳原子的-亚烷基-芳基.这样的烷芳基的实例有爷基、苯乙基等."烷氣基"是指基团"烷基-o-".优选的烷氣基包括例如甲氣基、12乙氣基、正丙氣基、异丙氧基、正丁氣基、叔丁氣基、仲丁氣基、正戊氣基、正己氣基、1,2-二甲基丁氧基等."取代的烷氣基是指基团"取代的坑基-o-",其中取代的烷基如上所定义."烷基烷氧基"是指基团"-亚烷基-o-烷基"，其包括例如亚甲基甲氧基(-CH山CH3)、亚乙基甲氧基(-CH2CIM)CH3)、亚正丙基异丙氧基(-CH2CH2CH2OCH(CH3)2)、亚甲基叔丁氣基(-CH广O-C(CH3)3)等."烷基硫代烷氧基"是指基团"-亚烷基-S-烷基"，其包括例如亚甲基碟代甲氧基(-CH2SCH》、亚乙基疏代甲氧基(-CH2CH,SC!U、亚正丙基疏代异丙氣基(-CH2CH2CH2SCH(CH3)2)、亚甲基碟代叔丁氧基(-CH广SC(CH3)3)等."链烯基"是指优选具有2-10个碳原子、更优选具有2-6个碳原子，并具有至少一个、优选1-2个烯基不饱和部位的链烯基.优选的链烯基包括乙烯基(-CH-C!U、正丙烯基(-CH2CH=CIU、异丙烯基(-C(CH》-CHJ等."取代的链烯基"是指具有l-3个选自下列的取代基的如上所定义的链締基烷氣基、取代的烷氣基、跣基、跣基氨基、酰氣基、氨基、氨基酰基、氨基酰氧基、氛基、由素、羟基、羧基、新基、碟代酮基、羧基烷基、巯基、碟代烷氣基、取代的碟代烷氣基、芳基、杂芳基、杂环基、硝基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-S0-芳基、-S0-杂芳基、-S0广坑基、-SO广取代的烷基、-SO广芳基、-SO广杂芳基、一烷基氨基、二烷基氨基、一(取代的烷基)氨基、二(取代的烷基)氨基、一芳基氨基、二芳基氨基、一杂芳基氨基、二杂芳基氨基、一杂环基氨基、二杂环基氨基，和具有选自下列的不同取代基的不对称二取代的胺烷基、取代的烷基、芳基、杂芳基和杂环基."炔基"是指优选具有2-10个破原子、更优选具有2-6个碳原子，并具有至少一个、优选l-2个炔基不饱和部位的炔基.优选的炔基包括乙炔基(-CH-CH2)、炔丙基(-CH2CsCH)等."取代的炔基"是指具有l-3个选自下列的取代基的如上所定义的炔基烷氧基、取代的坑氧基、耽基、酰基氨基、跌氣基、氨基、氨基耽基、氨基酰氧基、氛基、卤素、羟基、羧基、嗣基、碗代新基、羧基烷基、拔基、疏代烷氧基、取代的砥代烷氧基、芳基、杂芳基、13杂环基、硝基、-so-烷基、-so-取代的烷基、-so-芳基、-so-杂芳基、-so广烷基、-so广取代的烷基、-so广芳基、-so广杂芳基、一烷基氨基、二烷基氨基、一(取代的烷基)氡基、二(取代的烷基)氨基、一芳基氨基、二芳基氨基、一杂芳基氨基、二杂芳基氨基、一杂环基氨基、二杂环基氨基，和具有选自下列的不同取代基的不对称二取代的胺烷基、取代的烷基、芳基、杂芳基和杂环基."酰基"是指基团烷基-C(0)-、取代的烷基-C(0)-、环坑基-C(0)-、取代的环烷基-c(o)-、芳基-c(o)-、杂芳基-c(o)-和杂环基-c(o)-，其中烷基、取代的烷基、环坑基、取代的环烷基、芳基、杂芳基和杂环基如本文所定义."酖基氨基"是指基团-C(0)MR，其中每个R独立地为氢、烷基、取代的烷基、芳基、杂芳基或杂环基，其中烷基、取代的烷基、芳基、杂芳基或杂环基如本文所定义."氨基耽基"是指基团-NRC(O)R，其中每个R独立地为氢、烷基、取代的烷基、芳基、杂芳基或杂环基，其中烷基、取代的烷基、芳基、杂芳基或杂环基如本文所定义."氨基跣氣基"是指基团-MC(0)0R，其中每个R独立地为氳、坑基、取代的烷基、芳基、杂芳基或杂环基，其中烷基、取代的烷基、芳基、杂芳基或杂环基如本文所定义."酜氣基"是指基团烷基-c(o)o-、取代的烷基-C(0)0-、环烷基-C(O)O-、芳基-C(0)0-、杂芳基-C(0)0-和杂环基-C(0)0-,其中烷基、取代的烷基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环基如本文所定义."芳基"是指具有6-14个碳原子的不饱和芳族碳环基，其具有一个环(例如苯基)或多个缩合(稠合)环(例如萘基或蒽基).优选的芳基包括苯基、萘基等.除非对芳基取代基的定义另有限制，否則这样的芳基可任选被1-5个选自酰氣基的取代基、1-5个(优选1-3个)选自下列的取代基取代羟基、酰基、烷基、烷氣基、链烯基、炔基、取代的烷基、取代的烷氣基、取代的链烯基、取代的炔基、氨基、氨基耽基、耽基氨基、烷芳基、芳基、芳氧基、叠氮基、羧基、羧基坑基、泉基、卤素、硝基、杂芳基、杂环基、氨基酰氧基、氣基酰基氨基、硫代烷氧基、取代的硤代烷氧基、疏代芳氧基、硫代杂芳氣基、-SO-烷基、-SO-取代的烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO广烷基、-S02-取代的烷基、-so2-芳基、-so广杂芳基、三卣代甲基、一坑基氨基、二烷基氨基、一(取代的烷基)氨基、二(取代的烷基)氨基、一芳基氛基、二芳基氨基、一杂芳基氨基、二杂芳基氨基、一杂环基氨基、二杂环基氨基，和具有选自下列的不同取代基的不对称二取代的胺烷基、取代的烷基、芳基、杂芳基和杂环基等.优选的取代基包括烷基、烷氣基、由素、氛基、硝基、三由代甲基和硪代烷氣基."芳氧基"是指基团芳基-o-,其中芳基如上所定义，并包括如上所定义的任选被取代的芳基."羧基烷基"是指基团"-C(0)0坑基"，其中烷基如上所定义."环烷基"是指具有3-12个碳原子的环状烷基，其具有一个环或多个稠合环，包括稠合的、桥连的和螺合的二环或多环化合物.这样的环烷基包括例如单环结构如环丙基、环丁基、环戊基、环辛基等，或多环结构例如金刚烷基等."取代的环烷基"是指具有1-5个(优选1-3个)选自下列的取代基的环烷基羟基、酰基、酜氧基、烷基、取代的烷基、烷氣基、取代的烷氣基、链烯基、取代的链烯基、炔基、取代的炔基、氨基、氨基酰基、烷芳基、芳基、芳氧基、嗣基、硖代嗣基、羧基、羧基烷基、氛基、由素、硝基、杂芳基、疏代烷氧基、取代的硤代坑氧基、三鹵代甲基等."环烯基"是指具有一个单环和至少一个内不饱和位点的4-8个碳原子的环状烯基.合适的环烯基的实例包括例如环丁-2-烯基、环戊-3-烯基、环辛-3-烯基等."取代的环烯基"是指具有l-5个选自下列的取代基的环烯基羟基、耽基、耽氣基、烷基、取代的烷基、烷氣基、取代的烷氣基、链烯基、取代的链烯基、炔基、取代的炔基、氡基、氨基耽基、烷芳基、芳基、芳氣基、羧基、明基、硤代稱基、羧基烷基、氛基、卤素、硝基、杂芳基、疏代烷氧基、取代的硫代烷氣基、三由代甲基等."由素"是指氟、氯、溴和碘，优选为氟或氣."杂芳基"是指具有1-15个碳原子和在至少一个环(如果有一个以上的环)内具有l-4个选自氧、氮和硫的杂原子的芳族碳环基.除非对杂芳基取代基的定义另有限制，否則这样的杂芳基可任选15被l-5个选自下列的取代基取代烷基、取代的烷基、坑氣基、取代的坑氣基、芳基、芳氧基、离素、硝基、杂芳基、就基、疏代烷氧基、取代的碟代烷氧基、疏代芳氣基、三由代甲基等.这样的杂芳基可具有一个单环(例如吡啶基或呋喃基)或多个稠合环(例如中氮茚基或苯并噻吩基)，包括稠合的、桥连的和螺合的二环或多环化合物.优选的杂芳基包括吡啶基、吡咯基和呋喃基."杂环"或"杂环基"是指具有单环或多个桐合环，包括稠合的、桥连的和螺合的二环或多环化合物，在环内具有1-15个碳原子和1-4个选自氮、硤或氣的杂原子的一价饱和或不饱和基团.除非对杂环取代基的定义另有限制，否则这样的杂环基可任选被1-5个选自下列的取代基取代烷基、取代的坑基、烷氧基、取代的坑氣基、芳基、芳氣基、由素、硝基、杂芳基、巯基、硤代坑氧基、取代的疏代烷氧基、砥代芳氣基、三卣代甲基等.这样的杂环基可具有一个环或多个稠合环.优选的杂环基包括吗啉代、哌啶基等.含氮杂环和杂芳基的实例包括但不限于吡咯、咪唑、吡唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪、中氮茚、异吲哚、吲哚、吲唑、嘌呤、喹嗪、异喹啉、喹啉、钛嗪、萘基吡啶、喹鬼啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、咔唑、味啉、菲啶、吖啶、菲咯啉、异^唑、吩唤、异，恶唑、吩哺唤、吩噱嗪、咪唑烷、咪唑啉、哌啶、哌唤、二氯吲哚、吗啉代、哌啶基、四氢呋喃基等，以及N-烷氧基含氮杂环."氧基觥基氨基"是指基团-OC(0)NRR，其中每个R独立地为氢、烷基、取代的烷基、芳基、杂芳基或杂环基，其中烷基、取代的坑基、芳基、杂芳基或杂环基如本文所定义."巯基"是指基团-SH."硫代烷氧基"是指基团-s-坑基."取代的碟代烷氣基"是指基团-s-取代的烷基."硫代芳氣基"是指基团芳基-s-，其中芳基如上所定义，并包括如上所定义的任选被取代的芳基."杂芳氧基"是指基团杂芳基-o-，其中杂芳基如上所定义，并包括如上所定义的任选被取代的杂芳基.在特别的方法实施方案中，本发明提供了如反应方案1和2所述的制备式(4)化合物的方法.在下述反应方案中，除非另有说明，否则16所有取代基都如前所定义，并且所有试刑都是本领域众所周知且理解的.反应方案1V,在反应方案1步稞1中，用合适的二烷氣基羰基乙酸醋转移试刑将适当的式(l)N-烷基苯乙基胺跣化，以生成式(2)化合物.合适的式(1)N-烷基苯乙基胺是其中V和R3是式I终产物中所需基团的化合物.这样的N-烷基苯乙基胺可通过在本领域技术人员众所周知且理解的条件下将2-溴或2-氟乙基苯与式1UMl3胺反应来容易地制得.合适的二烷氧基羰基乙酸酯转移试刑是其中l是C,-"烷基，且将二烷氧基羰基乙耽基转移到式(l)化合物上的试刑，例如二烷氧基羰基乙酸和二烷氣基羰基乙酰氟(参见Ben-Ishai，Tetrahedron,43，439-450(1987)).例如，将适当的式(l)N-坑基苯乙基胺与合适的二烷氣基羰基乙酸接触以生成式(2)化合物.这样的偶联反应是肽合成中的常规反应，并且可采用其中所使用的合成方法.例如，可使用众所周知的偶联试剂例如碳二亚胺来促进该酰化，同时使用或不使用众所周知的添加剂例如N-羟基琥珀酰亚胺、l-羟基苯并三唑等.这样的偶联反应经常使用合适的碱来清除在反应期间产生的酸.合适的碱包括例如三乙胺、N，N-二异丙基乙胺、N-甲基吗啉等.该反应通常在惰性非质子极性稀17释刑例如二甲基甲酰胺、二氦甲烷、氯仿、乙腈、四氢呋喃中进行.该反应通常在约OTC-约601C的温度下进行，并且一般需要约1-约24小时.反应完成后，通过常规方法，包括萃取、沉淀、色谦法、过滤、研制、结晶等收集式(2)产物。或者，例如，将适当的式(l)N-烷基苯乙基胺与合适的二烷氧基羰基乙跣氯接触，以生成式(2)化合物.这样的酰氦可通过本领域众所周知的方法由相应的酸制得，例如通过三氣化磷、三氯氧化磷、五氟化磷、亚硤跣氯或草跌氦的作用，使用或不使用少量二甲基甲耽胺，在惰性溶刑例如甲苯、二氯甲烷或氯仿中；于约0-80iC的温度下进行所述反应.该反应通常进行1小时-24小时.可将酰氯分离和纯化，或者其经常可以直接使用，也就是说，进行或不进行分离和/或纯化。这样的酰化反应通常使用合适的碱来清除在反应期间产生的酸，合适的碱包括例如吡啶、三乙胺、N，N-二异丙基乙胺、N-甲基吗啉等.该反应通常在惰性非质子极性稀释刑例如二氣甲烷、氯仿、四氩呋喃等中进行.该反应通常在约-20lC—约801C的温度下进行，并且一般需要约1-约24小时.反应完成后，通过常规方法，包括萃取、沉淀、色谦法、过滤、研制、结晶等收集式(2)产物.在反应方案1步碟2中，将式(2)化合物环合以生成式(3)化合物.例如，将式(2)化合物与酸例如三氟甲磧酸或碟酸接触，通常使用所选的酸作为溶刑来进行该反应.一般情况下，首先将反应物在约-20iC—约OTC的温度下混合，然后温热至约环境温度-约601C的温度.该环合反应一般需要约12-约72小时.反应完成后，通过常规方法，包括萃取、沉淀、色谦法、过滤、研制、结晶等收集式(2)产物.在反应方案1步稞3中，将式(3)化合物脱保护以生成式(4)化合物.除去这样的烷氣基羰基胺保护基是本领域众所周知且理解的.例如参见ProtectingGroupsinOrganicSynthesis,TheodoraGreene(l'，和2ndEditions,Wiley-Interscience)和Ben-Ishai，Tetrahedron,43，439-450(1987).反应方案2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>在反应方案2步稞1中，将合适的式(5)苯基乙酸衍生物与适当的式(6)缩醛偶联，以生成式(7)化合物.合适的式(5)苯基乙酸衍生物是其中V是式I终产物中的所需基团，且A,是活化基团例如-OH、-Cl或-Br的化合物.合适的式(6)缩醛是其中113是式I终产物中的所需基团，且R5是C,-C4烷基的化合物.这样的偶联反应是肽合成中的常规反应，并且可如反应方案1步稞1所述采用其中所使用的合成方法.另外，反应方案2步緣2中描述的偶联可在SchoUen-Baumann条件下，使用式(5)适当苯乙酸的跌面与合适的式(6)缩搭在混合溶刑例如甲基叔丁基酸、乙酸乙酴、四氣呋喃、丙稱或乙醚和水中进行.该反应使用合适的碱来进行，所述碱有例如氩氣化钠、氢氧化钟、碳酸钠、碳酸钟、碳酸氢钠或破酸氩钟.一般情况下，将该反应剧烈挽拌或搅动，其在约-20iC-约801C的温度下进行，并通常需要约1-约24小时.反应完成后，通过常规方法，包括萃取、沉淀、色谦法、过滤、研制、结晶等收集式(7)产物，在反应方案2步碟2中，将式(7)化合物环合以生成式(8)化合物.在酸例如疏酸中进行这样的环合反应.通常使用酸作为溶刑.该反应一般在约-20iC-约1501C的温度下进行，并通常需要约1-约24小时.反应完成后，通过常規方法，包括萃取、沉淀、色谦法、过滤、研制、结晶等收集式(8)产物.在反应方案2步骤3中，将式(8)化合物进行胺转移反应，以生成式(9)化合物.在反应方案2中描迷了肟化作用.这样的肟化作用是通过将式(8)化合物的烯醇化物与肝转移试刑例如亚硝酸坑基酯接触来完成的.式(8)化合物的烯醇化物可通过将式(8)化合物与合适的碱例如叔丁醇钟、二异丙基氛基锂、六甲基二硅叠氮锂(Lithiumhexamethyldisilazide)、六甲基二娃叠氮钠、六甲基二磋叠氮钟等反应来制得.Wheeler，等人，OrganicSyntheses,Coll.Vol.VI，p.840中举例说明了这样的肟化作用，其中描述了将亚硝酸异戊醋与辆反应来制备所需的肟.该反应通常是在溶刑例如四氩呋喃中进行的.该反应一般在约-20X:-约50TC的温度下进行，并且通常需要约1-约24小时.反应完成后，通过常規方法，包括萃取、沉淀、色谦法、过滤、研制、结晶等收集式(8)产物.或者，这样的胺转移反应可经由叠氮化物来完成.叠氮化物可通和三异丙基苯橫耽叠氮反应来形成.Evans,等人，J.Am.Chem.Soc.,112:4011-4030(1990)41中举例说明了这样的反应.该反应通常是在溶刑例如四氩呋喃中进行的.该反应一般在约-20TC-约501C的温度下进行，并且通常需要约l-约24小时.反应完成后，通过常规方法，包括萃取、沉淀、色谱法、过滤、研制、结晶等收集具有叠氮化物来代替肟的式(8)产物.如反应方案2步稞4所示，将肟还原成式(4)化合物.这样的还原是通过用氢与合适的催化刑例如阮内镍或钯催化刑如披钯碳处理来完成的.该反应一般在溶刑例如四氣呋喃，乙酸乙醋，或低级醇例如甲醇、乙醇和异丙醇，乙酸，水，氛水等，及其混合物中进行.该反应20一般在大气压-约600psi(4137kPa)的氳气压下进行.该反应一般在约201C-约IOOTC的温度下进行，并且通常需要约1-约24小时.反应完成后，通过常规方法，包括萃取、沉淀、色谦法、过滤、研制、结晶等收集式(4)产物.或者，当胺是经由叠氮化物转移时，将叠氮基还原.这样的还原是通过如上所迷的氦化进行的.在另一个实施方案中，本发明提供了制备式I内酰胺化合物，包括(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰基)-1-(L-丙氛耽基)—(S)-l-氨基-3-甲基-2，3,4,5-四氦-lH-3-苯并氛杂革-2-稱的立体有择方法，以及制备其手性中间体的方法.反应方案A中描述了这样的方法.反应方案A反应方案A步驟1描述了将合适的式(4)内酰胺化合物进行立体化学拆分以生成式(IO)内酰胺化合物.本领域技术人员能够理解，本发21明方法并不一定限于制备一种异构体.本发明方法能够制备内酰胺化合物的任一种特定对映体，并特别适于制备l-氛基-3-烷基-2，3,4，5-四氢-lH-3-苯并氮杂箪-h嗣的异构体.由于在2，3，4,5-四氢-lH-3-苯并氮杂蕈-2-嗣部分的(S)-异构体具有更强的生物活性，本发明在制备基本上纯的(S)-异构体方面是最有用的.本文所用术语"基本上纯"是指(R)-或(S)-内耽胺，特别是(R)-和(S)-l-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氢-lH-3-苯并氮杂萆-2-酮的对映体纯度.依据本发明，所制得的基本上纯的(S)-l-氨基-3-烷基-2，3，4，5-四氢-lH-3-苯并氮杂罩-2-嗣可包含大于80%、优选大于90%、更优选大于95%、最优选大于97。/。的(S)-对映体，例如，式(4)化合物的个体异构体可通过将二苯甲酰基酒石酸盐、(R)一(-)-10-棹脑磺酸和(D)—(-)-扁桃酸盐分级结晶来拆分，预计有多种不同的二苯甲酰基酒石酸酯(盐)适于该用途.具有选自下列的对位取代基的二苯甲跣基酯是特别优选的氢、卤素、C,-C4烷基和C,-C4烷氣基，二对甲苯甲耽基酒石酸酯(盐)是最优选的.二-对甲苯甲耽基-L-酒石酸醋(盐)是用于获得(S)-异构体.在反应方案A步槺1的优选实施方案中，式(4)化合物是定义如下的化合物其中V是氢，且R3是d-C4烷基，包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基和仲丁基；最优选使用其中V是氢，且R3是甲基的式(4)化合物.依据本发明方法，将式(4)化合物与所选的酸接触.一般可使用约0.4摩尔当量-大大过量所选的酸，优选使用约0.4-1.5摩尔当量，更优选使用约0.5-l.l摩尔当量所选的酸.本发明方法一般通过将酸加成盐从溶液中结晶出来来进行.特别是，溶刑例如低级醇，包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、丁醉、仲丁醇.异丁醇、叔丁醇、戊醇、异戊醇、叔戊醉、己醇、环戊醇和环己醇是合适的；其中甲醇、乙醇和异丙醉是优选的.使用反溶剂可能是有利的.本文所用术语"反溶刑"是指其中与溶刑相比盐的溶解性显著下降的溶刑.优选地，当使用反溶刑时，其与所选溶刑混溶.合适的反溶刑包括醚例如乙醚、甲基叔丁基醚等，和乙酸低级烷基酶例如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸丙醋、乙酸异丁醋、乙酸22仲丁酯、乙酸丁酯、乙酸戊醋、乙酸异戊醋等，和烷烃例如戊烷、己烷、庚烷、环己烷等.当本发明方法是通过将酸加成盐从外消旋混合物中结晶出来而进行的时，在使用反溶刑时必须小心以避免结晶出不需要的非对映体盐.一般情况下，结晶在约40TC-所选溶刑的回流温度的初始温度下以约0.05摩尔浓度-约0.25摩尔浓度的初始浓度进行.然后将该混合物冷却以生成盐.加入晶种可能是有利的.将初始沉淀搅拌约4-48小时可能是有利的.优选将该结晶溶液緩慢地冷却.最适宜的是，将结晶混合物冷却至环境温度-约-20TC的温度.可使用本领域众所周知的技术，包括过滤、倾析、离心、蒸发、干燥等来收集盐.式(10)化合物可作为所选酸的酸加成盐直接使用.或者，在使用之前，可在酸交换之后将式(IO)化合物作为另一酸加成盐分离出来，或者可通过在本领域众所周知且理解的碱性条件下萃取而作为碱分离出来.在一个优选的实施方案中，本发明提供了动态拆分(dynamicresolution)基本上对映体纯的(S)-卜氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氳-lH-3-苯并氮杂萆-2-新，包括作为动态方法，在芳族搭存在下，将l-氡基-3-甲基-2，3，4，5-四氦-lH-3-苯并氮杂箪-2-嗣作为选自下列的酸的酸加成盐结晶出来二-对甲苯基-L-酒石酸、(R)-(-)-10-樟脑磺酸和(D)-(-)-扁桃酸.该动态方法的优点是，在结晶期间1-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氳-lH-3-苯并氮杂萆-2-酮转化成一种异构体，由此提高了产率和避免了包括不需要的异构体的废物流.预计有多种不同的搭适于本发明方法，我们已经发现，在实际过程中有很多醛特別合适.具体来说，我们已经发现，在本发明动态拆分方法中，水杨醛类是优选的，水杨搭、5-硝基水杨眵和3,5-二氣水杨搭是更优选的.因此，当本发明方法作为动态拆分进行时，在S^存在下将i-氨基-3-甲基-2,3,4，5-四氦-lH-3-苯并氮杂箪-2-稱与所选的酸接触.对于动态拆分，通常使用约0.9-1.2摩尔当量的酸，优选使用约l摩尔当量的酸.搭一般以催化量使用.通常使用约0.5-0.001摩尔当量的S^，优选使用约0.1-约0.01摩尔当重的S^.该动态方法一般在溶刑或不具有上述反溶刑的溶刑中进行.将1-氨基-3-甲基-2,3，4，5-四氦-lH-3-苯并氮杂苯-2-稱、所选的酸和搭的23混合物搅拌以转化成所需异构体.该转化一般在环境温度—所选溶刑的回流温度下进行.转化一般需要6-48小时.本领域技术人员知道，当本发明方法是作为动态拆分来进行时，使用(3)-1-氨基-3-甲基-2，3,4,5-四氦-111-3-苯并氦杂萆-2-胴的酸加成盐可由于分离的产物中存在少量搭而变得复杂.因此，动态拆分后，在其使用或形成碱之前，优选通过盐交换来分离(S)-l-氡基-3-甲基-2，3，4，5-四氩-111-3-苯并氮杂蕈-2-胡，优选将其作为盐酸盐分离出来.本领域技术人员知道，式(10)化合物可用于制备可用来治疗阿尔茨海默氏病的化合物的多种方法中.这些方法描述在于1997年12月22日提交的PCT申请PCT/US97/22986中，下文对其作了描述，本发明方法的特征在于，它们利用了反应方案A步骤1所示的拆分制得了式I化合物.反应方案A步骤2描述了式PgNH-CHR广C(O)-A所示合适的氨基保护的氨基酸与适当的式(10)内耽胺化合物的偶联反应.合适的氨基保护的氨基酸是定义如下的那些其中Pg是胺保护基，l是式I终产物中的所需基团，且A是能够与式(10)化合物的氨基偶联的活化基团例如-OH或-Cl.对于本领域技术人员来说，这样的氨基保护的氨基酸易于获得.优选的式PgNH-CHR广C(O)-A所示氨基保护的氨基酸是其中Pg是叔丁氧基羰基和千氣基羰基，R:是甲基，并且具有L-氨基酸立体化学的那些.反应方案A步骤2中描述的偶联反应涉及肽合成中的常规反应，并且也可以采用其中所使用的合成方法.反应方案1步驟1中详细描述了这样的方法.反应方案A步稞3中描述了将(11)化合物脱保护以生成式(12)化合物.这样的氨基保护基的脱保护是本领域众所周知且理解的.反应方案A步驟4中描迷了合适的式(13)化合物RXX,X广C(0)A,与式(12)化合物的生成式I化合物的偶联反应.合适的式(13)化合物是其中Rt、X,和X,是式I终产物中的所需基团的化合物，并且是本领域众所周知的，包括描述在于1997年12月22日提交的PCT申请PCT/US97/22986中以及如本文所迷.合适的式(13)化合物还可以具有式I终产物中所需的立体化学.步骤3中描述的偶联反应是用式(13)酸(其中A,是-OH的化合物)或由其衍生的耽卤(其中A,是-C1或-Br的化合物)以类似于反应方案1步碟1所述的方式进行的.反应方案A步稞5描述了制备式I化合物的另一方法，其显示了将合适的式(10)化合物与合适的式(14)化合物RtCX,X「C(0)-NH-CHR2-C(0)Ai的直接生成式I化合物的偶联反应.合适的式(10)化合物如步驟2所述.合适的式(14)化合物是其中R,、X,、X2和R,是式I终产物的所需基团的化合物.合适的式(14)化合物还是其中立体化学符合式I终产物需求的化合物.式(14)化合物可通过将羧基保护的氨基酸H2N-CHR2-C(0)OPg,与如上所述的式(13)化合物偶联来容易地制得。这样的偶联反应同样是本领域众所周知的，并且获得了这样的产物，其在脱保护后，生成了式(14)化合物.通过下述实施例和制备来进一步举例说明本发明.这些实施例和制备仅是举例说明，而不是以任何方式限制本发明.除非另有说明，否则在实施例和制备中使用的术语具有其标准含义.例如，""C"是指摄氏度；"咖ol"是指毫摩尔或毫摩尔数；"g"是指克或克数；"mL"是指毫升或毫升数；"盐水"是指饱和氦化钠水溶液；"THF"是指四氩呋喃；"HPLC"是指高压液相色谦法等.实施例1合成l-氨基-3-甲基-2，3,4，5-四氨-lH-3-苯并氮杂苯-h嗣向氦化钠(l.l当量)在15mL无水DMF内的浆液中加入2，3，4，5-四氩-lH-S-苯并氮杂蕈4-嗣(0.0(M2mol)在10mLDMF中的溶液.然后加入甲基碘(约2当量).当TLC证实反应完全时，将该反应混合物倒入水上，并萃取到乙酸乙醋内.将有机层依次用水和盐水洗涂.然后将有机层用Na,S04干燥，过滤并减压浓缩.通过HPLC(LC2000)纯化残余物，用乙酸乙酯/己烷系统洗脱，获得了3-甲基-2，3，4，5-四氳-111-3-苯并氮杂苯-2-稱.将3-甲基-2，3,4，5-四氩-111-3-苯并氮杂蕈-2-胡(1当量)溶解在THF中，并加入异戊猜(1.2当量).将该混合物在冰浴中冷却至O"C.滴加NaHMDS(l.l当量，1M的THF溶液).搅拌l小时或直至反应完全后，将该混合物浓缩，用1N盐酸酸化，并用乙酸乙酯萃取.将有机相25干燥，浓缩，获得了粗产物，通过硅胶色谱纯化，获得了1-羟基亚氨基+甲基-2，3，4，5-四氩-lH-3-苯并氮杂蕈-2-稱:质谱(M+H)+，205.1.将1-羟基亚氨基-3-甲基_2，3，4，5-四氢-111-3-苯并氮杂革-2-嗣溶解在EtOH/NH3(20:1)中，在高压气体贮罐(bomb)中使用阮内镍和氩气(500psi/3447kPa)于IOOTC氩化10小时.将所得混合物过滤，浓缩，获得了油状物，通过硅胶色谦纯化，获得了本标题化合物.实施例2合成l-氨基-3-甲基-2，3，4,5-四氢-lH-3-苯并氮杂簟-2-鲷在室温向20LMorton烧瓶中加入MTBE(5.52L，7体积)和(N-甲基氨基)-乙醛缩二曱醇(614g，5mol)以形成溶液.向该Morton反应烧瓶中加入通过加入碳酸氪钠(546g，6.5mol)和水(6.31L,8体积)制得的碳酸氨钠溶液.将该混合物冷却至101C以下，用1小时向该冷却的反应混合物中滴加苯乙酰氯(789g，5mol)的MTBE(789mL)溶液.加入完成后，将该反应混合物在室温搅拌1小时.在该阶段，HPLC分析表明反应已完全.用MTBE(4体积)萃取，用无水硤酸镁干燥，然后用旋转蒸发仪浓缩，获得了1.187kg(98%)N-甲基-N-(2,2-二甲氣基乙基)苯基乙酰胺，为液体，(M+H)'=237.9.在浓氮气氛下向5LMorton烧瓶中加入H2S0^(1.42L)，向该反应烧瓶中滴加N-甲基-N-(2,2-二曱氧基乙基)苯基乙酰胺(712g，3mol),引起放热(从221C升至78X:).然后将所得反应在1101C加热3小时，然后冷却至室温，并转移到20LMorton烧瓶中，在101C以下，用氢氧化钠水溶液(9,18L,5N)中止该反应混合物的反应.用乙酸乙酴(2x2.85L)萃取，用硪酸钠干燥，然后浓缩至固体，获得了520g(73.5%)3-甲基-6,7-二氩-2H-3-苯并氛杂蕈-2-酮，为固体.将该产物从MTBE中重结晶以提高纯度，获得了固体，mp-81-82"C;(M+H)+=174.2.将3-甲基-6，7-二氦-2H-3-苯并氮杂箪-2-酮(113.8g，0.657mol)的THF(0.5L)溶液冷却至0TC,并滴加异戊膀(100.75g，0.86mol),以使温度保持在101C以下的速度向所得混合物中加入LiHMDS(1N的THF溶液，854mL,0.854mol).加入完成后，将该反应在室温搅拌2-3小时，同时通过HPLC检测反应进程.反应完全后，将该混合物冷却至01C，用盐酸(2N)将pH从12调节至2-3.将所得沉淀搅拌12-16小时，然后通过过滤分离，干燥，获得了86.3g(64.9%)1-鞋基亚氨基-3-甲基-6,7-二氳-2H-3-苯并氮杂萆-2-酮;mp=225-2261C;(M+H)+=203.0,将l-轻基亚氨基-3-甲基-6，7-二氦-2H-3-苯并氮杂萆-2-稱(35g，0.173mol)的乙醇(525mL)溶液与披钯炭(10%,3.5g)在稀盐酸(17.5g浓盐酸在17mL水中的溶液)中的浆液一起加到高压釜中.将所得混合物在5QTC和250psi(1723kPa)氳化直至反应完全.将该反应混合物经由硅藻土(celite)垫过滤，使用乙醇作为溶刑，并将滤液浓缩至90mL.向该浓缩液中加入水(350mL)，并将所得溶液进一步浓缩至约200mL.将二氯甲烷(350mL)加到该水溶液中，然后用氩氧化钠水溶液(lN)将pH调节至ll-ll.5.分离出有机相，用二氯甲烷(175mL)萃取水相.将合并的萃取液浓缩，获得了在静置时结晶的残余物，得到了本标趙化合物mp=69-81TC;(M+H)+=191.0.实施例3合成l-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氢-lH-3-苯并氮杂萆-2-嗣向22LMorton烧瓶中加入二氯甲烷(4.73L，8体积)、N-甲基苯乙基胺(591g，4.33mol)和碳酸氩钠水溶液(436.7g，5.2mol，在4.73L水中).将该混合物冷却至5TC以下，用70分钟向该冷却的反应混合物中滴加氟乙酰氯(513.7g，4.55mol)的二氟曱坑(887mL)溶液，加入完成后，HPLC分析表明反应已完全.分离各层，用二氯甲烷萃取水层.将合并的有机层用无水疏酸镁干燥，用旋转蒸发仪浓缩，获得了915.7g(99.8%)N-甲基-N-(2-苯基乙基)-l-氣乙耽胺(M+H)=212.1.在氮气氛下向12L烧瓶中加入N-甲基-N-(2-苯基乙基)-l-氯乙酰胺(883.3g,4.17mol)和邻二氟苯(6.18L).加入氣化铝(1319g，10.13mol),引起了放热(从221C升至501C).然后将所得反应加热至165TC2.5小时，用约14小时冷却至室温.将该反应混合物冷却至约0X:，分4批加到冷水(8.86L，约5TC)中以将放热保持在约401C,分离各层，用二氟甲烷(7.07L)萃取水层，并分离各层.合并有机层，依次用盐酸(8.83L，1N)和饱和碳酸氩钠水溶液(7.07L)萃取，用疏酸镁干燥，与硅胶(883g)合并，并施加到硅胶柱(3.53kg,在烧结玻璃漏斗中，作为在二氦甲烷中的浆液填塞).用二氣甲坑洗脱该硅胶柱直至收集到25L，然后用乙酸乙醋洗脱，获得了产物.将含有产物级分蒸发，获得了3-曱基-2,3，4,5-四氩-lH-3-苯并氣杂萆-2-稱，为黄褐色固体，608g(83%).在22L烧瓶中，于氮气氛下将3-甲基-2，3，4,5-四氢-lH-3-苯并氮杂蕈-2-嗣(606g，3.46mol)和异戊腈(543g，4.5mol)放入THF(7.88L)中.将该混合物冷却至约0TC，然后以使温度保持在约7t:以下的速度向该混合物中加入LiHMDS(1N的THF溶液，4.5L,04.5mol).加入完成后，将该反应在室温撹拌约2小时，同时通过HPLC监测反应进程.反应完全后，将该混合物冷却至约01C,用盐酸(2N)将pH从12调节至约2-3,将所得沉淀搅拌约6小时，然后通过过滤分离，干燥，获得了l-羟基亚氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氯-lH-3-苯并氮杂罩-2-胡604.7g(85.6%).将1-羟基亚氛基-3-甲基-2,3，4，5-四氢-lH-卜苯并氮杂萆-2-酮(625g，3.06mol)和3A乙醇(15.6L)与披钯炭(10%,120g)在稀盐酸(浓盐酸(312g在320mL水中的溶液)中的浆液一起加到高压釜中.将所得混合物在剧烈搅拌下于50"C和250psi(1723kPa)氢化直至反应完全(约4小时)，将该反应混合物经由硅藻土垫过滤，使用乙醇作为溶刑，并将滤液浓缩，获得了固体.用二氦甲烷(6L)处理该固体，加入1N氢氣化钠水溶液直至水层的pH为11-11.5.将该混合物搅拌，分离各层，用二氯甲烷(2L)萃取水层.将有机层用疏酸镁干燥，过滤，用旋转蒸发仪蒸发，获得了本标趙化合物477g(81.9%),实施例4合成(S)-l-氨基-3-甲基-2,3,4，5-四氩-lH-3-苯并氛杂箪-2-酮将l-氨基-3-甲基-2，3，4,5-四氢-lH-3-苯并氮杂苯-2-酮(1.544g，8.12imjo1)在15mL甲醇中轻微加热以形成溶液.在另一烧瓶中，将二-对甲苯甲酰基-L-酒石酸(3.12g，8.08nunol)溶解在15mL甲醇中，并通过移液管加到温热的胺溶液中.将该混合物加热，沉淀出固体.再加入30mL甲醇以获得溶液，将其回流30-40分钟，然后緩慢地冷却至环境温度，获得了固体.搅拌约18小时后，通过过滤收集固体，用少量冷的甲醇洗涤，获得了2.24g(S)-l-氨基-3-甲基-2，3,4,5-四氢-1H-3-苯并氮杂箪-2-嗣二-对甲苯甲酰基-L-酒石酸盐(产率为96%，94.7%ee).将(S)-l-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氩-lH-3-苯并氮杂萆-2-稱二-对甲苯甲酜基-L-酒石酸盐(ll.83g，20.5mmol)溶解在45mL1.0N氢氧化钠水溶液中，并用二氯甲烷(3x25mL)萃取.将合并的二氯甲烷层依次用35mL1.0N氦氧化钠水溶液、盐水溶液洗涂，并用无水疏酸镁干燥.真空除去溶剂，获得了本标趙化合物(3.38g)，为无色油状物(产率为87%，93.2%ee).实施例5合成(S)-l-氨基-3-甲基-2，3,4,5-四氢-lH-3-苯并氮杂蕈-2-酮将1-氨基-3-甲基-2,3，4，5-四氨-lH-3-苯并氮杂蕈-2-酮(6.0g，31.5咖ol)在75mL甲醇中轻微加热以形成溶液，与二-对甲苯甲耽基-L-酒石酸(12.2g，31.5mmol)在75mL温热的甲醉中的溶液合并.向该溶液中加入晶种，形成了固体.再加入100mL甲醇，将该混合物搅拌.搅拌约18小时后，通过过滤收集固体，用少量冷的甲醇洗涤，获得了6.7g固体，将固体与曱醇(200mL)合并，搅拌.18小时后，收集固体，获得了(S)-l-氨基-3-甲基-2，3,4,5-四氢-lH-3-苯并氮杂蕈-2-酮二-对甲苯甲跣基-L-酒石酸盐(4.4g).通过实施例4中描述的方法分离出碱，获得了本标題化合物(96。/。ee),实施例6合成(S)-l-氨基-3-甲基_2,3，4,5-四氩-lH-3-苯并氮杂蕈-2-^在22L容器中于氮气氛下将1-氨基-3-甲基-2，3,4，5-四氩-lH-3-苯并氮杂蕈-2-胡(438g，2.3mol)加热(约的"C)以获得在甲醇(4.38mL)中的溶液.在另一个烧瓶中，将二-对甲苯甲耽基-L-酒石酸(889.7g，2.3mol)溶解在4.38L甲醇中，加热至约40TC,然后加入1-氨基-3-甲基-2，3,4，5-四氩-lH-3-苯并氮杂蕈_2-辆溶液.继续加热，再加入6.13L甲醇，然后将该混合物回流约45分钟，之后緩慢地冷却至环境温度，获得了固体.搅拌约18小时后，通过过滤收集固体，用少重母液洗涤，风干后，用约2L乙酸乙醋洗涤，获得了561.6g(S)-l-氨基-3-甲基-2,3，4，5-四氩-lH-3-苯并氮杂革-2-酮二-对甲苯甲跣基-L-酒石酸盐.将(S)-l-氨基-3-甲基-2，3,4,5-四氩-lH-3-苯并氮杂罩-卜酮二-对甲苯甲酰基-L-酒石酸盐、二氦甲烷(6.57L)和1N氩氣化钠水溶液(6.57L)合并，撹拌.分离各层，将有机层用1N氩氧化钠水溶液(3.28L)萃取2次，用盐水(2.46L)萃取l次，然后用碟酸镁干燥，过滤，用旋转蒸发仪浓缩，获得了本标趙化合物250g(57.4%，94.1%ee),实施例7合成(S)-l-氨基-3-甲基-2，3，4,5-四氪-lH-3-苯并氦杂罩4-稱盐磁社将l-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氩-lH-3-苯并氮杂箪-2-酮(31.9g,168咖ol)在约300mL乙酸异丙醋中浆化，并加热至在另一个单独的烧瓶中，将(R)-(-)-D-扁桃酸(25.0g,164咖ol)在约130mL异丙醇中加热直至形成溶液，并加到上面获得的l-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氬-lH-3-苯并氮杂罩-2-酮/乙酸异丙酯浆液中，得到溶液，其中迅速形成了沉淀.将该混合物在45X:搅拌约3小时.将5-硝基水杨毪(2-幾基-5-硝基苯甲搭)(1.40g,8.38mino1，5加1%)加到该温热的溶液中，并将该混合物在45TC搅拌.约14小时后，将该浆液冷却至环境温度，搅拌2小时，然后通过过滤收集固体，用70mL冷的乙酸异丙酯洗涤，在真空烘箱中于40"C干燥，获得了46.62g(S)-l-氛基-3-甲基-2,3，4，5-四氩-lH-3-苯并氮杂箪-P新(R)-扁桃酸盐(产率为82.9%，98.4%ee).将(S卜l-氛基-3-甲基-2，3，、5-四氢-lH-3-苯并氮杂箪-:i-酮(R)-扁桃酸盐(2.42g，7.06mmo1,98.4。/。ee)在25mL乙酸乙酯中于环境温度浆化.加入浓盐酸(l.lmL,约11.2mmol)，在剧烈搅拌下将该混合物加热至501C攬拌3.5小时.将该浆液冷却至环境温度，过滤，用甲基叔丁基酸(约10mL)洗涤，获得了1.48g本标趙化合物(产率为92.5%，97.9%ee).实施例8合成(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁跣基)-1-(L-丙氨酰基)—(S)-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氪-111-3-苯并氮杂蕈-2-酮在氮气氛下向圃底烧瓶中加入在THP中的N-t-Boc-L-丙氨酸(l.0当量)、羟基苯并三唑水合物(约1.1当重)和(S)-l-氨基-3-甲基-2,3，4，5-四氨-lH-3-苯并氮杂蕈-2-嗣(l.O当重).向该充分搅拌的混合物中加入Hunig's碱(N，N-二异丙基乙胺，1.1当重)，然后加入EDC(l.l当量).在环境温度搅拌4-17小时后，减压除去溶刑，将残余物置于乙酸乙酯和水中，用饱和破酸氩钠水溶液、1N盐酸、盐水洗涤，用无水硤酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，获得了l-(N-t-Boc-L-丙氨酰基)氦基-3-甲基-2，3，4，5-四氨-lH-3-苯并氮杂蕈-^網质诿(M+H)+,362.3.在NZ下向l-(N-t-Boc-L-丙氛酰基)氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氩-111-3_苯并氮杂蕈-2-稱在1,4-二氧杂环己烷(0.03-0.09M)内的在冰浴中冷却至约IOTC的攬拌溶液中通入无水HCI气流10-15分钟.将该溶液密封，然后移去冷却浴，搅拌温热至环境温度，2-8小时，通过TLC监测，1.O意味着原料已消耗完.将该溶液浓缩，获得了l-(L-丙氨酰基)-(S)-氨基-3-甲基-2，3,4,5-四氣-lH-3-苯并氮杂箪-2-酮，不用进一步纯化直接使用.在氮气氛下将l-(L-丙氨酰基)-(S)-氨基-3-甲基-2，3，4,5-四氩-3甲基-lH-3-苯并氮杂蕈-2-嗣(1.0当量)、羟基苯并三唑水合物(1.1当量)和(S)-2-羟基-3-甲基-丁酸(1.0当重)置入THF中.向该充分搅拌的混合物中加入Hunig's碱(N，N-二异丙基乙胺，l.l当量)，然后加入EDC(l.l当量).在环境温度搅拌4-17小时后，减压除去溶刑，将残余物置于乙酸乙酯(或类似溶刑)和水中，用饱和碳酸氳钠水溶液、1N盐酸、盐水洗涤，用无水碟酸钠干燥，减压除去溶刑，获得了本标题化合物.实施例9合成(N)—((S)-2-羟基-3-甲基-丁跣基)-1-(L-丙氨酰基)一(S)-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氣-lH-3-苯并氣杂萆-h鹏在氮气氛下向圃底烧瓶中加入在THF(3.76L)内的N-t-Boc-L-丙氨酸(249'5g,1.32mol)、幾基苯并三唑水合物(232,2g,1.52mol)和(S)-1-氨基-3-甲基-2,3,4，5-四氢-lH-3-苯并氮杂箪-2-辆U50.8g,1.32mol).将该混合物冷却至5t;以下，然后加入Hunig's碱(N,N-二异丙基乙胺，188.4g，1.45mol)，然后加入EDC(283.7g，1.45mol).搅拌6小时后，将该反应混合物温热至环境温度，并搅拌约14小时.减压除去溶刑，将残余物置于乙酸乙酯(3.76L)和水(1.76L)中，分离各层，将有机层用水(1.76L)萃取，合并水层，用乙酸乙酶(1.76L)萃取.合并有机层，用饱和破酸氣钠水溶液(1.76L)萃取，用无水疏酸钠干燥，过滤，用旋转蒸发仪浓缩，获得了l-(N-t-Boc-L-丙氡酰基)氨基-3-甲基-2,3,4，5-四氢-lH-3-苯并氮杂罩-h嗣4"g(97.2%).使用液面下分散管，通过让无水HC1气体流经冷却至约O"C的乙酸乙醋(l.76L)来制备HC1的乙酸乙酯溶液.将上迷制备的HC1的乙酸乙酶溶液加到l-(N-t-Boc-L-丙氨酰基)氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氩-lH-3-苯并氮杂蕈^-酮(462g,1.28mol)在乙酸乙醋(3.7L)内的剧烈搅拌溶液中.再加入一定量的乙酸乙酯(lL),让该反应混合物温热至室温，并搅拌22小时.将该反应混合物过滤，获得了固体.将该固体用乙猜(5L)浆化，加热至回流，然后冷却至约601C，之后过滤并干燥，获得了l-(L-丙氨酰基)-(S)-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氢-lH-3-苯并氮杂箪-2-稱389.8g(94.7%).在氮气氛下将l-(L-丙氨酰基)-(S)-氨基-3-甲基-2，3,4，5-四氢-3-甲基-lH-3-苯并氛杂蕈-2-酮(369.5g,1.18mol)、羟基苯并三唑水合物(207.6g，1.36mol)、Hunig's碱(N，N-二异丙基乙胺，352.2g，2.71mol)和(S)-2-羟基-3-甲基-丁酸(140.6g,1.18mol)在THF(4.8L)中合并，冷却至5"C以下，加入EDC(253.7g,1.3mol),让该反应混合物温热至环境温度，并搅拌.约25小时后，将该反应混合物用二氯甲烷(5.54L)稀释，并用水(2.22L)萃取.将有机层用水(2.22L)萃取，合并水层，用二氦甲烷(5.54L)萃取.合并有机层，用水(2.22L)萃取2次，用饱和碳酸氩钠水溶液(2.22L)萃取，用无水疏酸钠干燥，过滤，并用旋转蒸发仪蒸发，获得了本标趙化合物428g(100%).实施例10合成(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰基)-l-(L-丙氨耽基)—(S)-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氩-lH-3-苯并氮杂革-2-嗣二水合物在轻微的温热下(40TC)将(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰基)-1-(L-丙氨耽基)一(S)-氨基-3-甲基-2,3，4，5-四氦-lH-3-苯并氮杂箪-2-嗣固体置于丙酮(3."L)和水(O."6L)中.将该溶液分成约2L的部分，向每份溶液中加入水(7.19L)，同时将该浑浊的溶液温热至50C.水加入完成后，将该浑浊的溶液冷却至环境温度，获得了固体，将其作为浆液在环境温度搅拌约14小时，然后过滤并干燥，获得了本标題化合物310.6g(66.2%).当用作药物时，本发明化合物通常以药物组合物的形式给药.因此，在另一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，其中包含有效量的结晶N-((S)-2-羟基-3-甲基-丁耽基)-1-(L-丙氨耽基)-(S)-l-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氛-lH-3-苯并氮杂苯-2-嗣二水合物和可药用稀释刑.这样的药物组合物用于抑制p-淀粉状蛋白肽释放和/或其合成，包括用于治疗阿尔茨海默氏病.因此，本发明包括结晶(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰基)-l-(L-丙氨酰基)-(S)-l-氦基-3-甲基-2，3，4,5-四氢-lH-3-苯并氮杂萆-2-酮二水合物在制备用于抑制p-淀粉状蛋白肽释放和/或其合成，特别包括用于治疗阿尔茨海默氏病的药物中的应用.结晶(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰基)-1-(L-丙氨酰基)-(S)-l-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氢-111-3-苯并氮杂萆-2-稱二水合物可通过多种途径给药.本发明化合物可以以使得化合物以有效量被生物利用的任何形式或方式，包括口服和非胃肠道途径给药.例如，本发明化合物可以通过口服、吸入、皮下、肌内、静脉内、透皮、鼻内、直肠、经眼、局部、舌下、類等途径给药.在制备本发明组合物的过程中，通常将活性组分与赋形刑混合，用賦形剂稀释，或者包封在可呈胶嚢、小袋、纸或其它容器形式的栽体内.本发明化合物可单独给药或者以药物组合物的形式给药，也就是说，与可药用稀释刑例如栽体或赋形刑合并，其中可药用稀释刑的比例和性质是根据本发明化合物的溶解度和化学性质、所选的给药途径和标准药物实践(Remington'sPharmaceuticalSciences,18thEdition,MackPublishingCo*(1990))确定，本发明药物组合物是通过药物领域众所周知的方式制得的.栽体或赋形刑可以是起活性组分的栽体或介质作用的回体、半固体或液体材料.适宜的栽体或赋形刑是本领域众所周知的.可使本发明药物组合物适于口服、吸入、非胃肠道或局部使用，并且可以以呈片刑、胶囊、气雾刑、吸入刑、栓刑、溶液刑、悬浮刑等形式施用.对于口服治疗给葯，可将化合物与赋形刑混合，并以片刑、锭刑(troches)、胶嚢、酏刑、悬浮刑、糖浆刑、糯米纸囊刑(wafers)、口香糖等形式使用.这些制刑应当含有至少4%的本发明化合物一活性组分，但是可根据特定形式而变，并且可适宜地占制刑单位重量的2%-约90%.本发明化合物在组合物中的量是可获得合适的刑量的量.优选的本发明组合物和制刑可由本领域技术人员确定.片刑、丸刑、胶嚢、锭剂等还可以含有一种或多种下列辅助刑粘合剂例如微晶纤维素、西黄著胶或明胶；赋形刑例如淀粉或乳糖；崩解刑例如藻酸、Primogel、玉米淀粉等；润滑刑例如硬脂酸镁、硅油或Sterotex;助流刑例如胶态二氣化硅；并且可加入甜味刑例如蔗糖或糖精，或矫味刑例如薄荷、水杨酸甲酶或橙味调味刑.当单位刑型是胶囊时，除了上述类型的物质以外，其还可以含有液体栽体例如聚乙二醇或脂肪油.其它单位刑型可含有改变刑重单位物理形式的其它多种物质，例如包衣.因此，可用糖、虫胶或其它包衣剂将片刑或丸剂包衣.除了本发明化合物以外，糖浆刑还可以含有作为甜味刑的蔗糖和一些防腐剂、染料、着色剂和矫味刑.制备这些不同组合物的物质应当是药物纯的，并且在所用的量是无毒的.为了非胃肠道给药，可将本发明化合物掺入到溶液或悬浮液内.这些制剂一般含有至少0.1%本发明化合物，但是可以在占制刑重量的0.1-约90%之间变化.本发明化合物在组合物中的量是可获得合适的刑量的量.溶液或悬浮液还可以包含一种或多种下列辅助刑无菌稀释刑例如注射用水、盐水溶液、不挥发油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶刑；抗菌刑例如苯甲醇或尼泊金甲酯；抗氧化剂例如抗坏血酸或亚硤酸氩钠；脊合刑例如乙二胺四乙酸；緩冲刑例如乙酸盐、柠檬酸盐或罅酸盐，和用于调节张力的物质例如氣化钠或葡萄糖.非胃肠道给药用制刑可封装在安瓿、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多刑量瓶中.优选的组合物和制刑能由本领域技术人员确定.本发明化合物还可以局部给药，并且当局部给药时，栽体可适当地包含溶液、骨剂或凝胶刑基质.基质可例如包含一种或多种下列组分凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、蜂蜡、矿物油、稀释刑例如水和醇、和乳化刑以及稳定刑.式I化合物或其可药用盐在局部给药用制刑中的浓度可以为约0.1-约10%w/v(重量/单位体积).另一优选的本发明制刑采用透皮给药系统("贴刑").这样的透皮貼刑可用于连续或不连续地输注控制量的本发明化合物.用于递送药物活性刑的透皮貼刑的构造和应用是本领域众所周知的.参见例如1991年6月11日授权的U.S.专利5，023,252,该专利引入本申请以作参考.这样的貼刑可构造成连续、以脉冲方式或按需要递送药物活性剂的形式.为了更充分地举例说明本发明的实施，下面描述局部给药用药物组合物.这些实施例仅是举例说明，并不是为了以任何方式限制本发明范围.制刑实施例1制备含有下列组分的硬明胶胶囊组分量(mg/胶囊)活性组分30.0淀粉305.0硬脂酸镁5.0将上述组分混合，以每粒340mg的量填充到硬明胶胶囊中.制刑实施例2使用下列組分制备片刑组分量(mg/片)活性组分25.0微晶纤维素200.0胶态二氧化硅10.0硬脂酸5.0将上迷组分混合，压制成每片重240mg的片刑.制刑实施例3制备含有下列组分的干粉吸入刑组分重量％活性组分5乳糖95将活性组分与乳糖混合，并加到干粉吸入器具中.制刑实施例4如下所述制备每片含有30mg活性组分的片刑组分重(mg/片)活性组分30.0mg淀粉45.0mg微晶纤维素35.0mg聚乙烯吡咯烷酮(作为10%在无菌水中的溶液)4.0mg羧甲基淀粉钠硬脂酸镁滑石粉总共4.5mg0.5迈g1.0mg120mg将活性组分、淀粉和纤维素过20目U.S.筛，并充分混合.将聚乙烯吡咯坑嗣溶液与所得粉末混合，然后过16目U.S.筛.将所制得的顆粒在50-60TC干燥，并过16目U.S.筛.将羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁和滑石粉预先过30目U.S.筛，然后加到上述顆粒中，混合后，在压片机上压制成每片重150mg的片刑.制刑实施例5如下所述制备每粒含有40mg药物的胶囊组分量(mg/胶囊)活性组分復0mg淀粉109.0mg硬脂酸镁1.0迈g总共150.0mg将活性组分、淀粉和硬脂酸镁混合，过20目U.S.筛，以的重填充到硬明胶胶囊中.制刑实施例6如下所述制备每粒含有25mg活性组分的栓刑组分量活性組分25mg饱和脂肪酸甘油酶加至2,000mg将活性组分过60目U.S.筛，悬浮在预先使用最小必需热量熔化的饱和脂肪酸甘油醋内.然后将该混合物倒入标称2.0g容量的栓刑模子内，并放冷.制刑实施例7如下所述制备每5.0ml剂量含有50mg药物的悬浮液组分量活性组分50.0mg黄原胶4.0mg羧甲基纤维素钠(11%)微晶纤维素(89%)苯甲酸钠调味剂和着色刑纯化水50.0mg1.75g10.0mg适量.0ml将活性组分、蔗糖和黄原胶混合，过10目U.S.筛，然后与预先制得的微晶纤维素和羧甲基纤维素钠在水中的溶液混合，用一些水将苯甲酸钠、调味刑和着色刑稀释，并在搅拌下加入.然后加入足量水以达到所需体积.制刑实施例8如下所述制备每粒含有15mg药物的胶囊组分量(mg/胶囊)活性组分15.0mg淀粉407.0mg硬脂酸镁3.0mg总共425.0mg将活性组分、淀粉和硬脂酸镁混合，过20目U.S.筛，并以5"rng的量填充到硬明胶胶囊内.制剂实施例9如下所述制备皮下用制刑组分量活性组分1.0mg玉米油1ml根据活性组分在玉米油中的溶解度，在该制刑中如果需要可使用高达约5.0mg或更多的活性组分.制刑实施例10如下所述制备局部给药用制刑組分量活性组分1-10g乳化蜡30g液体石蜡20g白色软石蜡加至100g将白色软石蜡加热直至熔化.掺入液体石蜡和乳化蜡，并搅拌直至溶解.加入活性组分，继续搅拌直至分散.然后将该混合物冷却直至固化.在一个其方法方面中，本发明涉及抑制p-淀粉状蛋白肽释放和/或其合成的方法，包括给有此需要的患者施用有效量的结晶(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁耽基)-1-(L-丙氨酰基)-(S)-1-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氳-lH-3-苯并氮杂箪-2-稱二水合物.在一个特别的方法实施方案中，本发明提供了治疗阿尔茨海默氏病的方法，包括给有此需要的患者施用有效量的结晶(N)-((S)-2-羟基-3-曱基-丁酰基)-1-(L-丙氨酰基)一(S)-1-氨基-3-甲基-2，3,4，5-四氦-lH-3-苯并氛杂蕈-2-稱二水合物，还应该认识到，本领域技术人员可通过治疗目前患有阿尔茨海默氏病的患者或者通过预防性地治疗有发展成该疾病危险的患者来影响阿尔茨海默氏病.因此，术语"治疗"是指其中可减緩、中断、阻止、控制或停止阿尔茨海默氏病进展的所有进程，但是不一定指完全消除所有症状.这样，本发明方法包括在有发展成阿尔茨海默氏病危险的患者中预防阿尔茨海默氏病的发作，抑制阿尔茨海默氏病的进展，和治疗重症阿尔茨海默氏病.本文所用术语"患者"是指患有与P-淀粉状蛋白肽释放和/或其合成增加有关的病症，包括阿尔茨海默氏病的温血动物例如哺乳动物.应当理解，豚鼠、狗、猫、大鼠、小鼠、马、牛、羊和人是在该术语含义范闺内的动物的实例.需要这种治疗的患者易于诊断.本文所用术语式I化合物的"有效量"是指能有效地抑制P-淀粉状蛋白肽释放和/或其合成，特别是治疗阿尔茨海默氏病的量，有效量可由作为本领域技术人员的临床诊断医师通过使用常规技术并观察在类似状况下获得的结果来容易地确定.在确定有效量一结晶N-((S)_2-羟基-3-甲基-丁耽基)-1-(L-丙氨酖基)-(S)-l-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氨-lH-3-苯并氮杂箪-2-嗣二水合物的刑量时，临床诊断医师要考虑多种因素，包括但不限于N-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰基)-1-(L-丙氨耽基)一(S)-1-氨基-3-甲基-2,3，4，5-四氪-lH-3-苯并氮杂罩-2-稱的效力和性质；患者种类；其身材、年龄和一般健康状况；疾病的牵涉程度和严重程度；个体患者的反应；给药方式；给药制刑的生物利用度特征；所选的给药方案；使用的其它伴行药物治疗；和其它相关因素.预计有效量的结晶N-((S)-2-羟基-3-甲基-丁跣基)-1-(L-丙氨酰基)-(S)-1-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氩-lH-3-苯并氮杂箪_2-明二水合物为约0.1毫克/千克体重/天(mg/kg/天)-约100mg/kg/天.优选的量能由本领域技术人员确定.可在包括下列测试在内的不同生物系统中测试本发明N-((S)-2-羟基-3-甲基-丁跣基)-l-(L-丙氨酰基)-(S)-l-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氢-111-3-苯并氮杂蕈-2-酮二水合物.实施例A用于检测p-淀粉状蛋白生成抑制刑的细胞筛选在具有Swedish突变的细胞系中测定上迷多种式I化合物抑制p-淀粉状蛋白生成的能力.该筛选测定使用这样的细胞(K293-人肾细胞系)，该细胞已经按照国际专利申请出版物No.94/10569'和Citron等人"描述的方式，用含有双突变LyS",Met"2至Asn6"Leum(APP751编号方式)的淀粉状蛋白前体蛋白751(APP751)穗定地转染过，该突变一般称为Swedish突变，在Dulbecco氏最小必需培养基(Sigma,St.Louis,M0)+10%胎牛血清中将称为"293751SWE"的细胞以2-4x10'个细胞/孔的量铺在Corning96-孔平板上.为了获得在线性测定范围内的P-淀粉状蛋白ELISA结果，(~0.2-2.5ng/mL),细胞数目很重要.在用10%二氣化碳平衡的恒温箱中于371C培养过夜后，除去培养基，用200jiL含有式I化合物(药物)的培养基/孔替换，预处理2小时后，并如上所述培养细胞.药物贮备液是在100%二甲亚巩中制备的，这样在处理所用的最终药物浓度下，二甲亚砜的浓度不超过O.5%,实际上，通常等于0.1%.在预处理结束时，再除去培养基，用新鲜的如上所迷的含有药物的培养基替换，将细胞再培养2小时.处理后，将平板在BeckmanGPR中以1200rpm的转速于室温离心5分钟，以使细胞碎屑从条件培养基中离心成团.从每个孔中将100nL条件培养基或其适当稀释物转移到ELISA平板中并在4TC培养过夜，其中所述平板是如国际专利申请出版物No.94/10569'所述用抗p-淀粉状蛋白肽的氨基酸13-28的抗体266[P.Seubert，Nature(1992)359:325-327]预包被的.在笫二天进行采用抗p-淀粉状蛋白肽的氨基酸l-5的标记的抗体3D6[P.Seubert，Nature(1992)359:325-327的ELISA测定，以测定所产生的抗p-淀粉状蛋白肽的量.通过Hansen等人的方法的改进形式来测定本发明化合物的细胞毒害作用.向保留在组织培养平板内的细胞中加入25nL3-(4，5-二甲基^唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物(MTT)(Sigma，St.Louis，MO)贮备液(5mg/mL),使终浓度为1mg/mL,将细胞在37TC培养1小时，通过加入相同体积的MTT裂解緩冲液(20%w/v十二坑基硖酸钠在50%二甲基甲耽胺中的溶液，pH4.7)来停止细胞活动.通过在室温振摇过夜来达到完全萃取.在MolecularDevice的UV..,微量培养板读数器中测定在0Dln.和0DS5。n.的差异，以作为细胞活力的指标.将p-淀粉状蛋白肽ELISA的结果拟合成标准曲线，并以ng/mLp-淀粉状蛋白肽表示.为了将细胞毒性規格化，将这些结果除以MTT结果，并以占不含药物的对照结果的百分比表示.所有结果都是至少6个平行测定的平均值和标准差.实施例B体内抑制P-淀粉状蛋白释放和/或合成该实施例举例说明如何测试本发明化合物在体内抑制p-淀粉状蛋白释放和/或合成，对于这些实验，使用3-4个月龄的PDAPP小鼠[Games等人，(1995)Nature373:523-527].根据所测试的化合物，通常将化合物配制成1-10mg/mL的浓度.由于化合物的低溶解性因素，可以用不同栽体配制化合物，例如玉米油(Safeway,SouthSanFrancisco,CA);10%乙醇在玉米油中的混合物；2-幾基丙基-p-环糊精(ResearchBiochemicalsInternational,NatickMA);和羧甲基纤维素(SigmaChemicalCo.,St.LouisM0).用26号的针头给小鼠皮下给药，3小时后，通过C02麻醉法将动物安乐死，使用用0.5MEDTA溶液，pH8,0包被的1cc25G5/8结核菌素注射器/针头通过心脏穿刺采集血液.将血液里于含有EDTA的BectonDickinson采血管中，以1500xg于51C离心15分钟.然后取出小鼠的脑，将皮层和海马切下来，并置于冰上.1.脑测定为了制备用于醉联免疫吸附测定(ELISA)的海马和皮层组织，使用Kontes机动化研扦(Fisher,PittsburghPA)将每个脑区域在10体积冰冷的胍緩冲液(5.0M胍-HCl，50mMTris-HCl，pH8.0)中均化将匀浆在旋转平台上于室温轻微摇动3-4小时，在定量测定p-淀粉状蛋白之前在-20lC贮存.将脑匀浆用冰冷的酪蛋白緩沖液进行1:10稀释由此将胍的终浓度降至0.5M,然后以16,OOOxg于4TC离心20分钟.如果需要的话，通过加入其中加有0.5M盐酸胍的酪蛋白緩冲液将样本进一步稀释，以获得ELISA测定的最佳范围.制备p-淀粉状蛋白标准物(l-40或l-42氨基酸)，使得最终的组合物等于在0.1%牛血清白蛋白(BSA)存在下的0.5M胍.定量测定p-淀粉状蛋白(aal-40)和p-淀粉状蛋白(aal-42)的总的P-淀粉状蛋白三明治ELISA由p-淀粉状蛋白的两种单克隆抗体(mAb)构成.捕获抗体266[P.Seubert，Nature(1992)359:325-327〗对P-淀粉状蛋白的氨基酸13-28是特异性的，对p-淀粉状蛋白的氨基酸1-5有特异性的抗体3DJohnson-Wood等人，PNASUSA(1997)94:1550-1555]是生物素化的，并且在该测定中起报道抗体的作用.3D6生物素化搮作采用的是生产商(Pierce,RockfordIL)有关免疫球蛋白的NHS-生物素标记的方法，不同之处在于使用的是100mM碳酸氩钠緩冲液，pH8.5.3D6抗体不识别分泌的淀粉状蛋白前体蛋白(APP)或全长的APP，而是仅识别具有氨基末端天冬氨酸的p-淀粉状蛋白.该测定的灵敏度下限为-50pg/ml(11pM)，并且在高达1ng/ml的浓度下对内源性鼠p-淀粉状蛋白肽不表现出交叉反应.用于定量测定p-淀粉状蛋白(aal-42)水平的三明治BLISA使用mAb21F12[Johnson-Wood等人，PNASUSA(1997)94:1550-1555](识别p-淀粉状蛋白的氨基酸33-42)作为捕获抗体.生物素化的3D6在灵敏度下限为-125pg/ml(28pM)的该测定中也是报道抗体.在室温将266和21F12捕获性mAbs以10ng/ml的量在96孔免疫测定平板(Costar,CambidgeMA)内包被过夜.然后抽吸这些平板，在室温用0.25。/。人血清白蛋白在PBS緩冲液中的溶液阻断至少1小时，然后在41C贮存干燥直至使用.在使用之前用洗涤緩沖液(Tris-緩沖盐水，0.05%吐温20)将平板再水合.将样本和标准物加到平板中，并在41C培养过夜.在该测定的每个步骤之间用洗涤緩冲液将平板洗涤3次，将在酪蛋白培养緩冲液(O.25%酪蛋白，PBS,0.05%吐温20，pH7.4)中稀释至0.5jig/ml的生物素化的3D6在孔中于室温培养1小时.将在酪蛋白培养援冲液中进行1:4000稀释的Avidin-HRP(Vector,BurlingameCA)加到孔中，在室温培养1小时.加入比色物质SlowTMB-ELISA(Pierce,CambridgeMA),并反应15分钟，之后，加入2N112804停止酶反应，使用MolecularDevicesVmax(MolecularDevicesMenloParkCA)通过测定在450nm和650nm的吸收度差异来定量测定反应产物.2.血液测定将EDTA血浆在样本稀释液(O.2gm/l磷酸钠參H20(—碱价)，2.16gm/l磷酸钠，7H20(二碱价)，0.5gm/l硤柳汞，8，5gm/1氯化钠，0.5mlTritonX—05，6.0g/1不含球蛋白的牛血清白蛋白；和水)中作1:1稀释.使用上述用于脑测定的总p-淀粉状蛋白测定(266捕获/3D6报道)，但是用所述样本稀释液代替上述酪蛋白稀释液，来测定样本稀幹液中的样本和标准物.通过上文的描述，本领域技术人员可对本发明组合物和方法作不同的修改和改变.在本申请权利要求书范围内的所有这样的修改都包括在本发明中.权利要求1.(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰基)-1-(L-丙氨酰基)-(S)-1-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氢-1H-3-苯并氮杂id="icf0001"file="A2009102038850002C1.tif"wi="4"he="5"top="34"left="124"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>-2-酮。全文摘要本发明涉及内酰胺化合物，尤其提供了(N)-((S)-2-羟基-3-甲基-丁酰基)-1-(L-丙氨酰基)-(S)-1-氨基-3-甲基-2，3，4，5-四氢-1H-3-苯并氮杂-2-酮，其使用方法以及制备所述化合物的方法。文档编号A61K31/55GK101624372SQ20091020388公开日2010年1月13日申请日期2001年11月2日优先权日2000年11月17日发明者D·米切尔,G·L·恩格尔,J·A·埃金斯,J·E·奥迪亚,L·A·布茨利,S·L·麦克丹尼尔,T·M·柯尼申请人:伊莱利利公司