从玛咖中提取纯化玛咖酰胺单体化合物的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种从新资源食品玛咖中提取纯化玛咖酰胺单体化合物的方法，属于 中药植物化学技术领域。
【背景技术】
[0002] 玛咖，又作玛卡（Maca、LepidiummeyemiiWalp)，属十字花科（Cruciferae)独 行菜属形似萝卜的块根类一年生或两年生草本植物，原产于秘鲁中部海拔3500~4500米 的南美安第斯山区，当地人主要用于作为食物，可作为传统药物使用。1982年在FA0 (联合 国粮农组织）和IPGRI(国际植物遗传资源研究所）等国际组织的努力下，玛咖在世界范 围内被广泛推广，并指出玛咖是一种营养安全食物，可以解决多种营养不足引起的健康问 题。2011年我国政府批准玛咖粉为新资源食品。玛咖中含有玛咖酰胺（macamides)、玛咖 稀（macaenes)等营养活成分，是一种能给人体提供全面营养物质的纯天然食品，具有抗疲 劳、抗衰老、调节内分泌系统、改善性功能、提高生育能力等功效。
[0003] 玛咖中玛咖酰胺类物质主要有N-Benzyl_5-〇x〇-6E, 8E_octacadinamide(1)，N-B enzylhexdecanamide(2)，N_(m-methoxybenzyl)hexdecanamide(3)，N-benzyl_9-〇x〇-12Z-octadecenamide(4)，N-benzyl_9-〇x〇-12Z, 15Z_octadecadienamide(5)，N-benzyl_13-〇xo -9Z,llZ_octadecadienamide(6)等玛咖酰胺类物质。最近报道玛咖提供物对男性及女性 均有保健功效（60似厶1^3 6.卩.6七&1，，了〇证仙1(^￡11(1〇(^111〇1(^7 176，163 - 168(2003).
[2]BrooksN.A.et.al,Menopause, 15 (6), 1157-1162 (2008). [3]StojanovskaL.et.al. ,C limacteric, 18:69 - 78(2015))〇
[0004] 本发明涉及玛咖酰胺类单体化合物，包含玛咖酰胺类单体化合物为N-苄基-5-氧 代-6E, 8E-十八碳二稀酰胺（1)、N_苄基-十六碳酰胺（2)、N_ (间甲氧基苄基）-十六碳酰 胺（3)、N_苄基-9-氧代-12E-十八碳稀酰胺（4)、N_苄基-9-氧代-12Z, 15Z-十八碳二稀 酰胺（5)、N-苯基-13-氧代-9Z，11Z-十八碳二烯酰胺（6)，其化学结构式如下：
[0005]
[0006]
[0007] 随着人们对玛咖酰胺类物质的生物活性及功能保健应用研究，对上述玛咖酰胺类 单体化合物的纯化分离具有重大意义。
[0008] 目前，植物玛咖成分的提取方法主要报道是采用植物玛咖为原材料进行活性成分 的提取，可制得玛咖生物碱（中国专利（CN103275012) -种玛咖生物碱的制备方法及应 用），玛咖多糖（中国专利（CN102898534) -种玛咖多糖的提取精制方法）和玛咖有效活性 成分（中国专利（CN1166387)玛咖有效成分提取方法）等，但目前没有玛咖酰胺单体化合 物的大量制备方法。
【发明内容】
[0009] 目的：为解决现有技术的不足，本发明提供一种从植物玛咖中提取纯化玛咖酰胺 单体化合物的方法，利用玛咖酰胺类化合物在弱酸条件下具有良好稳定的物化性质，采用 在弱酸条件下的多级逆流萃取法和大孔吸附树脂分离纯化相结合技术制备玛咖酰胺类单 体化合物，工艺简单、操作简便，成本低，能够实现批量制备N-苄基-5-氧代-6E，8E-十八 碳二稀酰胺、N-苄基-十六碳酰胺、N-(间甲氧基苄基）-十六碳酰胺、N-苄基-9-氧 代-12E-十八碳稀酰胺、N-苄基_9_氧代-12Z, 15Z-十八碳二稀酰胺、N-苯基-13-氧 代-9Z，11Z-十八碳二烯酰胺生产等几种单体化合物。
[0010] 技术方案：为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
[0011] -种从玛咖中提取纯化玛咖酰胺单体化合物的方法，其特征在于，包括以下步 骤：
[0012] 步骤A:将植物玛咖粉碎成玛咖粉，加入4-10倍的70% -95%体积浓度的醇-酸 水溶液，进行多级逆流萃取提取2-5小时，提取液过滤后在30-60°C度下减压浓缩得玛咖酰 胺粗品；
[0013] 步骤B:大孔吸附树脂分离纯化：将玛咖酰胺粗品加入到大孔吸附树脂层析柱中 进行梯度洗脱，洗脱液分别收集、进行TLC跟踪，得到N-苄基-5-氧代-6E，8E-十八碳二烯 酰胺、N-苄基-十六碳酰胺、N-(间甲氧基苄基）-十六碳酰胺、N-苄基-9-氧代-12E-十八 碳稀酰胺、N-苄基_9_氧代-12Z, 15Z-十八碳二稀酰胺、N-苯基-13-氧代-9Z, 11Z-十八 碳二烯酰洗脱液，分别减压浓缩后分别得各玛咖酰胺类单体化合物。
[0014] 所述醇-酸水溶液为乙醇-乙酸水溶液、乙醇-磷酸水溶液、乙醇-甘氨酸水溶液 中的一种或几种；所述醇-酸水溶液的PH值为3. 5-6. 5。更优选的，所述醇-酸水溶液的 PH值为 4. 5-5. 5。
[0015] 所述减压浓缩的真空度为0? 05-0.IMPa。
[0016] 所述玛咖粉的粒度为20-80目。作为更优选，所述玛咖粉的粒度为40-60目。
[0017] 作为优选方案，所述大孔吸附树脂为D101型、DA-201型或DM-301型大孔吸附树 脂。
[0018] 所述梯度洗脱中玛咖酰胺粗品上样量与大孔吸附树脂质量比为1:30-100。
[0019] 所述梯度洗脱的洗脱液梯度设置为体积浓度分别为46-52%的乙醇-水溶液， 56-62 %的乙醇-水溶液，66-72 %的乙醇-水溶液，76-82 %的乙醇-水溶液和88-92 %的乙 醇-水溶液。
[0020] 有益效果：本发明提供的从玛咖中提取纯化玛咖酰胺单体化合物的方法，利用玛 咖酰胺类化合物在弱酸条件下具有良好稳定的物化性质，采用在醇-酸水溶液进行多级逆 流萃取法，醇-酸水溶液能够在提取时保护玛咖酰的有效成分，大大提高玛咖植物中有效 成分的提取率，大孔吸附树脂分离纯化采用的D101型、DA-201型及DM-301型大孔吸附树 脂均可反复利用，以乙醇-水溶液作为溶剂，经济实用，可以方便高效地获取高纯度玛咖酰 胺类单体化合物，各单体化合物纯度达95%以上，工艺简单、操作简便，成本低，适于批量生 产。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合实施例对本发明做具体说明：
[0022] 实施例1
[0023] 将植物玛咖粉碎成40-60目玛咖粉，称取120克玛咖粉，装入多级逆流萃取装置 中，再加入1200ml的80 %的乙醇-乙酸水溶液进行逆流萃取5小时，萃取后进行过滤，在真 空（0. 05-0.IMPa)下浓缩，50°C左右减压浓缩得玛咖酰胺粗品17. 8克。
[0024] 取柱长为450mm，内径为45mm的玻璃色谱柱，装350mlD101大孔吸附树酯，将上 述玛咖酰胺粗品上样于层析柱柱顶，然后分别用流动相50 %、60 %、70 %、80 %、90 %的乙 醇-水溶液进行梯度洗脱，TLC板跟踪，在真空（0.05-0.IMPa)下浓缩，用无水乙醇带水，分 别得到64mgN-苄基-5-氧代-6E，8E-十八碳二烯酰胺（纯度97. 3%)、31mgN-苄基-十六 碳酰胺（纯度95.8%)、25mgN-(间甲氧基苄基）-十六碳酰胺（纯度95.6%)、18mgN-苄 基-9-氧代-12E-十八碳烯酰胺（纯度95. 4% )、17mgN-苄基-9-氧代-12Z，15Z-十八碳 二烯酰胺（纯度95. 9 % )、12mgN-苯基-13-氧代-9Z，11Z-十八碳二烯酰（纯度95. 1 % )。
[0025] 其核磁共振解析如下：
[0026] N-苄基-5-氧代-6E，8E-十八碳二烯酰胺l/HNMR(400MHz， CDC13), 8 ：7. 30 (m, 3H), 7. 24 (d. 2H,J= 8. 4Hz), 7. 09 (dd, 2H,J= 15. 6Hz,J= 9. 6Hz), 6. 12 (m. 2H), 6. 04 (d, 1H,J= 15. 6Hz), 5. 76 (br, 1H), 4. 41 (d, 2H,J= 8. 4Hz), 2. 50 (m, 2H)，2. 16 (m, 2H)，2. 14 (m, 2H)，1. 24-1. 45 (m, 14H), 1. 61 (m, 2H)，0? 88 (m, 3H)。
[0027] N-苄基-十六碳酰胺 2,虫NMR(400MHz，CDC13)，S:7. 28 (m, 3H)，7. 18 (d. 2H,J= 8. 4Hz), 5. 99 (br, 1H), 4. 32 (d, 2H,J= 6. 0Hz), 2. 12 (dd, 2H)