专利名称：一种复方人参制剂的制备方法及其抗氧化活性的制作方法
一种复方人参制剂的制备方法及其抗氧化活性技术领域
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及一种复方人参制剂的制备方法及其抗氧化活性。
背景技术：
人参Panax ginseng C. A. Mey.为五加科植物人参的根，性平、味甘、微苦，微温。 归脾、肺经。大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津止渴，安神益智。主要含人参皂苷，尚含有机酸及酯类、维生素类、留醇、腺苷转化酶、L-天冬氨酸酶、β-淀粉酶、蔗糖转化酶；麦芽醇、山柰酚、人参黄酮苷及铜、锌、铁、锰等二十多种微量元素。人参能调节中枢神经系统兴奋过程和抑制过程的平衡，对学习记忆的影响有双向性及成分依赖性，能促进蛋白质的合成、RNA的合成及DNA的合成、对脑血流量和脑能量代谢亦有明显的影响，能使动物大脑更合理地利用能量物质葡萄糖，氧化产能，合成更多的ATP供学习记忆等活动之用、可改变机体的反应性，具有“适应原”样作用，即能增强机体对各种有害刺激的反应能力，加强机体适应性，对多种动物的心脏均有先兴奋后抑制、小量兴奋，大量抑制的作用，对心肌有保护作用；人参或其提取物，能显著地提高动物耐缺氧的能力，使耗氧速度减慢，存活时间延长，并能使心房在缺氧条件下收缩时间延长。人参或其提取物对骨髓的造血功能有保护和刺激作用，能使正常和贫血动物红细胞数、白细胞数和血红蛋白量增加。人参具有抑制血小板聚集的作用，降血脂和抗动脉粥样硬化作用，能减轻豚鼠血清诱发的过敏性休克，而延长其生存时间，能增加肝脏代谢各物质的酶活性，使肝脏的解毒能力增强，从而增强机体对各种化学物质的耐受力，对垂体-肾上腺皮质系统有刺激作用，对正常血糖及因注射肾上腺素和高渗葡萄糖引起的高血糖病均有抑制作用，人参及其皂苷对机体各组织的RNA和蛋白质合成均有促进作用，人参皂苷可促进脂质代谢，人参具有推迟细胞衰老，延长细胞寿命的功能。 人参皂苷和人参多糖对正常动物网状内皮系统吞噬功能有刺激作用。人参具有抗肿瘤、抗疲劳、抗衰老作用。
党参为桔梗科多年生草本植物党参、素花党参、川党参及其同属多种植物的根。具有补中益气，健脾益肺之功效。党参含多种糖类、酚类、留醇、挥发油、黄芩素葡萄糖苷、皂苷及微量生物碱，具有增强免疫力、扩张血管、降压、改善微循环、增强造血功能等作用。此外对化疗放疗引起的白细胞下降有提升作用。
紫球藻(Porphyridium cruentum)是属于红藻门的一种单细胞红藻，在生长过程中能大量合成胞外硫酸酯多糖、藻胆蛋白和多不饱和脂肪酸等生物活性物质。紫球藻藻红蛋白占藻胆蛋白84%，其中以B-藻红蛋白含量最多。藻红蛋白用途广泛，它既可作为天然色素应用于食品、化妆品、染料等工业，又可制成荧光试剂用于临床医学诊断和免疫化学及生物工程等领域，藻红蛋白还是一种具有开发潜力的光敏剂，用于肿瘤的光动力治疗。紫球藻的胞外硫酸化多糖抗病毒特性突出，具有抗肿瘤、抗过敏、抗氧化、降血脂、调血脂等功能。因此，综合开发紫球藻藻红蛋白、多糖和藻粉系列产品，社会经济效益明显。
人体在生命活动的氧化代谢过程中会不断产生各种自由基，体内过多自由基对生物大分子造成损伤，导致细胞和组织的结构和功能减退，并对机体的衰老过程产生影响，最终导致疾病的发生。而人工合成的抗氧化剂具有一定的毒性和致癌作用。所以评价和筛选具有强抗氧化活性的天然植物已成为医学、生物学和食品科学研究的新趋势。采用典型的体外抗氧化体系，以抗坏血酸为对照，评价复方人参制剂的抗氧化活性，为更好的开发利用复方人参资源为抗氧化活性产品，提供理论依据。
DPPH 法DPPH 为 1，1_ 二苯基 _2_ 三硝基苯胼(1，l-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical2, 2-Diphenyl-l-(2,4,6-trinitrophenyl) hydrazyl) DPPH 法于 1958 年被提出，广泛用于测定食品的抗氧化能力。此法是根据DPPH自由基有单电子，在517nm处有一强吸收， 其醇溶液呈紫色的特性。当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系，因而可用分光光度计进行快速定量分析。发明内容
1. 一种具有抗氧化作用的复方人参制剂的制备方法，其特征在于包括以下过程
(1)原料药的重量配比为人参9g_12g、党参6g_9g、紫球藻10g_20g ；
(2)将人参和党参加入8-10倍量70%乙醇室温下浸提8_10h，再密封超声30min， 温度为30°C，功率为80W，然后用纱布过滤，滤渣再分别用6倍量与4倍量70%的乙醇重复提取各一次，过滤，得滤液；
(3)将⑵中的滤液合并，回收乙醇，得到人参、党参提取物；
(4)将紫球藻用5000r/min离心机离心lOmin，然后悬浮于pH7. 4,50mmol/L的磷酸缓冲液中，进行超声破碎，破碎5s，间隔5s，20次，用lOOOOr/min高速冷冻离心机离心 15min，得上清液，冷冻干燥，得干燥物；
(5)将(4)中的干燥物与(3)中的人参、党参提取物混合均勻，得复方人参制剂。
2.将复方人参制剂进行试验，该制剂具有抗氧化作用
根据本发明，本发明中的“ ％，，是重量百分比。
具体实施方式
本发明所述的涉及一种复方人参制剂的制备方法及其抗氧化活性包括以下实施例，下面的实施例可进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1
1. 一种具有抗氧化作用的复方人参制剂的制备方法，其特征在于包括以下过程
(1)原料药的重量配比为人参9g、党参6g、紫球藻IOg ；
(2)将人参和党参加入8倍量70%乙醇室温下浸提8，再密封超声30min，温度为 30°C，功率为80W，然后用纱布过滤，滤渣再分别用6倍量与4倍量70%的乙醇重复提取各一次，过滤，得滤液；
(3)将⑵中的滤液合并，回收乙醇，得到人参、党参提取物；
(4)将紫球藻用5000r/min离心机离心lOmin，然后悬浮于pH7. 4，50mmol/L的磷酸缓冲液中，进行超声破碎，破碎5s，间隔5s，20次，用lOOOOr/min高速冷冻离心机离心 15min，得上清液，冷冻干燥，得干燥物；
(5)将(4)中的干燥物与(3)中的人参、党参提取物混合均勻，得复方人参制剂。
2.将复方人参制剂进行试验，该制剂具有抗氧化作用
实施例2
1. 一种具有抗氧化作用的复方人参制剂的制备方法，其特征在于包括以下过程
(1)原料药的重量配比为人参12g、党参9g、紫球藻20g ；
(2)将人参和党参加入10倍量70%乙醇室温下浸提10h，再密封超声30min，温度为30°C，功率为80W，然后用纱布过滤，滤渣再分别用6倍量与4倍量70%的乙醇重复提取各一次，过滤，得滤液；
(3)将⑵中的滤液合并，回收乙醇，得到人参、党参提取物；
(4)将紫球藻用5000r/min离心机离心lOmin，然后悬浮于pH7. 4，50mmol/L的磷酸缓冲液中，进行超声破碎，破碎5s，间隔5s，20次，用lOOOOr/min高速冷冻离心机离心 15min，得上清液，冷冻干燥，得干燥物；
(5)将(4)中的干燥物与(3)中的人参、党参提取物混合均勻，得复方人参制剂。
2.将复方人参制剂进行试验，该制剂具有抗氧化作用一种复方人参制剂的的抗氧化试验
1复方人参制剂对DPPH清除率的测定
1.1DPPH溶液的制备
精密称定DPPH样品0. Olg,加入无水乙醇定容至250ml容量瓶中，得到DPPH溶液， 浓度为 0. (Mmg/ml。
1.2样品溶液的制备
精密称取复方人参制剂0. 4g置于50ml具塞容量瓶中，加入适量的蒸馏水，密封超声30min，待其溶解完全后，再加入蒸馏水定容至50ml，得到样品母溶液，浓度为8mg/ml，备用。在样品母溶液中，用移液枪精密移取体积为0. 003125，0. 00625,0. 0125,0. 025,0. 05， 0. 1,0. 2,0. 4ml的样品母液，用蒸馏水定容于IOml容量瓶中得到浓度为0. 0025,0. 005， 0. 01，0. 02，0. 04，0. 08，0. 16，0. 32mg/ml 的样品溶液。
1.3样品对DPPH的清除作用
准确移取不同浓度的样品溶液分别与DPPH溶液和无水乙醇溶液等体积混合于不同试管中，摇勻，在黑暗中放置30min，在515nm下测定其吸光度值分别为Ai和Ai。另取蒸馏水与DPPH溶液等体积混合于试管中，测得吸光度值为A。其中以蒸馏水和无水乙醇混合为空白对照试验。并按
下面公式计算清除率。
清除率=(A-Ai+AJ)/AX100%
2复方人参制剂对羟自由基清除率的测定
2. 1样品溶液的制备
精密称取复方人参制剂0. 25g置于50ml具塞容量瓶中，加入适量的蒸馏水，密封超声30min，待其溶解完全后，定容至刻度，得到样品母溶液，备用。在样品母溶液中，用移液枪精密移取体积为 5 μ 1，10 μ 1，20 μ 1，40 μ 1，80 μ 1，160 μ 1，320 μ 1，640 μ 1 的样品母液， 用蒸馏水定容于IOml容量瓶中得到浓度为0. 0025,0. 005,0. 01,0. 02,0. 04,0. 08,0. 16， 0. 32mg/ml的样品溶液。
2. 2试剂的制备
称取0. 2032g甲基紫用去离子水定容于IOOml容量瓶中，备用。用盐酸调Tris缓冲溶液PH为5，备用。取30%的H2A溶液1. OmL，用去离子水定容于IOOmL容量瓶中，备用。 称取0. 0695gFeS04 · 7H20用水定容于50mL容量瓶中，备用(现用现配)。
2. 3羟自由基· OH的产生及测定
取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris缓冲液lmL，按顺序放入IOmL的刻度管中。并用去离子水定容至刻度，摇勻静置三十分钟，记为A578。
取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris缓冲液lmL，Fe2+溶液lmL，H2O2溶液ImL按顺序放入IOmL的刻度管中。并用去离子水定容至刻度，摇勻静置三十分钟，记为A00
取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris缓冲液lmL，不同浓度梯度的待测液2mL，Fe2+溶液lmL，H2O2溶液ImL按顺序放入IOmL的刻度管中。并用去离子水定容至刻度，摇勻静置三十分钟。平行三次，记为As。
以去离子水做空白实验，用721紫外分光光度计在578的波长下测定其吸光度。
2. 4羟自由基· OH清除率的计算
利用公式清除率<% = (As-A0)/(A578-A0) X100%,得出样品提取液对羟自由基的清除率。
63复方人参制剂的抗氧化结果3. 1复方人参制剂对DPPH和羟自由基的清除率见表1。表1复方人参制剂对DPPH和羟自由基的清除率结果
权利要求
1.一种具有抗氧化作用的复方人参制剂的制备方法，其特征在于包括以下过程(1)原料药的重量配比为人参9g-12g、党参6g-9g、紫球藻10g-20g；(2)将人参和党参加入8-10倍量70%乙醇室温下浸提8-10h，再密封超声30min，温度为30°C，功率为80W，然后用纱布过滤，滤渣再分别用6倍量与4倍量70%的乙醇重复提取各一次，过滤，得滤液；(3)将O)中的滤液合并，回收乙醇，得到人参、党参提取物；(4)将紫球藻用5000r/min离心机离心lOmin，然后悬浮于pH7.4,50mmol/L的磷酸缓冲液中，进行超声破碎，破碎k，间隔k，20次，用lOOOOr/min高速冷冻离心机离心15min， 得上清液，冷冻干燥，得干燥物；(5)将中的干燥物与(3)中的人参、党参提取物混合均勻，得复方人参制剂。
2.如权利要求1中所述的一种复方人参制剂的用途，其特征在于制备抗氧化作用药物中的应用。
全文摘要
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及一种复方人参制剂的制备方法及其抗氧化活性。将人参、党参加入70％乙醇室温下浸提，再超声30min，温度为30℃，功率为80W，过滤，滤渣再分别用6倍量与4倍量70％的乙醇重复提取各一次，过滤，得滤液；将滤液合并，回收乙醇，得到人参、党参提取物；将紫球藻用5000r/min离心机离心10min，然后悬浮于pH7.4，50mmol/L的磷酸缓冲液中，进行超声破碎，用高速冷冻离心机离心，得上清液，冷冻干燥，得干燥物，将此干燥物与人参、党参提取物混合均匀，得复方人参制剂。本发明产品具有抗氧化作用。
文档编号A61K36/344GK102512476SQ20121000987
公开日2012年6月27日 申请日期2012年1月1日 优先权日2012年1月1日
发明者侯欣池, 张崇禧, 张成城, 郑友兰 申请人:山东大学威海分校