一种结构脂质载体的制备方法及结构脂质载体与流程

本发明属于兽药制剂技术领域，具体涉及一种结构脂质载体的制备方法及结构脂质载体。

背景技术：

替米考星(tilmicosin)是20世纪80年代开发，由泰乐菌素的一种水解产物半合成的，畜禽专用的大环内酯类抗生素。它对革兰氏阳性菌、某些革兰氏阴性菌、支原体、螺旋体等均有抑菌作用；对胸膜肺炎放线杆菌、巴氏杆菌及畜禽支原体具有比泰乐菌素更强的抗菌活性。兽医临床上用于防止敏感菌引起的动物呼吸道疾病，如猪牛的胸膜肺炎放线杆菌、巴氏杆菌病及猪气喘病、鸡慢性呼吸道疾病等。替米考星具有心脏、肾脏毒性，严禁静脉和肌肉注射，一般多以口服和皮下注射给药；另外替米考星能够引起接触性皮炎及过敏反应，使用应避免直接与皮肤接触。

替米考星的分子式：c46h80n2o13，分子量为869.15。

技术实现要素：

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

鉴于上述和/或现有替米考星应用中存在的问题，提出了本发明。

因此，本发明其中一个目的是解决药物生物利用度较低，毒副作用较高的问题，提供一种结构脂质载体的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种结构脂质载体的制备方法，包括，将替米考星和熔融状态下的硬脂酸与油酸混合物混合，加入吐温80后搅拌溶解，再加入等温泊洛沙姆188水溶液，保持体系温度不变，进行高速剪切，得到粗分散体；将得到的粗分散体，对其进行高压均质，整个过程保持体系温度不变，得到初乳；保持初乳温度不变，将其与冷水混合，进行高速剪切，得到替米考星纳米结构脂质载体。

作为本发明所述结构脂质载体的制备方法的一种优选方案，其中：所述替米考星、硬脂酸、油酸、吐温80、泊洛沙姆188、泊洛沙姆188水溶液的水相、冷水，以质量份计，其份数为，

作为本发明所述结构脂质载体的制备方法的一种优选方案，其中：所述熔融状态下的硬脂酸与油酸混合物，其温度为75～80℃。

作为本发明所述结构脂质载体的制备方法的一种优选方案，其中：所述保持体系温度不变，进行高速剪切，其中，高速剪切的时间为2～5min，速度为10000～15000rpm。

作为本发明所述结构脂质载体的制备方法的一种优选方案，其中：所述将得到的初乳与冷水混合，进行高速剪切，其中，所述高速剪切的时间为20～60s，速度为10000～15000rpm。

作为本发明所述结构脂质载体的制备方法的一种优选方案，其中：所述高压均质，其压力为500～800bar。

作为本发明所述结构脂质载体的制备方法的一种优选方案，其中：所述搅拌溶解，其搅拌速度为400～600rpm，搅拌时间为1h。

作为本发明所述结构脂质载体的制备方法的一种优选方案，其中：所述保持初乳温度不变，其是将初乳温度保持在75～85℃。

作为本发明所述结构脂质载体的制备方法的一种优选方案，其中：所述冷水，其温度为0～4℃。

因此，本发明还有一个目的是提供一种结构脂质载体。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种结构脂质载体，其载有替米考星，以质量份数计，替米考星结构脂质载体的组分包括，

本发明所具有的有益效果：

(1)本发明制得的替米考星纳米结构载体初分散体外观呈乳白色液体，最优粒径在619.1±5.1nm之间，zeta电位值-23.9±0.2mv，反映了粒子之间的相互排斥力较好，体系稳定，多分散系数<0.330。电镜下观察纳米粒呈规则球形(见附图3)，体系无崩塌，包封率达89％以上，载药量8.93±0.45％。

(2)本发明制得的替米考星纳米结构载体，能够对替米考星起到十分优秀的缓释控释作用。

(3)同时，本发明所筛选的固态脂质与表面活性剂均为生物可降解材料，毒性低，对粘膜无刺激作用。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：

图1是实施例1制得的替米考星纳米结构脂质载体纳米粒粒径分布图。利用马尔文激光粒度仪(zetasizernanozs90)对所得纳米粒进行粒径测定，测得平均粒径619.1±5.1nm，多分散系数(pdi)为0.325±0.076，说明颗粒大小均一。

图2是实施例1制得的替米考星纳米结构脂质载体纳米粒zeta电位分布图。利用马尔文激光粒度仪(zetasizernanozs90)对所得纳米粒进行zeta电位测定，测得zeta电位值为-23.9±0.2mv，说明该体系稳定性较好。

图3是实施例1制得的替米考星纳米结构脂质载体颗粒的透射电子显微镜照片，可见纳米粒呈近球形，大小均一，相互之间无粘连。

图4是硬脂酸的光学显微镜照片(×10)。

图5是硬脂酸与油酸物理混合物的光学显微镜照片(×10)，可见，油酸加入硬脂酸后打乱了硬脂酸的晶型结构，降低了体系的结晶程度。

图6是健康猪灌胃tlm-nlcs与tlm原料药后的血药浓度-时间曲线，可见，本发明制得的替米考星纳米结构脂质载体，其缓释控释作用十分明显。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。

在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。

其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。

实施例1

材料：替米考星5g、硬脂酸35g、油酸15g、吐温808.4g、泊洛沙姆1881.6g

制备方法：按重量份数比将1.6g泊洛沙姆188溶胀于500ml的单蒸水中，作为水相1；称取35g硬脂酸、15g油酸置于烧杯或其他玻璃器皿中，水浴加热至80℃，待熔融完全后，将5g替米考星溶解其中，再加入8.4g吐温80，以500rpm，磁力搅拌为1h，作为油相；将油相加入相同温度的水相1中，80℃水浴下高速剪切5min，速度为15000rpm，得到粗分散体；保持粗分散体温度不变，将其进行高压均质，压力为600bar，循环5次，然后迅速取得所得初乳(初乳温度保持在80℃)与500ml4℃的水(水相2)混合并进行高速剪切，高速剪切的时间为40s，速度为15000rpm，得到替米考星纳米结构脂质载体。

检测：所得纳米粒平均粒径619.1±5.1nm，zeta电位值-23.9±0.2mv。多分散系数(pdi)为0.325±0.076；电镜下观察纳米粒呈近球形，颗粒之间无聚集现象。

用高效液相色谱法测定其包封率为89.29±0.45％，载药量为8.93±0.45％。

实施例2

材料：替米考星5g、硬脂酸30g、油酸10g、吐温809.0g、泊洛沙姆1882.0g

制备方法：按重量份数比将2.0g泊洛沙姆188溶胀于500ml的单蒸水中，作为水相1；称取30g硬脂酸、10g油酸置于烧杯或其他玻璃器皿中，水浴加热至80℃，待熔融完全后，将5g替米考星溶解其中，再加入9.0g吐温80，以600rpm，磁力搅拌为0.5h，作为油相；将油相加入相同温度的水相1中，80℃水浴下高速剪切3min，速度为10000rpm，得到粗分散体；保持粗分散体温度不变，将其进行高压均质，压力为500bar，循环5次，然后迅速取得所得初乳(初乳温度保持在80℃)与500ml0℃的水(水相2)混合并进行高速剪切，高速剪切的时间为60s，速度为12000rpm，得到替米考星纳米结构脂质载体。

用高效液相色谱法测定其包封率为86.11±0.45％，载药量为8.02±0.36％。

实施例3

材料：替米考星5g、硬脂酸50g、油酸10g、吐温8010.0g、泊洛沙姆1883.0g

制备方法：按重量份数比将3.0g泊洛沙姆188溶胀于500ml的单蒸水中，作为水相1；称取50g硬脂酸、10g油酸置于烧杯或其他玻璃器皿中，水浴加热至80℃，待熔融完全后，将5g替米考星溶解其中，再加入10.0g吐温80，以400rpm，磁力搅拌为1.5h，作为油相；将油相加入相同温度的水相1中，80℃水浴下高速剪切3min，速度为12000rpm，得到粗分散体；保持粗分散体温度不变，将其进行高压均质，压力为600bar，循环5次，然后迅速取得所得初乳(初乳温度保持在80℃)与500ml4℃的水(水相2)混合并进行高速剪切，高速剪切的时间为20s，速度为15000rpm，得到替米考星纳米结构脂质载体。

用高效液相色谱法测定其包封率为81.27±0.54％，载药量为8.76±0.47％。

实施例4

材料：替米考星10.0g、硬脂酸45g、油酸20g、吐温8015g、泊洛沙姆1884.5g

制备方法：按重量份数比将4.5g泊洛沙姆188溶胀于500ml的单蒸水中，作为水相1；称取45g硬脂酸、20g油酸置于烧杯或其他玻璃器皿中，水浴加热至80℃，待熔融完全后，将10.0g替米考星溶解其中，再加入15g吐温80，以600rpm，磁力搅拌为1.5h，作为油相；将油相加入相同温度的水相1中，80℃水浴下高速剪切4min，速度为10000rpm，得到粗分散体；保持粗分散体温度不变，将其进行高压均质，压力为800bar，循环5次，然后迅速取得所得初乳(初乳温度保持在80℃)与500ml4℃的水(水相2)混合并进行高速剪切，高速剪切的时间为40s，速度为15000rpm，得到替米考星纳米结构脂质载体。

用高效液相色谱法测定其包封率为85.29±0.20％，载药量为7.92±0.32％。

实施例5

将实施例1制备得到的替米考星nlcs向健康猪灌胃，设置替米考星原料药作为对照，以替米考星含量为20mg/ml剂量给药，初步研究其药动学特性。利用建立的测定血浆中替米考星的hplc方法，获得两个给药组的药动数据。经过数据处理后得到药时曲线和药动学参数，具体下下表以及说明书附图6。

tlm-nlcs和tlm原料药在猪体内的药动学参数(n＝5)

实施例6

对不同的乳化剂占脂质的质量百分比(乳脂比)对替米考星纳米结构脂质载体纳米粒质量的影响做平行实验分析。

4组平行实验中，乳脂比分别为20％、30％、40％、60％，其余材料及其用量和制备方法同实施例1。所得结果如下表所示。乳脂比为40％和60％的体系冷却后胶凝化，无法在水中分散，故无法测定其水动力尺寸。

由此可见，本发明制得的替米考星纳米结构载体初分散体外观呈乳白色液体，最优粒径在619.1±5.1nm之间，zeta电位值-23.9±0.2mv，反映了粒子之间的相互排斥力较好，体系稳定，多分散系数<0.330。电镜下观察纳米粒呈规则球形(见附图3)，体系无崩塌，包封率达89％以上，载药量8.93±0.45％；本发明制得的替米考星纳米结构载体，能够对替米考星起到十分优秀的缓释控释作用；同时，本发明所筛选的固态脂质与表面活性剂均为生物可降解材料，毒性低，对粘膜无刺激作用。

值得一提的是，在我方发明的技术方案中，优选了硬脂酸和油酸两种成分，油酸加入硬脂酸后打乱了硬脂酸的晶型结构(从说明书附图4、5可对比看出)，降低了体系的结晶程度，并且在最优比例硬脂酸：油酸＝7:3下，降低效果最为明显。在实验过程中，发现两种脂质(硬脂酸、油酸)在与表面活性剂混合前的温度，最优为75～80℃，在此温度条件下，脂质分子中脂肪酰链的旋转异构化运动会受到抑制，甚至产生歪扭构象，使得体系的结晶程度得到进一步的降低。并且，由于替米考星存在π-π共轭的结构。具有π-π共轭结构的分子间能产生强烈的π-π堆叠(stacking)作用,硬脂酸是双亲性分子，与替米考星通存在很强的π-π堆叠、疏水作用。我方发明通过优选优化替米考星与两种脂质的比例、高速剪切和均质的参数、其他组分与脂质的比例以及相应的温度参数来加强这种替米考星与脂质载体之间的π-π堆叠作用。并且最终在实验过程中发现，将替米考星和熔融状态下的硬脂酸与油酸混合物混合，加入吐温80后搅拌溶解，再加入等温泊洛沙姆188水溶液，保持体系温度不变，进行高速剪切，得到粗分散体；将得到的粗分散体，对其进行高压均质，整个过程保持体系温度不变，得到初乳；保持初乳温度不变，将其与冷水混合，进行高速剪切，得到替米考星纳米结构脂质载体。

在以下质量份数条件下，

所述保持体系温度不变，进行高速剪切，其中，高速剪切的时间为2～5min，速度为10000～15000rpm；所述高压均质，其压力为500～800bar；所述将其与冷水混合，进行高速剪切，其中，所述高速剪切的时间为20～60s，速度为10000～15000rpm；所述搅拌溶解，其搅拌速度为400～600rpm，搅拌时间为0.5～1.5h；所述保持初乳温度不变，其是将初乳温度保持在75～85℃；所述冷水，其温度为0～4℃的总体技术方案下，替米考星与脂质载体之间的π-π堆叠作用最强，因而大大提高了替米考星纳米结构脂质载体的包封率和载药量。

应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。