专利名称：：血管紧张素Ⅱ2型受体激动剂在组织修复中的应用的制作方法
背景技术：
：本发明广泛地涉及生物化学和医学领域。更具体地说，本发明涉及用于加速组织生长或愈合的方法及物质。哺乳动物组织上的伤口(即破口或开口)会导致组织破坏和微血管在伤口表面的凝固。这些组织的修复体现了对损伤的有序的、受控的细胞反应。不论尺寸大小，所有的软组织伤口均按相似的方式愈合。组织的生长和修复为生物学体系，其中在氧梯度下发生细胞增生和血管生成。在组织修复期间中顺序发生的形态学和结构的变化已被详细地指征并在某些实例中作了定量化处理[Hunt，T.K.等人，“血管生成和伤口愈合中的凝固及巨噬细胞刺激”(Coagulationandmacrophagestimulationofangiogenesisandwoundbealing)，”inThesurgicalwound，1-18页，ed.F.Dineen&G.Hildrick-Smith(Lea&Febiger，Philadelphia1981)]。细胞形态包括三个特征区。中心无血管伤口区为缺氧的、酸中毒的和碳酸过多的(hypercarhic)，并有高的乳酸盐浓度。与该伤口区毗连的是局部贫血(局部缺血)梯度区。其中有分立的成纤维细胞。在该先导区后是活性胶原合成区，其特征在于成熟的成纤维细胞和大量的新生毛细血管(即新血管形成)。虽然在伤口组织愈合中需要新血管生长(血管生成)，但通常血管生成剂并不能满足长期以来认定的为组织修复提供附加生物合成效应的需求。尽管有要求伤口更快愈合的需求(即，严重烧伤，手术切口，破口或别的创伤)，至今用药剂加速伤口愈合仅有有限的成功事例。关于DiZerega的美国专利5,015,629(其整篇内容在此引入作为参考)中描述了一种增加伤口组织愈合速度的方法，包括以足够造成愈合速度增加的量对所述组织施用血管紧张素II(AII)。对伤口组织施用血管紧张素II可明显增加伤口愈合的速度，导致更快的上皮组织再生和组织修复。术语血管紧张素II指在人或别的物种体内存在的一种八肽，其序列为Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe[SEQIDNO1]。血管紧张素II为已知的升压药并可从市场中购得。尽管可使用血管紧张素II加快伤口的愈合，现仍需要别的能加速伤口愈合的药剂。另外，如果使用在导致高血压方面比血管紧张素II性能弱的药剂，那将是更加有利的。在PCT专利申请PCT/US94/10502和PCT/US/94/10503中分别公开了包含血管紧张素II类似物和血管紧张素III及其类似物的用于伤口愈合的组合物。虽然这些组合物在伤口处置中有明显的效能，现仍需要具有更少不期望副作用的组合物及方法。一种选择性亲合AT2受体的肽激动剂(这种肽对AT2的亲合力要比AT1大1000倍)已被鉴定。该肽为对氨基苯丙氨酸6-AII[“(p-H2-Phe)6-AII”]，Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-Xaa-Pro-Phe[SEQIDNO2]，其中Xaa为对氨基苯丙氨酸[Speth，RC和KHKim.1990.“用血管紧张素II之选择性的激动剂类似物，对氨基苯丙氨酸6血管紧张素II，鉴别两种血管紧张素II受体亚型”(DiscriminationoftwoangiotensinIIreceptorsubtypeswithaselectiveagonistanalogueofangiotersinII，p-aminophenvla，lanine6angiotensinII).BiochemBiophysResCommun169997-1006]。在所试验的实验模型中与AT2拮抗剂相比该肽表现出结合特征[Catalioto等人.1994.“血管紧张素诱导前列环素从兔输精管中的释放受体非均一性的证据”(Angiotensinsinducethereleaseofprostacyclinfromrabbitvasdeferensevidenceforreceptorheterogeneity).EurJPharmacol25693-97；Bryson，SE等人，1992.“成神经细胞瘤x神经交质瘤杂交，N-108-15之分化对血管紧张素At2受体亚型表达的诱导”(InductionoftheangiotensinAt2receptorsubtypeexpressionbydifferentiationoftheneuroblastomaxgliomahybrid，NG-108-15).EurJPharmacol225119-127]。本发明的目的在于提供不具有无前已知的组合物所有缺点的组合物和方法。发明简述本发明涉及血管紧张素II2型受体激动剂(“AT2激动剂”)在伤口愈合中的应用。这些化合物构成了用于加快伤口愈合的组合物的基料，该组合物中包含至少一种AT2激动剂，其用量应足以加速伤口愈合。AT2受体亚型的激动剂有利于伤口的修复而又不表现血管紧张素II的多种副作用，如增高血压和造成口渴。优选地，组合物为基质或胶束溶液形式。附图简述参考附图将可更好地理解本发明，其中图1描绘出在伤口闭合方面相对于仅用药物载体处理的对照使用(p-NH2-Phe)6-AII的对照应答百分率；和图2描绘出在肉芽组织生成方面相对仅用药物载体处理的对照使用(p-NH2-Phe)6-AII的百分率增加。发明详述依照本发明，使用包含有效量的至少一种AT2激动剂的组合物可加速哺乳动物组织上的伤口愈合。通常活性药剂以基质或胶束溶液给药，并且甚至在很低浓度下对加速上皮细胞再生和组织修复也有效。正如此后所定义的那样，本发明使用的AT2激动剂的优选类型包括在相应于AII之6位的位置上有P-NH2-Phe的AII类似物及其活性片断。除肽药剂之外，本发明也考虑使用具有所要求的AT2激动剂作用的多种非肽药剂(如类肽)。血管紧张素II为已知的效力最强的血管收缩药之一，可造成分枝构成毛细血管的小动脉如小动脉的收缩。血管紧张素的生物合成由血管紧张肽原酶作用血浆中底物血管紧张肽原引发。所形成的物质为被称为血管紧素I的十肽，其通过转化酶血管紧张肽酶切去血管紧张素I碳端的His-Leu残基转化为血管紧张素II。近期研究表明血管紧张肽原酶-血管紧张素体系的血管活性产物，血管紧张素II(AII)增加生长因子的释放、致有丝分裂作用、向化性和细胞修复涉及的培养细胞之细胞外基质的释放[DzauV.E.等人(1989)“血管紧张素在调节血管和心脏生长中的分子机理”(Molecularmechanismofangiotensinintheregulationofvascularandcardiacgrowth).JMolCellCardiol21.(SuppleIII)S7；BerkBC等人(1989)“血管紧张素II刺激经培养之血管平滑肌细胞中的蛋白合成”(AngiotensinIIstimulatedproteinsynthesisinculturedvascularsmoothmusclecells).Hypertension13305-14；Kawahara，Y，等人(1988)“血管紧张素II通过蛋白激酶C活化和钙离子在经培养之血管平滑肌细胞中的迁移诱导c-fos基因的表达”(AngiotensinIIinducesexprssionofthec-fosgenethroughproteinkinaseCactivationandcalciumionmobilizationinculturedvascularsmoothmusclecells).BBRC15052-9；Naftilan，AJ等人(1989)“血管紧张素II在经培养之鼠血管平滑肌细胞中对血小板衍生的生长因子A链和c-myc基因表达的诱导”(Inductionofplatelet-derivedgrowthfactorA-chainandc-mycgeneexpressionsbyangiotensinIIinculturedratvascularsmoothmusclecells).JClinInvest831419-24；Taubman，MB等人(1989)“血管紧张素II在主动脉平滑肌中诱导c-fosmRNA。Ca2+迁移和蛋白激酶C活化的作用”(AngiotensinIIinducesc-fosmRNAinaorticsmoothmuscle.RoleofCa2+mobilizationandproteinkinaseCactivation).JBiolChem264526-530；Nakahara，K等人(1992)“兔血管平滑肌中三种类型之PDGF-A链基因转录的鉴别以及他们在成熟期间和通过血管紧张素II调节的表达”(IdentificationofthreetypesofPDGF-AchaingenetranscriptsinrabbitvascularsmoothmuscleandtheirregulatedexpressionduringdevelopmentandbyangiotensinII).BBRC184811-8；StoufferGA和GKOwens.(1992)“血管紧张素II诱导自发性高血压鼠之经培养的平滑肌细胞的促有丝分裂，这依赖于转形生长因子-β的autocrine产生”(AngiotensinIIinducedmitogenesisofspontaneouslyhypertensiveratderivedculturedsmoothmusclecellsisdependentonautocrineproductionoftransforminggrowthfactor-β).CircRes70820；Wolf，G等人(1992)“血管紧张素II在经培养之鼠肾小球膜细胞中刺激I型胶原蛋白的增殖和生物合成”(AngiotensionIIstimulatestheproliferationandbiosynthesisoftypeIcollageninculturedmurinemesangialcells).AmJPathol14095-107；Bell，L和JAMadri(1990)“血管紧张素系统对内皮和平滑肌细胞迁移的影响”(Influenceoftheangiotensinsystemonendothelialandsmoothmusclecellmigration).AmJPathol1377-12]。另外，AII在兔角膜眼和鸡绒毛膜尿囊膜模型中显示血管生成作用[Fernandez，LA等人(1985)“血管紧张素II产生的新血管生成作用”(Neovasculari-zationproducedbyangiotensinII).JLabClinMed105141；LeNole，FAC等人(1991)“血管紧张素II在鸡胚胎绒毛腺膜尿囊膜中刺激血管生成”(AngiotensinIIstimulatesangiogenesisinthechorio-allantiocmembraneofthechickembryo).EurJPharmacol195305-6]。因此，AII可通过增加血管再生、生长因子释放、上皮细胞再生和细胞外基质生成来加快伤口的修复。通过增加受伤组织的血流量和营养，AII可增加伤口修复的速率。AII也可通过增加受伤部位生长因子的产生加快伤口的修复。已显示外源性添加生长因子可通过多种机制来加快伤口修复[Grotendorst，GR等人(1985)“血小板衍生之生长因子在正常和糖尿病鼠中刺激肉芽组织的形成”(Stimulationofgranulationtissueformationbyplatelet-derivedgrowthfactorinnormalanddiabeticrats).JClinInvest762323-9；Mustoe，TA等人(1987)“转形生长因子-β诱导的鼠伤口愈合加快”(Acceleratedhealingofincisionalwoundsinratsinducedbytransforminggrowthfactor-β).Science2371333-5；Pierce，GF等人(1988)“血小板衍生之生长因子和重组c-cis基因homodimeric蛋白对活体内伤口愈合的增加”(Invivoincisionalwoundhealingaugmentedbyplatelet-derivedgrowthfactorandrecombinantc-cisgenehomodimericproteins).JExpMed167974-87；Lynch，SE等人(1989)“在伤口愈合中的生长因子”(Growthfactorsinwoundhealing).J.ClinInvest84640-6；Greenhalgh，DG等人(1990)“PDGF和FGF刺激遗传性糖尿病鼠的伤口愈合”(PDGFandFGFstimulatewoundhealinginthegeneticallydiabeticmouse)AmJPathol1361235-46]。近期的研究表明在受伤后AII可增加颈动脉和主动脉中新内膜的形成[Powell，JS等人(1989)“血管紧张素转化酶抑制剂防止血管受伤后的肌内膜的增殖”(Inhibitorsofangiotensin-convertiongenzymepreventmyointimalproliferationaftervascularinjury).Science245186-8；Powell，JS等人(1991)“转化酶抑制作用对血管受伤之增殖应答的抑制”(Theproliferativeresponsetovascularinjuryissuppressedbyconvertingenzymeinhibition).JcardiovascPharmacol16(suppl4)S42-9；Capron，L等人(1991)“血管紧张素转化酶抑制剂--雷米普利对鼠颈动脉对气球导管损伤之应答的作用”(Effectoframipril，aninhibitorofangiotensinconvertingenzyme，ontheresponseofratthoracicaortatoinjurywithaballooncatheter).JCardiovascPharmacol18207-11；Osterriedes，W等人(1991)“血管紧张素II对鼠中损伤诱导之新内膜形成的作用”(RoleofangiotensinIIinjury-inducedneointimaformationinrats).Hypertesion18SupplII60-64；Daemen，MJAP等人(1991)“血管紧张素II在正常和受伤鼠的血管壁上诱导平滑肌细胞增殖”(AngiotensinIIinducessmoothmusclecellproliferationinthenormalandinjuredratarterialwall).CircRes68450-6]。由于这些实验观察的结果，开展了确定内源性AII可诱导内膜增生之机制的研究。表明AII可作为平滑肌细胞、成纤维细胞和内皮细胞的促细胞分裂剂[Schelling，P等人(1979)“血管紧张素II拮抗剂saralasin在3T3和SV3T3细胞中对细胞生长和血管紧张肽原酶的作用”(EffectsofangiotensinIIandangiotensinIIantagonistsaralysinoncellgrowthandreninin3T3andSV3T3cells).JCellPhysiol98505-13；Campbell-Boswell，M和ALRobertson.(1981)“血管紧张素II和血管加压素在体外对人平滑肌细胞的作用”(EffectsofangiotensinIIandvasopressinonhumansmoothmusclecellsinvitro).ExpMolPathol35265-76；Emmett，N等人(1986)“沙拉新(血管紧张素II拮抗剂)对3T3细胞生长和增殖的作用”(Effectofsaralasin(angiotensinIIantagonist)on3T3cellgrowthandproliferation).JCellBiol103171(Abst)；Paquet，JL等人(1990)“血管紧张素II在自发性高血压鼠中诱导的主动脉肌细胞增殖”(AngiotensinII-inducedproliferationofaorticmyocytesinspontaneouslyhypertensiverats).JHypertens8565-72；Dazauetal，同上]。AII也增加血管平滑肌细胞的蛋白质含量和大小[Berk等人(1989)，同上；Geisterfer，AAT等人(1988)“血管紧张素II诱导经培养之鼠主动脉平滑肌细胞肥大，而不是增生”(AngiotensinIIinduceshypertrophy，nothyperplasia，ofculturedrataorticsmoothmusclecells).CircRes62749-56]。研究表明AII增加在平滑肌细胞、内皮细胞和血管成纤维细胞中的包括PDGF、结合肝素的EGF和重排生长因子β(TGFβ)、以及与生长有关的原致癌基因的多种类型的生长因子的释放[Kawahara等人(1988)，同上；Naftilan，AJ(1992)“血管紧张素II在血管平滑肌细胞生长中的作用”(TheroleofangiotensinIIinvascularsmoothmusclecellgrowth).JcardiovasPharmacol20S37-40；Naftilan等人(1989)，同上；Taubmen等人(1989)，同上；Nakahara等人(1992)同上；Temizer等人(1989)，同上；Gibbons，GH等人(1992)“血管平滑肌细胞肥大对增生。autocrine转形生长因子β-1的表达确定对血管紧张素II的生长应答”(Vascularsmoothmusclecellhypertrophyvshyperplasia.Autocrinetransforminggrowthfactor-beta1expressiondeterminesgrowthresponsetoangiotensinII).JClinInvest90456-61；Bell，L等人(1992)“autocrine血管紧张素系统对牛主动脉内皮细胞迁移以及血浆酶原的调节涉及对原致肿瘤基因pp60c-src表达的调节”(Autocrineangiotensinsystemregulationofbovineaorticendothelialcellmigrationandplasminogenactivatorinvolvesmodulationofproto-oncogenepp60c-srcexpression).JClinInvest89315-20；Stouffer和Owens(1992)，同上]。血管平滑肌细胞受AII影响的过度生长可通过PDGF调节[Berk，BC和GNRao.(1993)“血管紧张素II诱导的血管平滑肌细胞肥大PDGF-A链介导的尺寸增加”(AngiotensinII-inducedvascularsmoothmusclecellhypertrophyPDGFA-chainmediatestheincreaseinsize).JCellphysiol154368-80]。因此，可设想AII通过增加伤口组织中生长因子浓度来加快伤口修复。此外，AII被显示出有刺激胶原合成的作用，因而建议为细胞外基质形成的一个因子[Wolf，G等人(1991)“血管紧张素II于经培养之大致环形的细胞中诱导细胞肥大后，IV型胶原蛋白转录和分泌的细胞内信号”(IntracellularsignallingoftranscriptionandsecretionoftypeIVcollagenafterangiotensinII-inducedcellularhypertrophyinculturedproximaltubularcells).CellReg2219-17；Wolf等人(1992)，同上；Zhou，G等人(1992)“血管紧张素II在经培养之心成纤细胞中调节对胶原蛋白合成的刺激调节”(AngiotensinIImediatedstimulationofcollagensynthesisinculturedcardiacfibroblasts).FASEBJ6A1914]。伤口修复也涉及所需细胞类型进入伤口层的向化性。在体外实验中AII也显示出诱导内皮细胞和平滑肌细胞迁移的作用[Bell和Madri(1990)，同上]。近期的研究也表明在伤口修复过程中AII受体的表达发生了改变[Viswanathan，M，和JMSaavedra(1992)“在实验性伤口愈合中血管紧张素IIAt2受体在鼠皮肤中的表达”(ExpressionofAngiotensinIIAT2ReceptorsintheRatSkinDuringExperimentalWoundHealing).Peptides13783-6；Kimura，B等人(1992)“在鼠伤口愈合期间皮肤之血管紧张素II受体的变化”(ChangesinskinangiotensinIIreceptorsinratsduringwoundhealing).BBRC1871083-1090]。这些变化以及在伤口修复部位AII的局部生成增加的证据表明AII可能在伤口修复中扮演一个关键的角色。最近已有AII涉及伤口修复的综述[Philips等人1994.“血管紧张素受体对鼠皮肤中的转形生长因子-β的刺激以及伤口愈合。在血管紧张素受体中”(Angiotensinreceptorstimulationoftrahsforminggrowthfactor-βinratskinandwoundhealing.InAngiotensinReceptors)(edJMSaavedraandPBMWMTimmermans)，PlenumPress，NewYork，NY，pp377-396]。在大多数已报道的研究中，表明这些效应受AT1受体调节。血管紧张素II(AII)的血管效应(以及大多数别的效应，如醛甾酮的分泌和增加口渴)由1型受体(AT1受体)调节[Wong，PC.1994.“在高血压模型中的血管紧张素拮抗剂。有关血管紧张素受体”(Angiotensinantagonistsinmodelsofhypertensin.InAngiotensinReceptors)(JMSaavedraandPBMWMTimmermans).PlenumPressNY，NYpp319-336；MacKenzie等人1994.“TCV116防止大面积肾切除鼠中的进行性的肾损伤”(TCV116preventsprogressiverenalinjuryinratswithexteniverenalablation).J.Hypertension12(Suppl9)S11-S16；Gupta，等人1995.“在肾上腺中局部产生的血管紧张素II调节基底、促肾上腺皮质激素和钾刺激的醛甾酮分泌”(LocallygeneratedagiotensinIIintheadrenalglandregulatesbasal，corticotropinandpotassium-stimulatedaldosteronesercetion).Hypertension25443-448；Llorens-Cortes，等人1994“通过定量反向转录酶-聚合酶链反应分析，血管紧张素II1型受体亚型的组织表达和调节”(Tissularexpressionandregulationoftype1angiotensinIIreceptorsubtypesbyquantitivereversetranscriptase-polymerasechainreactionanalysis).Hypertension24538-548；Wong，等人1992.“PD123177在鼠中增加losartan(Dup753)诱导的血管紧张素II受体拮抗作用”(Enhancementoflosartan(Dup753)-inducedangiotensinIIreceptorantagonismbyPD123177inrats).EurJPharmacol220267-70]。这一结论基于受体亚型特征拮抗剂抑制了AII的作用。AII和AII拮抗剂的效应在两个血管损伤和修复模型中已被检查。研究中已考虑了AT2对血管系统气球损伤后血管增生的贡献。在鼠的颈动脉中，大部分受体为AT1亚型。气球损伤后两周，大部分受体为AT2[Pratt，RE等人1992.“血管紧张素受体的AT2重排异构体在血管损伤后介导肌细胞的增生”(TheAT2isoformsoftheangiotensinreceptormediatesmyointimalhyperplasiafollowingvascularinjury).Hypertension20432]。与此相反，受伤鼠胸主动脉的新内膜细胞主要表现出AT1受体性质[Viswanathan，M等人，“气球血管成形术增加血管紧张素II亚型ATl受体在鼠主动脉新内膜中的表达”(BalloonangioplastyenhancestheexpressionofangiotensinIIsubtypeAT1receptorsintheneointimaofrataorta).JClinInvest901707-12，1992]。用PD123319(AT2特征拮抗剂)降低内膜增生73％，而用losartan(AT1特征拮抗剂)降低内膜面积95％[Pratt等人(1992)，同上]。在相似的模型中，环管注入的CGP42112(AT2拮抗剂)防止内膜生成14天，而低剂量的losartan无效[Janiak等人1992.“血管紧张素亚型2受体在血管损伤后的新内膜形成中的作用”(Roleofangiotensinsubtype2receptorinneoinstimaformationafterVascularinjury).Hypertension20737-45]。在别的研究中，发现高剂量的losartan有效[ForneyPrescott等人1991.“血管紧张素转化酶抑制剂与血管紧张素II，AT1受体拮抗剂，对平滑肌细胞在气球导管损伤后的迁移和增殖之作用”(Angiotensin-convertingenzymeinhibitorversusangiotensinII，AT1receptorantagonist，Effectonsmoothmusclecellmigrationandproliferationafterballooncatheterinjury).Am.JPathol1391291-6；Kauffman，等人1991.“Losartan--九肽血管紧张素II(AngII)受体拮抗剂，在鼠颈动脉血管受伤后抑制新内膜的形成”(Losartan，anonpeptideangiotensinII(AngII)receptorantagonist，inhibitsneointimaformationfollowingballooninjurytoratcarotidarteries).LifeSci49223-228]。因此，可设想两种受体亚型在气球损伤后的血管损害的形成中均起作用。在实验伤口愈合过程中，伤口周围皮肤表面真皮的局部组织中的AII受体的表达增加；其中大部分增加是由于AT2受体[Viswanathan，等人1992.“在实验伤口愈合期间鼠中血管紧张素IIAT2受体的表达”(ExpressionofangiotensinIIAT2receptorsintheratskinduringexperimentalwoundhealing).Peptides13783-6；Kimura等人“在伤口愈合期间鼠之皮肤血管紧张素II受体的变化”(ChangesinskinangiotensinIIreceptorsinratsduringwoundhealing)，BiochemBiophysRCommun1871083-90]。这些研究是在表达一些AT2受体的幼鼠上进行的。在成年鼠的伤口愈合研究中(用该处报道的实验进行)，切出伤口后AT1受体发生改变。这些随后的研究在实验设计中未对真皮和伤口的其它部分作区分。AT2激动剂的优选类型具有通式R1-R2-R3-R4-R5-R6-R7-R8其中R1和R2一起构成下列基团X-RA-RB，其中X为H或一至三个肽基团，RA和RB间的肽键易被氨肽酶A断裂；R3选自Val、Ala、Leu、Ile、Gly、Pro、Aib、Acpc和Tyr；R4选自Tyr、Thr、Ser和azaTyr；R5选自Ile、Ala、Leu、Val和Gly；R6为P-NH2-Phe；R7为Pro或Ala；并且R8选自Phe、Phe(Br)、Ile和Tyr。在优选实施方案的一种类型中，RA适宜选自Asp、Glu、Asn、Acpc(1-氨基环戊羧酸)、Ala、Me2Gly、Pro、Bet、Glu(NH2)、Gly、Asp(NH2)和Suc。RB适宜选自Arg、Lys、Ala、Orn、Ser(Ac)、Sar、D-Arg和D-Lys。RA和RB特别优选的组合为Asp-Arg、Asp-Lys、Glu-Arg和Glu-Lys。在上述各式中使用氨基酸残基的标准简写形式。在未作构型相反的指示时，表明为L-型氨基酸。别的残基按下表作简化</tables>已建议AII及其类似物采取gamma或beta转角[Regoli，D.等人(1974)“血管紧张素的压力学”(PharmacologyofAngiotension).PharmacologicalReviews2669]。一般地，认为位置R3、R5和R7上的中性侧链与保持主要用于受体结合和/或内在活性之R4、R6和R8上的活性基团之间的适当距离有关。位置R3、R5和R8上的疏水性侧链在肽的构象和假想疏水穴的形成起重要作用。位置R2的适当侧链提供化合物对靶受体的亲合力和/或在肽的构象中起重要作用。因此Arg和Lys特别优选作为R2。对于本发明来说，认为R3可能与R5(在gamma转角模型中)或R6(在beta转角模型中)构成线性或非线性氢键。在beta反平行结构(也被建议为一种可能的结构)中R3也可参与第一转角。与通式1中的其他位置相反，在该位置上beta和gamma分枝效果相同。另外，单一氢键就足以保持构象相对稳定。因此，R3适宜于选自Val、Ala、Leu、Ile、Gly、Pro、Aib、Acpc和Tyr。对于R4，构象分析认为该位置的侧链(以及位置R3和R5)用于构成疏水区，该区域对受体的进占和激动很重要。因此R4优选选自Tyr、Thr、Ser和azaTyr。在该位置上，由于可与受体中能接受酚羟基之一个氢原子的位置构成氢键(Regoli等人，(1974)同上)，特别优选为Tyr。在位置R5中，具有β脂肪或脂环侧链的氨基酸为特别优选。因此Gly适于位置R5，该位置上的优选氨基酸选自Ile、Ala、Leu和Val。根据本发明特别重要的化合物中，R6为P-NH2-Phe；文献认为该氨基酸提供激动剂活性。现认为R7应为Pro以使R8达最佳定向。在位置R8中，疏水性环和阴离子端羧基在有活性类似物与受体结合中特别有用；因此，对本发明来说Tyr和特别优选的Phe为优选。AT2激动剂对氨基苯丙氨酸6-AII用于鼠表皮修复模型试验中，与AII对照以剂量100μg/天共5天给出正结果。检查肉芽组织生成速度和伤口闭合程度，发现均被对氨基苯丙氨酸6-AII加速。根据本发明的方法，至少一种AT2激动剂以足以增加组织愈合速度的剂量施用于伤口组织。在体外实验中这些化合物在纳摩尔数量级时即可明显加快愈合速率。对任何给定激动剂(肽类或非肽类)，在给定组合物中的最佳浓度可以容易地经验确定。通常适用于本发明的活性药剂的用量在约0.0001μg至约100mg每公升体重之间。本发明的化合物可以多种溶液形式施用。适用于本发明的溶液为无菌的，溶有足量肽的，并对伤口组织无害的。因此本发明的化合物为非常稳定的但可被强酸和强碱水解。本发明的化合物可溶于有机溶剂和pH为5～8的水溶液中。任意类型的在一定时间内将活性药剂注入组织内的施用方法均可被采用。例如，可通过纱布绷带或纱布条将水溶液施用于伤口组织上，或将该溶液作成制剂使得可定时注入药物(使用如脂质体，软膏，胶束等)。对本领域的普通技术人员来说利用本发明化合物制作这些制剂是容易的。对活性药剂的使用浓度要求不高，因为甚至在纳克级水平本发明化合物也有组织修复效应。优选使用的基质或胶束溶液中活性药剂浓度至少为1毫克每毫升。特别有利的基质溶液为以商标Hydron售卖的半固体聚乙二醇聚合物制剂，由HydroMedSciences公司，NewBrunswick，NewJersey制造。另一优选溶液为以商标PluronicsF108售卖的胶束溶液，由BASF公司，LudwigshafenGermany制造。在室温条件下该溶液为流体，但当施用于温暖的组织上后该溶液则变为胶状物，使得活性药剂在几天的时段内注入到伤口组织内。别的优选制剂包括羧甲基纤维素制剂(如本文实施例那样)、晶体制剂(如生理盐水、林格式乳酸盐溶液、磷酸盐缓冲的生理盐水等)、粘弹体制剂、聚乙二醇制剂、聚丙二醇制剂和伤口包扎(如绷带等)。本发明化合物的愈合效应可用多种实例表现。溶液可局部地用于表层伤口组织上以治疗溃疡、损伤、创伤、糖尿病性溃疡、烧伤、创伤、堵塞性溃疡、牙周受伤、破口和别的情况。别外，如外科手术造成的腹腔伤口组织也可用本发明的组合物处理以加快愈合。例如在手术切除结肠部分或别的组织后，在闭合手术部位前可在伤口面上涂布活性药剂的溶液以加快内部毛细血管渗入和愈合。另外，可通过注射或别的方法皮下给药加快局部愈合速率。以所附实施例为参考可更好地理解本发明，实施例仅具有说明性性质而不能被理解为对所附权利要求的范围作限制。实施例雄性SpragueDawley鼠，175-200g，来自SimonsenLaboratories，Gilroy，CA。在手术当天，手术前老鼠接受肌肉氯胺酮/甲苯噻嗪麻醉。刮去老鼠的毛并用聚乙烯吡咯酮碘擦洗。在鼠背上造成两块1.5×1.5cm的与皮层厚度一致的伤口。切除皮肤后，将伤口尺寸画在一块盖玻片上并将药剂注入到100μl10％低粘度羧甲基纤维素(Sigma)中。实验老鼠以剂量100μg每块伤口测试。对照仅用药物载体处理。对实验老鼠给药后，将老鼠包扎好并使其从麻醉中清醒。在手术后的1至4天，对老鼠再给100μg肽制剂。在第2、4、7和9天时，在甲氧氟烷麻醉(以商品名Metofane从Pittman-Moore，Mundelein，IL购得)下测量伤口面积。伤口面积用以下方法测定(1)将伤口形状画在图纸(有1×1mm的方格)上；(2)切下该伤口形状图；(3)称量该纸片重量并对比1.5×1.5cm纸片的重量；然后(4)数出格子数。另外在第2、4和7天时，按同样方式测量肉芽面积。如图1-2所示，当实验动物用AT2激动剂处理后相对于对照动物伤口闭合程度和肉芽组织生成速度大大增加。图1描绘出在伤口闭合方面相对于仅用药物载体处理的对照的对照应答百分率；图2描绘出在肉芽组织生成方面相对仅用药物载体处理的对照的百分率增加。从上述描述中，本领域技术人员可容易地确定本发明的基本特征，并且在不违反本发明精神和范围的条件下，可将本发明作多种用途并用于多种情况。形式上的改变以及等同物的替代被认为是各种使用环境的要求或导致的结果，而且虽然在此使用了特征术语，它们仅具有描述性质而非定界性质。权利要求1.一种加速伤口愈合的方法，包括在伤口上施用以可加速伤口愈合的有效量使用的至少一种血管紧张素II2型受体激动剂。2.如权利要求1中的方法，其中激动剂具有通式R1-R2-R3-R4-R5-R6-R7-R8其中R1和R2一起构成下列基团X-RA-RB，其中X为H或一至三个肽基团，RA和RB间的肽键易被氨肽酶A断裂；R3选自Val、Ala、Leu、Ile、Gly、Pro、Aib、Acpc和Tyr；R4选自Tyr、Thr、Ser和azaTyr；R5选自Ile、Ala、Leu、Val和Gly；R6为P-NH2-Phe；R7为Pro或Ala；并且R8选自Phe、Phe(Br)、Ile和Tyr。3.如权利要求1中的方法，其中通式1的化合物为(p-NH2-Phe)6-AII。4.如权利要求1中的方法，其中激动剂以基质或胶束溶液形式给药。5.如权利要求1中的方法，其中激动剂在适当的载体或稀释剂中以0.1ng每公斤体重的剂量给药。6.如权利要求5中的方法，其中载体或稀释剂选自羧甲基纤维素制剂、类晶体制剂、粘弹体、聚乙二醇和聚丙二醇。7.如权利要求1中的方法，其中激动剂通过伤口包扎形式给药。8.一种加速伤口愈合的组合物，包含适当的载体或稀释剂以及可加速伤口愈合的有效量的至少一种血管紧张素II2型受体激动剂。9.权利要求8中的组合物，其中激动剂具有通式R1-R2-R3-R4-R5-R6-R7-R8其中R1和R2一起构成下列基团X-RA-RB，其中X为H或一至三个肽基团，RA和RB间的肽键易被氨肽酶A断裂；R3选自Val、Ala、Leu、Ile、Gly、Pro、Aib、Acpc和Tyr；R4选自Tyr、Thr、Ser和azaTyr；R5选自Ile、Ala、Leu、Val和Gly；R6为P-NH2-Phe；R7为Pro或Ala；并且R8选自Phe、Phe(Br)、Ile和Tyr。10.如权利要求9中的组合物，其中通式1的化合物为(p-NH2-Phe)6-AII。11.如权利要求8中的组合物，其中激动剂以基质或胶束溶液形式给药。12.如权利要求8中的组合物，其中激动剂在适当的载体或稀释剂中以0.1ng每公斤体重的剂量给药。13.如权利要求12中的组合物，其中载体或稀释剂选自羧甲基纤维素制剂、类晶体制剂、粘弹体、聚乙二醇和聚丙二醇。14.如权利要求8中的组合物，其中激动剂通过伤口包扎形式给药。15.如权利要求9-14中任一项的组合物用于加速伤口愈合。16.至少一种血管紧张素II2型受体激动剂在制备加速伤口愈合的药剂中的应用。17.权利要求8-14中任一项的组合物在制备加速伤口愈合的药剂中的应用。全文摘要血管紧张素Ⅱ2型受体激动剂(AT2受体亚型激动剂)用于加速伤口愈合。这些化合物形成用于加速伤口愈合之组合物的基础,在该组合物中活性药物以可加速伤口愈合的有效量存在。优选的是组合物为基质或胶束溶液形式。文档编号A61K38/08GK1187133SQ96194602公开日1998年7月8日申请日期1996年6月6日优先权日1996年6月6日发明者凯瑟琳·E·罗杰斯,盖尔·斯托德·迪泽雷加申请人:南加利福尼亚大学