专利名称：人血管紧张素Ⅱ/血管升压素受体样基因的制作方法
技术领域：
本发明涉及新鉴定的多核苷酸、由其编码的多肽和这些多核苷酸和多肽的用途及其生产。更具体而言，本发明的多核苷酸和多肽与血管紧张素和/血管升压素受体家族(以下称为CBDAKD01)有关。本发明还涉及抑制或激活这些多核苷酸和多肽的作用。
“CBDAKD01”一般是指具有序列2所示氨基酸序列的多肽或其等位变体。
“CBDAKD01活性或CBDAKD多肽活性”或“CBDAKD01或CBDAKD01多肽生物活性”是指CBDAKD01的代谢或生理功能，包括类似活性或提高的活性或具有较低不希望有的副作用的活性。所述活性还包括CBDAKD01的抗原和免疫原活性。
“CBDAKD01基因”是指具有序列1所示核苷酸序列的多核苷酸或其等位变体和/或其互补物。
“抗体”在本文中包括单克隆和多克隆抗体、嵌合、单链和人源化抗体以及Fab片段，包括Fab或其他免疫球蛋白表达文库的产物。
“分离的”表示“通过人工”改变其天然状态。如果“分离的”组合物或物质在自然界中存在，则它已经从其原始环境改变或取出或者已经取出并改变。例如，在本文中使用该术语时，在活动物体内存在的多核苷酸或多肽不是“分离的”，但已经与天然状态下共存的物质分开的同样多核苷酸或多肽就是“分离的”。
“多核苷酸”一般指聚核糖核苷酸或聚脱氧核糖核苷酸，可以是未修饰或修饰的RNA或DNA。“多核苷酸”包括但不限于单链和双链DNA，单链和双链区混合的DNA，单链和双链RNA，单链和双链区混合的RNA，含有DNA和RNA的杂合分子，可以是单链或更常见为双链或单链和双链区的混合物。此外，“多核苷酸”还指含有RNA或DNA或RNA和DNA的三链区。术语“多核苷酸”也包括含有一个或多个修饰碱基的DNA或RNA，以及为稳定性或其他原因已对骨架进行修饰的DNA或RNA。“修饰”碱基包括例如三苯甲基化碱基和肌苷等稀有碱基。可以对DNA和RNA进行多种修饰，因此，“多核苷酸”包括自然界中常见的多核苷酸的化学、酶促或代谢修饰形式，以及病毒和细胞特征性的DNA和RNA化学形式。“多核苷酸”也包括相对短的、通常被称为寡核苷酸的多核苷酸。
“多肽”指含有通过肽键或修饰的肽键即肽等排物(peptideisosteres)互相连接的两个或多个氨基酸的任何肽或蛋白。“多肽”既包括短链(通常称为肽)的寡肽或寡聚体，也包括长链(通常称为蛋白)。多肽可能含有20种基因编码的氨基酸之外的氨基酸。“多肽”包括通过翻译后加工等天然方法或本领域已知的化学修饰技术修饰的氨基酸序列。这些修饰在基本教科书和专论以及大量研究论文中叙述详尽。修饰可以发生在多肽的任何部位，包括肽骨架、氨基酸侧链和氨基或羧基末端。在给定多肽的不同位点同类修饰可以以相同或不同的程度存在。并且给定多肽可以含有多种类型的修饰。多肽可以由于遍在蛋白化而分支，也可以为分支或不分支的环状。环状、分支和分支环状多肽可能由于翻译后的天然加工或合成方法产生。修饰包括乙酰化、酰化、ADP-核糖基化、酰胺化、黄素的共价辍合、血红素的共价辍合、核苷酸或核苷酸衍生物的共价辍合、脂或脂衍生物的共价辍合、磷脂酰肌醇的共价辍合、交联、环化、二硫键形成、脱甲基化、共价交联的形成、胱氨酸形成、焦谷氨酸形成、甲酰化、γ羧化、糖基化、GPI锚定物形成、羟化、碘化、甲基化、肉豆蔻酰化、氧化、蛋白水解加工、磷酸化、异戊二酰化、外消旋化、硒酰化(selenoylation)、硫酸化、转运RNA介导的氨基酸加入蛋白质，如精氨酰化和遍在蛋白化(可以参见例如《蛋白质结构和分子特性》第2版，T.E.Creighton，W.H.Freeman and Company，New York，1993 and Wold，F.，“翻译后蛋白修饰前景与展望”，1-12页，《蛋白的翻译后共价修饰》B.C.Johnson，Ed.，Academic Press，NewYork，1983；Seifter et al.，“蛋白修饰和非蛋白辅因子的分析”，MethEnzymol (1990)82626-646和Rattan et al.，“蛋白质合成翻译后修饰和老化”，Ann NY Acad Sci(1992)66348-62)。
“变体”指不同于参照多核苷酸或多肽但保留了基本特性的多核苷酸或多肽。一般多核苷酸变体的核苷酸序列与参照多核苷酸不同。变体核苷酸序列的变化可能改变或不改变由参照多核苷酸编码的多肽的氨基酸序列。如下所述，核苷酸改变可能导致参照序列编码的多肽中氨基酸的置换、添加、缺失、融合和截短。一般多肽变体的氨基酸序列与参照多肽不同。通常，差异有限，因此参照多肽和变体的序列在总体上是极其近似的，在许多区域是相同的。变体和参照多肽在氨基酸序列上可以有任何组合形式的一个或多个置换、添加、缺失的区别。置换或插入的氨基酸残基可以是或不是遗传密码编码的氨基酸。多核苷酸或多肽的变体可以是天然存在的，如等位变体，或者是非天然存在的。非天然存在的多核苷酸和多肽变体可以通过诱变技术或直接合成制备。
“同一性”在本领域中已知是通过比较序列确定的两个或多个多肽序列或多核苷酸序列之间的关系。在本领域中，“同一性”也表示通过这些序列链之间的匹配确定的多肽或多核苷酸序列之间的序列相关程度。“同一性”和“相似性”可以通过已知方法方便地计算，包括但不限于以下文献中所述方法《计算分子生物学》，Lesk，A.M.，ed.OxfordUniversity Press，New York，1988；《计算生物学简介和基因组工程》，Smith D.W.，ed.，Academic Press，New York，1993；《序列数据的计算机分析》第1部分，Griffin A.M.，and Griffin H.G.，eds.，Humana Press，NewJersey，1994；《分子生物学中的序列分析》，von Heiinje，G.，Academic Press，1987；《序列分析引物》，Gribskov，M.and Devereux，J.，eds.，M StocktonPress，NeW York，1991；Carillo，H.，and Lipman，D.，SIAM J.Applied Math.，481073(1988)。优选确定同一性的方法被设计成使测试的序列之间匹配最大。而且，确定同一性和相似性的方法已被编成可公开获得的计算机程序。确定两个序列之间的同一性和相似性的优选计算机程序方法包括但不限于GCG程序包(Devereux，J.，et al.，Nucleic Acids Research(1984)12(1)387)，BLASTP，BLASTN，FASTA(Atschul，S.F.et al.，J Molec Biol(1990)215403)。BLAST X程序可从NCBI或其他来源获得(BLAST手册，Altschul，S.，et al.，NCBI NLM NIH Bethesda，MD 20894；Altschul，S.，etal.，J.Mol.Biol.215403-410(1990)。众所周知的Smith Waterman算法也可以用来确定同一性。
多肽序列比较的优选参数包括1)算法Needleman and Wunsch，J.Mol Biol.48443-453(1970)比较矩阵(Comparison matrix)∶BLOSSUM62，来自Hentikoff andHentikoff，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.89∶10915-10919(1992)缺口补偿12缺口长度补偿4可以应用这些参数的一个程序是Genetics Computers Group，Madison WI提供的gap程序。上述参数是肽比较的缺省参数(末端缺口不补偿)。
多核苷酸比较的优选参数包括1)算法Needleman and Wunsch，J.Mol Biol.48443-453(1970)比较矩阵(Comparison matrix)匹配=+10，错配=0缺口补偿50缺口长度补偿3可以使用这些参数的一个程序是Genetics Computers Group，Madison WI提供的gap程序。上述参数是核酸比较的缺省参数。
优选多核苷酸实施方案还包括含有与序列1的多核苷酸参照序列的同一性至少为50、60、70、80、85、90、95、97或100％的分离多核苷酸，其中所述序列可以与序列1的参照序列相同，或者与参照序列相比包括一定数量的核苷酸改变，其中所述改变选自至少一个核苷酸缺失、置换(包括转换和颠换)或插入，其中所述改变可以发生在参照多核苷酸序列的5′或3′末端或两个末端之间的任何位置，分别散在分布在参照序列的核苷酸之间，或者以一个或多个毗连群散在分布在参照序列中。核苷酸改变的数量如下确定序列1中的总核苷酸数乘以相应同一性百分数，然后将其结果从序列1的总核苷酸数中减除，或者nn≤Xn-(Xn·y)其中nn为核苷酸改变数量，xn为序列1的总核苷酸数，y值在50％时为0.50，在60％时为0.60，在70％时为0.70，在80％时为0.80，在85％时为0.85，在90％时为0.90，在95％时为0.95，在97％时为0.97，在100％时为1.00，其中若xn和y的结果不是整数，则将其四舍五入取最近的整数，再从xn中减除。编码序列2多肽的多核苷酸序列的改变会在其编码序列中产生无义、错义或移码突变，因而改变后的多核苷酸编码的多肽发生变化。
优选多肽实施方案还包括含有与序列2的多肽参照序列的同一性至少为50、60、70、80、85、90、95、97或100％的分离多肽，其中所述序列可以与序列2的参照序列相同，或者与参照序列相比包括一定数量的氨基酸改变，其中所述改变可以选自至少一个氨基酸缺失、置换(包括保守和非保守置换)或插入，其中所述改变可以发生在参照多肽序列的氨基或羧基末端或两个末端之间的任何位置，分别散在分布在参照序列的氨基酸之间，或者以一个或多个毗连群散在分布在参照序列中。氨基酸改变的数量如下确定序列2中的总氨基酸数乘以相应同一性百分数，然后将其结果从序列2的总氨基酸数中减除，或者na≤xa-(xa·y)其中na为氨基酸改变数量，xa为序列2的总氨基酸数，y值在50％时为0.50，在60％时为0.60，在70％时为0.70，在80％时为0.80，在85％时为0.85，在90％时为0.90，在95％时为0.95，在97％时为0.97，在100％时为1.00，其中若xa和y的结果不是整数，则将其四舍五入取最近的整数，再从xa中减除。本发明的多肽一方面，本发明涉及CBDAKD01多肽(或CBDAKD01蛋白)。CBDAKD01多肽包括序列2的多肽，以及含有序列2的氨基酸序列的多肽，和含有与序列2全长的同一性至少为80％的氨基酸序列的多肽，优选与序列2的同一性至少为90％，更优选同一性至少为95％。同一性至少为97-99％的序列是高度优选的。CBDAKD01多肽还包括其氨基酸序列与具有序列2氨基酸序列的多肽全长的同一性至少为80％的多肽，优选与序列2的同一性至少为90％，更优选同一性至少为95％。同一性至少为97-99％的序列是高度优选的。优选的CBDAKD01多肽具有至少一种CBDAKD01生物活性。
CBDAKD01多肽可以是“成熟”蛋白的形式，也可以是较大蛋白如融合蛋白的一部分。通常包括附加氨基酸序列较为有利，附加氨基酸序列包括分泌或前导序列，原序列，帮助纯化的序列如聚组氨酸残基，或重组生产过程中有助于稳定的附加序列。
本发明也包括CBDAKD01多肽片段。片段是其氨基酸序列与CBDAKD01多肽的氨基酸序列的一部分完全相同，而不具有CBDAKD01的全部氨基酸序列。同CBDAKD01多肽一样，片段可以是独立的，或作为一部分或一个区域包括在较大的多肽中，优选作为一个单独的连续区域。本发明的多肽片段的代表性实例包括例如大约自氨基酸1-20、21-40、41-60、61-80、81-100和101到CBDAKD01多肽末端的片段。“大约”包括在任一端或两端较具体所述的范围大或小几个、5个、4个、3个、2个或1个氨基酸。
优选的片段包括例如具有CBDAKD01多肽的氨基酸序列的截短的多肽，但缺失了包括氨基末端的一段连续残基或包括羧基末端的一段连续残基，或缺失了两段连续残基，一段包括氨基末端，一段包括羧基末端。还优选其特征在于结构或功能特性的片段，例如包括如下结构的片段α-螺旋和α-螺旋形成区、β-片层和β-片层形成区、转角和转角形成区、卷曲和卷曲形成区、亲水区、疏水区、α两亲区、β两亲区、柔性区、表面形成区、底物结合区和高抗原指数区。其他优选的片段是生物活性片段。生物活性片段是介导CBDAKD01活性的片段，包括具有类似活性或较高活性的片段，或具有较低不希望的活性的片段。还包括在动物尤其是人中具有抗原性或免疫原性的片段。
优选所有这些多肽片段保持了CBDAKD01的生物活性，包括抗原活性。给定序列和片段的变体也是本发明的一部分。优选的变体是参照物中保守氨基酸发生置换的变体，即参照物中的残基被具有类似特性的其他氨基酸置换。典型的这种置换包括Ala，Val，Leu和Ile之间的置换；Ser和Thr之间的置换；酸性残基Asp和Glu之间的置换；Ash和Gln之间的置换；碱性残基Lys和Arg之间的置换；或芳香族残基Phe和Tyr之间的置换。特别优选的是其中置换、缺失或增加几个、5-10个、1-5个或1-2个氨基酸或这些方式的组合的变体。
本发明的CBDAKD01多肽可以通过任何合适的方式制备。这些多肽包括分离的天然存在的多肽，重组生产的多肽，合成生产的多肽，或这些方法组合生产的多肽。制备这些多肽的方法在本领域广为人知。本发明的多核苷酸本发明另一方面涉及CBDAKD01多核苷酸。CBDAKD01多核苷酸包括编码CBDAKD01多肽和片段的分离的多核苷酸以及与其密切相关的多核苷酸。更具体而言，本发明CBDAKD01多核苷酸包括含有序列1的核苷酸序列、编码序列2的CBDAKD01多肽的多核苷酸，和具有序列1的特定序列的多核苷酸。CBDAKD01多核苷酸还包括含有与编码序列2的CBDAKD01多肽的核苷酸序列全长的同一性至少为82％的核苷酸序列的多核苷酸，和含有与序列1全长的同一性至少为82％的核苷酸序列的多核苷酸。优选同一性至少为90％的多核苷酸，尤其优选同一性至少为95％的多核苷酸。同一性至少为97％的多核苷酸是高度优选的，更优选同一性至少为98-99％的多核苷酸，最优选同一性至少为99％的多核苷酸。CBDAKD01多核苷酸还包括其同一性足够使其在用于扩增或用作探针或标记的条件下可以与序列1中的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。本发明还提供了与CBDAKD01多核苷酸互补的多核苷酸。
本发明的CBDAKD01结构上与血管紧张素和/或血管升压素受体家族的其他蛋白相关，表1中编码人CBDAKD01的cDNA测序的结果(序列1)证实了这一点。序列1的cDNA序列含有编码序列2的514氨基酸的多肽的一个开放读框(核苷酸47-1588)。表2的氨基酸序列(序列2)485氨基酸残基与大鼠血管紧张素/血管升压素受体(AII/AVP)(N.Ruiz-Opazo，et al.，Nature，Med.1074-1081，1995)的同一性大约为30％(FASTA)。表1的核苷酸序列(序列1)489核苷酸残基与大鼠血管紧张素/血管升压素受体(AII/AVP)(N.Ruiz-Opazo，et al.，Nature，Med.1074-1081，1995)的同一性大约为57.9％(FASTA)。因此，预期本发明的CBDAKD01多肽和多核苷酸具有与其同源多肽和多核苷酸类似的生物功能/特性，其用途对本领域技术人员来说是显而易见的。
表1a a人CBDAKD01核苷酸序列(序列1)。
表2b b人CBDAKD01氨基酸序列(序列2)。
本发明编码CBDAKD01的多核苷酸可以通过标准克隆和筛选从cDNA文库中获得，该文库使用表达序列标记(EST)分析由来自人脐血细胞的mRNA衍生(Adams，M.K.，et al.，Science(1991)2521651-1656；Adams，M.D.，et al.，Nature，(1992)355632-634；Adams，M.D.，et al.，Nature(1995)377 Supp3-174)。本发明的多核苷酸也可以来自天然来源如基因组DNA文库，或可以使用众所周知的市售技术合成。
编码序列2的CBDAKD01多肽的核苷酸序列可以等同于表1的多肽编码序列(序列1的核苷酸47-1588)，或者可以是由于遗传密码丰余(简并)形成但仍编码序列2的多肽的序列。
当本发明的多核苷酸用于重组生产CBDAKD01多肽时，该多核苷酸可以包括成熟多肽或其片段的编码序列本身；成熟多肽或片段编码序列与其他编码序列框内融合的序列，其他编码序列例如前导或分泌序列、前或原或前原蛋白序列或其他融合多肽部分的编码序列。例如可以编码帮助融合多肽纯化的标记序列。在本发明这一方面的一些优选实施方案中，标记序列是6-组氨酸肽或HA标记，前者以pQE载体提供(Qiagen，Inc.)，有关论述参见Gentz et al.，Proc Natl Acad Sci USA(1989)86821-824。多核苷酸也可以含有非编码的5′或3′序列，如转录、非翻译序列，剪切和聚腺苷酸化信号，核糖体结合位点和稳定mRNA的序列。
进一步优选的实施方案是编码CBDAKD01变体的多核苷酸，所述变体包括表2的CBDAKD01多肽氨基酸序列(序列2)，其中置换、缺失或增加几个、5-10、1-5、1-3、1-2或1个氨基酸残基或是这些方式的组合。
本发明还涉及与上述序列杂交的多核苷酸。本发明尤其涉及在严紧条件下与上述多核苷酸杂交的多核苷酸。在本文中，“严紧条件”表示只有序列之间的同一性至少为80％、优选至少90％、更优选至少95％、最优选97-99％时才能发生杂交。
本发明的多核苷酸与序列1或其片段的核苷酸序列相同或足够相同，因此可以用作cDNA和基因组DNA的杂交探针，以分离编码CBDAKD01的全长cDNA和基因组克隆，也可以分离与CBDAKD01基因具有高序列相似性的其他基因(包括编码除人以外的物种的同源物和直向同源物的基因)的cDNA和基因组克隆。这些杂交技术是本领域技术人员已知的。一般这些核苷酸序列与参照物序列的同一性为80％，优选同一性为90％，更优选同一性为95％。探针一般包括至少15个核苷酸。优选这些探针包括至少30个核苷酸或至少50个核苷酸。特别优选的探针为30到50个核苷酸。
在一个实施方案中，获得编码CBDAKD01多肽的多核苷酸包括除人以外的物种的同源物或直向同源物的方法包括以下步骤用具有序列1或其片段的标记探针在严紧杂交条件下筛选合适的文库；分离含有所述多核苷酸序列的全长cDNA和基因组克隆。因此，另一方面，本发明的CBDAKD01多核苷酸还包括以下核苷酸序列，其核苷酸序列在严紧条件下与序列1的核苷酸序列或其片段杂交。CBDAKD01多肽还包括以下多肽，其氨基酸序列由上述杂交条件下获得的核苷酸序列编码。这些杂交技术为本领域技术人员熟知。严紧杂交条件如上所述，或者换而言之为以下条件在如下溶液中42C温育过夜，然后在约65℃用0.1×SSC洗涤滤膜，所述溶液包括50％甲酰胺，5×SSC(150 mM NaCl，15mM柠檬酸三钠)，50mM磷酸钠(pH7.6)，5×Denhardt溶液，10％葡聚糖硫酸酯和20μg/ml变性剪切的鲑精DNA。
本发明的多核苷酸和多肽可以作为研究试剂和材料，用来寻找动物和人类疾病的治疗和诊断方法。载体、宿主细胞、表达本发明也涉及含有本发明的一个或多个多核苷酸的载体，经遗传工程改造含有本发明载体的宿主细胞，和通过重组技术生产本发明的多肽。利用衍生自本发明DNA构建体的RNA，无细胞翻译系统可用来生产这些蛋白。
为进行重组生产，宿主细胞可以经遗传工程改造含有本发明多核苷酸的表达系统或其部分。将多核苷酸导入宿主细胞可以通过多种标准实验手册中所述的方法实现，所述实验手册如Davis et al.，《分子生物学基本方法》(1986)和Sambrook et al.，《分子克隆实验室手册》第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.(1989)，所述方法包括磷酸钙转染、DEAE-葡聚糖介导的转染、转位、微注射、阳离子脂介导的转染、电穿孔、转导、摩擦转化、粒子轰击或感染。
合适宿主的代表性实例包括细菌细胞，如链球菌、葡萄球菌、大肠杆菌、链霉菌和枯草杆菌细胞；真菌细胞，如酵母细胞和曲霉细胞；昆虫细胞，如果蝇S2和草地夜蛾Sf9细胞；动物细胞，如CHO、COS、HeLa、C127、3T3、BHK、HEK 293和Bowes melanoma细胞；以及植物细胞。
可使用多种表达系统。这些表达系统包括染色体、附加体和病毒衍生的系统等，例如衍生自细菌质粒、细菌噬菌体、转座子、酵母附加体、插入元件、酵母染色体元件、病毒的载体，和衍生自上述元件组合的载体，所述病毒包括杆状病毒、乳多空病毒如SV40、痘苗病毒、腺病毒、禽痘病毒、伪狂犬病毒和逆转录病毒，组合载体如衍生自质粒和细菌噬菌体遗传元件、粘粒和噬菌粒的载体。表达系统可以含有调节和启动表达的控制区。一般来说，任何适于在宿主中维持、增殖或表达多核苷酸的系统或载体均可使用。合适的核苷酸序列可以通过多种已知的常规技术插入到表达系统中，所述技术可参见例如Sambtook et al.，《分子克隆实验室手册》第2版(同上)。
为了翻译的蛋白可以分泌到内质网腔内、周质空间或胞外环境，可以向所需的多肽上加入合适的分泌信号。这些信号可以是多肽内源的，也可以是外源分泌信号。
如果CBDAKD01多肽要表达用于筛选试验，一般优选多肽在细胞表面生成。在这种情况下，细胞可以在用于筛选试验之前收获。如果CBDAKD01多肽分泌到培养基中，可以回收培养基以回收和纯化多肽；如果在细胞内生成，细胞首先要裂解，然后回收多肽。CBDAKD01多肽可以通过已知方法从重组细胞培养物中回收和纯化，所述方法包括硫酸铵或乙醇沉淀，酸抽提，阴离子或阳离子交换色谱，磷酸纤维素色谱，疏水相互作用色谱，亲和色谱，羟基磷灰石色谱和凝集素色谱。最优选高效液相色谱用于纯化。如果多肽在分离或纯化过程中变性，已知的重折叠蛋白的方法可用于恢复活性构象。诊断试验本发明还涉及CBDAKD01多肽作为诊断试剂的应用。检测与功能障碍相关的CBDAKD01基因突变形式可以提供一种诊断工具，这可以增加或限定一种由于CBDAKD01的表达不足、表达过量或表达异常产生的疾病或疾病易感性的诊断。CBDAKD01基因中携带突变的个体可以通过多种技术在DNA水平上检测出来。
诊断核酸可以获自受试者细胞，如血、尿、唾液、组织活检样品或尸检材料。基因组DNA可以直接用来检测，或在分析之前使用PCR或其他扩增技术酶促扩增。RNA或cDNA可以类似方式使用。缺失和插入可以通过与正常基因型相比扩增产物的大小变化检测。点突变可以通过将扩增DNA与标记的CBDAKD01核苷酸序列杂交来鉴别。完全匹配的序列可以通过RNA酶消化或融解温度上的差异与错配双链区分。DNA序列差异也可以通过DNA片段在加入或不加变性剂的凝胶上的电泳迁移率或直接DNA测序来检测。可参见例如Myers et al.，Science(1985)2301242。在特定位置的序列变化也可以通过核酸酶保护试验如RNA酶和S1保护法或化学切割法来显示。可参见Cotton et al.，PNAS USA(1985)854397-4401。在另一个实施方案中，可以构建含有CBDAKD01核苷酸序列或其片段的寡核苷酸探针阵列(array)，以便进行例如基因突变的有效筛选。阵列技术方法广为人知，适用性广泛，可用来解决分子遗传学中的多种问题，包括基因表达，遗传连锁和遗传变异性。(参见例如M.Chee et al.，Science，Vol.274，pp610-613(1996)。
诊断试验通过利用上述方法检测CBDAKD01基因的突变，提供了诊断或确定对高血压、心脏病、癌症和肾病的易感性的方法。
此外，高血压、心脏病、癌症和肾病可以通过以下方法诊断确定来自受试者样品中的CBDAKD01多肽或CBDAKD01 mRNA的水平异常降低或增加。表达降低或增加可以使用核苷酸定量领域已知的任何方法在RNA水平上确定，所述方法例如PCR、RT-PCR、RNA酶保护、RNA印迹和其他杂交方法。可用于确定来自宿主的样品中的蛋白水平如CBDAKD01多肽水平的试验技术为本领域技术人员所熟知。这些试验方法包括放射免疫试验、竞争结合试验、蛋白印迹分析和ELISA试验。
因此，另一方面，本发明涉及确定疾病或疾病易感性的诊断药盒，所述疾病特别是高血压、心脏病、癌症和肾病，所述药盒包括(a)CBDAKD01多核苷酸，优选序列1的核苷酸序列，或其片段；(b)与(a)中核苷酸互补的核苷酸序列；(c)CBDAKD01多肽，优选序列2的多肽，或其片段；(d)CBDAKD01多肽的抗体，优选序列2的多肽的抗体。应当理解，在这种药盒中，(a)，(b)，(c)或(d)可以包括一种主要成分(substantial component)。染色体试验本发明的核苷酸序列对染色体鉴定也有价值。该序列可以特异靶向一个个体染色体上的特定位置并可与其杂交。根据本发明染色体相关序列的作图是将这些序列与疾病相关的基因联系起来的重要的第一步。一旦序列已经被定位在具体的染色体位置，该序列在染色体上的物理位置可以与遗传图谱数据联系起来。这些数据可参见例如V.McKusick，《人类的孟德尔遗传》(由Johns Hopkins University Welch Medical Library在线获得)。定位在同一染色体区域的基因和疾病之间的关系可以通过连锁分析(物理相邻基因的共遗传)确定。
受影响和正常个体中cDNA或基因组序列的差异也可以确定。如果在某些或全部受影响个体中观察到某一突变，而在正常个体中未观察到该突变，则该突变可能是疾病的病因。CBDAKD01基因已经被定位在X染色体上的q21.3。抗体本发明的多肽或其片段或类似物或表达它们的细胞也可用作免疫原，生成对CBDAKD01多肽免疫特异性的抗体。“免疫特异性的”在本领域中表示对本发明多肽的亲和力明显大于对本领域其他相关多肽的亲和力。
针对CBDAKD01多肽的抗体可以通过常规方法向动物优选非人类的动物给药多肽或含表位片段、类似物或细胞获得。为了制备单克隆抗体，可以使用提供连续细胞系培养物生成的抗体的任何技术。实例包括杂交瘤技术(Kohler，G.and Milstein，C.，Nature(1975)256495-497)，三瘤(trioma)技术、人B细胞杂交瘤技术(Kozbor et al.，Immunology Today(1983)472)和EBV杂交瘤技术(Cole etal.，《单克隆抗体和癌症治疗》，pp77-96，Alan R.Liss，Inc.，1985)。
生产单链抗体的技术(美国专利4，946，778)也可以改进后用来生产本发明多肽的单链抗体。转基因小鼠或其他有机体包括其他哺乳动物也可以用来表达人源化抗体。
上述抗体也可以用来分离或鉴定表达所述多肽的克隆或纯化亲和色谱技术制备的多肽。
抗CBDAKD01多肽的抗体也可以用来治疗高血压、心脏病、癌症和肾病等。疫苗本发明的其他方面涉及在哺乳动物中诱导免疫应答的方法，包括用CBDAKD01多肽或其合适的片段免疫接种哺乳动物，产生抗体和/或T细胞应答，从而保护该动物免于高血压、心脏病、癌症和肾病等疾病。本发明的其他方面也涉及在哺乳动物中诱导免疫应答的方法，包括给药指导CBDAKD01多肽体内表达的载体来给药CBDAKD01多肽，以便诱导免疫应答，生成抗体保护动物免于疾病。
本发明的其他方面涉及免疫原/疫苗制剂(组合物)，将其引入哺乳动物宿主时，可诱导针对CBDAKD01多肽的免疫应答，其中该组合物含有CBDAKD01多肽或CBDAKD01基因。该疫苗制剂还可以含有合适的载体。因为CBDAKD01多肽在胃中可以被降解，优选通过肠胃外途径给药(包括皮下、肌肉、静脉内、皮内等注射)。适合胃肠外给药的制剂包括含水和不含水的无菌注射液，其中可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与受者血液等渗的溶质；含水和不含水的无菌悬浮液，其中可以含有悬浮剂或增稠剂。该制剂可以是单剂或多剂容器形式，例如密封安瓿和小瓶，也可以保存在冻干条件下，只需在使用前加入无菌液体载体即可。疫苗制剂也可以含有增强制剂免疫原性的佐剂系统，如水包油系统或本领域已知的其他系统。剂量取决于疫苗的比活性，可以通过常规试验方便地确定。筛选试验本发明的CBDAKD01多肽可以用于筛选激活(激动剂)或抑制(拮抗剂或称为抑制剂)本发明的CBDAKD01多肽激活的化合物的方法中。因此本发明的多肽也可以用来从细胞、无细胞制备物、化学文库和天然产品混合物中评价鉴定激动剂或拮抗剂。这些激动剂或拮抗剂可以是本发明多肽的天然或修饰的底物、配体、受体、酶等；或者是本发明多肽的结构或功能模拟物。可参见Coligan et al.，Current Protocol inImmunology 1(2)Chapter 5(1991)。
CBDAKD01多肽具有多种生理功能，包括多种病理效应。因此，有必要寻找刺激CBDAKD01多肽或抑制CBDAKD01多肽功能的化合物和药物。一般，激动剂可以用于高血压、心脏病、癌症和肾病等疾病的治疗和预防目的。拮抗剂可用于高血压、心脏病、癌症和肾病等疾病的多种治疗和预防目的。
一般，这些筛选方法包括使用表达CBDAKD01多肽或对本发明的CBDAKD01多肽有反应的合适细胞。这些细胞包括来自哺乳动物、酵母、果蝇或大肠杆菌的细胞。将表达CBDAKD01多肽的细胞(或含有表达多肽的细胞膜)或对CBDAKD01多肽有反应的细胞与待测化合物接触，观察结合或功能反应的刺激或抑制。比较接触过候选化合物的细胞与未接触过候选化合物的相同细胞的CBDAKD01活性的能力。
该试验可以简单地测试候选化合物的结合，其中与具有CBDAKD01多肽的细胞的粘附通过直接或间接与候选化合物结合的标记检测，或通过包括与标记竞争物竞争的试验检测。并且，这些试验可以测试候选化合物是否会产生CBDAKD01多肽激活产生的信号，使用适合于具有CBDAKD01多肽的细胞的检测系统。激活抑制剂通常在已知激动剂存在时试验，观察候选化合物存在对激动剂激活的影向。
另外，该试验可以简单地包括以下步骤混合候选化合物与含有CBDAKD01多肽的溶液，形成混合物，测定混合物中CBDAKD01活性，比较混合物与标准品的CBDAKD01活性。
CBDAKD01 cDNA，蛋白和蛋白的抗体也可以用来设计检测加入的化合物对细胞中CBDAKD01 mRNA和蛋白生成的影响的试验。例如，可以设计ELISA，通过本领域已知的标准方法使用单克隆和多克隆抗体来测定分泌或细胞结合的CBDAKD01蛋白水平，这可以用来从合适的工程改造的细胞或组织中寻找可以抑制或增加CBDAKD01生成的物质(也可以分别称为拮抗剂或激动剂)。
CBDAKD01蛋白可以用来鉴定存在的膜结合或可溶受体，使用本领域已知的标准受体结合技术。这些包括但不限于配体结合和交联试验，其中CBDAKD01用放射性同位素(125I)标记，化学修饰(如生物素化)，或与适合检测或纯化的肽序列融合，与推测的受体源(细胞、细胞膜、细胞上清、组织提取物、体液)温育。其他方法包括生物物理技术，如表面胞质共振和分光术。除了用来纯化和克隆受体之外，这些结合试验也可以用来鉴定CBDAKD01激动剂和拮抗剂，它们与CBDAKD01对存在的受体的结合竞争。进行筛选试验的标准方法在本领域是众所周知的。
可能的CBDAKD01多肽拮抗剂的实例包括CBDAKD01多肽的抗体，或者在某些情况下为与CBDAKD01多肽的配体、底物、受体、酶等密切相关的寡核苷酸或蛋白，例如配体、底物、受体、酶等的片段；或者为与本发明的多肽结合但不引发应答的小分子，从而抑制多肽的活性。
因此，本发明另一方面涉及一种筛选药盒，用来鉴定CBDAKD01多肽的激动剂、拮抗剂、配体、受体、底物、酶等；或者是降低或增加CBDAKD01多肽生成的化合物，该药盒包括(a)CBDAKD01多肽，优选序列2的多肽；(b)表达CBDAKD01多肽优选序列2的多肽的重组细胞；(c)表达CBDAKD01多肽优选序列2的多肽的细胞膜；(d)CBDAKD01多肽的抗体，优选序列2的多肽的抗体。应当理解，在这种药盒中，(a)，(b)，(c)或(d)可以包括一种主要成分。预防和治疗方法本发明提供了与CBDAKD01多肽活性过高或过低有关的疾病的治疗方法，所述疾病如高血压、心脏病、癌症和肾病等。
如果CBDAKD01多肽活性过高，可以有几种方法。一种方法包括向受试者给药上述抑制剂化合物(拮抗剂)和可药用载体，其用量可以抑制CBDAKD01多肽的功能，例如通过阻断配体、底物、受体、酶等的结合，或通过抑制第二信号，从而缓解异常症状。另一种方法中给药能够与内源CBDAKD01多肽竞争结合配体、底物、酶、受体等的可溶形式的CBDAKD01多肽。这种竞争物的典型实例包括CBDAKD01多肽的片段。
在另一种方法中，可以使用表达阻断技术抑制编码内源CBDAKD01多肽的基因的表达。已知的这种技术包括使用反义序列，可以是内部产生的或单独给药。可以参见例如O′Connor，J Neurochem(1991)56560，《基因表达反义抑制剂的寡脱氧核苷酸》CRC Press，Boca Raton，FL(1988)。或者可以使用与基因形成三螺旋的寡核苷酸。参见例如Lee，et al.，Nucleic Acid Res(1979)63073；Cooney et al.，Science(1988)241456；Dervan et al.，Scicence(1991)2511360。可以给药这些寡聚体或在体内表达有关寡聚体。
为了治疗CBDAKD01和其活性表达不足的异常症状，有几种方法可以使用。一种方法包括向受试者给药治疗有效量的激活CBDAKD01多肽的化合物，即上述激动剂，结合给药可药用的载体，从而缓解异常症状。或者，可以使用基因治疗来实现受试者相关细胞内源生产CBDAKD01。例如，本发明的多核苷酸可以如上述经工程改造用复制缺陷型逆转录病毒载体表达。然后分离逆转录病毒表达构建体并导入用逆转录病毒质粒载体转导的包装细胞中，载体中含有编码本发明多肽的RNA，因而包装细胞可以生产含有目的基因的感染性病毒粒子。可以向受试者给药这些生产细胞，以便体内改造细胞并在体内表达多肽。基因治疗的有关论述可参见第20章，“基因治疗和其他基于分子遗传学的治疗方法(及其中的参考文献)，《人类分子遗传学》，T Strachan and A P Read，BIOSScientific Publishers Ltd(1996)。另一种方法是给药治疗有效量的CBDAKD01多肽，结合给药合适的药用载体。制剂和给药CBDAKD01多肽的可溶形式等肽和肽或小分子的激动剂和拮抗剂可以与合适的药用载体组合配方。这些制剂包括治疗有效量的多肽或化合物和可药用载体或赋形剂。这些载体包括但不限于盐水、缓冲盐水、葡萄糖、水、甘油、乙醇和其组合。制剂应当适合给药方式，这是本领域技术人员熟知的。本发明还涉及药包和药盒，其中包括一个或多个容器，装有一种或多种本发明的上述组合物成分。
本发明的多肽和其他化合物可以单独使用，或与其他化合物如治疗化合物联合使用。
药用组合物的优选全身给药方式包括注射，一般是静脉内注射。也可使用其他注射途径如皮下、肌肉、或腹膜内途径。全身给药的其他方法包括使用胆酸盐或梭链孢酸或其他表面活性剂等渗透剂经粘膜、经皮给药。此外，如果配制成肠道或胶囊剂，也可以口服给药。这些化合物也可以以软膏、糊剂、凝胶等形式表面和/或局部给药。
所需剂量范围取决于肽的选择、给药途径、制剂性质、受试者症状的性质和主治医师的判断。合适的剂量范围为0.1到100μg/kg。鉴于可以获得的化合物有多种，不同的给药途径有不同的效果，所需剂量的变化范围很大是可以预见的。例如，预期口服给药较静脉注射所需剂量大。这些剂量水平的变化可以使用用来优化的标准实验方法调整，这在本领域是众所周知的。
治疗用多肽也可以在受试者体内内源产生，这种治疗形式通常称为“基因治疗”。因此，例如来自受试者的细胞可以用多核苷酸如编码来自体内的多肽的DNA或RNA，利用逆转录病毒质粒载体工程改造。然后将这些细胞引入受试者体内。
本说明书中所引用的所有出版物，包括但不限于专利和专利申请，全部引作参考，如同每一出版物单独和个别地指明引作参考一样。
序列表(1)一般信息(ⅰ)申请人张庆华、沈宇、茅矛、顾柏炜(ⅱ)发明名称人血管紧张素Ⅱ/血管升压素受体(AII/AVP)样基因(CBDAKD01)(ⅲ)序列数2(ⅳ)通讯地址(A)联系人Ratner & Prestia(B)街道P.O.Box 980(C)城市Valley Forge(D)州PA(E)国家USA(F)邮政编码19482(ⅴ)计算机可读形式(A)介质类型软盘(B)计算机IBM兼容(C)操作系统DOS(D)软件FastSEQ for Windows Version 2.0(ⅵ)当前申请数据(A)申请号(B)申请日(C)分类(ⅶ)在先申请数据(A)申请号(B)申请日(ⅷ)律师/代理人信息(A)姓名Prestia，Paul F(B)登记号23，031
(C)参考/案卷号GP-70382(ⅸ)电讯信息(A)电话610/407-0700(B)传真610/407-0701(C)电传846169(2)序列1信息(ⅰ)序列特征(A)长度2218碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列表述序列1CAGGGCAGCC TTCAGTCTGA TTCAGGAGAA CGAGGTCCTC TTCACCATGT GCTTCATCCC 60CCTGGTCTGC TGGATCGTGT GCACTGGACT GAAACAGCAG ATGGAGAGTG GCAAGAGCCT 120TGCCCAGACA TCCAAGACCT CCACCGCGGT GTACGTCTTC TTCCTTTCCA GTTTGCTGCA 180GCCCCGGGGA GGGAGCCAGG AGCACGGCCT CTGCGCCCAC CTCTGGGGGC TCTGCTCTTT 240GGCTGCAGAT GGAATCTGGA ACCAGAAAAT CCTGTTTGAA GAGTCCGACC TCAGGAATCA 300TGGACTGCAG AAGGCGGATG TGTCTGCTTT CCTGAGGATG AACCTGTTCC AAAAGGAAGT 360GGACTGCGAG AAGTTCTACA GCTTCATCCA CATGACTTTC CAGGAGTTCT TTGCCGCCAT 420GTACTACCTG CTGGAAGAGG AAAAGGAAGG AAGGACGAAC GTTCCAGGGA GTCGTTTGAA 480GCTTCCCAGC CGAGACGTGA CAGTCCTTCT GGAAAACTAT GGCAAATTCG AAAAGGGGTA 540TTTGATTTTT GTTGTACGTT TCCTCTTTGG CCTGGTAAAC CAGGAGAGGA CCTCCTACTT 600GGAGAAGAAA TTAAGTTGCA TGATCTCTCA GCAAATCAGG CTGGAGCTGC TGAAATGGAT 660TGAAGTGAAA GCCAA GCTA AAAAGCTGCA TGATCAGCCC AGCCAGCTGG AATTGTTCTA 720CTGTTTGTAC GAGATGCAGG AGGAGGACTT CGTGCAAAGG GCCATGGACT ATTTCCCCAA 780GATTGAGATC AATCTCTCCA CCAGAATGGA CCACATGGTT TCCTCCTTTT GCATTGAGAA 840CTGTCATCGG GTGGAGTCAC TGTCCCTGGG GTTTCTCCAT AACATGCCCA AGGAGGAAGA 900GGAGGAGGAA AAGGAAGGCC GACACCTTGA TATGGTGCAG TGTGTCCTCC CAAGCTCCTC 960TCATGCTGCC TGTTCTCATG GGTTGGGGCG CTGTGGCCTC TCCCATGAGT GCTGCTTCGA 1020CATCTCCTTG GTCCTCAGCA GCAACCAGAA GCTGGTGGAG CTGGACCTGA GTGACAACGC 1080CCTCGGTGAC TTCGGAATCA GACTTCTGTG TGTGGGACTG AAGCACCTGT TGTGCAATCT 1140GAAGAAGCTC TGGTTGGTGA ATTCTGCCTT ACGTCAGTCT GTTGTTCAGC TTTGTCCTCG 1200GTACTCAGCA CTAATCAGAA TCTCACGCAC CTTTACTGCG AGGCAACACT CTCGGAGACA 1260AGGGATCAAA CTACTCTGTG AGGGACTCTT GCACCCCGAC TGcAAGCTTC AGGTGTTGGA 1320ATTAGACAAC TGCAACCTCA CGTCACACTG CTGCTGGGAT CTTTCCACAC TTCTGACCTC 1380CAGCCAGAGC CTGCGAAAGC TGAGCCTGGG CAACAATGAC CTGGGCGACC TGGGGGTCAT 1440GATGTTCTGT GAAGTGCTGA AACAGCAGAG CTGCCTCCTG CAGAACCTGG GGTTGTCTGA 1500AATGTATTTC AATTATGAGA CAAAAAGTGC GTTAGAAACA CTTCAAGAAG AAAAGCCTGA 1560GCTGACCGTC GTCTTTGAGC CTTCTTGGTA GGAGTGGAAA CGGGGCTGCC AGACGCCAGT 1620GTTCTCCGGT CCCTCCAGCT GGGGGCCCTC AGGTGGAGAG AGCTGCGATC CATCCAGGCC 1680AAGACCACAG CTCTGTGATC CTTCCGGTGG AGTGTCGGAG AAGAGAGCTT GCCGACGATG 1740CCTTCCTGTG CAGAGCTTGG GCATCTCCTT TACGCCAGGG TGAGGAAGAC ACCAGGACAA 1800TGACAGCATC GGGTGTTGTT GTCATCACAG CGCCTCAGTT AGAGGATGTT CCTCTGGTGA 1860CCTCATGTAA TTAGCTCATT CAATAAAGCA CTTTCTTTAT TTTTCTCTTC TCTGTCTAAC 1920CTTCTTTTTC CTATCTTTTT TTCTTCTTTG TTCTGTTTAC TTTTGCTCAT ATCATCATTC 1980CCGCTATCTT TCTATTAACT GACCATAACA CAGAACTAGT TGACTATATA TTATGTTGAA 2040ATTTTATGGC AGCTATTTAT TTATTTAAAT TTTTTGTAAT AGTTTTGTTT TCTAATAAGA 2100AAAATCCATG CTTTTTGTAG CTGGTTGAAA ATTCAGGAAT ATGTAAAACT TTTTGGTATT 2160TAATTAAATT GATTCCTTTT CTTAATTTTA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAA2218(2)序列2信息(ⅰ)序列特征(A)长度514氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列表述序列2Met Cys Phe Ile Pro Leu Val Cys Trp Ile Val Cys Thr Gly Leu Lys1 5 10 15Gln Gln Met Glu Ser Gly Lys Ser Leu Ala Gln Thr Ser Lys Thr Ser20 25 30Thr Ala Val Tyr Val Phe Phe Leu Ser Ser Leu Leu Gln Pro Arg Gly35 40 45Gly Ser Gln Glu His Gly Leu Cys Ala His Leu Trp Gly Leu Cys Ser50 55 60Leu Ala Ala Asp Gly Ile Trp Asn Gln Lys Ile Leu Phe Glu Glu Ser65 70 75 80Asp Leu Arg Asn His Gly Leu Gln Lys Ala Asp Val Ser Ala Phe Leu85 90 95Arg Met Asn Leu Phe Gln Lys Glu Val Asp Cys Glu Lys Phe Tyr Ser100 105 110Phe Ile His Met Thr Phe Gln Glu Phe Phe Ala Ala Met Tyr Tyr Leu115 120 125Leu Glu Glu Glu Lys Glu Gly Arg Thr Asn Val Pro Gly Ser Arg Leu130 135 140Lys Leu Pro Ser Arg Asp Val Thr Val Leu Leu Glu Asn Tyr Gly Lys145 150 155 160Phe Glu Lys Gly Tyr Leu Ile Phe Val Val Arg Phe Leu Phe Gly Leu165 170 175 Val Asn Gln Glu Arg Thr Ser Tyr Leu Glu Lys Lys Leu Ser Cys Met180 185 190Ile Ser Gln Gln Ile Arg Leu Glu Leu Leu Lys Trp Ile Glu Val Lys195 200 205Ala Lys Ala Lys Lys Leu His Asp Gln Pro Ser Gln Leu Glu Leu Phe210 215 220Tyr Cys Leu Tyr Glu Met Gln Glu Glu Asp Phe Val Gln Arg Ala Met225 230 235 240Asp Tyr Phe Pro Lys Ile Glu Ile Asn Leu Ser Thr Arg Met Asp His245 250 255Met Val Ser Ser Phe Cys Ile Glu Asn Cys His Arg Val Glu Ser Leu260 265 270Ser Leu Gly Phe Leu His Asn Met Pro Lys Glu Glu Glu Glu Glu Glu275 280 285Lys Glu Gly Arg His Leu Asp Met Val Gln Cys Val Leu Pro Ser Ser290 295 300Ser His Ala Ala Cys Ser His Gly Leu Gly Arg Cys Gly Leu Ser His305 310 315 320Glu Cys Cys Phe Asp Ile Ser Leu Val Leu Ser Ser Asn Gln Lys Leu325 330 335Val Glu Leu Asp Leu Ser Asp Asn Ala Leu Gly Asp Phe Gly Ile Arg340 345 350Leu Leu Cys Val Gly Leu Lys His Leu Leu Cys Asn Leu Lys Lys Leu355 360 365Trp Leu Val Asn Ser Ala Leu Arg Gln Ser Val Val Gln Leu Cys Pro370 375 380Arg Tyr Ser Ala Leu Ile Arg Ile Ser Arg Thr Phe Thr A la Arg Gln385 390 395 400His Ser Arg Arg Gln Gly Ile Lys Leu Leu Cys Glu Gly Leu Leu His405 410 415Pro Asp Cys Lys Leu Gln Val Leu Glu Leu Asp Asn Cys Asn Leu Thr420 425 430Ser His Cys Cys Trp Asp Leu Ser Thr Leu Leu Thr Ser Ser Gln Ser435 440 445Leu Arg Lys Leu Ser Leu Gly Asn Asn Asp Leu Gly Asp Leu Gly Val450 455 460Met Met Phe Cys Glu Val Leu Lys Gln Gln Ser Cys Leu Leu Gln Asn465 470 475 480Leu Gly Leu Ser Glu Met Tyr Phe Asn Tyr Glu Thr Lys Ser Ala Leu485 490 495Glu Thr Leu Gln Glu Glu Lys Pro Glu Leu Thr Val Val Phe Glu Pro500 505 510Ser Trp
权利要求
1．分离的多核苷酸，含有与编码序列2的CBDAKD01多肽的核苷酸序列全长的同一性至少为80％的核苷酸序列；或者所述分离多核苷酸的互补核苷酸序列。
2．权利要求1的多核苷酸，其中所述多核苷酸包括编码序列2的CBDAKD01多肽的序列1的核苷酸序列。
3．权利要求1的多核苷酸，其中所述多核苷酸包括与序列1的核苷酸序列全长的同一性至少为80％的核苷酸序列。
4．权利要求3的多核苷酸，其为序列1的多核苷酸。
5．权利要求1的多核苷酸，其为DNA或RNA。
6．含有一种表达系统的DNA或RNA分子，其中所述表达系统在相容宿主细胞中能够生产CBDAKD01多肽，其氨基酸序列与序列2的多肽的同一性至少为80％。
7．含有权利要求6的表达系统的宿主细胞。
8．生产CBDAKD01多肽的方法，包括在可以产生所述多肽的条件下培养权利要求7的宿主，由培养物中回收多肽。
9．制备产生CBDAKD01多肽的细胞的方法，包括用权利要求6的表达系统转化或转染宿主细胞，使宿主细胞在合适的培养条件下能产生CBDAKD01多肽。
10．CBDAKD01多肽，含有与序列2的氨基酸序列全长的同一性至少为80％的氨基酸序列。
11．权利要求10的多肽，其包括序列2的氨基酸序列。
12．权利要求10的CBDAKD01多肽的免疫特异性抗体。
13．治疗需要增加权利要求10的CBDAKD01多肽的活性或表达的受试者的方法，包括(a)向受试者给药治疗有效量的所述多肽的激动剂；和/或(b)向受试者提供分离的多核苷酸，其核苷酸序列与序列2的CBDAKD01多肽的编码核苷酸序列全长的同一性至少为80％；或者其核苷酸序列与上述核苷酸序列互补，多核苷酸的形式可以实现所述多肽活性的体内表达。
14．治疗需要抑制权利要求10的CBDAKD01多肽的活性或表达的受试者的方法，包括(a)向受试者给药治疗有效量的所述多肽的拮抗剂；和/或(b)向受试者给药抑制所述多肽的编码核苷酸序列表达的核酸分子；和/或(c)向受试者给药治疗有效量的与所述多肽竞争其配体、底物或受体的多肽。
15．诊断受试者中与权利要求10的CBDAKD01多肽的表达或活性有关的疾病或疾病的易感性的方法，包括(a)确定所述受试者基因组中所述CBDAKD01多肽的编码核苷酸序列中是否存在突变；和/或(b)分析来自受试者的样品中是否存在CBDAKD01多肽的表达或其表达量。
16．鉴定抑制(拮抗)或激活权利要求10的CBDAKD01多肽的化合物的方法，包括(a)将候选化合物与表达CBDAKD01多肽的细胞(或表达CBDAKD01多肽的细胞膜)或对CBDAKD01多肽有反应的细胞接触；和(b)观察结合或功能反应的刺激或抑制；或比较接触过候选化合物的细胞(或细胞膜)与未接触过候选化合物的相同细胞的CBDAKD01多肽活性的能力。
17．权利要求16的方法鉴定的激动剂。
18．权利要求16的方法鉴定的拮抗剂。
19．权利要求9的方法制备的重组宿主细胞或表达CBDAKD01多肽的其细胞膜。
全文摘要
本发明公开了CBDAKD01多肽和多核苷酸以及通过重组技术生产该多肽的方法。本发明还公开了在设计治疗高血压、心脏病、癌症和肾病等疾病的方法和诊断试验中利用CBDAKD01多肽和多核苷酸的方法。
文档编号A61K39/00GK1286698SQ98813892
公开日2001年3月7日 申请日期1998年3月12日 优先权日1998年3月12日
发明者张庆华, 沈宇, 茅矛, 顾柏炜 申请人:上海第二医科大学