有如上所述的本发明的诺如病毒VLP或其它诺如病 毒抗原，其处于能够对脊椎动物施用并诱导保护性免疫应答的形式，该保护性免疫应答足 以诱导免疫力来预防和/或改善感染和/或减轻感染的至少一种症状和/或增强另一剂 VLP或抗原的功效。如本文中所使用的，术语"抗原性配制剂"或"抗原性组合物"指在对脊 椎动物（例如哺乳动物）施用时会诱导免疫应答的制备物。如本文中所使用的，术语"免疫 应答"指体液免疫应答和由细胞介导的免疫应答二者。体液免疫应答牵涉对B淋巴细胞生 成抗体的刺激，该抗体例如中和传染剂、阻断传染剂进入细胞、阻断所述传染剂的复制、和/ 或保护宿主细胞免于感染和破坏。由细胞介导的免疫应答指由脊椎动物（例如人）展现的， 针对传染剂的，由T淋巴细胞和/或其它细胞（诸如巨噬细胞）介导的免疫应答，其预防或 改善感染或减轻其至少一种症状。具体而言，"保护性免疫"或"保护性免疫应答"指由脊椎 动物（例如人）展现的，针对传染剂的免疫力或针对传染剂引发免疫应答，其预防或改善感 染或减轻其至少一种症状。具体而言，自疫苗的施用诱导保护性免疫应答表现为消除或降 低胃肠炎的一种或多种症状的存在或此类症状的持续时间或严重程度的降低。由诺如病毒 引起的胃肠炎的临床症状包括恶心、腹泻、稀粪、呕吐、发烧、和全身不舒服。降低或消除疾 病症状的保护性免疫应答会降低或终止诺如病毒爆发在人群中的传播。疫苗制备物一般性 记载于 Vaccine Design ("The subunit and adjuvant approach"（Powell M. F.和 Newman M. J?编）（1995) Plenum Press New York)。本发明的组合物可配制用于例如投递至口、胃 肠、和呼吸（例如鼻）粘膜中一项或多项。
[0082] 在意图将组合物投递至呼吸（例如鼻）粘膜的情况中，通常将它配制成水溶液 (用于作为气雾剂或滴鼻剂施用）或干粉（例如用于在鼻道内快速沉积）。用于作为滴鼻 剂施用的组合物可含有一种或多种通常包括在此类组合物中的赋形剂类型，例如防腐剂、 粘度调节剂、张度调节剂、缓冲剂、等等。粘度剂可以是微晶纤维素、壳聚糖、淀粉、多糖、等 等。用于作为干粉施用的组合物还可含有一种或多种通常包括在此类组合物中的赋形剂， 例如粘膜粘着剂、填充剂、和提供适宜粉末流动和大小特征的药剂。填充剂和粉末流动和大 小剂可包括甘露醇、蔗糖、海藻糖、和木糖醇。
[0083] 在一个实施方案中，本发明的诺如病毒疫苗或抗原性配制剂含有一种或多种诺如 病毒基因小组抗原（作为免疫原）、佐剂（诸如MPL? )、用于促进对粘膜表面的粘着的生 物聚合物（诸如壳聚糖）、和填充剂（诸如甘露醇和蔗糖）。例如，诺如病毒疫苗可配制成含 有一种或多种诺如病毒基因小组抗原（例如诺沃克病毒、休斯顿病毒、雪山病毒）、MPL? 佐剂、壳聚糖粘膜粘着剂、和甘露醇和蔗糖（作为填充剂和提供适当的流动特征）的IOmg 干粉。配制剂可包含约7. Omg壳聚糖（25-90% w/w范围）、约I. 5mg甘露醇（0-50% w/w范 围）、约 I. 5mg 鹿糖（0-50% w/w 范围）、约 25 y g MPL? (〇? 1-5% w/w 范围）、和约 100 y g 诺如病毒抗原（0. 05-5% w/w范围）。
[0084] 诺如病毒抗原可以以约0? 01% (w/w)至约80% (w/w)的浓度存在。在一个实施 方案中，可以以约5 yg、约15 yg、约25 yg、约50 yg、约100 yg、约200 yg、约500 yg、和约 111^每1011^干粉配制剂（0.05、0.15、0.25、0.5、1.0、2.0、5.0、和10.0%￥/^)(用于施用入 两个鼻孔，每个鼻孔IOmg)或约10 y g、约30 y g、约50 y g、约100 y g、约200 y g、约400 y g、 约111^、和约211^(0.1、0.3、0.5、1.0、2.0、4.0、10.0和20.0%￥/^)每2011^干粉配制剂（用 于施用入一个鼻孔）的剂量配制诺如病毒抗原。在每次施用期间可以在一个或两个鼻孔中 给予配制剂。第一次施用后1-12周可以有强化施用以改善免疫应答。疫苗和抗原性配制 剂中每种诺如病毒抗原的含量可以是I Ug至IOOmg的范围，优选I-1000 yg的范围，更优 选5-500 yg，最通常的是10-200 yg的范围。每剂施用的总诺如病毒抗原可以是约10 yg、 约30 yg、约200 yg、约250 yg、约400 yg、约500 yg、或约1000 yg。可以将总疫苗剂量施 用入一个鼻孔中，或者可以对半拆分，施用至两个鼻孔。干粉特征是这样的，即少于10%的 颗粒的直径小余10 um。粒度均值的范围为直径10-500 ym。
[0085] 在另一个实施方案中，抗原性和疫苗组合物可配制成液体，供随后对受试者施用 用。意图用于鼻内施用的液体配制剂会包含诺如病毒基因小组抗原、佐剂、和投递剂诸如壳 聚糖。用于肌肉内（i.m.)施用的液体配制剂会包含诺如病毒基因小组抗原、佐剂、和缓冲 剂，没有投递剂（例如壳聚糖）。
[0086] 优选的是，上文所述抗原性和疫苗组合物是冻干和无水保存的，直至它们准备使 用，那时用稀释剂重建它们。或者，可以在试剂盒中分开保存组合物的不同成分（任何或所 有成分是冻干的）。所述成分可保持冻干形式，用于干配制剂或重建液体配制剂，而且或是 在使用前混合或是分开对患者施用。对于干粉施用，可以将疫苗或抗原性配制剂预载入鼻 内投递装置中并保存，直至使用。优选的是，此类鼻内投递装置会保护和确保其内容物的稳 定性。
[0087] 抗原性配制剂和疫苗的冻干是本领域公知的。典型的是，在存在在冻干过程中保 护抗原及产生具有期望粉末特征的块状物（cake)的药剂的情况中冷冻干燥液体抗原。糖 (诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖、或乳糖）（以10-200mg/mL的初始浓度存在）常常用于蛋白质 抗原的冷冻保护及产生具有期望粉末特征的冻干块。冻干组合物理论上产生更稳定的组合 物。虽然大多数配制工艺的目的是使蛋白质聚集和降解最小化，但是发明人发现聚集抗原 的存在增强针对诺如病毒VLP的免疫应答（见实施例3和4)。因此，发明人开发了能在冻 干过程期间控制抗原聚集百分比以生成最佳的聚集抗原对完整抗原比以诱导最大免疫应 答的方法。
[0088] 如此，本发明还涵盖制备诺如病毒抗原配制剂的方法，包括（a)制备包含诺如病 毒抗原、蔗糖、和壳聚糖的冻干前溶液，其中蔗糖对壳聚糖的比率为约0:1至约10:1 ;(b)用 液氮冷冻溶液；和（c)将冷冻后的溶液于环境温度冻干48-72小时，其中最终的冻干产物含 有一定百分比的聚集形式的所述诺如病毒抗原。在一个实施方案中，冻干前溶液还包含填 充剂。在另一个实施方案中，所述填充剂是甘露醇。
[0089]可以通过下列指导方针来确定产生想要的聚集百分比的蔗糖与壳聚糖的适宜比 率。含有范围为约2. 5:1至约10:1的蔗糖对壳聚糖重量比的冻干前混合物会在冻干后产生 多于95%的完整诺如病毒抗原（即少于5%的聚集抗原；见实施例13)。约1:1至约2. 1:1 的蔗糖对壳聚糖重量比范围会产生约50%至约90%的完整诺如病毒抗原（即约10%至约 50%的聚集抗原）。0:1的蔗糖对壳聚糖重量比会产生少于30%的完整诺如病毒抗原。省 略蔗糖和壳聚糖二者会产生少于5%的完整抗原（即多于95%的聚集抗原）。使用这些指 导方针，熟练技术人员能调整冻干前混合物中蔗糖对壳聚糖的重量比以获得产生最佳免疫 应答所必需的期望量的聚集。
[0090]另外，在冻干前溶液中包括蔗糖和壳聚糖提升完整诺如病毒抗原随时间的稳定 性。当作为干粉保存约12个月或更长的时间段时，配制剂中聚集的抗原/完整的抗原的比 率不升高（见实施例10)。如此，此冻干规程确保具有可预测的和可控制的聚集对完整诺如 病毒抗原比率的稳定配制剂。
[0091] 刺激免疫应答的方法
[0092] 将每种抗原性或疫苗配制剂剂量中抗原的量选择成诱导强烈免疫应答而没有显 著不良副作用的量。这样的量会随采用哪种具体抗原、施用路径、和所使用的佐剂而变化。 一般而言，在本发明的语境中，对患者施用的剂量应当足以随时间在患者中招致保护性免 疫应答，或诱导抗原特异性抗体的生成。如此，以足够的量对患者施用组合物以引发针对特 定抗原的免疫应答和/或预防、减轻、降低、或治愈来自疾病或感染的症状和/或并发症， 并如此减轻或终止诺如病毒爆发在人群中的传播。足以实现这一点的量定义为"治疗有效 里。
[0093] 对于基本上纯的形式的诺如病毒抗原，预期每剂会包含约IUg至10mg，优选约 15-500yg配制剂中的每种诺如病毒抗原。在一种采用本发明的抗原性制备物的典型免疫 接种方案中，可以以数剂（例如1-4剂）来施用配制剂，每剂含有I-1000 yg每种抗原。剂 量由组合物产生的免疫学活性和患者的状况以及要治疗的患者的体重或表面积决定。剂量 的大小还会由在特定患者中施用特定组合物可伴随的任何不良副作用的存在、性质、和程 度决定。
[0094] 可以经非粘膜或粘膜路径施用本发明的抗原性和疫苗配制剂。这些施用可以包括 体内施用，其经由胃肠外注射（例如静脉内、表皮下、和肌肉内）或其它传统直接途径，诸如 含服/舌下、直肠、口、鼻、表面（诸如经皮和眼）、阴道、肺、动脉内、腹膜内、眼内、或鼻内路 径或直接进入特定组织。或者，可以通过多种路径之任一种来施用本发明的疫苗，诸如口、 表面、表皮下、粘膜、静脉内、肌肉内、鼻内、舌下、经皮、真皮下、真皮内和经栓剂。可以简单 地通过使用针、导管或相关装置在单个时间点或多个时间点进行的直接施用来实现施用。
[0095] 在一个优选的实施方案中，通过鼻内路径来施用本发明的抗原性和疫苗配制剂。 经粘膜表面进行的免疫接种提供优于其它免疫接种路径的众多潜在优点。最明显的好处是 1)粘膜免疫接种不需要针或训练有素的人员来进行施用，