[0066] 根据本发明的一实例，上述组合物可适用于预防或治疗脑神经疾病。在本说明书 中，术语"预防"是指在个体（subject)中减少脑神经疾病的可能性/危险、或在个体中延迟 脑神经疾病的发生，或它们的组合。在本说明书中，术语"治疗"是指抑制在个体中所发生 的脑神经疾病的发展、或减少（缓和）在个体中所发生的脑神经疾病的症状、或去除在个体 中所发生的脑神经疾病，或它们的组合。在本说明书中，术语"改善"使用为与术语"治疗" 相同的含义。利用本发明的药剂学组合物来预防或治疗的"个体"为人或除了人之外的动 物，优选地，指人。
[0067] 根据本发明的一实例，上述脑神经疾病为选自由神经退行性疾病、缺血性脑卒中、 认知功能障碍及运动功能障碍组成的组中的疾病。
[0068] 利用本发明的组合物来预防或治疗的上述神经退行性疾病包括痴呆症、亨廷顿氏 病、帕金森氏病及肌萎缩性侧索硬化症。上述痴呆症为艾滋病（AIDS)诱发痴呆症、路易体 痴呆症、额颞叶痴呆症、多发梗塞性痴呆症、语义性痴呆症、阿尔茨海默氏症及血管性痴呆 症。
[0069] 利用本发明的组合物来预防或治疗的上述认知功能障碍包括记忆力减退、学习障 碍、失认症、健忘症、失语症、失用症或谵妄症。
[0070] 利用本发明的组合物来预防或治疗的上述运动功能障碍包括运动障碍（motor disturbance)、麻痹、运动失调（ataxia)、异动症（dyskinesia)、痉挛（spasticity)及肌张 力障碍（dystonia)。上述运动障碍通常指身体的随意运动，例如，使四肢、躯干、脖子、脸、 颜面、舌头等移动的运动未能随意进行的状态。上述麻痹是指作为神经或肌肉以无形态变 化的方式失去功能的状态，失去感觉或无法移动的状态。这种麻痹可根据症状分为将无法 移动的状态作为主要症状的运动麻痹和失去感觉的感觉麻痹，包括单瘫、偏瘫、双瘫及四肢 瘫。
[0071] 上述运动失调是指虽然正常地保持筋力，但未保持参与运动的筋组的相互协调， 并在顺畅的运动上受到障碍的状态。上述异动症是指减少随意性运动，并呈现非随意性运 动（抽搐或舞蹈症等）的现象。上述痉挛是指与由牵张反射的过兴奋引起的肌肉伸长（伸 展）速度成正比地增加的肌肉紧张。其中，牵张反射是指当持续伸长骨骼肌时，以对其伸长 抵抗的方式对伸长的肌肉反射性地发生收缩来使紧张高潮的现象。上述肌张力障碍是指因 持续性地肌肉收缩而导致身体的一部分曲扭或呈现反复性运动或非正常姿势等的症状的 总称。
[0072] 根据本发明的一实例，本发明的组合物可抑制由外伤性脑损伤（traumatic brain injury)引起的脑神经细胞的细胞凋亡。因此，本发明的组合物可用于改善由因外伤性脑损 伤而发生的神经细胞的凋亡引起的神经学及认知运动行为障碍。
[0073] 根据本发明的一实例，包含于本发明的组合物的5型磷酸二酯酶活性抑制剂⑴ 在脑组织中抑制退行性神经元（degenerative neuron)的形成，或（ii)在神经细胞中抑制 胱天蛋白酶-3或聚（腺苷二磷酸-核糖）聚合酶（PARP，Poly ADP ribose polymerase) 的表达。
[0074] 根据本发明的一实例，上述5型磷酸二酯酶抑制剂能够以0. 5_2mg/kg的容量给药 到需要抑制脑神经细胞的细胞凋亡的个体（subject)(参照实施例1)。这种给药能够以1 天1次的方式实现。
[0075] 在一个特定例中，上述5型磷酸二酯酶抑制剂能够以l_2mg/kg的容量给药到个 体。
[0076] 根据本发明的一实例，本发明的组合物可从脑神经细胞的细胞凋亡诱发24-72小 时之后开始给药到个体。
[0077] 根据本发明的再一实例，本发明的组合物的最初给药时期为诱发脑神经细胞的细 胞凋亡之后24至168小时。在一个特定例中，本发明的组合物的最初给药时期为诱发脑神 经细胞的细胞凋亡之后24至72小时。
[0078] 在以如上方式给药的情况下，如在以下实施例2中所述，可得到最佳的神经细胞 保护效果。这种给药能够以1天1次的方式实现。
[0079] 根据本发明的一实例，上述脑神经细胞的细胞凋亡的诱发可由脑损伤（例如，缺 血性脑损伤）引起。
[0080] 本发明的药剂学组合物能够以口服给药方式或非口服方式给药。
[0081] 根据本发明的一实例，本发明的药剂学组合物以口服给药方式给药到对象 (subject)，或以非口服给药方式给药到除了头部（head)之外的部位。即，本发明的组合物 在未直接给药到脑组织、包围脑组织的身体组织（例如，头皮）以及与其相邻的部位的情况 下，也可呈现本发明中所意图的效果。在一特定例中，上述以非口服给药方式的给药为皮下 给药、静脉内给药、腹腔注入、硬皮给药或肌肉内给药，在另一特定例中为皮下给药、静脉内 给药或肌肉内给药。与此相关地，血脑屏障（BBB，blood-brain barrier)为从全身的血液 循环中隔离脑的中枢神经系统（CNS)的唯一结构。血脑屏障防止在血液内循环的很多物质 (色素、药物、毒素等）接近脑，来有效地保护脑，但在另一方面，在脑疾病的药理学治疗中 成为主要的障碍。但是，如以下实施例中所证明，向个体的背部皮下注射5型磷酸二酯酶抑 制剂之后，实施大脑组织的组织病理学评价，其结果确认到因将5型磷酸二酯酶抑制剂进 行给药而减少大脑萎缩，减少退行性神经元，抑制作为细胞凋亡标记的胱天蛋白酶-3的表 达，并抑制聚（腺苷二磷酸_核糖）聚合酶的表达。这种结果可视为未直接给药到脑部位的 5型磷酸二酯酶抑制剂对脑细胞或组织呈现直接的药理效果，即，通过血脑屏障对脑呈现直 接的药理作用。这种结果在考虑通常药物难以通过血脑屏障，并由此在脑组织中难以呈现 直接的药理效果的该领域中众所周知的事实时，属于惊人的结果。
[0082] 包含于本发明的药剂学组合物的药剂学上接受的载体作为制剂时通常所使用 的物质，包含乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、明 胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮（p〇 1 yviny 1 pyrro 1 idone)、纤维素、水、糖浆、 甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯（methyl hydroxybenzoate)、羟基苯甲酸丙酯（propyl hydroxybenzoate)、滑石、硬脂酸镁及矿物油等，但并不局限于此。本发明的药剂学组 合物除了上述成分之外还可包含润滑剂、润湿剂、甜味剂、香味剂、乳化剂、悬浮剂及保鲜 剂等。适合的药剂学上接受的载体及制剂详细地记载于Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed.，1995)〇
[0083] 本发明的药剂学组合物通过本发明所属技术领域的普通技术人员可容易实施的 方法，利用药剂学上接受的载体和/或赋形剂来进行制剂化，从而能够以单位容量的形态 制备或内入于多容量容器内来制备。此时，剂型为油或水性介质中的溶液、悬浮液或乳化液 的形态，或可以为浸膏剂、粉剂、颗粒剂、片剂、薄膜或胶囊剂的形态，还可包含分散剂或稳 定剂。
[0084] 在以口服给药方式将上述5型磷酸二酯酶活性抑制剂进行给药的情况下，本发明 的组合物可具有薄膜剂型。在本发明中，上述薄膜可命名为剥离膜（strip)、口腔溶解膜 (orally dissolving film)、口腔崩解膜（orally disintegrating film)等，是指贴于舌 上、口腔黏膜、舌下等口腔内来以溶解方式服用的剂型。这种薄膜剂型具有无水可服用的优 点。
[0085]根据本发明的还一实施方式，本发明提供脑神经细胞的细胞凋亡（apoptosis)抑 制用保健功能食品，上述脑神经细胞的细胞凋亡抑制用保健功能食品包含：（i) 5型磷酸二 酯酶（phosphodiesterase type 5)活性抑制剂；以及（ii)食品学上接受的食品辅助添加 剂。
[0086]本发明的保健功能食品包含上述的5型磷酸二酯酶抑制剂，因而为了防止本说明 书过于复杂，省略它们之间共同的记载内容。
[0087]本发明的保健功能食品并不特别局限于此，但可以为保健功能性食品、营养辅助 剂、营养剂、药物食品（pharmafood)、保健食品、营养食品（nutraceutical)、特定营养食 品、食品添加剂等的所有形态的食品，优选地，可以为包含肉类、香肠、面包、巧克力、糖类、 快餐类、饼干类、匹萨、方便面、其他面类、□香糖类、冰淇淋类的乳制品、各种汤、饮料、茶、 清凉剂、酒精饮料及维生素复合剂。
[0088]本发明的保健功能食品不仅包含5型磷酸二酯酶抑制剂，还包含在制备食品时通 常所添加的成分作为有效成分，例如，包含蛋白质、碳水化合物、脂肪、营养素、调味剂及香 味剂。作为上述碳水化合物，例如有作为单糖的葡萄糖、果糖等、作为二塘的麦芽糖、蔗糖、 低聚糖等以及作为多糖的糊精、环糊精等的通常的糖及木糖醇、山梨糖醇及赤藓糖醇等的 糖醇。作为香味剂可使用天然香味剂（奇异果甜蛋白、甜叶菊提取物（例如，莱鲍迪苷A、甘 草甜素等））及合成香味剂（邻苯甲酰磺酰亚胺、阿斯巴甜等）。
[0089]除了上述之外，本发明的食品可包含多种营养剂、维生素类、矿物（电解质）、食物 成分、合成风味剂及天然风味剂等的风味剂、着色剂及重镇剂（奶酪、巧克力等）、果胶酸及 其盐、海藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增粘剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、乙醇及 碳酸饮料中所使用的碳酸化剂等。若考虑对食品的容易接近性，则本发明的食品非常有用 于抑制脑神经细胞的细胞凋亡，并预防及治疗脑神经疾病。 【【具体实施方式】】
[0090]以下，通过实施例对本发明进行更详细的说明。这种实施例只用于更详细地说明 本发明，根据本发明的要旨，本发明的范围并不由这些实施例限制，这对于本发明所属技术 领域的普通技术人员来说是显而易见的。
[0091]【实施例】
[0092]【实施例1. 5型磷酸二酯酶抑制剂的神经元（neuron)的保护效果】
[0093]【实验材料及实验方法】
[0094] 【1?实验动物的准备】
[0095]使6周龄的100只健康的雄性斯普拉格-道利大鼠（体重180-200g ;SLC，日本） 适应于环境100天之后使用于实验中。以20-25°C的温度及50-55%的湿度每一窝饲养了 5 只大鼠。将暗周期设定为12hr: 12hr，可自由摄取水和食物（标准啮齿目食物、三阳、韩国）。 所有动物基于依照实验动物资源机关、生命科学委员会、美国国立研究会（1996)的大邱韩 医大学校的实验动物的饲养及使用指南。具体实验组如下：
[0096]【表1】
[0097]
[0098] 【2?实验物质的准备及给药】
[0099]将米罗那非（mirodenafil 2HC1，SK 化学生命科学业务（SK Chemical Life Science Business)，韩国）使用于实验中。米罗那非作为白色粉，易溶于盐水。为了从光 和湿气中保护米罗那非，在4°C的冰箱中进行保存。以0. 5mg/ml、lmg/ml及2mg/ml使米罗 那非溶解于生理盐水中之后，从手术24小时开始，以1天1次的方式向大鼠的背部皮肤以 每公斤lml的容量皮下给药了 28天。在各对照组中，将同量的盐水进行给药，来代替米罗 那非。
[0100] 【3.神经细胞凋亡（apoptosis)动物模型的制备】
[0101] 通过以下方法对实验动物的大脑右半球施加损伤来诱导神经细胞的凋亡。具体 地，用在70%的N 20和28. 5%的02气体中混合2%或3%的异氟烷的麻醉气体进行全身麻 醉之后固定于手术台，在眼窝和外耳道之间横向切开右侧头部皮肤来使颞肌露出之后，以 防止面神经和眼窝骨受损的方式进行切除来露出颞骨的一部分。之后，通过利用牙科用钻 子的颞下颜骨切除术（subtemporal craniectomy)露出近端大脑中动脉（proximal MCA)。 之后，在嗅束附近的大脑静脉的正下方实施微型双极凝固法（microbipolar coagulation) 来永久性地封闭了近端大脑中动脉。吸入并全身麻醉之后，利用直肠温度计和热垫来恒定 地保持体温，整体死亡率观察为5 %以下。假手术对照组以与上述相同的方法露出近端大脑 中动脉之后不实施微型双极凝固法，而封闭了肠腔。
[0102]【4.免疫组织化学评价】
[0103] 在进行大脑石錯片（section)的脱錯之后，通过在文献Shi SR et al.，J Histochem Cytochem. 41:1599-604(1993)中所公开的方法执行了梓檬酸盐缓冲剂抗原 (epitope)的回收预处理。简单地说，将装有包含10mM的柠檬酸盐缓冲剂（pH6.0)的染色 盘的水槽预热至95-100°C，并将载玻片浸泡于染色盘，且在盘上以松散的方式放置盖子之 后，培养了 20分钟。在常温条件下放置染色盘之后，将载玻片冷却了 20分钟。表位回收之 后按照以下步骤对各部分进行了免疫染色。
[0104] 在常温条件下，与甲醇及0. 3%的H202 -同将各个部分培养30分钟，并在0. 01M 的磷酸盐缓冲液（PBS，phosphate buffered saline)中清洗 3 分钟（pH7.