9. 13%及-17. 39%的变化。
[0250]【身体摇摆评价】
[0251] 仅选择使用了手术24小时之后向右侧手术部位的身体摇摆次数及比率的减少为 规定的（1-4次；3. 33-13. 33%)大鼠，在神经细胞凋亡对照组中，在手术28天之后也确认 到与假手术对照组相比更具有显著性的（P< 0.01)向右侧手术部位的身体摇摆次数及比 率的减少。手术24小时及72小时之后开始，在将lmg/kg的米罗那非进行给药的实验组中， 分别确认到与神经细胞凋亡对照组相比更具有显著性的（P< 0.01)向右侧手术部位的身 体摇摆次数及比率的增加，但手术168小时之后开始，在将lmg/kg的米罗那非进行给药的 实验组中，未确认到与神经细胞凋亡对照组相比更具有显著性的身体摇摆次数及比率的变 化（图7)。
[0252] 具体地，手术28天之后向右侧手术部位的身体摇摆次数及比率在神经细胞凋亡 对照组中与假手术对照组相比呈现了 -59. 35%的变化，但手术24小时、72小时及168小时 之后，在将lmg/kg的米罗那非进行给药的实验组中，与神经细胞凋亡对照组相比，呈现了 82. 00%、48. 00%及 14. 00%的变化。
[0253]【（3)对认知运动行为产生的影响分析一水迷宫检查】
[0254] 在假手术对照组中，每当反复实施时，从水迷宫罐内到逃避平台的移动距离及时 间显著地减少，但在神经细胞凋亡对照组中，手术28天之后分别确认到与假手术对照组相 比更具有显著性的（P< 0.01)平台为止的移动距离及时间的增加，根据实施次数的移动距 离及时间的缩短也显著地得到了抑制。手术24小时及72小时之后开始，在将lmg/kg的米 罗那非进行给药的实验组中，在手术2天后在所有实施中分别确认到与神经细胞凋亡对照 组相比更具有显著性的（P < 0. 01或P < 0. 05)平台为止的移动距离及时间的减少，但在 手术168小时之后开始，在将lmg/kg的米罗那非进行给药的实验组中，未确认到与神经细 胞凋亡对照组相比更具有显著性的平台为止的移动距离及时间的变化（图8)。
[0255] 具体地，手术28天之后，在神经细胞凋亡对照组中，从水迷宫罐内到平台的平均 移动距离与假手术对照组相比呈现了 85. 74%的变化，但手术24小时、72小时及168小时 之后开始，在将lmg/kg的米罗那非进行给药的实验组中，与神经细胞凋亡对照组相比，分 别呈现了 -26. 45%、-16. 05 % 及-6. 42 % 的变化。
[0256] 手术28天之后，在神经细胞凋亡对照组中，从水迷宫罐内到平台的平均移动时间 与假手术对照组相比呈现了 79. 67%的变化，但手术24小时、72小时及168小时之后开 始，在将lmg/kg的米罗那非进行给药的实验组中，与神经细胞凋亡对照组相比，分别呈现 了 -24. 49%、-17. 33%及-5. 36%的变化。
[0257] 【3.检讨】
[0258] 本实验的结果如下：确认到由脑损伤引起的神经细胞凋亡导致的显著的体重减 少、神经学及认知运动行为障碍征象，即，肢体放置检查分数的增加、向右侧的身体摇摆次 数及比率的减少、逃避平台为止的移动距离及时间的增加和根据反复实施的移动距离及时 间的缩短的抑制，并引起了在组织病理学标本中诱发右侧大脑半球的萎缩、大脑皮质内单 位面积的变性神经元、胱天蛋白酶-3及聚（腺苷二磷酸-核糖）聚合酶阳性神经元的数量 增加。
[0259] 从手术24小时及72小时开始，通过将lmg/kg的米罗那非进行给药，来分别显著 地抑制了由这种脑损伤引起的体重减少、神经学及认知运动行为障碍及脑损伤周边部位大 脑皮质神经元的变性征象，手术168小时之后开始，在将lmg/kg的米罗那非给药14天的实 验组中，也确认到与神经细胞凋亡对照组相比更显著的脑损伤周边部位大脑皮质神经元的 变性及细胞凋亡（apoptosis)抑制征象。因此，判断为如下：当脑损伤（神经细胞凋亡）24 小时-72小时之后开始将米罗那非进行给药的情况下，呈现由缺血性脑损伤引起的神经学 及认知运动行为障碍的改善效果。
[0260] 缺血性脑损伤的进展导致认知及运动障碍，最终伴随着显著的体重降低[Garcia et al.，1986;Scholler et al.，2004;Wang et al.，2012]。在本实验的结果中，脑损伤 7 天之后开始，在所有手术组中也确认到与假手术对照组相比更具有显著性的（P < 0. 01或 p < 0. 05)体重的减少，实验期间的增体量也呈现了与假手术对照组相比更具有显著性的 (p < 0. 01)减少。相反，手术24小时及72小时之后开始，在将米罗那非进行给药的实验 组中，分别确认到与神经细胞凋亡对照组相比更具有显著性的（P < 0. 01或P < 0. 05)体 重及增体量的增加，但手术168小时之后开始，在将米罗那非进行给药的实验组中，未确认 到与对照组相比更具有显著性的体重及增体量的变化。这种结果判断为只有脑损伤24小 时-72小时之后开始给药，5型磷酸二酯酶抑制剂才能有意义地抑制由认知及行动障碍引 起的体重减少的直接证据。
[0261] 肢体放置检查作为代表性的神经学运动行为检查，将前肢及后肢的放置异常进行 等级化，等级越高，就表示神经学运动行为异常越严重。并且，身体摇摆检查也作为频繁 使用的神经学运动行为检查，在正常动物中，向左右侧的身体摇摆大致为5:5,相反，在具 有脑损伤的动物中，显著地减少向损伤部位的身体摇摆（Roof et al.，2001 ;Menniti et al.，2009)。并且，水迷宫检查作为最普遍使用的认知运动行为检查，在存在认知运动障碍 的情况下，显著地延长向逃避平台的移动距离及时间，尤其在反复实施的情况下，也显著地 抑制它们的距离及时间的减少。
[0262] 本实验的结果如下：手术24小时及72小时之后开始，在将米罗那非进行给药的实 验组中，在肢体放置、身体摇摆及水迷宫检查中，显著地抑制由脑损伤导致的神经学及认知 运动行为异常征象，但手术168小时之后开始，在将米罗那非进行给药的实验组中，未确认 到与神经细胞凋亡对照组相比更具有显著性的神经学及认知运动行为异常征象的变化。这 种结果判断为脑损伤24小时及72小时之后开始给药的情况下，5型磷酸二酯酶抑制剂在缺 血性脑损伤中恢复认知及运动功能的直接证据。
[0263] 本实验的结果如下：在由缺血性脑损伤引起的脑损伤周边部位导致了显著的大脑 皮质的萎缩，但手术24小时、72小时及168小时之后开始，在将米罗那非进行给药的实验组 中，分别在脑损伤周边部位显著性（P < 〇.〇1)地抑制了大脑皮质的萎缩征象，在大脑皮质 中也显著性（P < 0. 01)地抑制了每单位面积的变性神经元的增加。
[0264] 胱天蛋白酶-3及聚（腺苷二磷酸-核糖）聚合酶作为代表性的细胞凋亡标记 (Nunez et al.，1998;Barrett et al.，2001)，在大脑皮质中，这些胱天蛋白酶-3及聚（腺 苷二磷酸-核糖）聚合酶的增加意味着由细胞凋亡引起的脑损伤的增加。本实验的结果如 下：手术24小时、72小时及168小时之后开始，在将米罗那非进行给药的实验组中，分别显 著地抑制了由脑损伤引起的大脑皮质胱天蛋白酶-3及聚（腺苷二磷酸-核糖）聚合酶免 疫反应细胞的数量增加。因此，观察到脑损伤24小时-168小时之后开始给药的情况下，5 型磷酸二酯酶抑制剂在脑损伤周边部位呈现了一定程度的神经保护效果，但观察到开始给 药时期越晚，神经保护效果越低。
[0265] 以上，对本发明的特定部分进行了详细说明，就本发明所属技术领域的普通技术 人员来说，这种详细说明只属于优选实例，本发明的范围并不局限于此，这是显而易见的。 因此，本发明的实质性的范围应根据所附的发明要求保护范围和其的等同技术方案来定 义。
【主权项】
1. 一种脑神经细胞的细胞凋亡抑制用药剂学组合物，其特征在于，包含： ⑴5型磷酸二酯酶活性抑制剂的药剂学有效剂量；以及 (ii)药剂学上接受的载体。2. 根据权利要求1所述的脑神经细胞的细胞凋亡抑制用药剂学组合物，其特征在于， 上述5型磷酸二酯酶活性抑制剂选自由米罗那非、西地那非、伐地那非、他达拉非、乌地那 非、达生他非、阿伐那非以及它们的药剂学上接受的盐、溶剂化物及水合物组成的组中。3. 根据权利要求2所述的脑神经细胞的细胞凋亡抑制用药剂学组合物，其特征在于， 上述药剂学上接受的盐为米罗那非盐酸盐、西地那非柠檬酸盐或伐地那非盐酸盐。4. 根据权利要求1所述的脑神经细胞的细胞凋亡抑制用药剂学组合物，其特征在于， 上述脑神经细胞的细胞凋亡抑制用药剂学组合物用于预防或治疗脑神经疾病。5. 根据权利要求4所述的脑神经细胞的细胞凋亡抑制用药剂学组合物，其特征在于， 上述脑神经疾病为选自由神经退行性疾病、缺血性脑卒中、认知功能障碍及运动功能障碍 组成的组中的疾病。6. 根据权利要求5所述的脑神经细胞的细胞凋亡抑制用药剂学组合物，其特征在于， 上述神经退行性疾病为选自由痴呆症、亨廷顿氏病、帕金森氏病及肌萎缩性侧索硬化症组 成的组中的神经性疾病。7. 根据权利要求5所述的脑神经细胞的细胞凋亡抑制用药剂学组合物，其特征在于， 上述认知功能障碍为记忆力减退、学习障碍、失认症、健忘症、失语症、失用症或谵妄症。8. 根据权利要求5所述的脑神经细胞的细胞凋亡抑制用药剂学组合物，其特征在于， 上述运动功能障碍为运动障碍、麻痹、运动失调、异动症、痉挛或肌张力障碍。9. 根据权利要求1所述的脑神经细胞的细胞凋亡抑制用药剂学组合物，其特征在于， 上述脑神经细胞的细胞凋亡由外伤性脑损伤引起。10. 根据权利要求1所述的脑神经细胞的细胞凋亡抑制用药剂学组合物，其特征在于， 上述5型磷酸二酯酶活性抑制剂在脑组织中抑制退行性神经元的形成，或在神经细胞中抑 制胱天蛋白酶-3或聚（腺苷二磷酸-核糖）聚合酶的表达。11. 根据权利要求1所述的脑神经细胞的细胞凋亡抑制用药剂学组合物，其特征在于， 上述5型磷酸二酯酶活性抑制剂以口服给药方式给药到人，或以非口服给药方式给药到除 了头部之外的部位。12. 根据权利要求11所述的脑神经细胞的细胞凋亡抑制用药剂学组合物，其特征在 于，当上述5型磷酸二酯酶活性抑制剂以口服给药方式进行给药时，上述脑神经细胞的细 胞凋亡抑制用药剂学组合物为薄膜剂型。13. -种脑神经细胞的细胞凋亡抑制用保健功能食品，其特征在于，包含： ⑴5型磷酸二酯酶活性抑制剂；以及 (ii)食品学上接受的食品辅助添加剂。14. 一种抑制脑神经细胞的细胞凋亡的方法，其特征在于，包括将包含5型磷酸二酯酶 活性抑制剂的组合物以有效剂量给药到需要上述组合物的个体的步骤。15. 根据权利要求14所述的抑制脑神经细胞的细胞凋亡的方法，其特征在于，上述个 体为脑神经疾病患者。16. 根据权利要求15所述的抑制脑神经细胞的细胞凋亡的方法，其特征在于，上述脑 神经疾病为选自由神经退行性疾病、缺血性脑卒中、认知功能障碍及运动功能障碍组成的 组中的疾病。17. 根据权利要求16所述的抑制脑神经细胞的细胞凋亡的方法，其特征在于，上述神 经退行性疾病为选自由痴呆症、亨廷顿氏病、帕金森氏病及肌萎缩性侧索硬化症组成的组 中的神经性疾病。18. 根据权利要求16所述的抑制脑神经细胞的细胞凋亡的方法，其特征在于，上述认 知功能障碍为记忆力减退、学习障碍、失认症、健忘症、失语症、失用症或谵妄症。19. 根据权利要求16所述的抑制脑神经细胞的细胞凋亡的方法，其特征在于，上述运 动功能障碍为运动障碍、麻痹、运动失调、异动症、痉挛或肌张力障碍。20. 根据权利要求14所述的抑制脑神经细胞的细胞凋亡的方法，其特征在于，上述脑 神经细胞的细胞凋亡由外伤性脑损伤引起。21. 根据权利要求14所述的抑制脑神经细胞的细胞凋亡的方法，其特征在于，上述5型 磷酸二酯酶活性抑制剂在脑组织中抑制退行性神经元的形成，或在神经细胞中抑制胱天蛋 白酶-3或聚（腺苷二磷酸-核糖）聚合酶的表达。22. 根据权利要求14所述的抑制脑神经细胞的细胞凋亡的方法，其特征在于，上述组 合物以口服给药方式给药到人，或以非口服给药方式给药到除了头部之外的部位。23. 根据权利要求14所述的抑制脑神经细胞的细胞凋亡的方法，其特征在于，当上述 组合物以口服给药方式进行给药时，组合物为薄膜剂型。
【专利摘要】本发明涉及包含5型磷酸二酯酶活性抑制剂的脑神经细胞的细胞凋亡抑制用组合物、保健功能食品及细胞凋亡的抑制方法。根据本发明，5型磷酸二酯酶抑制剂抑制脑神经细胞的细胞凋亡，来呈现对神经细胞的保护作用。因此，本发明可有用地利用于脑神经疾病的预防、改善及治疗。
【IPC分类】A61P25/16, A61P25/28, A61K31/519, A61K31/53
【公开号】CN105025900
【申请号】CN201380063366
【发明人】金明华, 郑在畯, 具世光
【申请人】株式会社阿丽浱欧, Sk化学株式会社
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2013年12月4日
【公告号】EP2929886A1, EP2929886A4, US20150297599, WO2014088326A1